Andiara De Rossi Daldegan.

1- Tutora do Programa PET Saúde, do Ministério da Saúde: "Aprendendo conjuntamente a cuidar de pessoas com covid-19 e covid longa no âmbito individual e coletivo, aprovado pelo Programa de Educação pelo Trabalho para a Saúde (PET Saúde) 2022/2023 (alunos de graduação). Ação interdisciplinar: Educação Física, Enfermagem (bacharelado e licenciatura), Farmácia, Fonoaudiologia e Odontologia do campus da USP em Ribeirão Preto. O PET-Saúde promove a integração do ensino (que é a Universidade) com o serviço de saúde com a comunidade e envolve docentes, estudantes de graduação e profissionais de saúde para o desenvolvimento de atividades na rede de saúde, de forma que as necessidades dos serviços sejam uma fonte de produção de conhecimento e pesquisa. Essa edição do PET-Saúde é uma das medidas do plano de ação do Brasil para implementação da EIP no nosso país, conforme recomendação do escritório regional da Organização Mundial da Saúde para as América, a OPAS.

O Projeto Criança é um projeto social que surgiu da carência de programas de saúde bucal desenvolvidos unicamente à população infantil, em especial de 3 a 9 anos de idade. Conta com a participação de crianças das mais diversas escolas públicas e particulares, visando à conscientização da importância da saúde bucal por meio de palestras, teatros, brincadeiras e apresentações. As atividades têm como objetivo despertar o interesse das crianças pela higiene bucal assim, como a introdução de conhecimentos a respeito das
técnicas de escovação dental, uso do fio dental e de enxaguatórios bucais. Além disso, as crianças receberam informações a respeito da doença cárie destacando as suas causas e consequência de maneira lúdica, através de apresentações de teatro e musicais.

A disciplina de Odontopediatria implantou e coordena, há mais de 20 anos, o ?Centro de Formação de Recursos Humanos Especializados no Atendimento Odontológico a Pacientes Especiais?. Esse serviço pioneiro se mantém, com a supervisão direta dos docentes da disciplina de Odontopediatria, sob a forma de Cursos de Aperfeiçoamento, sendo um com duração anual de 306 horas (9 horas semanais, sendo 8 horas de atividades clínicas e 1 hora de atividades teóricas) e outro, com duração anual de 180 horas (5 horas semanais de atividades clínicas). O serviço já prestou atendimento odontológico a cerca de 2000 pacientes portadores de necessidades especiais com, aproximadamente, 45.000 procedimentos odontológicos e efetivamente realizados. A atividade é voluntária e não remunerada.

A disciplina de Odontopediatria implantou desde 2011 o serviço de atendimento de pacientes pediátricos que sofreram traumatismos dento-alveolares, com a supervisão direta dos docentes da disciplina de Odontopediatria. A atividade é voluntária e não remunerada.*

Criação de um Fórum de discussão de casos clínicos realizados pelos alunos de graduação de Disciplina de Odontopediatria I da FORP USP, com participação de docentes (orientadores) e pós-graduandos (co-orientadores). Os casos realizados pelos alunos durante as atividades clínicas da Disciplina são documentados, redigidos em resumo e submetidos à avaliação pelo evento, sendo posteriormente publicados nos Anais da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto da USP (ISSN 1980-7801). Além disso, no dia da apresentação oral dos trabalhos os alunos de pós-graduação atuam como avaliadores, junto aos docentes, o que proporciona uma modalidade única de ensino/aprendizagem por meio de discussão de casos clínicos.

