Adelino Sanchez Ramos da Silva.

Processo Apolo número 17.1.00324.90.4) - Programa Cultura e Extensão da Pró-Reitoria de Cultura e Extensão da USP

Programa Aprender com Cultura e Extensão da Pró-Reitoria de Cultura e Extensão da USP

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É sabido que o fígado desempenha um papel fundamental no metabolismo, sendoresponsável pela síntese de diversas substâncias essenciais para as atividadesmetabólicas. Entre essas substâncias, destacam-se as interleucinas, com foco especialneste estudo na interleucina-10 (IL-10), reconhecida como uma citocinaanti-inflamatória que desempenha um papel crucial na modulação da resposta hepáticadiante de processos inflamatórios. Um aspecto relevante das funções da IL-10 é suacapacidade de estimular a autofagia, processo de autodegradação celular quedesempenha um papel crucial na remoção de mitocôndrias envelhecidas. A diminuiçãona sinalização da IL-10 pode resultar em um acúmulo exacerbado de mitocôndriasdanificadas devido a uma redução nos níveis de autofagia, comprometendo assim afunção hepática e mitocondrial. Além disso, é importante destacar que a IL-10 éinfluenciada pelo exercício físico, que demonstra aumentar suas concentraçõescirculantes após o treinamento. Portanto, um objetivo significativo deste estudo éinvestigar o papel da IL-10 na regulação dos processos mitocondriais e de autofagia nofígado após o treinamento de força. Assim, os objetivos específicos deste estudoincluem: 1) verificar se há comprometimento no funcionamento do maquináriomitocondrial e da via da autofagia no tecido hepático na ausência de IL-10; e 2)investigar o papel da IL-10 na regulação dos processos mitocondriais e de autofagia nofígado de camundongos após oito semanas de treinamento de força. Para tanto, serãoutilizados camundongos selvagens (WT) e nocautes para IL-10 (IL-10 KO), que serãodivididos em dois subgrupos para cada fenótipo (n=20/grupo): Controle (sedentário;CT), Exercício (EX, submetido ao exercício de força). As metodologias empregadasneste projeto serão RTq-PCR, técnica de western blotting, ressonância paramagnéticaeletrônica, e análise histológica com coloração de Oil-red. De acordo com a distribuiçãoestatística dos dados, serão utilizados testes paramétricos ou não paramétricos para acomparação dos parâmetros estudados entre os grupos experimentais.

Com o avanço da competitividade esportiva, treinamentos ficarão cada vez mais intensos, porém, exercícios físicos exaustivos podem influenciar negativamente na cognição, além de aumentar a demanda energética durante a atividade esportiva. Diante disso, a suplementação exógena de éster de cetona pode ter sua importância, pois parece auxiliar tanto na preservação da capacidade cognitiva quanto no fornecimento de energia alternativa ao corpo humano. Dessa maneira, nossa hipótese é que a cetogênese interfere positivamente na via da quinurenina e no sistema energético durante o exercício físico, resultando na melhora do desempenho esportivo. Método: Será um ensaio clínico, randomizado, cruzado e duplo cego. Os 16 ciclistas amadores perfomarão durante duas horas, consumindo, em um momento, bebida controle contendo carboidrato (CHO), e em outro momento, suplementando bebida carboidrato acrescida de cetona (CHO-KE). Ambas condições suplementarão o mesmo valor energético durante o percurso, permitindo-nos avaliar a performance cognitiva e física, além da investigação da via da quinurenina. Os atletas responderão o questionário de qualidade do sono, humor e tolerância intestinal da suplementação. O sangue coletado será submetido as análises de Western blot, ensaio de imunoabsorção (ELISA) e metabolômica. De acordo com a distribuição estatística dos dados, serão utilizados testes específicos para comparação dos resultados, adotando o nível de significância de p<0.05.

A Doença de Alzheimer (DA) é um dos principais desafios globais de saúde, afetando especialmente países de média e baixa renda como o Brasil, onde a incidência da doença está em crescimento devido ao envelhecimento populacional e fatores de risco como hipertensão, obesidade e inatividade física. Estudos indicam que até 45 dos casos poderiam ser prevenidos ou retardados por meio de intervenções em fatores ambientais e hábitos saudáveis, como o exercício físico. Embora o impacto do exercício físico aeróbio, de resistência e combinado seja amplamente descrito na literatura, seus efeitos intergeracionais e no modelo murino APP/PS1 de DA permanecem pouco explorados. Dessa maneira, este projeto investigará os efeitos do treinamento físico combinado no modelo APP/PS1, avaliando a epigenética do hipocampo, aspectos comportamentais e funcionais, e as vias moleculares AMPK e PGC-1, em quatro momentos distintos na prole (3, 6, 9 e 12 meses). Estudos prévios demonstram que o exercício físico pode ativar essas vias, que desempenham papéis críticos na proteção contra o estresse oxidativo, manutenção da função mitocondrial e regulação do metabolismo energético. Além disso, o exercício físico paterno tem mostrado potencial para influenciar marcadores epigenéticos no esperma, como miRNAs, que podem ser transmitidos para a prole, promovendo melhorias metabólicas e cognitivas. O projeto integrará análises in vitro (células SH-SY5Y) e in vivo (camundongos APP/PS1) para validar os efeitos do exercício. Também serão realizadas análises histológicas e de microscopia eletrônica no hipocampo dos camundongos e avaliações epigenéticas para compreender os impactos intergeracionais. Os resultados esperados podem preencher lacunas na literatura, destacando o potencial do exercício físico como estratégia não farmacológica para prevenir ou retardar a progressão da DA, promovendo benefícios epigenéticos e cognitivos tanto no parental quanto nas gerações futuras. (AU)

