Jose Luiz Catao Dias.

Cetáceos são classificados como "organismos sentinelas" do meio marinho e são espécies de especial interesse em saúde pública por compartilharem ecossistemas costeiros e possuírem alimentação com base em espécies similares que humanos. Dentre as doenças que acometem os cetáceos, as hepáticas são classificadas como relevantes e relativamente comuns, sendo também relatadas em cetáceos do Brasil. Apesar disso, em diversos estudos a etiologia da maioria das lesões hepáticas observadas não foi estabelecida. Diferentes vírus têm sido descritos como agentes etiológicos de lesões hepáticas em mamíferos, entre eles os herpesvírus, adenovírus e os vírus da hepatite E (HEV) - esse último com certos genótipos considerados zoonóticos. Os três agentes mencionados já foram detectados em cetáceos, e recentemente lesões hepáticas associadas à infecção por HEV foram descritas em golfinhos. Impactos antropogênicos deletérios têm sido descritos como uma das principais causas de perda de biodiversidade e emergência de doenças. Por conta de diferenças em exposição e susceptibilidade (animais de habitats mais impactados por fatores antropogênicos, que poderiam promover quadros de imunossupressão), a ocorrência e carga viral desses agentes infecciosos pode variar entre populações costeiras (habitam águas com menos de 200 metros de profundidade), pelágicas (mais de 200 metros) e de habitat misto (costeiro/pelágico), possivelmente maior nos cetáceos residentes em áreas costeiras. Além disso, esses agentes poderiam estar associados a dano hepático em espécies de cetáceos do Brasil. O presente projeto visa (1) comparar a ocorrência e a carga viral de agentes infecciosos selecionados (herpesvírus, adenovírus e HEV) por meio de ensaios moleculares em espécies de cetáceos costeiras, mistas e pelágicas do Brasil visando avaliar indiretamente o impacto da atividade humana sobre o seu estado de saúde; (2) realizar a caracterização molecular desses agentes empregando diferentes técnicas moleculares, entre elas sequenciamento completo, a fim de estabelecer seu grau de similitude entre diferentes populações costeiras, mistas e pelágicas; e (3) determinar se os agentes selecionados estão associados a lesões hepáticas em cetáceos por meio de técnicas histopatológicas, imunohistoquímicas e hibridização-in-situ. Esses esforços se baseiam em conceitos da medicina da conservação e Saúde Única, visando garantir a conservação dessas espécies e a manutenção da saúdes humana, animal e ambiental. (AU)

O morbilívirus dos cetáceos (CeMV; gênero Morbillivirus, família Paramyxoviridae) tem causado vários surtos de doença letal em odontocetos e misticetos em todo o mundo. Três variantes de CeMV encontram-se relativamente bem caracterizadas: morbilivírus das porpoises, morbilivírus dos golfinhos, e morbilivírus das baleias-piloto (hemisfério norte). Três novas variantes foram recentemente detectadas, uma delas no Brasil, sendo considerada a primeira descrição na América do Sul. Estudos sugerem a ocorrência de diferenças espécie-específicas na suscetibilidade dos cetáceos à infecção pelo CeMV, estando os golfinhos-nariz-de-garrafa (Tursiops truncatus) e os golfinhos-listrados (Stenella coeruleoalba) entre os mais suscetíveis, com históricos de epizootias fatais. Não há estudos anteriores acerca dos aspectos imunopatogênicos locais em tecidos com alterações patológicas associadas à infecção por CeMV, exceto estudos pontuais utilizando sangue periférico. A presente proposta de investigação irá empregar tecidos com maior significado patogênico (encéfalo, pulmão e linfonodos) arquivados, fixados em formol e embebidos em parafina, assim como congelados, de golfinhos-nariz-de-garrafa e golfinhos-listrados (provenientes do Atlântico central e Mar Mediterrâneo), e cetáceos encalhados na costa brasileira (sudoeste Atlântico), positivos ao CeMV mediante análise por RT-PCR. Será utilizado um conjunto de marcadores linfocitários, histiocitários e outros marcadores adicionais para caracterizar as respostas imunitárias locais. Neste contexto, um dos nossos estudos preliminares mostrou adequada reatividade cruzada com anticorpos primários contra caspase 3, CD3, CD57, CD68, FoxP3, HLA-DR±, IFN³, IgG, IL4, IL10, Lysozyme, TGF² e PAX-5. No entanto, o resultado obtido com anticorpos contra CD4 não foi satisfatório e acredita-se ser apropriado o desenvolvimento de anticorpo monoclonal CD4 específico para cetáceos, possibilitando a execução plena do presente estudo. Além disso, a expressão de citocinas TH1 e TH2 será avaliada por meio de RT-qPCR/PCR. Ainda, importante mencionar que a presente proposta também subsidiará a execução do projeto de pós-doutorado do pesquisador associado (JDD; Processo FAPESP 2017/02223-8). Acreditamos que os propostos estudos histopatológicos, imuno-histoquímicos e moleculares concomitantes poderão contribuir significativamente para a compreensão dos mecanismos imunopatogênicos das alterações patológicas associadas à CeMV, uma doença com distribuição mundial e grande significado para a conservação dos cetáceos.