As propriedades biológicas, antimicrobianas, antiinflamatórias e antioxidantes da epigalocatequina-3-galato (EGCG), principal polifenol bioativo derivado do chá verde, que já desempenha comprovada ação na prevenção e tratamento de diferentes doenças sistêmicas, também poderiam desempenhar papel na prevenção e tratamento de doenças infeciosas que afetam a cavidade bucal. Sabe-se que, no tratamento de doenças infecciosas da cavidade bucal, como na doença periodontal e periapical ou de infecções oportunistas, como a candidíase decorrente do uso de imunossupressores ou próteses mal adaptadas, o uso de medicamentos citotóxicos, como agentes antimicrobianos de uso prolongado (clorexidina) apresenta efeitos colaterais, o que torna necessário a busca por agentes naturais e não tóxicos que possam prevenir e tratar tais condições. Visando o desenvolvimento de uma formulação à base de EGCG que apresente ação antimicrobiana eficaz contra agentes etiológicos das principais doenças infecciosas que afetam a cavidade bucal (doenças periodontais, periapicais e candidoses), tornou-se necessário avaliar inicialmente sua atividade antimicrobiana. O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, a atividade antimicrobiana da EGCG derivada do chá verde sobre microrganismos envolvidos em doenças infecciosas que afetam a cavidade bucal. Será avaliada a atividade antimicrobiana in vitro da EGCG contra E. faecalis, P. gingivalis, F.nucleatum, P. intermedia, S.aureus, S. aureus multirresistente (MRSA), C. albicans e C. tropicalis, por meio da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). A seguir foi desenvolvida uma formulação natural que pode ser utilizada na prevenção e tratamento de doenças infecciosas que afetam a cavidade bucal.

A escolha do tratamento de canal radicular de dentes com necrose pulpar e lesão periapical, em uma ou duas sessões é atualmente fonte de debate. O objetivo do presente estudo será propor um novo protocolo de tratamento endodôntico realizado em uma única sessão com aplicação de curativo antimicrobiano (hidróxido de cálcio) e comparar, in vivo, a resposta dos tecidos apicais e periapicais de dentes de cães com necrose pulpar e lesão periapical visível radiograficamente, esta técnica com o tratamento convencional em sessão única, sem curativo, ou em sessão dupla, utilizando o mesmo curativo

Em crianças, a ingestão de dosagens inadequadas de fluoreto durante o desenvolvimento dentário pode ocasionar efeitos agudos e crônicos indesejáveis, como a fluorose dentária. O uso de dentifrícios fluoretados é a forma mais comum de ingestão inadequada de fluoretos por crianças, podendo causar fluorose dental. Hoje em dia são encontrados no comércio 3 principais tipos de dentifrícios para crianças: sem fluoreto, com teor reduzido de fluoreto (500 ppm) e com teor de fluoreto convencional (de 1100 a 1500 ppm). Assim, diante desta diversidade, verifica-se a necessidade de avaliar se as recomendações profissionais com relação ao dentifrício ideal para crianças nas diferentes faixas etárias estão de acordo com o preconizado pelas principais organizações e associações dentárias nacionais e internacionais. O objetivo desse trabalho foi avaliar se as recomendações de Cirurgiões-Dentistas e Odontopediatras sobre o tipo e a quantidade de dentifrício indicado para bebês e crianças, assim como, as formas de orientação e monitoramento da escovação estão de acordo com o atualmente preconizado por associações dentárias nacionais e internacionais.

O objetivo deste estudo será desenvolver uma nova formulação antimicrobiana nanoestruturada à base de epigalocatequina-3-galato (EGCG), derivada do chá verde, e avaliar in vitro e in vivo sua ação antimicrobiana contra microrganismos cariogênicos e a possibilidade de alteração de cor dental. A EGCG será encapsulada em nanopartículas poliméricas preparadas a partir do polímero biodegradável alginato pela técnica de pré-gelificação ionotrópica e complexação entre alginato e quitosano; e em nanopartículas lipídicas sólidas com monostearato de glicerila pela técnica de homogeneização de alta pressão. As nanopartículas serão caracterizadas quanto à morfologia por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de força atômica (AFM), quanto ao diâmetro e distribuição do tamanho médio utilizando-se a técnica de espectroscopia de correlação de fótons e será determinada a carga superficial por Potencial Zeta. Serão estudadas a eficiência de encapsulamento do peptídeo e sua liberação sustentada in vitro por UV-VIS. A seguir, a atividade antimicrobiana da formulação (convencional e encapsulada), será avaliada in vitro contra S. mutans, S. sobrinus e L. casei pela determinação da concentração inibitória mínima, e, in vivo, após seu uso clínico por crianças com alto risco e atividade da doença cárie. A concentração de microrganismos cariogênicos será determinada na saliva das crianças, antes e após a realização do bochecho com as formulações. A clorexidina e água destilada serão utilizadas como controle (positivo e negativo, respectivamente). A possível alteração de cor dental será avaliada em dentes decíduos e permanentes humanos recém-extraídos, por meio de espectrofotometria (Easy Shade). Espera-se desenvolver uma formulação tópica nanoestruturada antimicrobiana natural para uso bucal, que apresente estabilidade físico-química, ação antimicrobiana e ausência de efeitos colaterais, e resulte no depósito de patente.

