Vera Luiza Capelozzi.

Resumo
A prevalência e o custo social das doenças respiratórias tais como: câncer de pulmão, síndrome do
desconforto respiratório agudo (SDRA), doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, silicose e
hipertensão arterial pulmonar é elevada e, algumas delas têm poucas alternativas terapêuticas. A
terapia da maior parte dessas doenças se baseia no controle sintomático e não na sua cura efetiva.
A presente proposta tem como objetivo central o entendimento das vias de ativação e regulação das
respostas celulares frente aos insultos e também o desenvolvimento dos mecanismos subjacentes
no reparo e remodelamento das lesões. Existe consenso de que a elucidação das vias e fatores
envolvidos nestas respostas ampliará a capacidade de identificar e desenvolver tratamentos mais
eficazes para o controle de doenças como as propostas neste projeto. Para tal, Prof. Vera Capelozzi
irá coordenar esse projeto em associação com diversos pesquisadores, incluindo pesquisadores
emergentes e doutores, reeditando uma associação de vários anos que implicou na criação de uma
atmosfera de pesquisa altamente colaborativa e na otimização do uso de instalações e equipamentos
comuns. Esse projeto também conta com a colaboração de pesquisadores estrangeiros com vasta
experiência em doenças respiratórias
Folha de Rosto
O projeto intitulado ?Biomarcadores associados ao remodelamento pulmonar
em doenças respiratórias agudas e crônicas: possíveis alvos terapêuticos? terá a
participação de pesquisadores vinculados a 7 Instituições distintas: (1) Universidade de
São Paulo: Departamento de Patologia da FMUSP-SP, (2) Universidade de São Paulo:
Disciplina de Reumatologia da FMUSP-SP, (3) Universidade de São Paulo: Departamento
de Patologia da FMUSP-RP, (4) Universidade Federal do Rio de Janeiro: Instituto de
Biofísica Carlos Chagas Filho, (5) Universidade Estadual Paulista: Departamento de
Genética do IBB/UNESP, (6) Hospital AC Camargo Cancer Center e (7) Hospital de
Câncer de Barretos. Vale ressaltar a ativa participação de pesquisadores emergentes
incluídos no conjunto que mantêm associação de trabalho e co-autoria de grau e extensão
diferentes, fruto de histórias de orientação na pós-graduação ou no pós-doutorado. Pósdoutores,
estudantes de pós-graduação e iniciação científica, bem como técnicos de
laboratório, participarão em diferentes subprojetos gerados a partir da presente proposta já
em andamento. Esse projeto também contará com a colaboração dos professores e 
pesquisadores fora do Brasil: Dr. Ignacio Wistuba e Dr. Edwin Roger Parra ?The University of
Texas, M.D. Anderson Cancer Center, Department of Translational Molecular Pathology, USA.
Aluno de pós-doutorado (Brasil) ?The University of Texas, M.D. Anderson Cancer Center,
Department of Translational Molecular Pathology, USA; Prof. Dr. Sem H. Phan, da Universidade
de Michigan, Ann Arbor-MI, USA. Os pesquisadores associados na presente proposta propõemse,
com os conhecimentos e a experiência ? em vários casos adquiridos conjuntamente ? avançar
na investigação de biomarcadores que poderão contribuir com o desenvolvimento de novas
estratégias terapêuticas em doenças respiratórias.

A instilação de sílica em camundongos resulta em alterações patológicas que mimetizam o padrão da silicose em humano, uma doença pulmonar ocupacional caracterizada por obstrução restritiva das vias aéreas, inflamação e fibrose. FIZZ1 pertence a classe de proteínas secretadas e é altamente expressa no parênquima pulmonar por células epiteliais alveolares. Está diretamente envolvida na diferenciação de miofibroblastos, através da sinalização via STAT6 dependente de IL-13 e IL-4, no processo fibrótico pulmonar induzido por bleomicina. Dado que FIZZ1 apresenta ação direta sobre miofibroblastos e está envolvido no processo de fibrose, pretende-se, neste projeto, estudar a participação desta molécula e suas vias de sinalização nos mecanismos fibrogênicos da silicose. Grupos de animais FIZZ1 +/+ e FIZZ1 -/-, receberão via instilação intrataqueal, partículas de sílica ou salina. A expressão de FIZZ1, ±-SMA e Notch1 no parênquima pulmonar de animais silicóticos e saudáveis, será avaliada e quantificada por Western blot, RT-PCR e imunohistoquímica. O grau de lesão pulmonar induzida por sílica em ambos os grupos será determinado por microscopia óptica e eletrônica, concentração de hidroxiprolina e Western Blot. Esperamos elucidar o papel de FIZZ1 na via de sinalização envolvida durante as alterações patológicas provocadas pela inalação de partículas de sílica, e eventualmente, utilizá-lo como um futuro biomarcador e potencial alvo terapêutico para esta doença.

O pulmão constitui um órgão bastante comprometido nas formas graves da dengue. Não está totalmente claro como o endotélio vascular é afetado ou o que desencadeia extravasamento vascular, embora mecanismos diretos e indiretos tenham sido propostos. São poucos os estudos com grandes série de casos confirmados laboratorialmente de dengue da forma hemorrágica e dengue com complicação, onde se descrevam as alterações histopatológicas correlacionando com a disfunção endotelial, a imunofenotipagem linfocitária, a aferição do TNF-±, a expressão do óxido nítrico, VEGF e da apoptose tecidual.Este Projeto tem o intuito de contribuir para elucidação dos eventos pulmonares relacionados a permeabilidade vascular na febre hemorrágica da dengue comparando com quadros de dengue com complicação.

