Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli.

Processo n 2020/00442-7Vigência de 01/02/2023 a 31/10/2023Título Desenvolvimento de uma plataforma fúngica para produção de coquetel enzimático em sistema industrial on site manufacture, visando hidrolisar biomassa lignocelulósica para produção de etanol de segunda geração

Este projeto é parte dos Acordos de Cooperação / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Fixação de Jovens Doutores - Projeto de Pesquisa - Regular - Chamada de Propostas (2022). Título do projeto: Formulação de consórcios enzimáticos "tailor-made" para a degradação da parede celular de variedades de cana-de-açúcar, FAPESP n 2023/01547-5. Vigência de 01/07/2023 a 30/06/2025.O INCT-Bioetanol avançou significativamente nos estudos da composição da parede celular da cana-de-açúcar nos últimos anos, fornecendo informações importantes sobre a estrutura dos polímeros e a forma de acesso das enzimas a parede durante a hidrólise, visando aumentar a conversão de celulose e hemicelulose em monossacarídeos. A presente proposta visa integrar esses conhecimentos para desenvolver consórcios enzimáticos contendo enzimas livres e imobilizadas para hidrolisar a biomassa obtida a partir de variedades hibridas de cana Energia e SP80-3280, de forma a encontrar as combinações que incrementem o processo de hidrólise. Para viabilizar a execução deste plano de trabalho, considerando a sua extensão e suas metas, esta proposta está fundamentada em três principais etapas: I) formular consórcios enzimáticos "tailor-made" a partir de holocelulases recombinantes para aplicação na hidrólise das variedades de cana-de-açúcar; II) preparar novos suportes magnéticos nanoporosos a partir de matrizes biodegradáveis, como amido e celulose; III) co-imobilizar holocelulases nos diferentes suportes e aplicar as diferentes formulações imobilizadas na hidrólise das variedades de cana-de-açúcar. Espera-se obter diferentes formulações de enzimas com alta eficiências na hidrólise da biomassa das variedades de cana, assim como para outras gramíneas em fase de estudo dentro do INCT-Bioetanol.

Processo FAPESP 2018/07522-6.O Brasil é o país com a maior biodiversidade do mundo. A microbiota presente nos diferentes biomas brasileiros permanece quase desconhecida e minimamente estudada, representando grande potencial para descoberta, aplicação em pesquisas científicas e atividades industriais. Considerando a grande biodiversidade do Brasil, em 2010, o Sistema Nacional de Pesquisa em Biodiversidade (SISBIOTA-Brasil) começou a isolar fungos de todos os biomas brasileiros, aumentando o potencial de obtenção de diferentes enzimas com interesses biotecnológicos e industriais. Portugal e o Brasil representam um grande mercado consumidor e produtor de diversos compostos, mas quando se trata de enzimas, os dois países ainda têm pouca expressão. Nos últimos 30 anos tem havido um enorme aumento no interesse e pesquisa de enzimas que degradam os compostos lignocelulósicos, principalmente devido ao excedente de resíduos, por exemplo, das agroindústrias, que geram toneladas de lixo diariamente, o que muitas vezes se torna um problema de poluição ambiental. Portanto, é necessário maximizar o uso de matéria orgânica, reduzindo a geração de resíduos e obtendo produtos com alto valor agregado. O material lignocelulósico consiste principalmente de três tipos diferentes de compostos: celulose, hemicelulose e lignina, que estão associados entre si e em diferentes proporções, dependendo do vegetal. A conversão enzimática tem sido um método que vem ganhando destaque entre a tecnologia para converter biomassa lignocelulósica em compostos de alto valor agregado. Este processo utilizou principalmente xilanases, celulases e ligninases. Nesse contexto, o presente projeto tem como objetivo a avaliação de diferentes tecnologias ecologicamente corretas para o pré-tratamento dos resíduos agroindustriais / florestais (como resíduos da indústria de papel e celulose: lodo de papel e casca de eucalipto) com o objetivo de facilitar o acesso das enzimas fúngicas aos componentes estruturais. Para isso serão priorizados os pré-tratamentos físico-químicos: aquecimento ôhmico e auto-hidrólise, para a extração de compostos derivados da hemicelulose. Paralelamente, será realizada a triagem dos fungos filamentosos obtidos no projeto SISBIOTA utilizando os resíduos das indústrias de arroz, café, cerveja, feijão, milho e papel como fonte indutora. As enzimas produzidas serão caracterizadas quanto aos seus parâmetros físico-químicos e imobilizadas em diferentes substratos, visando uma melhora na hidrólise enzimática desses resíduos. Em seguida, um coquetel de enzimas será projetado para ser aplicado no pré-tratamento biológico (enzimático) dos componentes lignocelulósicos (celulose, hemicelulose e lignina), visando gerar produtos de alto valor agregado. Os produtos obtidos serão explorados na produção de compostos com interesse industrial, como xilooligossacarídeos, bioetanol e compostos antioxidantes / antimicrobianos.