Este trabalho objetiva investigar as principais causas de óbito em serpentes peçonhentas brasileiras dos gêneros Bothrops, Crotalus, Lachesis e Micrurus, mantidas em cativeiro no biotério intensivo e semi-extensivo do Laboratório de Herpetologia do Instituto Butantan. O Laboratório de Herpetologia mantém, aproximadamente, 1000 serpentes em cativeiro para a extração de veneno para pesquisas imunobiológicas e para a produção dos diferentes tipos de soros antipeçonhas: soro anticrotálico; soro antibotrópico, soro antibotrópico-crotálico, soro antibotrópico-laquético e soro antielapídico. Oitenta por cento dos soros antiofídicos distribuídos por todo o território nacional são produzidos pelo Instituto Butantan. Para realizar este estudo, serão analisadas um total de, aproximadamente, quinhentas fichas de necropsias de serpentes que morreram no período de 2000 a 2017, com suas respectivas amostras teciduais. Os diversos fragmentos de órgãos fixados serão processados de acordo com as técnicas rotineiras de inclusão em parafina. Cortes de 5 ¼m serão obtidos e corados pela técnica da hematoxilina-eosina e colorações histoquímicas específicas serão consideradas quando oportunas. Parasitas metazoários e protozoários, quando encontrados, serão identificados quanto à família e, quando possível, ao gênero, através de características específicas de cada parasito observadas na leitura das lâminas histopatológicas. Os resultados obtidos serão tabulados quanto à causa da morte e os diagnósticos principais e secundários. A grande quantidade de material que será produzido possibilitará identificar patologias sazonais, àquelas relacionadas ao sexo, à idade, os diferentes tipos de neoplasias e patologias espécie-específicas, auxiliando no entendimento das diferentes patologias que acometem estas espécies em cativeiro. Os resultados deste trabalho poderão contribuir na conservação das espécies; criação destes animais em cativeiro; e com a saúde pública, à medida que a criação de serpentes peçonhentas em cativeiro é de suma importância para a produção de soro antipeçonha

No Brasil, 99,7% dos casos de malária, causados por Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum e Plasmodium malariae, ocorrem na região Amazônica. Na região Extra-Amazônica a malária predomina nas áreas de Mata Atlântica onde são registrados casos autóctones, em sua maioria com baixa parasitemia e apresentação clínica assintomática, causados por P. vivax e P. malariae. Acredita-se que a malária de Mata Atlântica seja uma zoonose, pois evidências genéticas indicam que o P. malariae pode ser derivado de P. brasilianum, um parasita que causa malária em primatas não humanos. O P. malariae, é um parasita de ampla distribuição geográfica e provavelmente um dos mais antigos causadores da malária, mas devido à sua semelhança morfológica com P. vivax, sua prevalência acaba sendo subestimada. Este projeto visa obter mais informações sobre prevalência e distribuição de P. malariae e P. brasilianum no Brasil, assim como seu relacionamento genético e imunológico. A análise genética será realizada com sequenciamento do genoma mitocondrial dos isolados obtidos. Para a análise de relacionamento imunológico serão utilizados ensaios sorológicos com proteínas recombinantes derivadas de diferentes regiões da MSP1 (merozoite surface protein 1). Essa proteína foi escolhida por ser bastante polimórfica e muito antigênica em infecções naturais causadas por P. vivax e P. falciparum. Entretanto, não existe nenhum estudo sorológico realizado em isolados de campo de primatas não humanos utilizando MSP1 derivada de P. brasilianum e, no caso de P. malariae há apenas um estudo, realizado fora do Brasil, onde apenas a MSP119 foi avaliada em poucos isolados de campo de humanos de origem geográfica desconhecida. Assim, pretende-se aqui avaliar a resposta de anticorpos, presentes em amostras de soro/plasma de humanos e de primatas não humanos de diferentes regiões endêmicas do Brasil (Região Amazônica e Mata Atlântica), contra sete proteínas recombinantes produzidas a partir do gene codificador da MSP1 de P. malariae e P. brasilianum. Essa pesquisa será feita por ELISA e Bioplex, possibilitando também uma comparação dos resultados encontrados nos diferentes métodos.

