Roberto Sartori Filho.

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	03/02/2020 a 03/02/2021

O objetivo principal é trabalhar em serviços de extensão buscando um melhor uso dos conhecimentos gerados sobre fisiologia reprodutiva em animais de interesse zootécnico, com foco em bovinos, assim do efeito da nutrição sobre características reprodutivas do macho e da fêmea. Serão realizadas parcerias com outros grupos de estudo/extensão relacionados à reprodução animal, gerando um intercâmbio entre alunos e informações. Parte dos projetos envolve também fazendas comerciais de corte ou leite, promovendo a disseminação das informações geradas e de biotecnologias reprodutivas.

https://www.esalq.usp.br/svcex/content/reprodu%C3%A7%C3%A3o-de-animais-de-interesse-zoot%C3%A9cnico-raiz

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimentos em fisiologia e biotecnologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos básicos e aplicados relacionados à reprodução de animais de interesse zootécnico para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva e manejo das biotécnicas de reprodução assistida em animais. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	12/08/2019 a 12/02/2020

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	04/02/2019 a 04/08/2019

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimentos em fisiologia e biotecnologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos básicos e aplicados relacionados à reprodução de animais de interesse zootécnico para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva e manejo das biotécnicas de reprodução assistida em animais. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	15/10/2018 a 15/04/2019

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	15/03/2018 a 15/08/2018

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimentos em fisiologia e biotecnologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos básicos e aplicados relacionados à reprodução de animais de interesse zootécnico para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva e manejo das biotécnicas de reprodução assistida em animais. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período: 11/09/2017 a 12/03/2018

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	01/07/2013 a 01/01/2014

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	10/08/2012 a 10/08/2013

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	28/03/2011 a 27/09/2011

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimentos em fisiologia e biotecnologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos básicos e aplicados relacionados à reprodução de animais de interesse zootécnico para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva e manejo das biotécnicas de reprodução assistida em animais. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	01/08/2011 a 23/12/2011

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimentos em fisiologia e biotecnologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos básicos e aplicados relacionados à reprodução de animais de interesse zootécnico para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva e manejo das biotécnicas de reprodução assistida em animais. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	02/03/2010 a 31/08/2010

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período:	01/09/2010 a 28/02/2011

Público Alvo:	Profissional de nível superior com formação em Medicina Veterinária ou áreas afins, com conhecimento em fisiologia da reprodução animal.
Objetivo:	Aprofundar o conhecimento de aspectos relacionados à reprodução de ruminantes, com ênfase na fêmea, para adequadamente capacitar profissionais para as atividades de pesquisa e/ou ensino na área de Produção Animal.
Justificativa:	Para uma melhor formação do profissional na área em questão, deve-se apresentar e discutir com ele as informações básicas e as mais recentes sobre função reprodutiva dos ruminantes. Utilizando-se o tema proposto, objetiva-se também estimular o senso crítico do profissional em relação a delineamentos experimentais, leitura, apresentação e discussão de trabalhos científicos.
Período: 01/09/2009 a 28/02/2010

A análise de fertilidade a campo de touros é um processo demorado e de pouca acurácia. Além disso, mimetizar o tempo de maturação dos gametas é um desafio na aplicação das biotecnologias da reprodução. Alguns estudos in vitro mostraram a capacidade dos espermatozoides em se ligarem às células epiteliais da tuba uterina (OEC) antes da fecundação. Esse teste de ligação mostrou alta correlação com fertilidade, entretanto, não há relatos na literatura dessa técnica realizada com modelos de vacas em fase do ciclo estral conhecida, isto é, o momento compatível com a fecundação. Dessa forma, a presente proposta tem por objetivo caracterizar qual o melhor modelo de cultivo de OEC e validar o teste de ligação em touros.