Embora apresente muitos benefícios, as imagens radiográficas são obtidas por meio de radiações ionizantes, que podem apresentar efeitos biológicos negativos sobre o organismo. Os tecidos mais sensíveis à dose de radiação recebida em radiografias intraorais de crianças são olhos, tireóide, medula e gônadas. Para reduzir a radiação devem ser utilizados equipamentos de proteção individuais, incluindo protetor de glândula tireóide, avental plumbífero e óculos. No entanto a proteção dos olhos geralmente não é realizada durante os exames radiológicos intraorais, inexistindo no comércio equipamentos específicos para esta finalidade, principalmente para uso em crianças. O objetivo desse estudo será avaliar a dose de radiação ionizante emitida nos olhos e tireóide de crianças, de acordo com a região radiografada e equipamento utilizado (radiografia convencional e digital), bem como desenvolver um protetor ocular eficaz para crianças.

O exame por imagens constitui um recurso de grande importância para o diagnóstico e tratamento de doenças bucais, além de servir como documentação pericial para a comprovação da qualidade dos tratamentos realizados ou em identificação humana. No entanto, o exame radiográfico convencional apresenta potencial de causar efeitos biológicos prejudiciais, principalmente em crianças. Assim é fundamental identificar fatores que possam reduzir a exposição de pacientes pediátricos e acompanhantes a fim de reduzir os efeitos biológicos nocivos da radiação. Ainda, é essencial que as radiografias apresentem imagens de qualidade, livres de erros de técnica e de processamento, além de serem adequadamente arquivadas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade da técnica, do processamento e do arquivamento de radiografias intrabucais obtidas de crianças. Froam incluídas no estudo 500 radiografias intrabucais obtidas de crianças de 0 a 12 anos de idade, com padronização do filme, do método de revelação e do equipamento utilizados. As radiografias foram avaliadas por 3 examinadores calibrados, sendo classificadas de acordo com a qualidade das imagens (boas e satisfatórias ou insatisfatórias), com a técnica radiográfica (enquadramento, angulagem, tempo de exposição) e com o processamento radiográfico (imersão parcial do filme, radiografias manchadas, amareladas, riscadas, com impressões digitais, sobreposição de filmes, contraste da radiografia).

A molécula adaptadora Myeloid Differentiation primary response gene 88 (MyD88) está envolvida na ativação de receptores Toll-like (TLRs) e são consideradas moléculas responsáveis pelo reconhecimento precoce dos patógenos invasores e no desencadeamento da resposta imunológica. O objetivo do presente estudo foi caracterizar o desenvolvimento e a progressão de lesões periapicais induzidas experimentalmente em dentes de camundongos knockout para a molécula MyD88 (MyD88 KO), comparados a animais wild-type (WT). As lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de 30 camundongos WT e de 30 camundongos MyD88 KO. Decorridos 7, 21 e 42 dias da indução da lesão periapical, os animais foram submetidos à eutanásia em câmara de CO2 e as mandíbulas foram removidas e submetidas ao processamento histotécnico. A seguir, cortes representativos foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição do tecido pulpar e das regiões apical e periapical e para contagem do número de células inflamatórias (neutrófilos), em microscopia de luz, e para mensuração da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência. Espécimes sequenciais foram analisados por meio de: histoenzimologia para a atividade da TRAP, para identificação e contagem de osteoclastos; coloração de Brown & Brenn, para localização de bactérias; e imunohistoquímica, para identificação de marcadores da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG).