O Diabetes Mellitus tipo 2 (DM tipo 2) é uma doença metabólica heterogênea, caracterizada principalmente pela resistência à insulina. Fatores como a inatividade física e o aumento do consumo de dietas hipercalóricas contribuem para o desenvolvimento dessa patologia. O exercício físico tem se mostrado uma estratégia eficaz na prevenção e tratamento do DM tipo 2, pois contribui para o controle glicêmico, aumentando a sensibilidade à insulina e reduzindo a resistência à insulina. Nesse contexto, o receptor nuclear REV-ERB, um repressor transcricional de genes envolvidos na regulação dos ritmos circadianos, desempenha importante função no metabolismo da glicose, do colesterol e na resposta inflamatória. Essa proteína é expressa em diversos tecidos, com destaque para o músculo esquelético (ME), atuando na biogênese mitocondrial, função oxidativa, modulação da morfologia e função muscular No entanto, a função do REV-ERB nos diferentes tipos de músculo esquelético (ME) ainda não está completamente elucidada, especialmente no contexto da patogênese do DM tipo 2 e nas adaptações ao exercício físico. O objetivo deste estudo é investigar os efeitos do exercício combinado em camundongos knockout (KO) para o gene subfamília 1 do receptor nuclear, membro do grupo D1 (Nr1d1), induzidos ao DM tipo 2. Camundongos homozigotos floxados para o gene Nr1d1 e camundongos KO condicional para o Nr1d1 machos serão induzidos ao DM tipo 2 por estreptozocina, e após 8 semanas em dieta hiperlipídica ou padrão, serão submetidos a um protocolo de treinamento combinado por mais 8 semanas. As metodologias empregadas incluem avaliação do desempenho funcional, composição corporal, teste de tolerância à glicose, análise in vivo da sensibilidade à insulina, cultura primária de células, medição da respiração mitocondrial, análise de conteúdo lipídico, perfil hormonal e inflamatório, além de análise de expressão gênica e proteica, histologia muscular e transcriptoma. A análise estatística será realizada utilizando análise de variância de duas vias (ANOVA), seguida do teste de Tukey, e os resultados serão expressos como médias desvio padrão, considerando um nível de significância de p < 0,05. Com essas análises esperamos que esses dados permitam identificar novos alvos moleculares que possam contribuir para o tratamento do DM tipo 2 e elucidar os mecanismos moleculares associados ao exercício combinado. (AU)

Segundo a literatura, a ausência do domínio pirina da família NLR (NLRP3) está relacionada com o envelhecimento muscular e progressão da sarcopenia. O inflamassoma NLRP3 pode ser induzido por diversos patógenos e padrões moleculares associados ao dano celular e de organelas danificadas, e sua ativação estimula a maturação de citocinas pró-inflamatórias, como a interleucina-1beta. O NLRP3 está intimamente relacionado ao envelhecimento, formação de espécies reativas de oxigênio (ROS), disfunção muscular e mitocondrial. Elegantemente, McBride e colaboradores demonstraram que o NLRP3 participa da perda relacionada à idade do potencial glicolítico muscular. Sayed e colaboradores observaram que fêmeas knockout de NLRP3 apresentaram redução de lactato, número de fibras musculares e número mitocondrial aos 12 meses de idade, já aos 24 meses foi detectado dano mitocondrial, redução da atividade locomotora, destruição das cristas mitocondriais, fragmentação nuclear, formação de agregados tubulares e aumento do índice de fragilidade. Estudos sobre o conjunto de processos fisiológicos nas células são extremamente necessários, uma vez que diversas vias possuem comunicação celular e podem estar diretamente relacionadas com a sarcopenia, a exemplo da autofagia, biogênese mitocondrial e síntese proteica. Sabendo que com o envelhecimento há diminuição do processo autofágico, uma vez que as investigações sobre a relação entre a autofagia e NLRP3 no músculo esquelético são limitadas, o primeiro objetivo do projeto atual será verificar se a sarcopenia, devido à ausência do NLRP3 (camundongos NLRP3 nocaute/KO), ocorre devido a prejuízo na via da autofagia. Sabendo que o exercício físico está associado com o aumento da autofagia, como segundo objetivo, verificaremos o papel do NLRP3 na resposta da via da autofagia no músculo esquelético de camundongos após um protocolo de exercício combinado. A proteína Rev-erb, codificada pelo gene nuclear receptor subfamily 1 group D member 1 (Nr1d1), é um importante regulador fisiológico da autofagia, conteúdo mitocondrial, função oxidativa e manutenção da massa muscular esquelética, tornando essa proteína um alvo molecular promissor para a prevenção e tratamento da sarcopenia. Poucos estudos enfatizaram o papel da Rev-erbalfa no músculo esquelético, além de quais proteínas e vias moleculares a Rev-erbalfa é capaz de modular. De acordo com os nossos dados preliminares utilizando a análise de bioinformática, a proteína Rev-erbalfa pode estar associada com outros eventos celulares e moleculares ainda não investigados no músculo esquelético. Com base nessas informações, e para expandir o conhecimento acerca do comportamento do gene Nr1d1 e sua proteína Rev-erb em diversos modelos de envelhecimento, o terceiro objetivo deste projeto será verificar se a deleção global do NLRP3 pode modular a via molecular da Rev-erb no músculo esquelético. Além disso, o presente projeto de pesquisa investigará a relação entre NLRP3 e Rev-erb em células C2C12 (mioblastos/miotubos) in vitro.

O músculo esquelético é o tecido mais abrangente do corpo humano, compreendendo cerca de 40 do peso corporal total e 50-75 de todas as proteínas no organismo. A posição em série de seus sarcômeros resulta na contração muscular, a qual envolve uma série de processos químicos que requer uma ótima concentração de cálcio (Caz) no lúmen do retículo endoplasmático (RE). O RE é uma organela intracelular responsável pela manipulação de Caz, síntese lipídica, dobramento e tradução de proteínas de maneira adequada. No entanto, quando ocorre um desequilíbrio na homeostase e, consequentemente, uma falha das ações citadas anteriormente, acontece o estresse do retículo endoplasmático (RE), que pode levar a apoptose celular. Para a reversão de tal processo, as células ativam a resposta de proteína desdobrada (UPR), auxiliando a restaurar o funcionamento adequado do RE. Uma ferramenta não farmacológica que pode mediar as respostas ligadas a UPR é o exercício físico crônico, atuando como um mecanismo de proteção à estresses atuais e futuros. Além disso, uma citocina anti-inflamatória que vem ganhando notoriedade por seu papel inibidor do estresse do RE é a interleucina-10 (IL-10), desempenhando um papel central no controle das respostas imunes e adaptativas. Portanto, o objetivo do presente projeto é verificar o papel da IL-10 no estresse do RE no músculo esquelético e o efeito do protocolo de exercício de força sobre a via da UPR em animais selvagens (WT) e nocaute (KO) de IL-10. Serão empregados camundongos C57BL/6 com seis semanas de idade e camundongos IL10-/- que serão obtidos do Laboratório Jackson, criados e utilizados como o grupo KO de IL-10. Os camundongos WT e KO serão distribuídos em dois subgrupos para cada fenótipo (n=5/grupo): Controle (CT; sedentário) e Exercício (EX; submetido ao protocolo de exercício resistido). Após a determinação de 1RM na exercício de escalada, os animais realizarão um protocolo de força. Esse treinamento será realizado em dias alternados, três vezes por semana, ao longo de 8 semanas. A inflamação e estresse do RE serão quantificados por meio da técnica RT-qPCR.