O crescimento folicular no ciclo estral das vacas se dá na forma de ondas e constitui-se das seguintes fases: 1) emergência da onda folicular (OF), na qual os folículos apresentam 4 mm de diâmetro; 2) desvio folicular (DF), com folículos medindo cerca de 8,5 mm de diâmetro nos taurinos e 6 a 7 mm nos zebuínos; 3) ovulação, na qual o folículo dominante atinge um diâmetro ideal e responde ao pico pré-ovulatório de LH. Estudos realizados especialmente em fêmeas da raça Holandês e taurinas de corte demonstraram efeito negativo da duração do período de dominância folicular na qualidade oocitária, desenvolvimento embrionário e fertilidade. Como pouco foi estudado sobre esse assunto em zebuínos, o presente estudo objetiva avaliar o impacto da idade do folículo ovulatório na fertilidade de vacas Nelore, além de comparar os efeitos na qualidade embrionária de vacas B. indicus e B. taurus. Para tanto, dois experimentos serão realizados, sendo que no primeiro, 600 vacas Nelore serão submetidas a um protocolo hormonal para pré-sincronização (D-13 ao D-6 = implante de 1 g de P4; benzoato de estradiol (BE) no D13); 0,5 mg de PGF2α, 300 UI de eCG e 0,5 mg de cipionato de estradiol (CE) no D-6; 20 µg de acetato de buserelina (GnRH) e 0,5 mg de PGF2α no D-4. Após a pré-sincronização, os animais serão divididos em três tratamentos: FOL-5D: D0 = dispositivo de P4 (1 g); D2 = 0,5 mg de PGF2α e 2 mg de BE; D2,5 = 0,5 mg de PGF2α; D8 = retirada do dispositivo e 0,5 mg
de PGF2α; D9,5 = 20 µg de GnRH; D10 = IATF. FOL-7D: D0 = dispositivo de P4 (1 g) e 2 mg de BE. No D2 e D2,5 = 0,5 mg de PGF2α; D8 = retirada do dispositivo e 0,5 mg de PGF2α; D9,5 = 20 µg de GnRH; D10 = IATF. O tratamento FOL-14d será semelhante ao anterior, contudo não será administrado 2,0 mg de BE no D0. No segundo experimento, de modo a testar a qualidade embrionária, 80 vacas (40 B. indicus ? Brahman e 40 B. taurus ? Aberdeen Angus) passarão por um protocolo de pré-sincronização: D-17 ao D-2 = implante de 1.38 g de P4; 0,5 mg de PGF2α no D-2; 200 µg de gonadorelina (GnRH) e 0,5 mg de PGF2α no D0. Em seguida,
receberão o seguinte protocolo, para gerar folículos persistentes: D4 = dispositivo de P4 (1,38 g, previamente utilizado); D6 e D6,5 = 0,5 mg de PGF2α; D12 = retirada do dispositivo e 0,5 mg de PGF2α; D13,5 = 200 µg de GnRH; D14 = IATF. Sete dias após a IATF (D21), será realizada lavagem uterina não cirúrgica transcervical, para recuperação e avaliação dos embriões, além da administração de duas doses de PGF2α, com 12 horas de intervalo. A hipótese do experimento 1 é que tanto o período prolongado quanto o período curto de
dominância folicular não afetarão a fertilidade de vacas Nelore. A hipótese do experimento 2 é que apenas vacas B. taurus terão comprometimento da qualidade embrionária ao ovularem folículos persistentes.

Experimentos serão realizados para auxiliar a esclarecer aspectos fisiológicos relacionados à ovulação e manutenção da gestação em fêmeas bovinas submetidas à inseminação artificial (IA) ou transferência de embriões (TE). Além disso, estudos avaliarão estratégias para elevar a eficiência e/ou simplificar o uso de protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) ou de produção de embriões. O projeto propõe a realização de 26 experimentos balanceados dentro de seis temas principais, sendo três sobre fisiologia reprodutiva (1 - Mecanismos envolvidos na manutenção da gestação; 2 - Alterações ovarianas, uterinas e endócrinas em resposta a diferentes tratamentos ou concentrações hormonais; 3 - Dinâmica ovariana e qualidade embrionária em protocolos de IATF) e outros três voltados às biotecnologias reprodutivas (4 - Eficiência reprodutiva em vacas e novilhas da raça Nelore submetidas a protocolos de IATF; 5 - Eficiência reprodutiva em vacas leiteiras submetidas a protocolos de IATF; 6 - Produção in vivo de embriões em vacas superovuladas inseminadas com espermatozoide sexado refrigerado), tanto em bovinos de corte quanto leiteiros. Nesses experimentos, aproximadamente 20.000 animais serão usados, onde haverá avaliações espermáticas do sêmen utilizado, exames ultrassonográficos ovarianos e uterinos transretais, colheitas de sangue para dosagens hormonais e lavados uterinos (quando pertinente) para estudar as dinâmicas e funções ovarianas e uterinas, qualidade embrionária e fertilidade.