O câncer é um tecido complexo composto por células neoplásicas malignas cercadas por um estroma reativo contendo células inflamatórias, endoteliais e fibroblastos, cuja dinâmica é atualmente reconhecida como fundamental na evolução, crescimento e disseminação tumoral. Acredita-se que quase todos os tumores sólidos apresentem fibroblastos atípicos em seu compartimento estromal, denominados fibroblastos associados ao câncer (CAFs). As proteases estromais produzidas pelos CAFs são frequentemente reguladas positivamente no microambiente tumoral e influenciam o comportamento da neoplasia pela ruptura da arquitetura tissular e por interações de sinalização. Nos cães, o mastocitoma é uma das formas mais frequentes de neoplasia cutânea e os fibroblastos são constituintes integrais do tecido conjuntivo. Estas células promovem a síntese dos componentes da matriz extracelular incluindo colágeno, fibronectina e laminina, abundantes no microambiente cutâneo. O presente projeto de pesquisa busca identificar, isolar e caracterizar os CAFs em mastocitomas caninos e investigar seu papel na manutenção dos tumores como entidades dinâmicas e na promoção do potencial invasivo e metastático.

Investigação da ocorrência de morbilivirus, prinicipal agente epizoótico atual, em cetáceos da costa brasileira

Os anisaquídeos (Nematoda: Anisakidae) são parasitos nematóides comuns de mamíferos e aves marinhas com ampla distribuição (Iñiguez et al., 2011; Mattiucci & Nascetti, 2007; Szostakowska et al., 2002). Larvas destes nematóides são encontradas em peixes e em outros organismos marinhos e atuam como agentes da anisaquíase, uma importante zoonose transmitida aos humanos através da ingestão de peixes crus ou mal cozidos (Chen et al., 2008; Pontes et al., 2005; Zhu et al., 2007) (Figura 1). 
A taxonomia deste grupo têm sido redefinida nos últimos anos através de análises moleculares, visto que a identificação morfológica, em particular para as larvas, é especialmente difícil (Fang et al., 2010; Mattiucci & Nascetti, 2008; Valentini et al., 2006).
Este projeto, que conta com a colaboração de várias instituições, visa caracterizar os anisaquídeos de cetáceos e pinípedes das regiões Sudeste e Sul do Brasil. Os espécimes de parasitas serão identificados através de métodos moleculares e, quando possível, também por meio de técnicas morfológicas clássicas.
Acreditamos que a identificação molecular de parasitos de mamíferos marinhos permitirá o desenvolvimento de marcadores moleculares com fins diagnósticos. Isto conferirá poder de resolução aos métodos diagnósticos para que seja possível investigar a cadeia epidemiológica das anisaquíases, com a correta e precisa identificação de fontes de infecção e vias de transmissão. Além disso, o projeto ora proposto poderá gerar informações relevantes referentes a aspectos filogeográficos da distribuição destes importantes patógenos zoonóticos.

A surucucu-pico-de-jaca, Lachesis muta, maior serpente peçonhenta do Brasil, está distribuída no norte do Brasil e na faixa de Mata Atlântica que vai do Rio de Janeiro até o Ceará. Devido ao desmatamento, o número de surucucus está em rápido declínio, tendo sido incluída na lista vermelha das espécies ameaçadas da "International Union for Conservation of Nature and Natural Resources". Segundo o Ministério da Saúde, 1,4% do total de acidentes com serpentes peçonhentas são causados pela surucucu, sendo que 939 acidentes foram notificados no período de 1990 a 1993, com 9 óbitos (0,9%), geralmente causado pelas atividades hemorrágica, coagulante e neurotóxica do veneno. Como o recebimento dessa espécie no Instituto Butantan é esporádico, a quantidade de serpentes no Laboratório de Herpetologia é insuficiente para a produção de soro antilaquético e para pesquisas imunobiológicas. O objetivo principal deste projeto é o de conhecer melhor o comportamento e ciclo reprodutivo da Lachesis muta e reproduzir esta espécie em cativeiro. Utilizaremos as serpentes que já fazem parte do plantel do Laboratório e as recém-chegadas da natureza após manejo profilático adotado no biotério. Os animais serão alocados em um recinto adaptado para o maior conforto dos animais. Um sistema de nebulização oferecerá a umidade adequada, a luminosidade será semelhante à da mata fechada e o fotoperiodismo será semelhante ao encontrado no ambiente natural. O comportamento dos animais será gravado 24 horas por sistema de monitoramento. O conhecimento do comportamento e ciclo reprodutivo da surucucu-pico-de-jaca facilitará o pareamento dos casais, aumentando o sucesso reprodutivo.

Investigar as consequências, através de métodos anátomo-patológicos, moleculares e epidemiológicos, das ações humanas sobre a população de baleias jubartes na costa brasileira.

A avifauna marina, em especial os pinguins-de-magalhães, são valiosas sentinelas da qualidade dos ambientes marinhos. O objetivo deste projeto é Investigar o impacto da malária aviária sobre a avifuana marinha, tendo os pinguins-de de-magalhães (Sphenicus magellanicus) como modelo de estudo. Métodos anátomo-patológicos e epidemiológicos serão empregados.