Estudos anteriores demonstraram que o nível de ácido hialurónico ( HA ) no estroma tumoral do pulmão correlaciona-se com a agressividade do tumor , suportando a hipótese de que HA promove a migração celular e invasão . A falta de informações sobre HA e as sintases do ácido hialurônico (HAS), bem como a sua relação com o câncer de pulmão , além do possível papel destas moléculas na matriz extracelular e no desenvolvimento de neoplasias , incentivou -nos a desenvolver uma colaboração com o laboratório da Dra. Paraskevi Heldin. Recentemente, o envolvimento do HA na fase invasiva precoce de um clone de linhagem de células de câncer de mama MDA -MB-231 que formam metástases ósseas foi estudada utilizando um modelo de membrana basal in vivo. As metástases ósseas de células tumorais exibiu uma capacidade de sintetizar HA 7 vezes mais elevada em comparação com a MDA - MB -231 ,predominantemente devido a um aumento da expressão da sintase do àcido hialuronico 2 ( HAS2 ) . Heldin et al , 2011, verificou que o knockdown de HAS2 suprimiu completamente a capacidade invasiva destas células pela indução tecidual do inibidor da metaloproteinase 1 ( TIMP - 1 ) e a desfosforilação de quinase de adesão focal ( FAK ) O knockdown de HAS2 mediou a inibição do remodelamento da membrana basal o qual foi resgatado pela superexpressão de HAS2 , através da transfecção com TIMP -1 siRNA, ou a adição de anticorpos bloqueadores de TIMP -1. Além disso, o knockdown de HAS2 suprimiu a indução mediada por EGF da via de sinalização FAK/PI3K/Akt . Assim, este estudo fornece novas pistas sobre um possível mecanismo durante a progressão do câncer de mama o qual as funções de FAK a jusante do receptor EGF ativado e silenciamento de HAS2 pode interferir nesta sinalização celular . Assim, o principal objetivo deste estágio é desenvolver um modelo in vivo semelhante, a explorar o papel de HA sintetizado por HAS2 e sua interação com CD44 na progressão do câncer de mama , bem como desenvolver as habilidades e aumentar os conhecimentos da aluna em relação à matriz extracelular e pesquisa sobre o câncer, incluindo o câncer de pulmão.

Collagen V appears more expressed in lung and skin of patients with SSc and that heterotrímera form of type V collagen can trigger ES to promote nasal tolerance in rabbits in the experimental model of scleroderma . In the present work we hypothesized that the cutaneous and pulmonary involvement in SSc present in humans and in experimental rabbit model can be developed in C57BL / 6 mice due to its high susceptibility to develop pulmonary fibrosis markers available for study, lower cost proving to be of great value to the study of pathogenesis and new therapeutic in this disease.

Lung cancer remains the main cause of cancer deaths in the Brazilian population. Even suspecting that the numbers are under-estimated, this neoplasia occupies a place among the most prevalent. In the last decades, several changes have occurred in diagnosis and treatment of this disease. Better therapeutic results and preventive strategies depend on the constant increase on the knowledge of the epidemiological and biological characteristics of lung cancer patients in different populations. Thus, the main goal of the present project is to identify the actual scenario of lung câncer in patients from three terciary hospitals in Brazil. With the expansion of the available technology to the SUS patients, this project will turn into reality news tools that, in the future, might be applied in different medical centers in Brazil, which study and treat this disease. Through our management, the following aims will be achieved: ü Describe the disease in Brazil contributing to prevalence and survival data information in different geographic regions and social economic groups; ü Contribute to the clinic, epidemiologic and molecular profile knowledge of lung câncer in Brazil; ü Establish a number of informations that could be transmited to other national institutionsthat work in the fight against Lung Cancer in the future, contributing to the development of new cooperative studies; ü Facilitate the access to molecular diagnosis to SUS patients, a very important tool in the survival data and efficacy of treatment evaluation; ü Strength the health politics planning in terms of primary, secondary and terciary prevention allowing the evaluation of cost-effectiveness for technology incorporation decisions.

Sarcoidosis and hypersensitivity chronic pneumonia, noninfectious granulomatous disease, as well as other infectious granulomatous diseases such as tuberculosis, histoplasmosis and paracoccidioidomycosis are currently associated with high mortality and morbidity. This is related to the low efficiency of therapeutic options and pulmonary parenchymal abnormalities associated with pulmonary granuloma formation. The granulomatous reaction is associated with an intense inflammatory response with activation of fibroblasts and deposition of extracellular matrix(ECM). Mainly in the case of sarcoidosis, the pathogenic mechanisms, the susceptibility and the clinical course of these diseases are little known. The search for a better understanding and possible solutions to the limitations of the treatment of sarcoidosis and other granulomatosis is critical to public health programs of the American continent, mainly to Brazil. Thus, the purpose of this project is to study the matrix and cellular immune responses in granuloma formation in infectious lung disease or not, focusing on the sarcoidosis in addition to studying a possible viral involvement in its etiology.

Sarcoidosis and chronic hypersensitivity pneumonia , granulomatous lung diseases of non-infectious origin, as well as other infectious granulomatous diseases such as tuberculosis , histoplasmosis and paracoccidioidomycosis are currently associated with high mortality and morbidity . This is related to the low efficiency of therapeutic options and pulmonary parenchymal abnormalities associated with pulmonary granuloma formation . The granulomatous reaction is associated with an intense inflammatory response with activation of fibroblasts and deposition of extracellular matrix (ECM ) . The fact is that , especially in the case of sarcoidosis , the pathogenic mechanisms of these diseases are unknown , and also about disease susceptibility and clinical course . The search for a better understanding and possible solutions to the limitations of the treatment of sarcoidosis and other granulomatosis is critical for public health programs of the American continent mainly to Brazil . Thus the goal of this project is to study the matrix and cellular immune responses in granuloma formation in infectious lung disease or not , main focus being the study of sarcoidosis , besides studying a possible viral involvement in its etiology .