Atualmente a clorexidina (CHX) constitui o agente antimicrobiano mais utilizado para bochechos em crianças. No entanto, este agente apresenta efeitos colaterais quando utilizado por longo período, podendo causar coloração extrínseca do dente, alteração do paladar, alterações de sensibilidade na língua, dor e descamação das mucosas. Estes efeitos colaterais conduzem à pesquisa de novas formulações, entretanto até o momento nenhum agente antimicrobiano substituiu a CHX não existindo um agente ideal com alta capacidade antimicrobiana e ausência de efeitos colaterais. O objetivo deste estudo foi desenvolver uma nova formulação antimicrobiana a base de extrato de plantas e avaliar in vitro e in vivo sua ação antimicrobiana contra microrganismos cariogênicos e a possibilidade de alteração de cor dental. Material e Métodos: A atividade antimicrobiana contra S. mutans, S. sobrinus e L. casei foi avaliada in vitro pela determinação da concentração inibitória mínima, efetuada em microplacas de cultivo com 96 cavidades e, in vivo, após seu uso por crianças com alto risco e atividade da doença cárie. A concentração de microrganismos cariogênicos foi determinada na saliva das crianças, antes e após a realização do bochecho com a nova formulação. A possível alteração de cor dental foi avaliada em dentes decíduos e permanentes humanos recém-extraídos, por meio de espectrofotometria (Easy Shade), por um período de 60 dias.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a participação da IL-22 na formação e progressão de lesões periapicais induzidas experimentalmente em dentes de camundongos wild-type (WT) e transgênicos (knockout para IL-22). As lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de 30 camundongos WT e de 30 camundongos IL-22 KO. Decorridos 7, 21 e 42 dias da indução da lesão periapical, os animais foram submetidos à eutanásia em câmara de CO2, as mandíbulas foram removidas e submetidas ao processamento histotécnico. A seguir, cortes representativos foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição do tecido pulpar e das regiões apical e periapical, em microscopia óptica convencional, e mensuração da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência. Espécimes sequenciais foram avaliados por meio de: histoenzimologia para a marcação de osteoclastos (TRAP), presença e localização de bactérias pela coloração de Brown & Brenn e imunoistoquímica para a caracterização do infiltrado celular inflamatório (neutrófilos, macrófagos e linfócitos T e B), identificação de diferentes citocinas (IL-1±, TNF-±, INF-³, IL-4, IL-10, IL-22) e de marcadores da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG). Os resultados numéricos obtidos da análise morfométrica da extensão da área das lesões periapicais e do número de osteoclastos foram submetidos à análise estatística adequada, dependendo da natureza dos dados, utilizando o software SAS (Statistical Analysis System) for Windows versão 9.1.3. O nível de significância adotado foi de 5

O presente projeto de pesquisa tem como objetivo caracterizar biomarcadores envolvidos na reabsorção óssea inflamatória associada às doenças periapicais e periodontais, visando estabelecer possíveis parâmetros de diagnóstico, bem como avaliar a possível repercussão sistêmica dessas doenças. Serão realizados estudos em humanos, utilizando amostras de saliva, sangue e biopsias de tecido de pacientes saudáveis ou portadores de doença periapical ou periodontal e em animais, utilizando modelos de indução experimental de doença periapical e periodontal. A expressão de diferentes proteínas (IL-1, TNF, IFN, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-17, MIP-1; RANK, RANKL, OPG, MMP-8, MMP-9, TIMP-2, MPO) e do infiltrado inflamatório (neutrófilos, macrófagos e linfócitos), será avaliada por meio de citometria de fluxo e imunoistoquímica. Adicionalmente será realizado o processamento histotécnico para obtenção de cortes histológicos que serão corados com hemotoxilina e eosina (HE), para análise histopatológica do infiltrado inflamatório presente nas lesões periapicais e periodontais e para imunomarcação. Os eventuais resultados poderão fornecer bases imunopatológicas para a maior compreensão dos fatores celulares e moleculares envolvidos nas doenças periapicais e periodontais, suas possíveis repercussões sistêmicas, bem como gerar dados com potencial aplicabilidade no desenvolvimento de novos instrumentos para o diagnóstico ou de novos alvos terapêuticos