A proposta do INCT para o próximo período visa integrar os conhecimentos obtidos nos últimos 6 anos para montar uma série de consórcios de enzimas que sejam capazes de hidrolisar a parede celular da cana com eficiência e rapidez. O foco principal será a combinação de consórcios enzimáticos com biomassas de cana de diferentes variedades e de plantas transformadas geneticamente de forma a encontrar as combinações que incrementem o processo de hidrólise. A ideia é encontrar os diferentes padrões de correspondência entre as variações nas composições da parede oriundas das populações e variedades geneticamente conhecidas e os diferentes consórcios de enzimáticos (cerca de 70 hidrolases distintas que são parte da coleção do INCT), bem como enzimas engenheiradas por Biologia Molecular. Para efetivar esta integração, será montado um sistema de análise de sacarificação de biomassa utilizando inicialmente coquetéis comerciais. Amostras de biomassa de cana com diferentes graus de susceptibilidade à sacarificação serão analisadas em maior profundidade de forma a compreender mais profundamente a variabilidade química que influencia a hidrólise. Isto possibilitará encomendar marcadores genéticos de parede celular que permitam ampliar ainda mais a busca de variedades com sacarificação aumentada no âmbito de programas de melhoramento genético. Paralelamente, genes de hidrolases de parede celular de cana serão silenciados ou ativados em plantas de cana. Na primeira fase projeto INCT-bioetanol, compilamos uma coleção de genes de hidrolases da própria cana, relacionados aos domínios arquitetônicos da parede celular. Manipulando esses genes, será possível avaliar os respectivos impactos sobre três fatores limitantes da hidrólise: porosidade, código glicômico e estrutura macrofibrilar da biomassa. O objetivo é produzir uma variedade de cana que possua mecanismos internos de facilitação da hidrólise, induzíveis por métodos de ativação externa que permitam fazer com que as plantas passem expressar enzimas hidrolíticas no momento desejado. O impacto do conhecimento e controle sobre os processos de síntese e degradação da parede celular da cana vai, no entanto, muito além do desenvolvimento de tecnologias para a produção de etanol. Através do controle dos processos de formação e hidrólise da parede celular, uma série de possibilidades se tornam mais viáveis no sentido do uso das usinas como biorrefinarias. Um exemplo é a possibilidade de utilização da cana, bem como outras plantas como biofábricas para polímeros complexos de interesse industrial como lignanas ou polissacarídeos hemicelulósicos (p.ex. hemiceluloses como o glucano e o xiloglucano) permitindo a aplicação destes polímeros como aditivo de alimentos, para cosméticos e medicamentos. Portanto, os conhecimentos que o INCT do bioetanol deverá produzir em sua segunda fase, permitirão ao Brasil se aproximar ainda mais da entrada do setor de cana na fase ainda mais ampla de biorrefinaria, apresentando alta flexibilidade na confecção de produtos de caráter altamente sustentável e de grande valor econômico. Deve-se salientar ainda o fato de que o desenvolvimento de tecnologias que viabilizem a hidrólise eficiente dos resíduos lignocelulósicos da cana terá impacto sobre outros processos em desenvolvimento no mundo, uma vez que as paredes celulares de outras gramíneas usadas para produção de etanol (milho, arroz, sorgo e miscanto) são similares à cana. Assim, esta conquista tecnológica tem potencial para trazer o Brasil de volta à posição de exportador de tecnologia 2G, criando divisas internacionais de grande importância na área de energias renováveis. Valor aprovado pelo projeto: R$ 7.000.000,00