A alteração dos ritmos circadianos tem sido demonstrada como um dos principais fatores de risco para desenvolver obesidade e diabetes tipo 2. O receptor nuclear Nr1d1 (Rev-erb) é um componente central do ciclo circadiano e tem sido destacado como um elo essencial entre o ciclo circadiano e o metabolismo. Observou-se que a proteína Rev-erb exerce um controle meticuloso sobre a via da autofagia, a qual mantém uma relação direta com a obesidade. Dado que os genes envolvidos no ritmo circadiano desempenham um papel significativo na regulação do equilíbrio energético em mamíferos, a interrupção desses genes pode contribuir para o desenvolvimento da obesidade e da síndrome metabólica em camundongos. Portanto, a compreensão da função do gene Nr1d1 (Rev-erb) no tecido muscular esquelético e das vias moleculares que esta proteína é capaz de modular na condição de obesidade assume uma importância crucial no avanço do conhecimento acerca da função desta proteína. Assim, o objetivo primordial do presente trabalho é verificar se animais obesos, por indução de dieta hiperlipídica, sem o gene Nr1d1 no músculo esquelético, apresentariam uma exacerbação da patogênese da obesidade na saúde muscular (composição e tamanho muscular, desempenho, adiposidade, inflamação etc.), bem como a resposta da autofagia frente a esse cenário, em comparação com seus pares controle. Serão utilizados camundongos homozigotos flox do gene Nr1d1 e camundongos knockout (KO) condicional (músculo esquelético) do gene Nr1d1 com dieta controle e dieta hiperlipídica (HFD), além de animais que serão transfectados com o vírus adeno-associado para superexpressão da Rev-erb. Os animais serão submetidos aos testes metabólicos e avaliações de desempenho físico, antes e após um período de oito semanas de dieta hiperlipídica, para verificação da interferência da dieta e modelo genético nos parâmetros físicos e metabólicos. Após os testes, serão removidos o sangue e músculo esquelético (sóleo, extensor longo dos dedos - EDL, e tibial anterior - TA) e estocados em -80C, para análises bioquímicas, reação em cadeia da polimerase - transcriptase reversa quantitativa (RTq-PCR), immunoblotting, análises estereológicas, ressonância paramagnética eletrônica (RPE), proteômica e bioinformática. Os resultados serão expressos em média desvio padrão da média. Todas as análises serão bilaterais e o nível de significância será pré-fixado em pd0,05. (AU)

O envelhecimento é um processo multifatorial marcado por diversas alterações epigenéticas e moleculares: encurtamento de telômeros, exposição do DNA a danos, disfuncionalidade mitocondrial e estresse oxidativo. Tais alterações levam à degeneração de células e moléculas, que afeta tecidos, órgãos e sistemas ao longo do tempo, reduzindo a capacidade do corpo humano em resistir a danos e favorecendo o desenvolvimento de doenças crônicas como o Diabetes Mellitus Tipo 2 (DM2). A taurina, aminoácido semi-essencial, parece estar relacionada à homeostase oxidativa, com o controle da glicose e com a inflamação. Conhecer as concentrações plasmáticas deste aminoácido em diferentes populações é necessário para uma maior compreensão do papel da taurina na fisiopatologia da obesidade e do DM2 na população idosa, além de gerar hipóteses a respeito de intervenções capazes de atenuar o estresse oxidativo e a inflamação, importantes marcos do envelhecimento. O objetivo será investigar se a condição de saúde (idosas com obesidade, DM2 e sem comorbidades) promove alteração na concentração de taurina plasmática e correlacionar essa concentração com os marcadores bioquímicos (glicemia, colesterol total, insulina, triglicerídeos e colesterol-HDL), desempenho físico (por meio dos resultados dos testes físicos) e Nível de Atividade Física (NAF). Métodos: Participarão do estudo transversal 40 idosas que serão alocadas em quatro grupos distintos, e serão classificadas: idosas com obesidade e DM2, idosas com obesidade e sem DM2; idosas eutróficas e com DM2; idosas eutróficas. Serão realizadas: avaliação da composição corporal (varredura de corpo total e regional, iDXA), antropometria, testes para avaliação do desempenho físico, coleta de sangue e o NAF por meio do Questionário de Baecke Modificado para Idosos. Análise estatística: Anova One-way para verificar as diferenças e comparar os quatro grupos.

Sabe-se que os potenciais benefícios do PGC-1alfa na função mitocondrial do músculo esquelético são mediados por adaptações induzidas pelo exercício físico. Contudo, a interconexão do PGC-1alfa com outras moléculas ainda não foi totalmente elucidada e descrita na literatura. Desta forma, é de suma importância desvendar os mecanismos pelos quais a homeostase muscular é regulada e quais as moléculas chaves neste controle. Para isso, o principal objetivo deste estudo será investigar se a relação entre PGC-1alfa e Rev-erb-alfa modula a biogênese mitocondrial, estresse oxidativo e autofagia no músculo esquelético. Dois estudos independentes (in vitro e in vivo) e complementares são propostos. No estudo 1, analisaremos os efeitos da manipulação de PGC-1-alfa (Knockdown e superexpressão) e Rev-erb-alfa (Knockdown, Knockout e superexpressão) em células C2C12. No estudo 2, investigaremos o papel do treinamento físico sobre as vias de biogênese mitocondrial, autofagia e rev-erb-alfa no músculo esquelético de camundongos com deleção específica do PGC-1alfa. Ao final dos experimentos serão analisadas as seguintes adaptações decorrentes do exercício físico: funcionais (desempenho físico e respiração mitocondrial), morfológicas (área de secção transversal e marcação de proteínas envolvidas no ciclo circadiano e autofagia), bioquímicas (atividade antioxidante), e moleculares (conteúdo proteico e produção de espécies reativas de oxigênio). Assim, a compreensão do papel do PGC1alfa e quais proteínas esse fator de transcrição é capaz de modular é uma esperança promissora para mapear vias específicas responsáveis pela sobrevivência celular e saúde muscular, fornecendo assim, novas possibilidades terapêuticas e de tratamento para as desordens envolvendo a disfunção mitocondrial.