O projeto desenvolvido teve o objetivo de estabelecer programas reprodutivos inovadores que aumentassem a fertilidade de vacas leiteiras de alta produção. O primeiro experimento visava implementar programas reprodutivos para a primeira IATF pós-parto. Para isso, estabeleceu-se uma pré-sincronização inovadora, à base de estradiol (E2) e progesterona (P4), usada antes do início de protocolos de IATF iniciados com GnRH. Além disso, foi comparado três estratégias de indução da ovulação ao final do protocolo, sendo uma com cipionato de E2 (CE), outra com GnRH e uma terceira combinando ambos hormônios. Os resultados demonstraram que o programa reprodutivo estabelecido foi eficiente em proporcionar uma adequada dinâmica luteal e concentrações de P4 durante o desenvolvimento folicular nos protocolos, e a fertilidade foi notável, principalmente em fazendas bem manejadas. As três estratégias de indução da ovulação promoveram fertilidade semelhantes aos 30 dias pós inseminação, no entanto, os resultados sugerem a necessidade da inclusão de CE no objetivo de diminuir a perda gestacional. No experimento 2, comparou-se 2 estratégias para iniciar o protocolo de ressincronização da IATF, uma com benzoato de E2 (BE) mais GnRH e uma somente com GnRH. Vacas começando o protocolo com BE apresentaram maior regressão do corpo lúteo durante o protocolo e menos vacas e número de corpo lúteo no momento da PGF dos protocolos, no entanto, a fertilidade não foi comprometida. Portanto, as estratégias de iniciar o protocolo de ressincronização promoveram fertilidade similares, porém, o uso de GnRH no início do protocolo, com alta taxa de ovulação promove boa fertilidade, e sua inclusão é necessária em protocolos iniciados com BE

Além de estudar a fisiologia e biotécnicas reprodutivas em vacas da raça Holandês, associados aos Processos FAPESP 2014/03580-0 e 2014/22885-7, pretende-se desenvolver ensaios robustos por ELISA de dosagem hormonal para substituírem as técnicas de Radioimunoensaio, as quais tem apresentado inúmeras dificuldades de realização no Brasil. O objetivo da presente proposta é de validar e comparar as técnicas de dosagem plasmática e sérica de progesterona (P4), estradiol (E2) e insulina para utilização em experimentos e possibilitar o entendimento fisiológico das reais concentrações hormonais existentes, bem como, entender as qualidade e limitações de cada técnica. As técnicas utilizadas para dosagem de P4, E2 e insulina serão radioimunoensaio, quimioluminescência e ELISA. As amostras de sangue serão oriundas dos animais envolvidos nos projetos 2014/22885-7 e 2014/03580-0, e um número mínimo de 100 amostras por ensaio será analisado. Concentrações plasmáticas e séricas também serão comparadas. A análise dos dados será realizada por meio de análise de variância, regressão logística e teste de correlação. Dos projetos envolvidos na proposta, o 2014/03580-0 tem como objetivo avaliar o papel da insulina na modulação da função folicular e luteínica e de entender a influência da dieta insulinogênica na produção embrionária, na expressão de enzimas hepáticas (Citocromo P450 2C, 3A, e aldo keto redutase 1C e 1D) e nas concentrações circulantes de P4, em vacas holandesas não lactantes e não gestantes. Já o 2014/22885-7 tem como objetivo estimar a incidência da condição anovulatória em rebanhos leiteiros e de entender o mecanismo, identificar os fatores de risco e os fatores envolvidos no estabelecimento e manutenção da prenhez das vacas em condição anovulatória. No retorno ao Brasil, após 12 meses, pretende-se estabelecer um Laboratório de Parceria e Prestação de Serviços para a comunidade científica com diversas opções de dosagens hormonais e várias publicações serão produzidas durante o período de pesquisa no exterior. Além disso, em relação aos projetos, vai se entender como a dieta pode influenciar na produção de embrião de doadoras, e identificar fatores de risco e técnicas de manejo para diminuir a incidência condição anovulatória, assim como encontrar medidas para aumentar a fertilidade das vacas leiteiras acometidas por essa condição.