Esta proposta visa à integração científica das Universidades de São Paulo ? Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP-USP), Departamento de Biologia e Departamento de Química e a Universidade Federal de Uberlândia, representada pelas Faculdades de Ciências Integradas do Pontal (FACIP-UFU), bem como do recém-criado Programa de Pós-Graduação em Biocombustíveis (UFVJM-UFU), e do Instituto de Química da UFU ? campus Santa Mônica Docentes de ambas as Universidades estão integrados no desenvolvimento da presente proposta de pesquisa, com o objetivo de contribuir para o desenvolvimento de novas tecnologias para a produção de biodiesel através do emprego de processos catalíticos enzimáticos pelo uso de lipases. Em projetos anteriores foi realizado pela coordenadora do projeto um árduo esforço de prospecção de fungos filamentosos nos biomas nacionais: Floresta Amazônica; Pantanal, Cerrado, Floresta Atlântica, Pampas, Litoral e Parque Nacional do Iguaçu. Destas coletas foram isolados mais de mil fungos filamentosos que estão sendo mantidos na Micoteca da FFCLRP-USP. Muitos destes micro-organismos estão sendo selecionados quanto às atividades lipolíticas e vários já foram identificados como excelentes produtores de lipases. Aliada a esta tecnologia, o laboratório da coordenadora vem desenvolvendo técnicas de expressão heteróloga das lipases dos fungos selecionados em Komagataella pastoris. A vantagem de produção de lipases em cepas recombinadas repercute nos altos índices enzimáticos e na facilidade de purificação, devido a uma menor quantidade de proteínas contaminantes secretadas. Ainda, ambas lipases provenientes de cepas selvagens e recombinadas são caracterizadas quanto a vários parâmetros físico-químicos, evidenciando as propriedades funcionais das lipases purificadas frente ao pH, temperatura, íons metálicos, análises cinéticas ou quanto aos aspectos estruturais, como massa molecular, dicroísmo, entre outras. Um grande investimento do grupo da coordenadora tem sido na imobilização enzimática em suportes químicos através de ligações iônicas, covalentes e hidrofóbicas. Para isto destaca-se a cooperação já consolidada com o Consejo Superior de Investigaciones Científicas, CSIC, Madri, Espanha. A proposta deste projeto também visa o emprego de lipases imobilizadas em suportes poliméricos para a produção de biodiesel a partir do óleo residual, pinhão manso e polpa de macaúba. Para esta finalidade, o projeto consta com a importante contribuição do grupo da FACIP-UFU onde as lipases serão imobilizadas em suportes poliméricos obtidos a partir de polímeros naturais como a celulose (celulose regenerada e acetato de celulose) obtida comercialmente e a partir de resíduos de processos agroindustriais. Dependendo do sucesso dos experimentos ainda é possível aventar a contribuição de pesquisadores de Amravati University, India, com a nanotecnologia de lipases em nanopartículas de prata e demais compostos. Desta forma, a presente proposta constitui-se na busca de bioprocessos inovadores na formulação de biodiesel.

 Processo CNPq 406838/2013-5. Valor aprovado: R$ 734.000,00.