Processo:&#09;22/09100-7&#10;Modalidade de apoio:&#09;Bolsas no Brasil - Doutorado&#10;Vigência (Início):&#09;01 de fevereiro de 2023&#10;Vigência (Término):&#09;31 de janeiro de 2027&#10;Área do conhecimento:&#09;Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular&#10;Pesquisador responsável:&#09;Adelino Sanchez Ramos da Silva&#10;Beneficiário:&#09;Bruno Brieda Marafon&#10;Instituição Sede:&#09;Escola de Educação Física e Esporte de Ribeirão Preto (EEFERP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil&#10;Vinculado ao auxílio:&#09;19/11820-5 - Função do Nr1d1 sobre a Sarcopenia associada ao envelhecimento, AP.TEM&#10;Assunto(s):&#09;Envelhecimento Sarcopenia&#10;Palavra(s)-Chave do Pesquisador:&#09;Envelhecimento | exercício combinado | Sarcopenia | Upr | Biologia Molecular do Exercício&#10;Resumo&#10;&#10;O envelhecimento está associado com a redução progressiva da força muscular, massa muscular, e desempenho físico (sarcopenia). Estimativas apontam que a cada 10 anos a perda de massa muscular é de 8% após os 40 anos e aumenta para 15% por década após os 70 anos. Quando se trata de força muscular, os números são ainda mais agressivos. Uma importante organela responsável pela manutenção muscular através da síntese e degradação de proteínas é o retículo endoplasmático (RE). Quando estressado, o RE aciona uma resposta de proteína desdobrada (UPR) para voltar a homeostase proteica dento do RE. Indivíduos idosos apresentam uma piora na UPR e, consequentemente, elevado estresse do RE que pode levar a apoptose celular. Recentemente, a sarcopenia foi classificada como uma doença e este fato trouxe a possibilidade de estabelecer diretrizes para o seu diagnóstico e tratamento. Nesse sentido, a proteína rev-erb-alfa é um alvo molecular promissor para a prevenção e tratamento desta doença, pois, além de possuir um importante papel na regulação da autofagia, conteúdo mitocondrial, função oxidativa e manutenção da massa muscular esquelética, parece regular também os marcadores da UPR e aliviar o estresse do RE. Portanto, o objetivo do presente projeto é verificar 1) o efeito do envelhecimento sobre a rev-erb-alfa, estresse do RE e apoptose, 2) o efeito da deleção condicional (músculo esquelético) do gene Nr1d1 sobre os marcadores do estresse do RE e apoptose, 3) efeito da ativação farmacológica do Nr1d1 sobre o estresse do RE e apoptose, 4) Efeito do exercício físico crônico sobre a rev-erb-alfa, estresse do RE e apoptose durante o envelhecimento, e 5) o papel da rev-erb-alfa nas adaptações do RE em resposta ao estresse gerado pelo exercício físico.

Nas duas últimas décadas a neuroinflamação foi considerada uma resposta biológica apenas coadjuvante na etiopatogenia da Doença de Alzheimer. No entanto, estudos pré-clínicos e clínicos mais recentes confirmam a participação decisiva do sistema imunológico na patogênese da Doença de Alzheimer. Nesse contexto a citocína Interleucína-10 (IL-10) passou a ser considerada como uma molécula chave no controle da neuroinflamação, devido seus potentes efeitos anti-inflamatórios. Portanto o objetivo do atual projeto será avaliar o potencial efeito anti-inflamatório da IL-10 no hipocampo em modelo pré-clínico da Doença de Alzheimer. Serão combinadas abordagens fisiológicas, genéticas e farmacológicas em camundongos APP/PS1 e IL-10-/-. Além dos estudos in vivo, serão realizadas análises in sílico a partir de bases de dados de camundongos idosos e pacientes com a Doença de Alzheimer. Estamos certos de que o desenvolvimento do atual projeto poderá contribuir de forma significativa para o entendimento do papel da IL-10 na etiopatogenia e no tratamento da Doença de Alzheimer.

Recentemente, a Organização Mundial de Saúde classificou a sarcopenia como uma doença, fato que permitirá o estabelecimento de diretrizes clínicas universais para o seu diagnóstico e tratamento. Nesse sentido, a proteína rev-erb-alfa é um alvo molecular promissor para a prevenção e tratamento da sarcopenia, pois possui um importante papel na regulação da autofagia, conteúdo mitocondrial, função oxidativa e manutenção da massa muscular esquelética. Portanto, o presente projeto temático investigará a função do gene nuclear receptor subfamily 1 group D member 1 (Nr1d1) no desenvolvimento da sarcopenia associada ao envelhecimento através de experimentos em células, roedores e seres humanos. Para isso, serão utilizados os seguintes subprojetos: 1) Efeito do envelhecimento sobre a rev-erb-alfa e suas relações com a sarcopenia; 2) Efeito da deleção global ou condicional (músculo esquelético) do gene Nr1d1 sobre o envelhecimento; 3) Análise do interactoma da proteína rev-erb-alfa através da imunoprecipitação da proteína alvo e identificação de possíveis ligantes por espectrometria de massas em cultura de células; 4) Efeitos da ativação farmacológica, nutricional e genética do Nr1d1 sobre o processo de envelhecimento; 5) Efeitos do exercício físico sobre a sarcopenia associada ao envelhecimento: papel da rev-erb-alfa no músculo esquelético. As metodologias empregadas neste projeto serão RNA-seq, immunoblotting, Real time-RTqPCR, interactoma, espectrometria de massas, terapia genética (CRISPR/Cas9 e vetor viral adeno-associado), histologia, imuno-histoquímica, imunofluorescência, bioinformática e fluxo autofágico lisossomal. De acordo com a distribuição estatística dos dados, serão utilizados testes paramétricos ou não paramétricos para a comparação dos parâmetros estudados entre os grupos experimentais. (AU).