A fonte energética pode influenciar a fermentação ruminal, obtendo-se diferente perfil de ácidos graxos voláteis, e consequentemente alterações nas concentrações circulantes de insulina, entretanto, ainda pouco se sabe sobre sua influência na função ovariana e na produção de embriões. O objetivo do experimento 1 é acessar o papel da insulina na modulação da função folicular e luteínica. Para tal, serão utilizadas 16 vacas holandesas não lactantes e não gestantes, confinadas e distribuídas de acordo com idade, peso e ECC em arranjo tipo quadrado latino, nos seguintes grupos experimentais: Grupo CC = água pré e pós desvio folicular (n = 16); Grupo CI = água e propilenoglicol pré e pós desvio folicular, respectivamente (n = 16), Grupo IC = propilenoglicol e água pré e pós desvio folicular, respectivamente (n = 16) e Grupo II = propilenoglicol pré e pós desvio folicular (n=16). Água ou propilenoglicol será fornecido via oral quatro vezes ao dia por 3 dias pré desvio e mais 3 dias pós desvio folicular. Os animais serão avaliados diariamente por ultrassonografia para verificação da dinâmica folicular e luteínica. Colheitas de sangue serão realizadas em todos os dias de manipulação dos animais e os hormônios progesterona, 17²-estradiol e insulina assim como a glicemia serão dosados. O objetivo do experimento 2 será avaliar a influência de dieta insulinogênica na produção embrionária, na expressão de enzimas hepáticas (Citocromo P450 2C, 3A, e aldo keto redutase 1C e 1D) e nas concentrações circulantes de progesterona, em vacas holandesas não lactantes e não gestantes. Para tanto, 24 vacas serão usadas. Após 15 dias, em dieta de adaptação, as fêmeas serão designadas em dois grupos experimentais: 1) dieta mais insulinogênica e 2) dieta menos insulinogênica. Cada grupo experimental receberá uma das dietas tratamento durante 70 dias. As vacas serão superovuladas e os embriões serão colhidos após 35 e 70 dias de fornecimento dos suplementos, para em seguida, realizar-se o crossover. Os embriões serão classificados segundo o grau de desenvolvimento e qualidade morfológica. Além disso, exames ultrassonográficos ovarianos serão realizados para avaliar as respostas superestimulatória e superovulatória. Biópsias hepáticas serão feitas, 2 dias após a colheita de embriões, aproximadamente 4 horas após o fornecimento da dieta. O fragmento hepático será condicionado para posterior quantificação em PCR em tempo real. Amostras de sangue para dosagens de progesterona, frutosamina e insulina serão colhidas no início do período experimental, ao início do protocolo de superovulação, no dia da colheita de embriões e no dia da biópsia hepática, todos em dois momentos (imediatamente antes da alimentação e 4 horas após).

Nos últimos anos, diversas alterações têm sido observadas na fisiologia reprodutiva de vacas leiteiras, comprometendo os índices de concepção. Estas alterações estão aparentemente relacionadas à alta produção de leite por vaca, resultado de intenso incremento nutricional, seleção genética e técnicas de manejo voltadas para a produção de leite. Tendo em vista a relação direta entre o aumento na produção de leite e a diminuição da fertilidade, tem-se buscado alternativas para incrementar os índices reprodutivos. Uma das alternativas é o desenvolvimento de protocolos de sincronização de ovulação para a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) com o uso de hormônios exógenos, já que os hormônios esteroides endógenos em vacas de alta produção são metabolizados em proporção elevada devido ao alto fluxo sanguíneo hepático. Assim, este estudo envolverá experimentos com o propósito de se desenvolver protocolos de IATF que assegurem elevadas taxas de sincronização de ovulação, assim como um ambiente hormonal adequado para otimizar a qualidade ovocitária e embrionária em vacas leiteiras a pasto ou confinadas. No Experimento 1, será avaliado em que situações fisiológicas a suplementação com eCG em protocolo de IATF aumenta a fertilidade em vacas mestiças (Gir x Holandês; n = 500). O Experimento 2 tem o propósito de avaliar a fertilidade, além de compreender o perfil sérico de progesterona (P4) e a dinâmica folicular e luteal durante a reutilização de dispositivos intravaginais desinfetados ou autoclavados (CIDR®) em protocolo de IATF iniciado com GnRH e benzoato de estradiol em 500 vacas Holandesas lactantes de alta produção.