Embora diferentes materiais sejam propostos para a obturação dos canais radiculares de dentes decíduos, ainda não existe um consenso na literatura com relação ao material obturador ideal, que preencha requisitos físico-químicos, antimicrobianos e biológicos. O presente projeto de pesquisa se propõe a avaliar in vitro o grau de endurecimento, a alteração dimensional, a solubilidade e a penetrabilidade na dentina radicular de uma pasta a base de hidróxido de cálcio (Calen®) associada ao óxido de zinco em diferentes proporções (1:0,5, 1:0,65, 1:0,8, 1:1), do cimento de óxido de zinco e eugenol (ZOE) e de dois cimentos endodônticos, um a base de hidróxido de cálcio (Sealapex®) e um à base de metacrilato (EndoREZ®). Para determinar o grau de endurecimento, moldes (10 X 2 mm) serão preenchidos com os materiais e, decorridos 150 seg, serão testados com agulha tipo Gillmore (100 g), a cada 60 seg, até a redução das marcas na superfície. Para o teste de alteração dimensional, serão obtidos corpos-de-prova cilíndricos (3,58 x 3,0 mm), cujos comprimentos serão mensurados por meio de paquímetro digital, antes e após a imersão em 2,24 mL de água destilada e deionizada por 30 dias. No teste de solubilidade, corpos-de-prova (1,5 X 7,75 mm) serão pesados antes e após a imersão em 7,5 mL de água destilada, determinando-se a perda percentual da massa após 7, 14 e 21 dias. Para a análise da penetrabilidade na dentina radicular serão utilizados dentes decíduos unirradiculares extraídos, com raízes íntegras ou com até 1/3 de rizólise, submetidos ao tratamento endodôntico convencional. Para possibilitar a mensuração de penetrabilidade dos na dentina radicular, um corante de cor violeta será adicionado aos materiais obturadores. Os dentes serão mantidos em ambiente úmido na temperatura de 37°C e após 14 dias serão cortados longitudinalmente (0,4 mm espessura) no sentido vestibulo-lingual e a mensuração da penetrabilidade das pastas na dentina será realizada com auxílio de um perfilômetro. Os eventuais achados poderão fornecer bases físico-químicas para a melhor manipulação de pastas obturadoras já amplamente utilizadas na obturação dos canais radiculares de dentes decíduos, gerar materiais com potencial aplicabilidade clínica, como os cimentos obturadores, que já são utilizados na obturação de dentes permanentes, bem como estabelecer parâmetros de pesquisa para o desenvolvimento de novos materiais.

Considerando que o chá é uma bebida com potencial de causar alteração de cor extrínseca em elementos dentários e que a alteração de cor depende do pH da tornou-se necessária a avaliação da possível alteração de cor causada em dentes decíduos e permanentes após a aplicação da EGCG-3, derivada do chá verde, no interior dos canais radiculares. O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades físico-químicas da EGCG, por meio da análise de pH e espectroscopia de absorção no ultra-violeta visível (UV-VIS), bem como avaliar, in vitro, a possível alteração de cor causada após sua aplicação no interior do sistema de canais radiculares de dentes decíduos e permanentes, utilizando espectofotômetro digital. Após a análise físico-química, a EGCG-3 foi aplicada no interior do sistema de canais radiculares de dentes decíduos e permanentes extraídos, apresentando 2/3 de raiz, provenientes do banco de dentes da FORP-USP (n=10 dentes), para avaliar a possível alteração causada na cor dos dentes. As leituras de cor foramrealizadas com o espectrofotômetro digital VITA Easyshade (Wilcos do Brasil Indústria e Comércio Ltda, SP, Brasil), antes e após a aplicação da EGCG-3 no interior dos canais radiculares por um período de 7 a 14 dias

O chá verde, planta originária da Camellia sinensis, é uma das bebidas mais populares em todo o mundo e, recentemente, tem sido foco de pesquisas científicas por apresentar efeitos benéficos na saúde geral. Estudos laboratoriais e epidemiológicos sugerem que, dentre os polifenóis que compõem o chá verde, a epigalocatequina-3-galato (EGCG) apresenta ação anti-oxidante, anti-inflamatória, anti-microbiana e anti-carcinogênica, atuando na prevenção e tratamento do câncer, doenças cardiovasculares, neurodegenerativas e hepáticas. Em diversas doenças ósseas e esqueléticas, a EGCG também desempenha papel protetor, atuando na inibição da osteoclastogênese; no entanto, seus possíveis efeitos na reabsorção óssea e inflamatória associada à lesão periapical ainda não foram avaliados. Assim, o objetivo desse estudo foi inicialmente caracterizar as propriedades físico-químicas e biológicas da EGCG, para posteriormente avaliar seus efeitos na possível inibição da inflamação e reabsorção associadas à lesão periapical. Os estudos físico-químicos visaram caracterizar a EGCG, veiculada em meio aquoso ou viscoso, por meio espectroscopia de absorção no ultra-violeta visível (UV-VIS) e de fluorescência, e avaliar seu comportamento em função do pH. Os estudos biológicos serão realizados para avaliar sua compatibilidade tecidual, no tecido subcutâneo de ratos, e seus efeitos terapêuticos durante o tratamento do canal radicular de dentes de ratos portadores de lesão periapical experimentalmente induzida