A obesidade avança mundialmente de forma descontrolada, sendo considerada fator preditivo também a doenças neurodegenerativas como a Doença de Alzheimer (DA). Não apenas a senescência se envolve à patogênese da DA, mas também o processo inflamatório característico da obesogênese, que pode antecipar seu surgimento e até mesmo ser gatilho inicial. A neuroinflamação hipocampal pode precipitar a neurodegeneração conduzindo a danos irreversíveis à memória. Dietas ricas em gorduras saturadas podem desestabilizar circuitos neurais homeostáticos hipocampais, formados por circuitaria complexa entre células gliais, neurônios, oligodendrócitos e astrócitos. Em tais grupamentos, receptores do tipo Toll (TLR) medeiam os efeitos inflamatórios das gorduras, e, receptores de citocinas, intensificam a inflamação. Consequentemente, a ativação inflamassomal, desregulação do retículo endoplasmático e falha na autofagia induzem à apoptose. Paralelo à inflamação, a resistência hipocampal à insulina pode reduzir o clearance local da proteína beta-amilóide (²A), formar emaranhados proteicos danosos às sinapses, e hiperfosforilar a proteína TAU, que desestrutura o citoesqueleto neuronal e intensifica sinais de morte. Conjuntamente, tais fenômenos implicam no avanço da DA, com desfecho clínico grave, como perda de memória e demência. Por outro lado, ácidos graxos insaturados ômega-3 (É3) são conhecidos como potentes agentes anti-inflamatórios, e seu consumo se correlaciona com benefícios aos portadores da DA. Contudo, tal observação ainda não encontra sustentação mecanística robusta. O É3 é agonista do receptor GPR120, que parece desarticular a sinalização intracelular controlada pelos receptores TLR4, TNF± e IL1² e pelo inflamassomo. Entretanto, sua presença e função não foi demonstrada no hipocampo de animais e humanos. Agonistas sintéticos do GPR120 têm sido desenvolvidos devido amplas possibilidades terapêuticas, já presentes em ensaios clínicos. Caso esse mecanismo se comprove plausível, a possibilidade farmacológica para postergação da DA poderia ser vislumbrada, contudo, sendo o É3 encontrado em alimentos, se tornaria também factível e, principalmente, de acesso à toda população.

Nosso grupo de pesquisa verificou que o desequilíbrio entre o excesso de exercício físico e o período adequado de recuperação está associado com sinais de hipertrofia cardíaca patológica, diminuição da fosforilação da proteína AMP-activated protein kinase (AMPK) no resíduo tirosina 172, e aumento das concentrações de interleucina-6 (IL-6) no soro e tecido cardíaco de camundongos. Sabe-se que o aumento da IL-6 é capaz de inibir o processo de autofagia, cuja ativação é considerada um alvo terapêutico promissor para a prevenção e o tratamento de doenças cardiovasculares. Nesse sentido, o principal objetivo do presente projeto de pesquisa será investigar o papel da IL-6 nas respostas da via da autofagia no coração de camundongos submetidos ao exercício físico agudo exaustivo. Para tanto, camundongos wild-type C57BL/6J (WT) e nocaute de IL-6 (KO) serão submetidos a um protocolo de exercício físico agudo exaustivo. Amostras de soro e do músculo cardíaco serão coletadas imediatamente, 1h e 3h após o protocolo de exercício físico exaustivo. Os parâmetros funcionais, séricos e moleculares serão analisados pelo ecocardiograma, fluxo autofágico, além das técnicas de Real time-RTqPCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) e immunoblotting. De acordo com a distribuição estatística dos dados, serão utilizados testes paramétricos ou não paramétricos para a análise dos resultados. Será adotado o nível de significância de p<0, 05. (AU)

A regulação da ingestão alimentar e controle do gasto energético ocorrem no hipotálamo através de neurônios orexígenos e anorexígenos. A inflamação hipotalâmica induzida pela obesidade está associada com a resistência à insulina e leptina, o que prejudica as ações desses hormônios na via da autofagia, induzindo a hiperfagia e aumentando a adiposidade corporal. Sabe-se que o jejum intermitente modula a expressão de neuropeptídios, promovendo a redução da gordura corporal independentemente da diminuição da ingestão de calorias, além de aumentar o gasto energético diário, o que sugere uma relação do jejum intermitente com as vias da leptina e autofagia no hipotálamo. Por outro lado, o exercício físico crônico tem um potente efeito anti-inflamatório no tecido hipotalâmico, sendo capaz de reestabelecer a sinalização da leptina. No entanto, as respostas da via autofágica hipotalâmica em camundongos obesos submetidos ao jejum intermitente associado com o exercício físico crônico são desconhecidas. Assim, o principal objetivo do presente projeto de pesquisa será avaliar os efeitos da associação do jejum intermitente com o exercício físico crônico nas vias da inflamação, leptina e autofagia no hipotálamo de camundongos obesos. Os roedores serão divididos em 5 grupos: Controle magro (C), Controle Obeso (O), Jejum intermitente (JI), Treinado (TR) e Treinados que realizam jejum intermitente (TRJ). Antes e após os protocolos de jejum intermitente e/ou treinamento físico, o gasto calórico, composição corporal, sensibilidade à insulina e níveis séricos de insulina e leptina serão avaliados. A ingestão alimentar e peso corporal serão avaliados semanalmente. Após a eutanásia dos roedores, as técnicas de immunoblotting para análise da via inflamatória hipotalâmica e resposta central à leptina, real-Time PCR para análise da expressão de neuropeptídios anorexígenos (POMC e CART) e orexígenos (NPY e AgRP), e imunofluorescências para análise da expressão de componentes da via autofágica na porção médio-basal do hipotálamo, serão empregadas. Para a comparação dos resultados, serão utilizados testes paramétricos ou não paramétricos com nível de significância de p<0.05.

Antecedentes: A autofagia desempenha um papel essencial na conquista da homeostase corporal. Uma das principais proteínas envolvidas nesse processo é a LC3I, que após a lipidação leva à formação de LC3II que participa da formação e maturação do autofagossomo. Este estudo descritivo verificou as respostas das proteínas LC3II a LC3I, bem como o tempo dessa taxa em fígados de camundongos após diferentes tipos de protocolos agudos de exercícios físicos. Métodos: Camundongos machos C57BL / 6 com oito semanas de idade foram mantidos três por gaiola com temperatura controlada (22 ± 2 ° C) em um ciclo normal claro-escuro de 12: 12 horas com comida (Purina chow) e água ad libitum. Os camundongos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: controle (CT, camundongos sedentários), força (FO, submetido a um único exercício de força), endurance (END, submetido a um único exercício de endurance), e concorrente (CE, submetido para uma única sessão de resistência combinada com exercícios resistidos). Os fígados dos camundongos foram extraídos e utilizados para a técnica de imunotransferência. Resultados: A razão hepática LC3B II/I para os grupos FO e END não foi alterada durante os diferentes momentos. Para o grupo CE, houve uma diminuição dessa relação 12h após o exercício em comparação com o tempo 0 e 18h. Além disso, as razões hepáticas LC3B II / I não foram diferentes entre os protocolos agudos de exercício físico ao longo do tempo. Conclusão: A razão hepática LC3B II / I não foi influenciada pelos protocolos de força e endurance, mas diminuiu em resposta ao protocolo concorrente às 12h após o estímulo.