Coleções científicas biológicas encerram uma incomensurável quantidade de informações sobre os mais diversos aspectos da Biodiversidade. Seus dados contribuem para as mais diversas aéreas da ciência e do interesse público, tais como: investigações em evolução, taxonomia, sistemática e biogeografia; saúde pública, segurança residencial, controle de pragas e espécies invasoras; estudos de avaliação, conservação e planejamento ambiental, entre muitos outras. Com advento da internet e o acelerado processo de desenvolvimento econômico, a demanda por informações biológicas e, conseqüentemente, pela disponibilização de dados qualificados (auditados) de coleções científicas é crescente. Notoriamente, as Universidades hospedam muitos dos mais importantes acervos biológicos, os quais atuam como esteio acadêmico para pesquisa e para formação de recursos humanos altamente qualificados para a investigação da Biodiversidade. No entanto, estas coleções, geralmente por carecerem de um comprometimento institucional formal, são as que mais sofrem riscos, inclusive quanto à salvaguarda de seus dados. O Departamento de Biologia da Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (DB/FFCLRP/USP) abriga o maior acervo biológico de todos os campi da Universidade de São Paulo, com 12 coleções contendo mais de 800.000 espécimes de diversos grupos de animais, de fungos e de vegetais. Estas encontram-se em diferentes níveis de desenvolvimento quanto à informatização e disponibilização on-line de seus dados. Tendo em vista os propósitos desta Chamada, que focalizam a informatização e a disponibilização de dados de acervos biológicos com vistas ao estabelecimento de políticas públicas direcionadas à Conservação, os seguintes objetivos foram delineados: 1) digitalizar todos os lotes/espécimes ainda não processados em todos os acervos do DB/FFCLRP/USP, 2) revisar os dados primários (localidade, coletores e data) de todos os registros; 3) geo-referenciar tod.

A presente proposta encontra-se inserida no Plano de Metas do Departamento de Biologia (DB) da FFCLRP/USP que visa melhorar e capacitar as coleções científicas presentes no DB. Tais coleções abrangem peixes, insetos (himenópteros, com ênfase em abelhas, vespas e dípteros), crustáceos, répteis, fósseis, plantas e fungos. Dentre estas coleções podem ser destacadas a coleção de sem ferrão (com mais de 250 mil registros), a coleção de peixes do Laboratório de Ictiologia de Ribeirão Preto e o Herbário do Departamento de Biologia (Herbário SPFR). Tanto as coleções maiores como as menores estão associadas a laboratórios e linhas de pesquisa dos docentes, sendo de importância fundamental para a consecução de suas pesquisas e também para a educação, estando disponíveis para a consulta por pesquisadores externos, alunos de pós-graduação e graduação da instituição e do público o em geral. Os objetivos deste projeto são: 1) melhorar as condições de acomodação destas coleções, através da aquisição de mobiliário específico e adequação do espaço; 2) informatizar estas coleções, através da aquisição de equipamentos (computadores, scanners e máquinas fotográficas) e a contratação (por meio de serviços de terceiros) de pessoal para digitalizar e disponibilizar os acervos on-line. De caráter inovador, os registros de nossas coleções serão conectados às filogenias mais atuais de grande grupo biológico em questão, o que permitirá efetuar um planejamento mais eficiente da pesquisa biológica, otimizar o uso do material da coleção localmente e, de caráter experimental, induzir a utilização da informação filogenética na Conservação. Com a melhoria das coleções, tanto do ponto vista de uso do espaço e acomodação do acervo, quanto de informatização do acervo e sua disponibilização on-line, pretende-se dar novo impulso à pesquisa ligada à sistemática e taxonômica, bem como a estudos ligados à conservação. (AU)

Coordenador/Responsável: Prof. Dr. Carlos Alberto Garófalo, vigência 01/02/2011 a 31/01/2012. Valor R$ 922.724,95 + US$ 42,864.26.