O projeto de invenção /desenvolvimento tecnológico se insere no campo de aplicação da ciência médica, mais especificamente na área de preparações para finalidades odontológicas, uma vez que visa o desenvolvimento de formulações de uso tópico bucal à base de epigalocatequina-3-galato (EGCG), derivada do chá verde, encapsulada em nanopartículas poliméricas e lipídicas sólidas, na forma de solução para bochecho, dentifrício, pastas endodônticas, géis ou pomadas, recomendadas na prevenção e no tratamento de doenças infecciosas da cavidade bucal (vírais, bacterianas e fúngicas).

Tumores cerebrais e da medula espinhal estão em segundo lugar na frequência como cancro que afeta as crianças, e são as causas mais comuns de mortalidade por câncer em jovens. Mundialmente, cerca de 30.000-40.000 crianças desenvolvem tumores no sistema nervoso central (SNC) a cada ano. A maioria das evidências favorece a mutação espontânea como a causa predominante do câncer infantil, ao contrário da etiologia ambiental ou hereditária, exceto radiação, que tem sido correlacionada com a ocorrência de tumores cerebrais na infância. O Meduloblastoma é o segundo tumor mais comum do SNC, sendo utilizado como tratamento a quimioterapia e radioterapia. A radioterapia é a razão principal para a ocorrência de trismo, o qual tem sido associado nutrição reduzida devido à mastigação deficiente, dificuldade em falar e comprometimento da higiene oral. A acupuntura tem sido amplamente utilizada para melhorar as funções motoras, sendo aplicada no tratamento da paralisia facial periférica na China. No entanto poucos relatos na literatura têm mostrado seu efeito no tratamento de paralisia facial e trismo após o tratamento oncológico de cabeça e pescoço. O objetivo desse estudo será a laserterapia para tratamento da paralisia facial, pós tratamento oncológico cirúrgico associado com quimioterapia e radioterapia.

A reabsorção dos tecidos mineralizados constitui uma das grandes preocupações da Odontologia, pois o controle ou a interrupção desse processo nem sempre são conseguidos na clínica por escassez de conhecimento dos seus mecanismos imunopatogênicos. O presente projeto de pesquisa se propõe a caracterizar os diversos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na reabsorção dos tecidos mineralizados (dente e osso alveolar), por meio da indução experimental de lesões periapicais em camundongos wild-type, bem como avaliar o papel específico da molécula de adesão intercelular-1 (ICAM-1) nesse processo utilizando camundongos transgênicos (knockout). Para induzir a reabsorção dos tecidos apicais e periapicais, será realizada abertura coronária dos 1os molares inferiores e exposição dos canais radiculares ao ambiente bucal para sua contaminação. Após a morte dos animais, as amostras obtidas em diferentes períodos experimentais, serão avaliadas por meio de microscopia convencional e de fluorescência (morfometria), histoenzimologia (TRAP), imunoistoquímica, imunofluorescência e PCR Real-Time, para avaliar expressão de citocinas (IL-1alfa, TNF-alfa, IFN-γ, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-17) e fatores envolvidos na osteoclastogênese (RANK, RANKL, OPG e catepsina K). Os eventuais achados poderão fornecer bases imunopatológicas para a melhor compreensão dos mecanismos da reabsorção dos tecidos mineralizados, bem como gerar dados com potencial aplicabilidade no desenvolvimento de novos instrumentos para o diagnóstico precoce das reabsorções patológicas, ou de novos alvos terapêuticos.