IPF is defined as a type of chronic interstitial fibrosing disease of unknown etiology limited to the lungs and shows a histological pattern of usual interstitial pneumonia. The prevalence of IPF is estimated at approximately 20/100000 13/100000 in men and in women, and the mean age at diagnosis is 67 years and the median survival is 2-5 years. It is estimated about 5 million people affected worldwide. The current clinical treatment is associated with partial and temporary improvements with questionable or unsatisfactory results. The surgical approach to FPI comprises lung transplantation and is rare because of the scarcity of donors and the limitation of qualified teams to perform procedures. Cell therapy is presented as a therapeutic alternative with great potential applicability in pulmonary fibrosis. This study aims to validate the model of pulmonary fibrosis induced by instillation of bleomycin and the analysis of the contribution of cell therapy using the injection of allogeneic mesenchymal stem cells or conditioner means, obtained from adipose tissue for the treatment of pulmonary fibrosis. 90 female mice will be used albino Wistar, weighing 250-300g of aged 8 weeks. Will be made six experimental groups of 15 animals being monitored: weight and the saturation index in 3 moments: D0, D10 and D21. D0 is performed instillation of bleomycin at a dose of 1,5U / kg. In D10 infusion of mesenchymal stem cells and quantified phenotyped by flow cytometry. In D21 is the sacrifice of animals for macro and microscopic analysis. The average fat removed will be 3.35 g and that after dissociation using collagenase type I cell count was 5.3 x 104 lymphomononuclear cells / g of adipose tissue. These cells are expanded in culture for 21 days, the Knockout DMEM-F12 doped with 10% fetal bovine serum. 3 will be considered evidence criteria MSC-RT: adhesion to plastic, CD90 expression by flow cytometry and the ability to differentiate into three strains of mesodermal origin. In D10, there will be a pool of these CTM will be infused intravenously into the tail vein at a concentration of 1x106 cells / animal in a volume of 200μl of saline. Histological analysis will be performed by two different experts in double-blind study. The parameters of weight gain, improvement in the saturation index, recovering macroscopic and microscopic lung tissue will be fully analyzed in each group. We expect to conclude that the clinical and histological point of view MSC-TA and the conditioned medium determine clinical and histological improvement demonstrated in animals with pulmonary fibrosis of different grades should be considered as an innovative therapeutic approach.

The Chronic Thromboembolic Pulmonary Arterial Hypertension (CTEPH) is caused by a thrombotic organizing obstruction causing vascular remodeling, increased peripheral vascular resistance and consequent progressive pulmonary hypertension and right heart failure may be associated with a mortality at 3 years of 90%. Concomitantly, there is obstruction of small pulmonary arteries elastic subsegmental and distal muscle, endothelial dysfunction related to hypoperfusion and / hypoxia. All these pathophysiological processes are raised by the altered molecular signaling pathways related to progression of vascular dysfunction involving the dynamic change of gene expression and its composition of proteins. Post-transcriptional control can be induced by microRNAs, which act as endogenous transcriptional repressor activity for gene silencing by RNA degradation by the translation block. Such regulatory function has been shown to be critical to various biological processes such as cell proliferation, apoptosis, angiogenesis, cell differentiation and fibrogenesis. In the meantime, some microRNAs are actively released into the bloodstream in response to biological stimuli or dead cells of derivatives, which are called circulating microRNAs. They show high potential biomarker diagnosis and prognosis of CTEPH. Our proposal is to sequence the plasma circulating microRNAs to identify them and correlate them with the diagnosis and disease progression.

As doenças pulmonares fibrosantes (DPF) constituem um grave problema de saúde, ocupando, por sua morbidade, lugar de destaque entre as doenças crônico-degenerativas. Os fatores relacionados no desenvolvimento das DPF são ainda pouco conhecidos ou desconhecidos, podendo haver participação de componentes imunológicos, genéticos e/ou virais em muitos casos. Todas as DPF remodelam a arquitetura pulmonar devido à constante ativação, proliferação e diferenciação de fibroblastos/miofibroblastos, comprometendo as diferentes estruturas e determinando, desta maneira, alterações funcionais qualitativas e quantitativas. Certamente alterações epiteliais, vasculares e matriciais contribuem para ativação dos fibroblastos/miofibroblastos com expressão alterada de suas propriedades biomecânicas, moduladas por alterações na atividade de imunomoduladores ou receptores que geram desestruturação da formação espacial normal dessas células, contribuindo nos processo de fibrose. Embora essas células sejam bastante estudadas muitos dos seus aspectos ainda são pouco conhecidos. No presente trabalho, levantamos a hipótese que os fibroblastos/miofibroblastos desempenham diferentes papéis nos mecanismos de injúria do interstício pulmonar em modelos experimentais de doença fibrosante induzidos por bleomicina (BLM) e 3-5-di-tert-4-hidroxitolueno (BHT), permitindo estabelecer o processo de remodelamento que mais se aproxima da fibrose pulmonar humana. O estudo e a compreensão dos mecanismos vinculados com o aumento de fibras colágenas, das células que intervém na sua produção e da análise funcional nos mecanismos da fibrose pulmonar podem contribuir para uma melhor compreensão da patogênese destas doenças pulmonares fibróticas.