O Dr. Donato Americo Rivas é Cientista II e Professor Instrutor no Nutrition, Exercise Physiology, and Sarcopenia Laboratory, Jean Mayer USDA Human Nutrition Research Center on Aging (HNRCA), na Tufts University (Boston, EUA). O Dr. Rivas pesquisa o papel dos substratos nas vias de sinalização celular que controlam o metabolismo e o crescimento do músculo esquelético e como a nutrição, o envelhecimento e o exercício físico contribuem para as alterações na homeostase da energia do músculo esquelético. Nessa visita ao Brasil, o Dr. Rivas participará como membro titular de uma banca de mestrado, contribuirá com a interpretação e discussão dos resultados parciais de cinco projetos de pesquisa financiados pela FAPESP (processos 2017/09038-1, 2017/12765-2, 2017/19869-8, 2017/25492-4, e 2018/12519-4), cujo Prof. Dr. Adelino Sanchez Ramos da Silva é o responsável. Além disso, o Dr. Rivas ministrará palestras para os alunos do Programa de Pós-Graduação - Educação Física e Esporte (Escola de Educação Física e Esporte de Ribeirão Preto/Universidade de São Paulo), do Programa de Pós-Graduação em Reabilitação e Desempenho Funcional (Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/Universidade de São Paulo), e do Programa de Pós-Graduação em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo (Faculdade de Ciências Aplicadas/Universidade Estadual de Campinas). (AU)

A inflamação leva ao estresse do retículo endoplasmático (ER), assim como a prática de exercício físico agudo e crônico. Entretanto, ainda não existem dados na literatura a respeito das funções do TLR4 no estresse do ER durante o exercício. Portanto, o objetivo principal do estudo é verificar as respostas dos indicadores do estresse do ER em camundongos knockout (KO) de TLR4 e camundongos wild-type (WT) após exercício físico agudo e crônico. Foram utilizados 25 camundongos machos C57BL/6 Tlr4wt/wt e 25 camundongos Tlr4-/- com 8 semanas de vida. Os animais foram mantidos em gaiolas de polietileno em trios, com temperatura controlada (222C), ciclo claro-escuro invertido (12/12h), com livre acesso a água e ração convencional. Os animais foram separados em três grupos para a sessão aguda de exercício físico (EFA): controle (camundongos sedentários), moderado (exercício físico moderado) e intenso (exercício físico intenso); e em dois grupos para o protocolo de treinamento crônico (EFC): controle (camundongos sedentários), treinados (protocolo de treinamento). A avaliação do desempenho físico dos camundongos ocorreu 48h antes e depois do protocolo de EFC, e foi composta pelo teste do rotarod, teste de carga incremental, e teste exaustivo. Duas horas após a realização dos protocolos de EFA, e uma semana após o término do protocolo de EFC os animais foram anestesiados e os músculos esqueléticos (gastrocnêmios) foram retirados, isolados e armazenados no freezer com temperatura em -80C para análise subsequente da expressão gênica pela técnica de Real Time- Polymerase Chain Reaction (RTq-PCR) e análise proteicas através da técnica de Western blot. Os resultados até o momento (EFA) mostram que os camundongos KO de TLR4 alcançaram uma velocidade significativamente menor do que o grupo WT, assim como na velocidade ajustada para Pmax de 75. Não houve diferença estatística entre camundongos WT e KO no estado basal para nenhuma das proteínas verificadas. A chaperona BiP apresentou uma queda em camundongos KO após exercício físico independente da intensidade, quando comparados ao grupo WT (p < 0,05). Ao observar as respostas da Caspase3 no grupo KO, verificou-se um aumento significativo desta proteína após exercício intenso, quando comparado ao exercício moderado. Também houve diferença entre os genótipos dos animais para o exercício intenso, onde a Caspase3 foi mais expressa nos camundongos KO. Concluindo, a falta de TLR4 parece afetar na disponibilidade de BiP durante o estresse do ER induzido pelo EFA, assim como levar ao aumento da ativação da Caspase 3, proteína relacionada à apoptose celular.

O número de pessoas com Demência tem crescido substancialmente ao redor do mundo, tendo um custo global similar ao PIB de países como Holanda. O Brasil ocupa o nono lugar no ranking. A Doença de Alzheimer (AD) tem a maior prevalência dentre as doenças neurodegenerativas (Demências), sendo a formação de placas ²-amilóide no tecido cerebral uma das características, afetando a função cognitiva. Um dos fatores envolvidos na má formação e aglomeração ²-amilóide é o funcionamento prejudicado da via autofágica-lisossomal, diminuindo a remoção da ²-amilóide, permitindo que se aglomerem levando a neurodegeneração. Desde sua descoberta, a TFEB tem demonstrado um papel fundamental na via autofágica-lisossomal. Ela é o principal coordenador autofágico, regulando positivamente a biogênese lisossomal e a formação do autolisossomo, tendo a capacidade de melhorar o quadro patológico de doenças neurodegenerativas. O exercício físico tem se mostrado uma ferramenta eficaz na prevenção da neurodegeneração, contudo os mecanismos protetivos necessitam de melhor elucidação. O exercício físico foi capaz de melhorar a autofagia neuronal e diminuir a neurodegeneração através da TFEB, e em tecido muscular pela ativação da via Calcineurina-TFEB, induzir a autofagia. Além disso, o exercício foi capaz de induzir a biogênese e melhorar a função mitocondrial em tecido muscular de forma dependente da TFEB. Sabe-se que disfunções mitocondriais e doenças neurodegenerativas tem uma próxima correlação, e a autofagia mitocondrial tem um papel importante na prevenção desse quadro. Portanto, o objetivo do presente estudo é verificar se a TFEB, através das vias autofágica-lisossomal e da biogênese mitocondrial, juntamente com a Calcineurina, estaria exercendo seu efeito neuroprotetor induzida pelo exercício físico. Os camundongos serão divididos em em 4 grupos: controle (CT; wild type sedentários), controle AD (CAD; APP/PS1 sedentários); treinados (TR; wild type submetidos ao protocolo de exercício); treinados AD (TAD; APP/PS1 submetidos ao protocolo de exercício). Os métodos empregados incluem: teste de memória, immunoblotting, Real time-PCR, imunofluorescência e imageamento cerebral. Será adotado o nível de significância de p<0,05.