O objetivo do presente trabalho será caracterizar o papel do LPS bacteriano e dos receptores toll-like 2 (TLR2) e toll-like 4 (TLR4) na gênese e progressão de lesões periapicais induzidas experimentalmente em dentes de camundongos wild-type e transgênicos (knockout para TLR2 e deficientes em TLR4). Para essa avaliação será realizada a caracterização do infiltrado celular inflamatório (neutrófilos, macrófagos e linfócitos T e B); imunoistoquímica para quantificação de citocinas (IL-1alfa, TNF, INF-gama, IL-4, IL-10), para identificação do fator ativador do receptor do fator nuclear KB (RANK), seu ligante (RANKL) e da osteoprotegerina (OPG) e histoenzimologia para a ativação da fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP). Serão utilizados 90 camundongos, sendo 30 wild-type, 30 knockout para TLR2 e 30 deficientes em TLR4, machos, de 6 a 8 semanas, pesando em média 23 gramas, os quais serão mantidos sob condições adequadas no Biotério da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto. Inicialmente, a abertura coronária será realizada nos primeiros molares inferiores com broca esférica de aço inoxidável em baixa rotação e os canais radiculares serão localizados com uma lima do tipo K e mantidos abertos ao meio ambiente bucal com o objetivo de contaminação dos canais radiculares e formação de lesão periapical nesses dentes. Nos períodos experimentais de 7, 21 e 42 dias, os animais serão mortos em câmara de CO2, as mandíbulas serão removidas, fixadas por imersão em formol tamponado a 10% por 24 horas na temperatura ambiente e, em seguida, lavadas por 24 horas em água corrente. Para descalcificação das peças será utilizada uma solução a base de EDTA a 4,13%. Após a descalcificação, as peças serão submetidas à técnica histológica de rotina para obtenção dos cortes histológicos. Os cortes serão avaliados por microscopia de luz convencional e de fluorescência. As análises morfométricas serão realizadas apenas nas raízes distais dos primeiros molares inferiores, em cortes mostrando o terço apical do canal radicular, o forame apical e o osso alveolar. Para a avaliação histopatológica os cortes serão corados pelo método de hematoxilina e eosina (HE); histoenzimologia para a ativação da fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP), para a identificação de osteoclastos; imunoistoquímica para a caracterização do infiltrado celular inflamatório (neutrófilos, macrófagos e linfócitos T e B), quantificação de citocinas (IL-1alfa, TNF, INF-gama, IL-4, IL-10), identificação do fator ativador do receptor do fator nuclear KB (RANK), seu ligante (RANKL) e da osteoprotegerina (OPG). Todos os procedimentos serão realizados às cegas por um único avaliador habilidoso. Os resultados obtidos serão submetidos à análise pelo teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar se os dados apresentam distribuição normal. Em seguida, será realizada a análise de variância (ANOVA) ou teste t Student para comparação entre duas variáveis, seguidos do teste Bonferroni se os dados apresentarem distribuição normal ou teste de Mann-Whitney se os dados não apresentarem distribuição normal. Os dados serão analisados usando-se o programa estatístico Graph Pad Prism 4, com nível de significância de 5%.

É amplamente aceito que em condições inflamatórias como artrite reumatóide, osteoartrite, periodontite e outras, as metaloproteinases (MMPs) agem na destruição tecidual e que sua inibição reduz este processo. No entanto, o papel das MMPs na formação, manutenção e reparação da lesão periapical é pouco conhecido; tem sido proposto que o mecanismo molecular de expansão das lesões periapicais provavelmente envolva algumas MMPs e seus inibidores -TIMPs. A proposição do presente projeto é avaliar o envolvimento das MMPs, dos seus inibidores (TIMPs) e do se indutor (EMMPRIN) na formação e progressão da lesão periapical em camundongos e ratos. Além disso, estudaremos o perfil de expressão de citocinas (IL-1, IL-6, TNF-), fatores envolvidos na osteoclastogênese (RANK, RANKL, OPG, catepsina K, TRAP), tipos celulares (neutrófilos, macrófagos, osteoclastos, osteoblastos), constituintes da matriz extracelular (colágenos tipo I e III) e perfil bacteriano (Gram positivos e negativos) implicados no desenvolvimento da lesão periapical. É nossa expectativa que o entendimento do papel das metaloproteinases na degradação da matriz extracelular, e a relação com a modulação de outros fatores envolvidos na rabsorção óssea resultará no aprofundamentodo conhecimento biológico sobre os fatores que regulam o desenvolvimento da lesão periapical além de poder oferecer sugestões ao conhecimento empregado na prática endodôntica atual; mais especificamente, a aplicação de modalidades terapêuticas direcionadas aos mecanismos biológicos envolvidos em seu início, progressão, manutenção e/ou resolução da lesão periapical.