Mudanças importantes começam a ocorrer no tratamento do Câncer de Pulmão, sobretudo no que tange às alterações moleculares específicas, como as mutações de PIK3CA, cMET, VEGF e CD44; e a translocação EML4-ALK entre outras. Como resultado mudanças de mentalidade ou da própria evolução epidemiológica entre os sexos estão mudando paulatinamente, crescendo sucessivamente a inclusão de um maior número de doentes do sexo feminino em protocolos terapêuticos, pelas diferenças nas respostas terapêuticas encontradas. Desta forma, apontam-se particularidades no que se refere à biologia, à história natural, à histopatologia, à resposta terapêutica e ao prognóstico do Câncer de Pulmão na mulher, fatos ainda não completamente esclarecidos e, em alguns aspectos, não consensuais. Neste contexto, existe a necessidade de se implementar maiores estudos, para comparação dessas especificidades entre os dois sexos, pois a maior parte dos fatos referenciados ainda deve ser mais bem estudada. As recentes descobertas de biomarcadores como alvos terapêuticos trazem uma importante ferramenta que deve ser estudada para uma melhor seleção terapêutica e para beneficiar melhor estes subgrupos de pacientes. Entender melhor o perfil destas alterações genéticas entre os sexos é de vital importância para direcionar um tratamento eficaz, permitindo uma terapêutica personalizada direcionada às variações não só de gênero assim como às variações regionais e aos fatores ambientais. O objetivo do presente estudo é avaliar a expressão das proteínas PIK3CA, cMET, VEGF, CD44 e a translocação EML4-ALK, sua relação com o gênero e seu impacto com a sobrevida em pacientes com Carcinomas não-peqeunas células de pulmão.

A FPI é definida como um tipo de doença intersticial fibrosante crônica, de etiologia desconhecida, limitada aos pulmões e que apresenta padrão histológico de pneumonia intersticial usual. A prevalência da FPI é estimada em aproximadamente 20/100000 nos homens e 13/100000 nas mulheres, sendo que a média da idade quando do diagnóstico é de 67 anos e a sobrevida média é de 2 a 5 anos. Estima-se cerca de 5 milhões de pessoas afetadas em todo o mundo. O tratamento clínico atual está associado à melhora parcial e transitória com resultados duvidosos ou insatisfatórios. A abordagem cirúrgica da FPI compreende o transplante de pulmão e é raro em decorrência da escassez de doadores e pela limitação de equipes capacitadas para realizar os procedimentos. A terapia celular apresenta-se como uma alternativa terapêutica com grande potencial de aplicabilidade em fibrose pulmonar. Este estudo tem como objetivo a validação do modelo de fibrose pulmonar induzido pela instilação de bleomicina e a análise da contribuição da terapia celular utilizando a injeção de células-tronco mesenquimais alôgenicas ou do meio condiconado, obtidas de tecido adiposo para o tratamento de fibrose pulmonar. Serão utilizados 90 ratos fêmeas, albinas, da raça Wistar, com peso médio de 250-300g com idade de 8 semanas. Serão constituídos 6 grupos experimentais compostos por 15 animais sendo monitorados: peso e o índice de saturação em 3 momentos: D0, D10 e D21. Em D0 será realizada a instilação da bleomicina na dose de 1,5U/Kg. Em D10 a infusão das células tronco mesenquimais quantificadas e fenotipadas por citometria de fluxo. Em D21 será realizado o sacrifício dos animais para análise macro e microscópica. A média de tecido adiposo retirado será de 3,35g sendo que após a dissociação com o uso de colagenase tipo I a contagem celular foi de 5,3 x 104 células linfomononucleares/g de tecido adiposo. Estas células serão expandidas em cultura por 21 dias, meio Knockout DMEM-F12 aditivado com 10% de soro fetal bovino. Serão considerados 3 critérios de comprovação das CTM-TA: adesão ao plástico, expressão de CD90 por citometria de fluxo e a capacidade de diferenciação em três linhagens de origem mesodérmica. Em D10, será realizado um pool destas CTM que serão infundidas por via venosa, em veia caudal na concentração de 1X106 células/animal em um volume de 200µl de soro fisiológico. As análises histológicas serão realizadas por dois diferentes especialistas em estudo duplo cego. Os parâmetros de ganho de peso, melhora no índice de saturação, recuperação macroscópica e microscópica do tecido pulmonar serão plenamente analisados em cada grupo. Temos a expectativa de concluírmos que do ponto de vista clínico e histológico as CTM-TA e o meio condicionado determinam melhora clínica e histológica comprovadas em animais com fibrose pulmonar de diferentes graus devendo ser considerada como proposta terapêutica inovadora.

Suplemento nutricional é toda substância que se destina a fornecer macro e micronutrientes à dieta de um individuo, além das necessidades normais, não podendo ser utilizado como alimentação exclusiva. O colágeno é considerado na forma hidrolisada, uma complementação terapêutica, devido ás suas propriedades no tratamento de doenças ósseas e das articulações. Em doenças inflamatórias, tais como a artrite reumatóide observou-se prevenção de problemas no estado nutricional e consequentemente agravo da patologia por meio de suplementação alimentar. A artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune de etiologia desconhecida, caracterizada pelo comprometimento da membrana sinovial, poliartrite, que leva a deformidade e destruição das articulações em virtude de erosões ósseas e da cartilagem. Alguns estudos apontam para alternativas terapêuticas, como a administração oral de colágeno tipo II (Col II), proteína encontrada na cartilagem articular, considerado um auto-antígeno importante na patogênese da AR. Esta terapia não apresenta efeitos colaterais graves ou de hipersensibilidade, deste modo estas características favoreceriam o tratamento clínico. No entanto, os estudos em pacientes com AR após administração oral de Col II ou de placebo, não demonstraram igual eficácia do tratamento. O colágeno tipo V (Col V), em especifico, possui aspectos imunogênicos e antigênicos, de maneira geral, invariaveis entre todas as suas isoformas fibrilares. Este estudo visa realizar a suplementação de Col V extraido de placenta bovina em modelo experimental de AR, avaliar o curso do processo inflamatório no tecido sinovial, visando avaliar o processo e mecanismos de remodelamento dos tecidos sinoviais.