São muitos os desafios enfrentados por veterinários e produtores para se produzir leite de forma eficiente. Dentre estes, pode-se citar a redução na fertilidade que vem ocorrendo com o aumento na produção de leite e consequentemente maior consumo de matéria seca ao longo dos anos. Além disso, as alterações metabólicas e hormonais sofridas pelas vacas durante o período de transição são causadoras de grandes distúrbios durante esta fase. No período pré-parto, ocorre uma queda no consumo de matéria seca, maior mobilização de reservas corporais e redução no status imunológico das vacas, que acarretam em maiores incidências de desordens tais como hipocalcemia, cetose, deslocamento de abomaso, retenção de placenta e infecções uterinas após o parto. Dentre os distúrbios metabólicos, a retenção de placenta é considerada um dos grandes causadores da perda de eficiência produtiva e reprodutiva em sistemas de produção de leite. A incidência de retenção de placenta é bastante variada em função da propriedade, época do ano e outros fatores, variando de 8 a 30% e acarreta em grandes prejuízos ao produtor de leite. Alguns trabalhos têm sugerido que a aplicação de vitamina E em vacas de leite na fase pré-parto, tem reduzido a incidência da não expulsão dos anexos fetais, especialmente nas vacas com carência deste nutriente. O objetivo deste projeto é avaliar a eficácia da suplementação com vitamina E em vacas no período pré-parto sobre a incidência de retenção de placenta e seu impacto sobre o desempenho produtivo e reprodutivo de vacas produtoras de leite. Além disso, investigar-se-á fatores endócrinos e metabólicos peri-parto potencialmente associados à retenção de placenta.

Esta proposta refere-se a dois estudos independentes relacionados a fatores (nutrição e sexagem espermática) que interferem na viabilidade do sêmen bovino. A criopreservação de sêmen é de fundamental importância para a expansão das técnicas reprodutivas como a IA, TE e FIV, entretanto pode levar a estresse oxidativo da célula espermática. Deste modo, esta deve possuir membrana plasmática com adequada fluidez que é garantida, entre outros fatores, pelos ácidos graxos poli-insaturados e suporte de defesa antioxidante para incrementar a sobrevivência celular após a congelação. No intuito de tornar espermatozóides mais resistentes à criopreservação, no estudo envolvendo aspectos nutricionais, 40 touros das raças Canchim e Nelore serão suplementados com gordura protegida e/ou vitamina C e selênio durante 70 dias. Neste período, colheitas e congelação de sêmen serão realizadas com intervalo de 14 dias. No sêmen fresco e após congelação/descongelação, serão realizadas diversas avaliações, tais como: vigor, turbilhonamento, concentração e motilidades progressiva e total, além de outros exames complementares: aglutinação de cabeça em contraste de fase, integridade de membrana plasmática com iodeto de propídeo e diacetato 6-carboxifluoresceína (C-FDA), integridade de acrossoma (Peannut aglutinin-PNA e iodeto de propídeo), capacitação espermática com hidroclorido de clortetraciclina (CTC), integridade de cromatina e morfometria espermática com azul de toluidina por meio de análise computadorizada. Além disso, sangue será colhido para posterior dosagem de testosterona, concentração de selênio e atividade da enzima glutationa peroxidase. O objetivo do estudo com sêmen sexado é comparar diferentes características espermáticas entre sêmen sexado e não sexado e embriões produzidos com sêmen de ambos os grupos. Para isto, um ejaculado de cada touro (n=4) da raça Nelore, será colhido e fracionado em três partes: não sexado (NS), sexado contendo cromossomo X (SX) ou cromossomo Y (SY). Para avaliação morfométrica da cabeça do SX vs. SY e pool de SX e SY vs. NS serão feitas 100 imagens de células por amostra de todos os touros/tratamento por meio de microscopia de força atômica. As imagens serão avaliadas em software SPM Off-line quanto às medidas uni, bi e tridimensionais e quanto aos descritores de forma, totalizando 28 variáveis. Padrão de metilação do DNA será avaliado na região diferencialmente metilada (DMR) do gene IGF2 e IGF2R. Todo o procedimento será repetido três vezes. Embriões produzidos in vitro com este sêmen dos três tratamentos serão utilizados para avaliação do padrão de metilação e expressão gênica. Quatro pools de 12 embriões de cada grupo serão formados para avaliação da expressão de diversos genes, tais como, PLAC-8, KRT-8, Interferon-tau, MnSOD, Hsp-70, DNMT 3A, DNMT 3B, DNMT 1, Glucose Transporter (GLUT) 1, 2 e 3 por PCR em tempo real. Do mesmo material será extraído DNA genômico para avaliação do padrão de metilação da DMR do gene IGF2 e IGF2R. Além disto, será realizada a comparação entre os grupos quanto à capacidade de ligação dos espermatozóides sexados e não sexados com as células da tuba uterina, também realizada em três diferentes repetições. O tempo de viabilidade do espermatozóide SX, SY e NS em meio de fecundação também será avaliado.