A autofagia é um mecanismo de degradação celular que auxilia na remoção de conteúdos citoplasmáticos, como macromoléculas e organelas. Atualmente, o Dr. Adelino Sanchez Ramos da Silva é o investigador principal de cinco projetos apoiados pela Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) que visam avaliar os efeitos do exercício físico sobre a autofagia em múltiplos tecidos. O principal foco de pesquisa do Dr. Joe Quadrilatero é investigar os mecanismos bioquímicos e moleculares que regulam os processos de morte celular (ou seja, apoptose e autofagia) nos tecidos, principalmente no músculo esquelético. Especificamente, seu laboratório está interessado em como a mitofagia (um mecanismo seletivo de autofagia para a degradação da mitocôndria), a função mitocondrial e o estresse oxidativo influenciam a sinalização da morte celular em resposta a lesão/estresse, envelhecimento e doença. Os objetivos desta proposta são: 1) estabelecer uma parceria de pesquisa em que uma das alunas de pós-graduação do Dr. Adelino, Ana Paula Pinto (beneficiária FAPESP, processo número 2017/19869-8), envie um projeto para concorrer a uma Bolsa Estágio de Pesquisa no Exterior (BEPE) para trabalhar com o Dr. Joe Quadrilatero e avaliar os efeitos do overtraining na mitofagia do músculo esquelético; 2) estabelecer um projeto de pesquisa colaborativa que será submetido a agências de fomento de pesquisa no Canadá e no Brasil. Em resumo, esta proposta de pesquisa terá validade de dois anos e resultará em duas visitas de cada um dos pesquisadores ao Canadá e ao Brasil, respectivamente. (AU)

Durante o processo de senescência, alguns fatores como o declínio das funções fisiológicas, a ingestão de alimentos ricos em gordura e a inatividade física estão relacionados com prejuízos no metabolismo hepático levando ao acúmulo de gordura no fígado, também conhecido como doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA). Uma vez instalada a DHGNA há o risco do desenvolvimento da esteatohepatite não alcoólica (EHNA) levando a prejuízos ainda mais severos na qualidade e expectativa de vida. Neste contexto, têm-se buscado identificar moléculas com ações regulatórias sobre a via de sinalização da insulina e nos processos de lipogênese e gliconeogênese no tecido hepático e sobretudo em resposta ao exercício físico em organismos envelhecidos. Nesse contexto, estudos têm demonstrado o papel da proteína Rho-quinase (Rock) em mediar a via de sinalização da insulina através da fosforilação do substrato 1 do receptor de insulina (IRS-1) no resíduo de serina 632/635, e com isso aumentando a captação de glicose no músculo esquelético. Porém, estudos recentes também têm demonstrado que a proteína Rock pode apresentar uma ação negativa no tecido hepático estando envolvida com a lipogênese e a produção hepática de glicose. Com isto, o principal objetivo deste estudo será avaliar os efeitos do exercício físico sobre a via de sinalização da Rock e os efeitos sobre a lipogênese e gliconeogênese no fígado de ratos idosos. Serão utilizados ratos Wistar e Fischer 344 jovens (3-5 meses) e idosos (17 meses) sedentários e exercitados. O protocolo de treinamento físico será de natação, com duração total de 120 minutos, 5 vezes/semana, por 7 dias. Ao final do experimento serão avaliadas as adaptações decorrentes do exercício físico, sendo estas: tolerância à glicose, sensibilidade à insulina, tolerância ao piruvato, glicemia, insulinemia e glicogênio hepático. A nível molecular será avaliado a expressão da Rock1, Rock2, as proteínas ativadora (RhoA) e inibidora (RhoE) da Rock, fosforilação do IRS-1 em serina 632/635 e tirosina 612, pAkt e Akt total, pGSK3 e GSK3 total e outras proteínas relacionadas a lipogênese e PHG no fígado. Será avaliado também a atividade da Rock através da fosforilação da MYPT-1 no tecido hepático. Para as avaliações moleculares serão utilizadas as técnicas de immunoblotting e PCR em tempo real. Além disso, para elucidar o mecanismo específico de ação da proteína Rock, será feita a inibição farmacológica através do inibidor Y-27632 e a superexpressão da Rock em células HepG2. Espera-se através dos achados elucidar os efeitos do exercício aeróbio sobre o metabolismo da Rock e as repercussões sobre a lipogênese e gliconeogênese no fígado de ratos idosos.

O consumo excessivo de gordura saturada altera a funcionalidade de neurônios hipotalâmicos que controlam a homeostase energética, contribuindo diretamente para a instalação do fenótipo obeso. A atividade mitocondrial em subpopulações de neurônios hipotalâmicos está intimamente relacionada ao controle da ingestão alimentar e da homeostase energética. O consumo de dietas ricas em gordura promove sinais deletérios que alteram as características morfológicas e funcionais das mitocôndrias em neurônios. Por outro lado, é sabido que as mitocôndrias possuem mecanismos altamente conservados entre as espécies com a finalidade de reestabeler a proteostase e a função mitocondrial, dentre eles destaca-se a UPRmt, do inglês mitochondrial Unfolded Protein Response. A UPRmt é ativada pela perda da proteostase mitocondrial, gerada por proteínas malformadas ou pela alteração do equilíbrio entre a produção de proteínas que formam os complexos mitocondriais que são oriundas tanto do DNA nuclear (DNAn) quanto do DNA mitocondrial (DNAmt). Esse mecanismo conhecido é como desequilíbrio mitonuclear. Contudo, os efeitos do consumo de gordura saturada sobre o desequilíbrio mitonuclear e sobre a UPRmt em neurônios hipotalâmicos ainda são desconhecidos. No presente projeto serão combinadas análises de bioinformática com experimentos em cultura de células e em modelo experimental de obesidade em camundongos wild-type e animais modificados geneticamente para a avaliação do papel do desequilíbrio mitonuclear e da UPRmt hipotalâmica no controle da homeostase energética. Nesse contexto também serão avaliadas duas diferentes estratégias terapêuticas, o uso de nutrientes e o exercício físico. O desenvolvimento do atual projeto poderá fornecer novos conhecimentos acerca dos efeitos da dieta rica em gordura sobre o funcionamento das mitocôndrias em neurônios hipotalâmicos, abrindo novas perspectivas para o tratamento e prevenção da obesidade.