Embora na última década tenha ocorrido um grande avanço nas estratégias do tratamento multidisciplinar do câncer de pulmão, levando a uma melhora do controle loco-regional e do intervalo livre de doença, houve pouco aumento da sobrevida global. Como então é possível melhorar os benefícios da terapia personalizada nos NSCLC avançados? Considerando que as recidivas e as metástases são os fatores responsáveis pela morte de pacientes (representando 90% dos casos), há necessidade de conhecer as múltiplas vias sinalizadoras envolvidas em sua patogênese e progressão. Adenocarcinomas e carcinomas de grandes células, por serem preferencialmente lesões periféricas, invadem primariamente vasos sanguíneos e linfáticos, metastatizando à distância para cérebro, ossos, adrenais e fígado. Já os carcinomas de células escamosas, por serem lesões centrais, envolvem diretamente os componentes mediastinais, sobretudo linfonodos e pericárdio. Carcinomas neuroendócrinos invadem linfonodos hilares e possuem, em se tratando de carcinomas de pequenas células, característica de formar rapidamente metástases à distância. Em contrapartida, no caso dos tumores carcinoides, esse comportamento caracteriza-se de forma indolente. Esse espectro diferencial de invasividade do microambiente nos carcinomas de pulmão ainda não pode ser definitivamente demarcado por biomarcadores, sobretudo nas variantes neuroendócrinas. Algumas moléculas, como glicoproteínas, enzimas hidrolíticas, colagenases tipo IV, proteases séricas, uroquinase, cisteína proteases e catepsinas B e L já foram extensivamente avaliadas, inclusive por nosso grupo, como potenciais biomarcadores em pacientes com câncer de pulmão, apresentando resultados controversos e ainda não aceitos pelo CAP/ IASLC/AMP. Tais evidências levam a supor que talvez outros mecanismos estejam mais intimamente envolvidos no processo de invasão, despontando como potenciais biomarcadores, como a transição epitélio-mesenquimal. Os estudos anteriores em câncer de mama, colorretal e de pulmão foram conduzidos com avaliação dos biomarcadores da EMT em bases proteicas utilizando a imuno-histoquímica. No entanto, os novos protocolos terapêuticos personalizados em câncer de pulmão têm surgido com o advento das terapias moleculares alvos. Desta forma, a identificação de biomarcadores preditivos como alvos da terapia molecular representa a mais atual base racional para selecionar uma terapia personalizada por paciente. Nesse sentido, o presente estudo levanta a hipótese, em sede de carcinoma pulmonar, de que os genes que governam o mecanismo molecular da EMT possam estar associados à variabilidade dos processos de invasão e metástase, de tal forma que o desenvolvimento de uma assinatura gênica possa despontar como potencial marcador preditivo e prognóstico no câncer de pulmão. A proposta deste estudo inclui: 1) prosseguir em nossa linha de pesquisa sobre desenvolvimento de biomarcadores moleculares preditivos e prognósticos para prever comportamento e estabelecer novos protocolos de tratamento em câncer de pulmão; 2) realizar o mapeamento genético da EMT no câncer de pulmão, a exemplo do que se faz nos grandes centros internacionais; 3) estabelecer uma assinatura gênica capaz de prever o potencial de invasão de diferentes tipos histológicos de câncer de pulmão. Espera-se obter um melhor entendimento da carcinogênese pulmonar em seus diferentes tipos histológicos, o que poderá implicar assinatura gênica promissora como biomarcador preditivo e prognóstico, abrindo novas fronteiras para a terapia personalizada no câncer de pulmão.

Ultra-diluição (UD) é uma solução, diluída acima do número de Avogrado, que na dependência da sua dinamização (diluição com sucussão) induz um efeito celular supressivo ou estimulante. Por outro lado, a 3,3?,5 Triiodo-L-Tironina (T3) é o hormônio mais importante na indução e manutenção das mudanças metamórficas dos girinos, nelas incluídas a absorção da cauda. O presente estudo, a ser realizado em cego e randomizado, tem como objetivo verificar, através estudos: (i) morfométricos, (ii) em hibridização QuantiGene Plex 2.0 e (iii) RT-PCR, como diferentes ultra-diluições de T3 alteram a apoptose na cauda de girinos de Rana catesbeiana, in vitro. Os explantes terão a apoptose induzida através da ação farmacológica do T3 10 nM (com exceção dos do grupo A) e serão distribuídos em dez grupos, conduzidos em duas etapas, com a adição das seguintes soluções: Etapa I: Grupo A: somente em meio de cultura; G.B: etanol 75% sem sucussão; G.C: T3 10cH; G.D: T3 30cH; G.E: T3 100cH; G.F: T3 300cH. Etapa II: G.G: etanol 75% sem sucussão; G.H: T3 na potência com efeitos mais consistentes; G.I: etanol 75% sucussionado na potência com efeitos mais consistentes; G.J: T3 na concentração dos efeitos mais consistentes, porém sem sucussão. A análise estatística dos resultados obtidos pelas diferentes técnicas utilizadas será feita através do teste de análise de variância (ANOVA) seguida de Tuckey Krammer (p<0,05). O nível de significância estatística será estabelecido em 5% (p<0,05). A doutrina homeopática baseia-se em dois pilares principais: i. o tratamento pela similitude e ii. o efeito das ultra-diluições. A nossa proposta é executar um estudo com adequado embasamento científico, isto é, adotando um critério metodológico rigoroso, com o objetivo de corroborar com os resultados obtidos em outros trabalhos relacionados ao estudo do efeito das ultra-diluições. Utilizando o protocolo experimental desenvolvido (GUEDES Tese 2010), estudaremos as alterações provocadas pela ação do T3, em várias ultra-diluições, sobre a apoptose que ocorre na cauda de girinos de Rana catesbeiana in vitro, induzida pelo mesmo T3 em dose fisiológica, isto é, 10nM. Dedicamos-nos aos estudos das ultra-diluições desde o ano 2000, com a realização de dois artigos, com os quais obtivemos os títulos de Mestre e de Doutor pela Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, ?Homeopathically prepared dilution of Rana catesbeiana thyroid glands modifies its rate of metamorphosis? (GUEDES et al., 2004) e ?Ultra High Dilution of Triiodothyronine Modifies the Cellular Apoptosis of Rana catesbeiana Tadpole Tail: IN VITRO? (GUEDES et al., 2011). Utilizando o protocolo experimental desenvolvido (GUEDES Tese 2010), estudaremos as alterações provocadas pela ação do T3, em várias ultra-diluições, sobre a apoptose que ocorre na cauda de girinos de Rana catesbeiana in vitro, induzida pelo mesmo T3 em dose fisiológica, isto é, 10nM.