A nutrição está intimamente relacionada com a reprodução em muitas espécies animais e ainda há muito a se aprender sobre essa inter-relação, principalmente porque há muita controvérsia na literatura. Por exemplo, alguns estudos sugerem ser benéfico o uso do "flushing" nutricional na produção de embriões em ruminantes. Entretanto, a maioria dos trabalhos mostra resultados negativos. Dessa forma, existe a necessidade em se avançar estudos comparando a fisiologia reprodutiva e produção de embriões em fêmeas sob diferentes níveis nutricionais. Este projeto de pesquisa engloba dois estudos para tratar deste tema. O primeiro envolve vacas e o segundo será realizado com ovelhas. No estudo 1, serão utilizadas 32 vacas Nelores não lactantes recebendo uma das quatro dietas a seguir: Mantença (M); 0,7M - restrição; 1,5M - alta ingestão de matéria seca; ou alta ingestão de energia (E), porém, com a mesma ingestão de matéria seca do grupo M, utilizando o modelo crossover. Estes animais terão o ciclo estral sincronizado e acompanhamento ultrassonográfico até confirmada a ovulação. Posteriormente, nos dias 7 e 10 do ciclo estral será avaliado o volume do corpo lúteo. Concentrações circulantes de hormônios esteróides (P4 e estradiol) e de IGF-I e insulina também serão avaliados durante este período experimental. Em seguida, entre os dias 10 e 16 do ciclo estral, as vacas serão superovuladas, os embriões serão colhidos, avaliados, criopreservados e posteriormente transferidos a aproximadamente 400 receptoras sincronizadas para avaliação das taxas de concepção. Conjuntamente, antes do início do protocolo de superovulação, as vacas terão seus folículos ovarianos aspirados para recuperação ovocitária e, após avaliação da qualidade desses ovócitos, será realizada fecundação in vitro e produção de embriões. Estes embriões serão vitrificados, de forma idêntica ao realizado com os embriões produzidos in vivo, para posteriormente serem transferidos (n = 400 a 600 embriões). No estudo 2, objetiva-se avaliar a influência da alta ou baixa ingestão alimentar nas concentrações plasmáticas de insulina, progesterona e expressão gênica das enzimas hepáticas (CYP2C e CYP3A), em ovelhas pré-puberes. Serão utilizadas 24 borregas, F1 Dorper X Santa Inês, com idade média de cinco meses e peso médio de 25 kg. Após 15 dias da fase de adaptação, os animais serão blocados de acordo com o peso inicial e divididos aleatoriamente em dois grupos experimentais. A mesma dieta experimental será fornecida para ambos os grupos, contudo a ingestão alimentar será distinta: O Grupo Ad Libitum (Ad) com ingestão média de 3,8% do peso vivo (PV) e o Grupo Restrição (R) com 2% PV, por um período de oito semanas. Ao final da quarta e oitava semanas, os animais receberão a aplicação de prostaglandina (PG) F2± e um dispositivo intravaginal de liberação lenta de progesterona (CIDR®), caracterizando o D0. A aplicação de PGF2± será repetida no D6. No D8, serão realizadas colheitas de sangue seriadas nos seguintes intervalos: -0,5; 1; 2; 3; 4; 5 e 6 horas, em relação ao momento da oferta da dieta (0 hora) para a dosagem das concentrações plasmáticas de insulina e progesterona. Para avaliação das enzimas hepáticas será feita biópsia hepática no D9 e posterior quantificação em PCR em tempo real.