Lignocelulose é constituído pelos polímeros celulose, hemicelulose e lignina, encontrados na parede celular das plantas como uma matriz complexa e estável. A estrutura complexa do lignocelulose limita a degradação das paredes celulares das plantas pela ação enzimática, restringindo seu uso de enzimas em aplicações de biorefinaria como biobranqueamento de polpas de celulose e a produção de açucares fermentáveis a partir de biomassa das plantas. Enzimas individuais são ineficientes contra a matriz de polímeros encontrada em lignocelulose, e a biorefinaria de biomassa necessita o uso de misturas de enzimas com especificidades diferentes.A meta da proposta atual e a identificação, caracterização e engenharia das propriedades catalíticas de enzimas com o objetivo de desenvolvimento de biocatalizadores que podem ser combinados em misturas enzimáticas para a biorefinaria de lignocelulose. A estratégia geral focalizará na caracterização de enzimas identificadas em projetos genomicos dos fungi Aspergillus niveus, Aspergillus japonicus e Chaetomium thermophilum e das bactérias Bacillus subtilis e Clostridium thermocellum, utilizando uma série de técnicas microbiológicas e bioquímicas em conjunto com abordagens de biologia molecular estrutural. Estes estudos iniciais serão conduzidos em paralelo com analises mais sofisticados com o intuito de identificar em mais detalhes as modificações nos polímeros de parede celular das plantas produzidas pelas enzimas. Estes atividades fornecerão informações para orientar o programa de engenharia de enzimas que melhorará as suas propriedades catalíticas usando estratégias de desenho racional e evolução dirigida visando aplicações de biorefinaria na indústria de polpa de celulose e papel no desenvolvimento de tecnologias na área de bicombustíveis. (AU)

Processo FAPESP: 2010/18850-2, com vigência de 01/04/2011 a 31/03/2016. Coordenador Prof Dr. Richard John Ward. Valores concedidos R$ 490.808,05 e US$ 356.864,82

O bagaço de cana corresponde a 27-30% do peso seco da cana e é largamente disponível no Brasil, considerando uma produção em torno de 600 toneladas de cana na última safra. Parte desse bagaço é utilizada para produção de energia térmica enquanto outra é rejeitada ou subaproveitada. A produção de açúcares a partir desse material é uma possibilidade de ampliar a produção de bioetanol no mundo sem comprometer novas áreas agriculturáveis, além de possibilitar a geração de substratos (açúcares e derivados fenólicos) para outras aplicações biotecnológicas. Propostas tecnológicas para sacarificação do bagaço visando a obtenção de açúcares incluem vias termoquímicas, vias químicas e bioquímicas. Os processos químicos ou termoquímicos têm o inconveniente de oxidar os açúcares e de gerar compostos químicos inibidores do metabolismo das leveduras e de outros microrganismos em fermentações subsequentes requerendo etapas de separação desses compostos antes da utilização do hidrolisado. Nos processos bioquímicos, propõem-se a quebrar dos polissacarídeos do material lignocelulósico em açúcares pelo uso de enzimas fibrolíticas, o qual é vantajoso em relação aos demais em função de especificidade e ausência de produtos secundários. Esta via é focada no presente projeto, na qual o grupo tem trabalhado nos últimos 13 anos. Entretanto, a eficiência da hidrólise enzimática do bagaço in natura não tem sido muito estimulante visto que inúmeras barreiras físicas e bioquímicas se interpõem no processo e precisam ser investigadas e resolvidas. O aumento da eficiência do acesso das enzimas aos seus substratos é um obstáculo que se pretende transpor na presente proposta por meio da incorporação de pré-tratamentos físicos das fibras, com o intuito de desorganizar a estrutura da parede celular facilitando a exposição dos polissacarídeos às enzimas, além da busca do entendimento da recalcitrância do bagaço aos diferentes sistemas de hidrólise por meio de análises químicas, microscópicas e ultraestruturais. Estudos sobre seleção de microrganismos degradadores de fibras lignocelulósicas, projetos e construção de biorreatores, monitoramento, modelagem e controle das condições dos processos fermentativos, processos de hidrólise física, química e/ou enzimática, caracterização química do hidrolisado, são muito importantes para o processo de uma forma geral, os quais são fortemente inter-relacionados e devem ser abordados obrigatoriamente de forma conjunta quando se visa o processo industrial com alto rendimento e baixo custo. É nesse contexto que o presente projeto está sendo apresentado, com a participação e colaboração interdepartamental, inter-institucional e internacional envolvendo pesquisadores experientes de diferentes especialidades desenvolvendo pesquisas integradas com numa ação coordenada e sinergística de forma a maximizar a compreensão do processo e a chance de sucesso na sacarificação do bagaço de cana. (AU)

Processo FAPESP: 2010/12624-0, com vigência de 01/05/2011 a 30/04/2015. Coordenador Profa Dra. Eleni Gomes. Valores concedidos R$ 456.816,67e US$ 123.906,98.