A ativação e a emergência de novo do miofibroblasto é o evento chave na fisiologia e patologia do reparo tecidual e fibrose crônica. Portanto, entender a origem destas células e os mecanismos de recrutamentos envolvidos, podem fornecer informações sobre a patogenia das diferentes doenças pulmonares fibróticas. A função do fator de transcrição CCAAT enhancer binding protein ² (C/EBP²) na regulação dos miofibroblastos ainda não está completamente elucidada, logo, diversos estudos estão sendo realizados a cerca desse tema. Foi demonstrado que animais deficientes para C/EBP² apresentam redução na fibrose pulmonar causada por bleomicina. Porém, se faz necessário o estudo dos genes alvo envolvidos nesse processo de fibrose e como está ocorrendo à ativação e diferenciação dos fibroblastos em miofibroblastos. Dessa forma nesse trabalho será avaliado o papel do C/EBP² nos miofibroblastos derivados da medula óssea vs miofibroblastos derivados de células intrapulmonares utilizando transplante de medula óssea de camundongos deficientes para esse fator de transcrição para animais selvagens e vice-versa. Adicionalmente, genes-alvo do C/EBP² serão avaliados e identificados in vivo em modelo de fibrose pulmonar induzida por BLM e em cultura de fibroblastos isoladas de camundongos com fibrose induzida por BLM bem como de pacientes com FPI. Diversos genes-alvos do C/EBP² com potencial relevância para a fibrose foram identificados utilizando camundongos knockout, incluindo matriz metaloproteinase 12 (MMP12) molécula semelhante a resistina ± (RELM-±, do inglês resistin-like molecule ±) e Dkks. Sendo assim, clones das regiões promotoras e genes reportes para MMP12 e RELM-± serão utilizados para confirmar a participação do C/EBP² na regulação da fibrose.

O câncer de pulmão constitui, atualmente, a principal causa de mortalidade por câncer no Brasil. Mesmo com a suspeita que os números sejam subestimados, este tipo de neoplasia figura entre aquelas mais incidentes. Nos últimos anos inúmeras mudanças vem ocorrendo no diagnóstico e tratamento desta doença. Conhecer detalhadamente características epidemiológicas e biológicas específicas dos portadores de câncer de pulmão, nas diversas populações, tornou-se fator crucial para a obtenção de melhores resultados terapêuticos e delineamento de ações preventivas. Assim, a principal finalidade do projeto apresentado é identificar o cenário atual do câncer de pulmão no em três Hospitais Terciários de referência. Através da incorporação da tecnologia que dispomos aos pacientes SUS, o projeto colocará em prática uma ferramenta que no futuro poderá ser aplicada a diferentes centros médicos brasileiros, que estudam e tratam essa doença. Através de nosso gerenciamento será possível: &#10;&#61692;&#09;Retratar de forma fidedigna a doença no Brasil, contribuindo com informações sobre a prevalência em pacientes oriundos das diferentes áreas geográficas e nos grupos socioeconômicos, assim como da sobrevida mediante os tratamentos;&#10;&#61692;&#09;Contribuir para o conhecimento do perfil clínico, epidemiológico e molecular do câncer de pulmão no Brasil, pois estudaremos pacientes que procuram Hospitais terciários de referência e conseqüentemente vindos de todas as regiões do País;&#10;&#61692;&#09;Propiciar o estabelecimento de uma rede de informações que possa no futuro ser transmitidas a outras instituições nacionais de combate ao câncer, constituindo assim uma plataforma para o desenvolvimento de estudos cooperativos;&#10;&#61692;&#09;Padronizar e incorporar diagnóstico molecular aos pacientes do SUS, atualmente imprescindível para indicação de conduta terapêutica, avaliação de resposta e de sobrevida;&#10;&#61692;&#09;Propiciar o acesso ao diagnóstico molecular, através da incorporação tecnológica aos pacientes SUS, atualmente imprescindível para interpretar dados de sobrevida e avaliar a eficácia dos diversos tratamentos;

As doenças pulmonares granulomatosas, como a sarcoidose e a pneumonia de hipersensibilidade crônica, de origem não infecciosa, assim como a tuberculose, histoplasmose e paracoccidioidomicose de origem infecciosa, estão fortemente associadas com alta morbidade e mortalidade ainda nos dias de hoje. Este fato se deve à baixa eficiência das opções terapêuticas em algumas destas doenças e às alterações parenquimatosas pulmonares causadas pelas formações granulomatosas. Essas alterações algumas vezes de causas desconhecidas, como no caso da sarcoidose, são importantes de serem estudadas para contribuir em novas estratégias de tratamento. A patogênese da inflamação granulomatosa é frequentemente associada à intensa resposta inflamatória onde atuam mecanismos imunológicos do próprio indivíduo acompanhados paralelamente com a ativação de fibroblastos e deposição de matriz extracelular (MEC). No entanto, os mecanismos patogênicos dessas doenças ainda são pouco conhecidos e compreendidos principalmente no caso da sarcoidose. As manifestações clínicas das doenças granulomatosas pulmonares são heterogêneas, e tanto a susceptibilidade à doença quanto o curso clínico são ainda pouco conhecidos. A busca de um melhor entendimento e possível solução das limitações terapêuticas no tratamento da sarcoidose e outras granulomatoses são prioritárias para os programas de Saúde Pública de nosso continente de uma maneira geral, e do Brasil em particular. O objetivo de nosso projeto é avaliar a resposta imune-celular e matricial na formação do granuloma em doenças pulmonares de caráter não infeccioso (Sarcoidose e Pneumonia de Hipersensibilidade crônica) e infeccioso (Tuberculose, Paracoccidioidomicose, Histoplasma), assim como avaliar a possível participação viral na sua etiologia.