Têm sido acumuladas nos últimos anos evidências de que em muitas doenças os principais aspectos patológicos não estão relacionados com uma ação direta do agente agressor, mas sim com a resposta imunológica, embora esta também seja fundamental para a defesa do organismo. Estudos realizados em nosso laboratório revelaram uma evidência importante a favor do envolvimento dos neutrófilos na patogênese da lesão periapical. Pesquisas recentes vem ampliando o conhecimento do papel funcional dos neutrófilos em diversas condições patológicas, revelando que estas células estão envolvidas não apenas no início, mas também na manutenção e resolução de processos inflamatórios. Entretanto, a caracterização e função dos tipos celulares envolvidos na lesão periapical é controversa e o papel dos neutrófilos na gênese e manutenção da doença tem sido negligenciado. O presente projeto de pesquisa propõe a avaliar o possível papel dos neutrófilos na imunopatogenia da lesão periapical. Os eventuais achados poderão gerar novos dados com potencial aplicabilidade no desenvolvimento de novos instrumentos diagnósticos e prognósticos e de novo alvos terapêuticos na clínica odontológica.

Como a clorexidina (CHX) tem sido recomendada tanto como solução irrigadora de canais radiculares como curativo de demora, o objetivo do presente estudo foi caracterizar in vivo a lesão induzida pela injeção de CHX na pata de camundongos em intervalos de tempo selecionados (24 e 48 horas e 7 e 14 dias) e in vitro a causa e o modo de morte celular (necrose e/ou apoptose), e o estresse causado pela exposição de fibroblastos L929 em cultura a concentrações crescentes de CHX por 24 horas. A CHX injetada no espaço subplantar da pata traseira de camundongos induziu efeitos tóxicos severos, evidenciados pelas alterações necróticas na epiderme, derme e tecido subcutâneo em associação com uma resposta inflamatória reacional, particularmente nas concentrações mais elevadas. Em cultura de fibroblastos, a CHX causou estresse do retículo endoplsmático como consequência do acúmulo de proteínas nas cisternas e induziu a morte celular por necrose e apoptose via estresse do retículo endoplasmático. Além disso, a CHX levou ao aumento da expressão de proteína de choque térmico (heat shock protein, Hsp70) e de proteína regulada pela glicose (glucose-regulated protein, Grp78), indicadores de estressse celular. Os resultados sugerem que a CHX pode ter um efeito desfavorável na resolução de lesões periapicais.

A utilização de camundongos knockout tem criado novas possibilidades para o estudo da imunopatogênese das doenças; pode fornecer importante contribuição dos mecanismos moleculares envolvidos em seu início, manutenção e/ou resolução. O objetivo desse estudo foi caracterizar a cinética de desenvolvimento de lesões periapicais experimentalmente induzidas em camundongos wild-type (WT) e avaliar o papel de citocinas Th1 (IFN-γ) e Th2 (IL-4 e IL-10), uma molécula de adesão celular (ICAM-1) e um receptor de quimiocinas (CCR5), utilizando animais knockout, visando estabelecer se esses fatores são predominantemente protetores ou estimuladores do desenvolvimento da lesão periapical. Após a abertura coronária os canais radiculares dos primeiros molares foram inoculados com 4 linhagens bacterianas e deixados expostos ao ambiente bucal. As lesões periapicais obtidas foram avaliadas em diferentes estágios de desenvolvimento por meio de microscopia convencional (HE, picrosirius vermelho, Brown e Brenn e TRAP), microscopia de fluorescência, imunoistoquímica (neutrófilos, macrófagos e linfócitos), imunofluorescência (RANK, RANKL e OPG) e real-time PCR (IL-1α, TNF-α, IFN-gama, IL-10, RANK, RANKL, OPG e catepsina K). A investigação da dinâmica de equilíbrio entre mecanismos defensivos e destrutivos pode fornecer bases imunopatológicas para a melhor compreensão dos sinais e sintomas da lesão periapical, possivelmente influenciando sua estratégia de tratamento e fornecendo alguma luz aos mecanismos da reabsorção óssea e dentária.