Pesquisadora colaboradora sob coordenação do Prof. Dr. Mario Luiz Teixeira de Moraes ? FEIS, UNESP, Campus de Ilha Solteira, SP, com o projeto: Programa de Melhoramento em Myracrodruon urundeuva (F.F. & M.F. Allemão).

O Instituto Nacional de Biotecnologia para o Bioetanol (INCT), tem como proposta unir um conjunto de 30 laboratórios de 5 estados brasileiros para desenvolver as bases tecnológicas necessárias para viabilizar a produção de etanol celulósico a partir da cana-de-açúcar no Brasil. 
O laboratório da Dra. Maria de Lourdes Polizeli vem trabalhando na prospecção de fungos filamentosos capazes de produzir enzimas que degradam a parede celular de plantas, resíduos agrícolas, de florestas e industriais. Enzimas do sistema xilanolítico, celulolítico, lignolítico, amilolítico e pectinolítico estão sendo purificadas e caracterizadas em nível estrutural e molecular. Além disso, as enzimas hidrolíticas estão sendo aplicadas no biobranqueamento de polpas de celulose e em ração animal.

Este projeto contempla o estudo de alguns sistemas enzimáticos, produzidos por fungos termotolerantes ou termofílicos, que hidrolisam biomassa vegetal. Essas enzimas oferecem um material de estudo interessante, sobre problemas relacionados com os mecanismos de catálise e regulação das mesmas, bem como pela possibilidade de utilização tecnológica. O projeto está dividido em cinco subprojetos: I) Estudo de amilases; II) Estudo de fosfatases, fitases e fosfatases alcalinas; III) Estudo de lipases; IV) Estudo de pectinases e V) Estudo de xilanases (celulases e ligninases).
Resultados prévios obtidos no laboratório tornaram esses estudos interessantes e justificam uma pesquisa mais aprofundada. Estamos sugerindo no presente projeto, num primeiro momento, a coleta de microrganismos a partir de solo, compostagem e águas termais de diversas regiões do estado de São Paulo, isolamento de fungos filamentosos, selecionamento de cepas que se destacam na produção de enzimas de interesse, identificação e catalogação das cepas selecionadas, buscas e possíveis estratégias para a otimização da produção das atividades estudadas, nos fungos coletados. Posteriormente, pretende-se realizar a purificação, a caracterização de propriedades bioquímicas das respectivas hidrolases, o seqüenciamento de aminoácidos e busca de homologias. Haverá uma abordagem envolvendo a aplicação biotecnológica destas enzimas, como as xilanases que deverão ser aplicadas no biobranqueamento da polpa de celulose para produção de papel. Para este propósito, será feita a determinação do número kappa das polpas de celulose tratadas com xilanases, bem como a determinação da viscosidade e a alvura da polpa celulósica. As xilanases, em conjunto com as amilases deverão ser utilizadas na hidrólise de fibras alimentares visando uma aplicação na indústria alimentícia. As fosfatases ácidas (fitases) e as xilanases (em conjunto com as celulases e ligninases) serão utilizadas em ração animal visando melhorar a digestibilidad

Projeto FAPESP- 04/07935-6 (Projeto temático)Valor: R$ 484.110,25 + US$ 72.982,05 + Reserva técnica R$ 57.274,74. 