As doenças pulmonares fibrosantes (DPF) constituem um grave problema de saúde, ocupando, por sua morbidade, lugar de destaque entre as doenças crônico-degenerativas. Os fatores relacionados no desenvolvimento das DPF são ainda pouco conhecidos ou desconhecidos, podendo haver participação de componentes imunológicos, genéticos e/ou virais em muitos casos.&#10;Todas as DPF remodelam a arquitetura pulmonar devido à constante ativação, proliferação e diferenciação de fibroblastos/miofibroblastos, comprometendo as diferentes estruturas e determinando, desta maneira, alterações funcionais qualitativas e quantitativas. Certamente alterações epiteliais, vasculares e matriciais contribuem para ativação dos fibroblastos/miofibroblastos com expressão alterada de suas propriedades biomecânicas, moduladas por alterações na atividade de imunomoduladores ou receptores que geram desestruturação da formação espacial normal dessas células, contribuindo nos processo de fibrose. Embora essas células sejam bastante estudadas, muitos dos seus aspectos ainda são pouco conhecidos.&#10;No presente trabalho, levantamos a hipótese que os fibroblastos/miofibroblastos desempenham diferentes papéis nos mecanismos de injúria do interstício pulmonar em modelo experimental de doença fibrosante induzido por bleomicina (BLM), permitindo estabelecer o processo de remodelamento que mais se aproxima da fibrose pulmonar humana. O estudo e a compreensão dos mecanismos vinculados com o aumento de fibras colágenas, das células que intervém na sua produção e da análise funcional nos mecanismos da fibrose pulmonar podem contribuir para uma melhor compreensão da patogênese destas doenças pulmonares fibróticas.

Despite all the advances in the lung cancer diagnosis and treatment this disease is still the one with the highest death rate among all types of cancer. This characteristic is closely related to the diagnosis of lung cancer which usually occurs in advanced stages of the disease and at that point the options of treatment are basically palliatives. Regarding that, it is urgent the development new molecular markers capable of predict the tumor behavior. The extracellular matrix is intimately involved in the carcinogenesis and in the development of metastasis. Among all its components are the glycosaminoglycans and the proteoglycans, molecules that are capable of influence the cellular behavior and the tissue dynamics. The heparan sulfate and chondroitin sulfate are parto f the glycosaminoglycan family and form proteoglycans like versican, biglycan, syndecan, glypican and perlecan. In some types of cancer it has been observed that these molecules present a different expression pattern when in the presence of cancer cells and they have the ability to influence the tumoral development facilitating processes such as angiogenesis and metastasis. In spite of all that, the present study pretend to: 1) measure the expression of glycosaminoglycans in lung câncer specimens through electroforesis; 2) analyse the location of these molecules in the tumors by immunohistochemistry; 3) evaluate the gene expression of the proteoglycans; 4)determine the cells that are responsible for the production of proteoglycans in a lung cancer cell line

Introdução. Uma alimentação rica em antioxidantes pode prevenir e reparar danos oxidativos causados pelas espécies reativas de nitrogênio e oxigênio, como o dano no DNA e a peroxidação lipídica e pode reduzir o risco de câncer, aterosclerose e outras doenças degenerativas. A polpa do Caryocar Brasiliense Camb, mais conhecido como pequi, é uma fruta do cerrado brasileiro que possui altos níveis de antioxidantes como os carotenóides, vitamina C e E e compostos fenólicos. Objetivos. Verificar a atividade antioxidante do óleo e do extrato da polpa do pequi na diminuição do estresse oxidativo em um modelo experimental de carcinogênese pulmonar. Métodos. O estudo foi realizado em 40 camundongos BALB/C machos: 35 animais foram submetidos a duas doses intra-peritoniais de 1,5 g/kg de uretana (U = 5), 10 destes camundongos receberam por gavagem 15&#956;L de óleo da polpa do pequi (UO = 10), 10 animais receberam gavagem de 15&#956;L de extrato etanólico de polpa de pequi (UE = 10) e os 10 animais restantes receberam por gavagem 3&#956;g/kg de betacaroteno (UB = 10). 5 camundongos não receberam as doses de uretana nem a gavagem (C = 5). Após 60 dias, os grupos foram sacrificados. A defesa antioxidante enzimática foi mensurada pelo teste bioquímico. A atividade antioxidante do óleo de pequi foi avaliada nos tecidos do pulmão pelo teste bioquímico de TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico) e os danos do DNA pelo método de teste de cometa. A expressão gênica e protéica das óxido nítrico sintases foi analisada por biologia molecular e imunohistoquímica, respectivamente. Resultados. O parênquima pulmonar dos animais que receberam as doses de uretana apresentaram formações neoplásicas induzidas pela carcinogênese química, em contraste com o grupo Controle. Os grupos de animais que receberam as doses de uretana e foram suplementados com o betacaroteno, o óleo e o extrato de pequi apresentaram resultados importantes na diminuição do dano no DNA, na peroxidação lipídica e na expressão protéica e gênica das isoformas da óxido nítrico sintase (NOS1, NOS2 e NOS3) ao contrário dos animais que receberam apenas as doses de uretana. Conclusão. Concluiu-se que os diferentes compostos antioxidantes encontrados no óleo e no extrato do pequi são eficientes para diminuir a expressão das enzimas óxido nítrico sintase, o dano no DNA e a peroxidação lipídica em um modelo experimental de carcinogênese pulmonar induzida pelo uretana, sugerindo que essa fruta possa contribuir no tratamento de câncer de pulmão.