As células-tronco do músculo esquelético ou células-satélite (SCs) são responsáveis pelo crescimento e regeneração das fibras musculares. Essas células estão situadas entre a membrana basal e o sarcolema nas fibras musculares. Numerosas vias de sinalização regulam a proliferação e diferenciação das SCs. Recentemente, demonstrou-se que a autofagia está envolvida na função e manutenção adequada das populações de células-tronco, promovendo sua quiescência, bem como mantendo suas propriedades e auto- renovação. A autofagia degrada macromoléculas e organelas que resultam na reciclagem dos componentes bioenergéticos. Ela também está envolvida em papéis celulares fundamentais, como crescimento e desenvolvimento celular, biogênese de organelas e regulando o equilíbrio entre a síntese de proteínas e a degradação. Sabe-se que as SCs no músculo esquelético estão diminuídas em animais com deficiência da proteína Atg7, essencial na via da autofagia. Curiosamente, a deficiência de autofagia leva a um fenótipo muito semelhante ao observado em células satélites envelhecidas, incluindo danos ao DNA, estresse oxidativo, acúmulo da proteína SQSTM1, mitocôndrias danificadas e marcadores de senescência. Assim, hipotetizamos que a autofagia poderia agir de maneira semelhante no músculo esquelético para permitir a diferenciação muscular e, ao mesmo tempo, evitar a depleção das SCs. Dessa maneira, o principal objetivo do estudo será determinar se SCs deficientes em autofagia sofrem miogênese in vitro e se as células deficientes em autofagia podem efetivamente regenerar o músculo esquelético in vivo.

A porção médio-basal do hipotálamo é composta por neurônios orexígenos AgRP e neurônios anorexígenos POMC, que estão envolvidos na regulação da ingestão alimentar e do gasto energético. Sabe-se que indivíduos obesos apresentam resistência a sinalização hipotalâmica da leptina e insulina devido ao aumento da expressão de proteínas inflamatórias nessa região. Dessa forma, os esperados efeitos anorexígenos induzidos pelos hormônios através de modulações na via autofágica são prejudicados, instalando-se um quadro crônico de hiperfagia, maior coeficiente de eficácia alimentar (razão da alteração do peso/ingestão alimentar) e aumento da adiposidade corporal. O jejum intermitente (JI), uma ferramenta popularmente difundida, é capaz de modular a expressão de neuropeptídios, promover a perda de gordura corporal mesmo sem a redução da ingestão calórica, e elevar o gasto energético diário em obesos, sugerindo assim a existência de modulações na via da leptina e da autofagia no hipotálamo. Todavia, essas respostas ainda não foram investigadas. Além disso, o exercício físico (EF) é capaz de induzir um efeito anti-inflamatório no hipotálamo reestabelecendo a sinalização da leptina. Contudo, é desconhecido os efeitos da combinação do JI com o EF sobre o reestabelecimento do controle autofágico hipotalâmico em obesos. Esse projeto de pesquisa tem como objetivo investigar o efeito da associação do JI com o EF combinado nas vias inflamatória, da leptina e da autofagia no hipotálamo de camundongos obesos. Os camundongos serão divididos em 5 grupos: Controle magro (C); Controle Obeso (O); Jejum intermitente (JI); Treinado (TR) e Treinados que realizam jejum intermitente (TRJ). Antes e após os protocolos de treinamento e/ou JI (24 horas) serão avaliadas as variáveis metabólicas: gasto calórico (por calorimetria indireta), composição corporal (por DEXA), sensibilidade à insulina (pelo teste de tolerância à insulina) e níveis séricos de insulina e leptina. O peso corporal e ingestão alimentar serão avaliados semanalmente. Após a eutanásia serão realizadas 4 diferentes técnicas: a) Immunoblotting: para análise da via inflamatória hipotalâmica e resposta central à leptina; b) Real-Time PCR: para análise da expressão de neuropeptídios anorexígenos (POMC e CART) e orexígenos (NPY e AgRP); c) Imunofluorescência: para análise da expressão de componentes da via autofágica na porção médio-basal do hipotálamo. De acordo com a distribuição estatística dos dados, serão utilizados testes paramétricos ou não paramétricos, e nível de significância pd0.05. (AU)

Recentemente foi evidenciado que o receptor nuclear rev-erb-alfa possui importante papel na adaptação da capacidade oxidativa do músculo esquelético, modulando a via de sinalização da AMPK. O exercício físico de endurance classicamente é capaz de ativar essa via de sinalização, porém os efeitos desse e de outros modelos de exercício físico (resistido e exaustivo) sobre a rev-erb-alfa permanecem desconhecidos. Além da regulação a nível transcricional dessa via de sinalização, já foi demonstrado que a rev-erb-alfa também é capaz de regular negativamente a autofagia no músculo esquelético e a biossíntese de dopamina no hipocampo. Sugere-se na literatura que a dopamina, juntamente com a serotonina, possui papel no desenvolvimento da fadiga do Sistema Nervoso Central (SNC). Resumidamente, a rev-erb-alfa é candidata a modular as adaptações moleculares que medeiam o desempenho físico, fadiga do SNC e autofagia. Dessa maneira, o presente projeto de pesquisa tem como objetivo principal investigar o papel da rev-erb-alfa nas adaptações moleculares induzidas por diferentes modelos de exercício que regulam o desempenho físico, fadiga do SNC e autofagia. Os camundongos serão divididos em 5 grupos: controle (CT; sedentários); endurance I (END1; submetidos ao protocolo de exercício físico aeróbio 1); endurance II (END2; submetidos ao protocolo de exercício físico aeróbio 2), resistido (RES; submetidos ao protocolo de exercício físico de força) e exaustivo (OT; submetidos ao protocolo de overtraining em declive). Como característica translacional, compararemos o RNA mensageiro da rev-erb-alfa e dos genes autofágicos entre indivíduos sedentários e treinados. Os métodos que serão empregados incluem: immunoblotting, real time-PCR, análise por imunofluorescência e HPLC. De acordo com a distribuição estatística dos dados, serão utilizados testes paramétricos ou não paramétricos. Será adotado o nível de significância de p<0,05. (AU)