SPECIFIC AIMS
1. To collect, isolate and maintain a library in our laboratories of soil fungi species from several geographic regions of São Paulo State;
2. To collect leaves and roots from some species of Asteraceae (V. arenaria, V. robusta, T. diversifolia and S. sonchifolia) in order to isolate and preserve its endophyte fungi in our laboratory; 
3. To prepare a library of extracts from both soil and endophytic fungi previously isolated, as well as from those isolated in new field collections;
4. To carry out preliminary antimicrobial bioassays in our laboratories to select fungal extracts for further chemical study. The extracts will be available to other bioassays of the network, which can detect other promising activities. We have special interest in screening for anticancer and antiparasitic activities;
5. To compare the chemical profiles of the endophyte extracts and its pure compounds with those from its plant sources by HPLC analysis, in order to verify if there are similarities between fungal and plant metabolisms;
6. To fractionate selected extracts by using different chromatographic techniques. This step may be monitored by bioassays;
7. To characterize isolated pure compounds by spectroscopic techniques (NMR, MS, IR, UV);
8. To submit pure compounds to antimicrobial assays. Compounds will be available to other bioassays of the network;
9. To carry out biotransformation of bioactive natural products (grandisin, budlein A, tagitinin C) using isolated fungi, in order to obtain new derivatives, which are not easily obtained by laboratorial synthesis;
10. To undertake the bioassays with the products of biotransformation, mainly in antiprotozoal and antitumoral assays (if available in the network);
11. To identify the promising fungi either from soil or endophytes, which may be of industrial interest or that produce potential

Este projeto contempla o estudo de sistemas enzimáticos que hidrolisam biomassa vegetal, tais como o complexo xilanolítico (xilanases e B-xilosidase), amilolítico (glucoamilases e alfa-amilase), fosfatassem ácidas e alcalinas, e trealases ácidas e neutras, produzidos por fungos filamentosos termo tolerantes ou termofílicos, isolados a partir de solo, plantas ou material em decomposição, de diferentes regiões do Estado de São Paulo. Pelas suas características de grande estabilidade, térmica, essas enzimas oferecem um material de estudo interessante, sobre problemas relacionados com os mecanismos de catalise e regulação das mesmas, bem como a possibilidade de utilização tecnológica. O projeto está dividido em quatro subprojetos, onde estamos sugerindo possíveis estratégias para a otimização da produção das enzimas relacionadas e posteriormente ensaios de purificação e caracterização de propriedades bioquímicas das respectivas hidrolases. (AU)

Coordenadora, auxílio individual, FAPESP processo 2001/06721-4, outubro de 2001 a setembro de 2003, valor: R$ 18.992,00 + US$ 17,141.78. Renovação: outubro de 2003 a setembro de 2004, aditivo: R$ 15.000,00.

Este projeto contempla o estudo de dois complexos enzimáticos que participam da degradação de biomassa vegetal. O subprojeto I trata-se do estudo das atividades B-xilosidase e xilanase produzida por Aspergillus phoenicis isolado do solo e materiais em decomposição da região de Ribeirão Preto. Entre 30 isolados, cultivados em meio salino suplementado com bagaço de cana, a temperatura de 40ºC, este microrganismo destacou-se como um excelente produtor de tais enzimas, que atuam, conforme resultados prévios, em pH ácido e temperaturas ótimas de 80-90ºC. Com relação ao subprojeto II, pretendemos dar continuidade aos nossos trabalhos que vêm sendo desenvolvidos com glucoamilase produzida pelo fungo Scytalidium thermophilum. (AU)

Auxílio individual, FAPESP processo 1998/07793-4 valor: R$ 16409,24 + US$ 27026.25. Aditivo de R$ 15.000,00 (fevereiro de 2000).