Introdução. Uma alimentação rica em antioxidantes pode prevenir e reparar danos oxidativos causados pelas espécies reativas de nitrogênio e oxigênio, como o dano no DNA e a peroxidação lipídica e pode reduzir o risco de câncer, aterosclerose e outras doenças degenerativas. A polpa do Caryocar Brasiliense Camb, mais conhecido como pequi, é uma fruta do cerrado brasileiro que possui altos níveis de antioxidantes como os carotenóides, vitamina C e E e compostos fenólicos. Objetivos. Verificar a atividade antioxidante do óleo e do extrato da polpa do pequi na diminuição do estresse oxidativo em um modelo experimental de carcinogênese pulmonar. Métodos. O estudo foi realizado em 40 camundongos BALB/C machos: 35 animais foram submetidos a duas doses intra-peritoniais de 1,5 g/kg de uretana (U = 5), 10 destes camundongos receberam por gavagem 15&#956;L de óleo da polpa do pequi (UO = 10), 10 animais receberam gavagem de 15&#956;L de extrato etanólico de polpa de pequi (UE = 10) e os 10 animais restantes receberam por gavagem 3&#956;g/kg de betacaroteno (UB = 10). 5 camundongos não receberam as doses de uretana nem a gavagem (C = 5). Após 60 dias, os grupos foram sacrificados. A defesa antioxidante enzimática foi mensurada pelo teste bioquímico. A atividade antioxidante do óleo de pequi foi avaliada nos tecidos do pulmão pelo teste bioquímico de TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico) e os danos do DNA pelo método de teste de cometa. A expressão gênica e protéica das óxido nítrico sintases foi analisada por biologia molecular e imunohistoquímica, respectivamente. Resultados. O parênquima pulmonar dos animais que receberam as doses de uretana apresentaram formações neoplásicas induzidas pela carcinogênese química, em contraste com o grupo Controle. Os grupos de animais que receberam as doses de uretana e foram suplementados com o betacaroteno, o óleo e o extrato de pequi apresentaram resultados importantes na diminuição do dano no DNA, na peroxidação lipídica e na expressão protéica e gênica das isoformas da óxido nítrico sintase (NOS1, NOS2 e NOS3) ao contrário dos animais que receberam apenas as doses de uretana. Conclusão. Concluiu-se que os diferentes compostos antioxidantes encontrados no óleo e no extrato do pequi são eficientes para diminuir a expressão das enzimas óxido nítrico sintase, o dano no DNA e a peroxidação lipídica em um modelo experimental de carcinogênese pulmonar induzida pelo uretana, sugerindo que essa fruta possa contribuir no tratamento de câncer de pulmão.

Iniciamos estudo sobre comportamento tumoral em bases moleculares como orientadora e coordenadora do Auxílio à Pesquisa do projeto de Doutorado da aluna Vanessa Karen de Sá (Bolsa Doutorado FAPESP 08/57911-7 e Auxílio à Pesquisa 08/58557-4, respectivamente). A idéia surgiu com os resultados obtidos através de projeto realizado como Mestrado pela aluna, ao demonstrar que concentrações de ácido hialurônico e as hialuronidades estavam elevadas em um estudo que envolveu 55 pacientes submetidos a prostatectomia radical por carcinoma de próstata. A continuidade ao estudo do comportamento tumoral em bases moleculares e, adicionalmente, imunohistoquímicos, foi concebida para o Doutoramento da aluna, tendo como alvo, os carcinomas não pequenas células (CPNPC) (Processo Fapesp 08/58557-2). Neste estudo, avaliamos 73 pacientes submetidos a lobectomia por CPNPC do Hospital AC Camargo e 56 pacientes da Universidade de Coimbra. Os pacientes foram divididos em 6 grupos para análise dos resultados: carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma predominantemente acinar, adenocarcinoma predominantemente papilífero, adenocarcinoma predominantemente sólido e adenocarcinoma lepídico. O grupo controle foi representado por 25 amostras de borda normal de pacientes com CPNPC. As variantes das HYAL foram identificadas por PCR e a imunoexpressão de HAS1, 2 e 3, Hyal 1 e 3, TGF-B e E-Caderina, foram avaliadas por imunohistoquímica. No presente projeto, pretendemos continuar nossa linha de pesquisa, avaliando por imunohistoquimica as Hyal1 e 3 e as HAS 1, 2 e 3 nas lesões pré-neoplasias pulmonares e aproveitar a casuística que já possuímos para avaliar a freqüência de mutação dos marcadores EGFR e KRAS por PCR e EML4-ALK por FISH, em três centros de referencias no País e um nos EUA. É esperado que a identificação de indíviduos com lesões pré-neoplásicas através da expressão de elementos da matriz extracelular que corroboram com o processo invasivo e metastático poderá minimizar a morbidade e mortalidade pelo Câncer de Pulmão. O conhecimento da freqüência de mutação do EGFR, KRAS e fusão EML4-ALK e do perfil genético dos pacientes em três grandes centros de referências poderá ser expandido para o resto do País, permitindo uma terapêutica personalizada direcionada a nossas variações regionais e associações com fatores ambientais. O projeto também promoverá a interação científica entre pesquisadores nacionais e internacionais que atuam na área do câncer de pulmão.