Teores de compostos orgânicos são de fundamental importância na constituição das sementes, tanto no seu desenvolvimento, per se, como na sua utilização, para os mais variados fins. Assim, surge à necessidade de um conhecimento maior sobre a constituição química de sementes, notadamente as das espécies florestais nativas, que são pouco conhecidas. Procurando-se atingir este objetivo maior, foram colhidas, em setembro de 1996, sementes de trinta famílias (progênies) de aroeira, em duas populações, sendo a primeira em Paulo de Faria - SP e a segunda em Selvíria - MS. Com estas sementes armazenadas em câmara seca, até o momento, pretende-se avaliar alguns caracteres tecnológicos de sementes (condutividade elétrica, germinação, e classificação do vigor); bioquímicos (teores de proteínas, lipídeos e carboidratos) e nutricionais (N, P, K, Ca, Mg, e S) com o objetivo de verificar, para estas características, o nível de variação genética existente entre e dentro destas populações de aroeira, como também a correlação genética entre as características estudadas. Assim, através de análises tecnológicas de sementes, bioquímicas, nutricionais e genéticas serão fornecidos subsídios para o aproveitamento de sementes de aroeira, para fins de conservação genética e fornecimento de compostos bioquímicos. (AU)

Pesquisadora colaboradora, FAPESP processo 1998/1877-1 coordenação Prof. Dr. Mario Luiz Teixeira de Moraes, 1 de junho de 1998 a 31 de maio de 2000, valor R$ 21103,37 + US$ 18979.00.

Coordenadora, auxílio individual, colaboração FAPESP-CNPq (processo FAPESP 1996/5396-2; Processo CNPq 521922/95-0 (NV)) "Estudos de hidrolases produzidas por fungos filamentosos. Aspectos regulatórios, purificação e caracterização fisiológica-bioquímica", fevereiro de 1997 a janeiro de 1999, valor: R$ 5000,00. 
Com esse projeto foram purificadas e caracterizadas pectinases de Neurospora crassa e amilases e fosfatases alcalina de duas linhagens de Scytalidium thermophilum, além de uma trealase de Mucor rouxi.

Clonagem e caracterização da expressão gênica da ubiquitina de A. nidulans em diferentes condições de estresse. As proteínas anormais surgem continuamente durante qualquer processo de estresse celular visando evitar níveis tóxicos na célula, a remoção rápida destas proteínas aberrantes é de suma importância. Uma variedade de evidências genéticas e bioquímicas indicam que a conjugação com ubiquitina é um passo obrigatório na pré-degradação da proteína. Nós estamos interessados em estudar a expressão da ubiquitina de Aspergillus nidulans durante diferentes processos de estresse celular, assim, os objetivos específicos são: (i) a clonagem do(s) gene(s) que codifica(m) a ubiquitina em A. nidulans; (ii) a caracterização da expressão destes genes em diferentes condições de estresse e (iii) a deleção ou gene disruption deste(s) gene(s); (iv) regulação do metabolismo de trealose em Neurospora crassa e sua relação com condições de estresse. Achados recentes demonstram o envolvimento da trealose na adaptação das células microbianas a diversas situações de estresse ambiental (temperatura, dessecação, estresse oxidativo). Nosso laboratório pesquisando o metabolismo de trealose frente a situações de estresse, utilizando como modelos fungos filamentosos mesofílicos: Neurospora crassa, Aspergillus nidulans, Mucor rouxii, e termofílicos: Humicola grisea, Scytalidium termophilum e Chaetomium thermophilum. As principais metas são: (1) clonagem e caracterização funcional das trealases neutras de N. crassa e M. rouxii; (2) caracterização bioquímica do sistema de síntese de trealose em N. crassa e M. rouxii; (3) clonagem e caracterização funcional do gene tps1 (trealose-6-fosfato sintase) de N. crassa; (4) caracterização bioquímica das trealases ca2 + - dependentes de fungos termofílicos. (AU)

Pesquisadora colaboradora (projeto temático), FAPESP, valor: R$ 89500,00 + US$ 173100.00.

Coordenadora, auxílio individual, FAPESP processo 1994/3361-1, valor R$ 33234,00 + US$ 1500.00. 

Nesse período estudamos amilases e fosfatases alcalina de fungos termofílicos

Coordenador Prof. Dr. José Carlos da Costa Maia, Instituto de Química, USP, realizado na Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, USP, sob orientação do Prof. Dr. Héctor Francisco Terenzi, Bolsa de Pós-doutorado FAPESP, Recém Doutor CNPq e produtividade em pesquisa CNPq.