Nos últimos anos, diversas alterações têm sido observadas na fisiologia reprodutiva de vacas leiteiras, comprometendo os índices de concepção. Estas alterações estão aparentemente relacionadas à alta produção de leite por vaca, resultado de intenso incremento nutricional, seleção genética e técnicas de manejo voltadas para a produção de leite. Tendo em vista a relação direta entre o aumento na produção de leite e a diminuição da fertilidade, têm-se buscado alternativas para incrementar os índices de fertilidade. Uma das alternativas é o desenvolvimento de protocolos de sincronização de ovulação para a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) com o uso de hormônios exógenos, já que os hormônios esteróides endógenos em vacas de alta produção são metabolizados em proporção elevada devido ao alto fluxo sanguíneo hepático. Assim, este estudo envolverá diversos experimentos com o propósito de, ao final, se desenvolver um protocolo de IATF que assegure elevadas taxas de sincronização de ovulação, assim como um ambiente hormonal adequado para otimizar a qualidade ovocitária e embrionária em vacas leiteiras de alta produção. No Experimento 1 (n = 48), será confirmada qual a melhor dose de benzoato de estradiol (BE), que concomitante com a inserção do dispositivo de Progesterona (P4), sincronizará com mais precisão a emergência de uma nova onda de crescimento folicular; no Experimento 2 (n = 80), será avaliado se o protocolo associando-se BE e P4 possui a mesma eficiência de sincronização em diferentes momentos da onda folicular, ou seja, na presença ou ausência de um folículo dominante; no Experimento 3 (n = 400), avaliar-se-á o efeito da suplementação de P4 após IATF na taxa de concepção de vacas em lactação; no Experimento 4 (n = 600), o efeito da suplementação de P4 previa ou simultaneamente à transferência de embriões na taxa de concepção será testado em vacas em lactação usadas como receptoras de embrião; no Experimento 5 (n = 900), serão comparados três grupos. G1: vacas submetidas à IA convencional após observação de estro, G2: vacas submetidas a IATF após sincronização com benzoato de estradiol (BE) e dispositivo intravaginal de P4, e G3: vacas submetidas à IATF após o mesmo protocolo do G2, mas com a aplicação de GnRH 3 ou 7 dias (baseado nos resultados do Experimento 2) antes do início do protocolo, proporcionando alta P4 pré-IA devido ao corpo lúteo formado após o GnRH. A perspectiva deste estudo é que, ao final, haja um incremento substancial no conhecimento dos fatores envolvidos com o sucesso ou insucesso dos protocolos para IATF, além de aumentar o conhecimento sobre a fisiologia reprodutiva de vacas leiteiras manejadas em sistemas intensivos no Brasil. Espera-se também que, com todas essas informações agregadas, possa-se identificar e sugerir as estratégias de manejo reprodutivo mais indicadas para distintas categorias de vacas em lactação ou manejadas sob diferentes condições.

As biotecnologias de reprodução têm contribuído enormemente com os programas de melhoramento animal e de conservação de raças naturalizadas em risco de extinção. De acordo com o Relatório Anual da IETS "International Embryo Transfer Society" 2008, o Brasil detém a maior produção de embriões bovinos produzidos in vivo e in vitro da América do Sul. Apesar do grande incremento conseguido com essas tecnologias, sua eficiência ainda é baixa. Na produção in vitro de embriões, a qualidade da nutrição e o estado corporal da doadora de ovócitos, a manipulação dos ovócitos e embriões e as condições ambientais in vitro, podem afetar a eficiência da técnica. Um evento genético/fisiológico vital e específico de gametas é uma extensa reprogramação epigenética pela qual passa essas células para estarem aptas à fecundação e formação de um embrião viável. O objetivo deste projeto é testar o efeito de dietas específicas sobre o padrão epigenético em ovócitos e embriões bovinos. Serão utilizados ovócitos e embriões produzidos de novilhas Nelores submetidas a diferentes dietas. Amostras de DNA e RNA serão extraídas para avaliações do padrão de metilação global do DNA, padrão de metilação em genes específicos, quantificação da expressão de genes envolvidos no processo de metilação do DNA e caracterização do padrão de inativação do cromossomo X in vivo sob diferentes dietas. Espera-se com isso, melhor entender o padrão de reprogramação epigenética que é um evento fisiológico importante que deve acontecer na gametogênese, e principalmente determinar qual o efeito da nutrição sobre estes eventos, em bovinos.

A criopreservação de sêmen é de fundamental importância para a expansão das técnicas reprodutivas como a inseminação artificial e a fecundação in vitro, entretanto é responsável pelo estresse oxidativo da célula espermática. Deste modo, esta deve possuir membrana plasmática com adequada fluidez que é garantida pelos ácidos graxos poliinsaturados e suporte de defesa antioxidante para incrementar a sobrevivência celular após a congelação. No intuito de tornar os espermatozóides mais resistentes à criopreservação, 40 touros das raças Canchim e Nelore serão suplementados com gordura protegida e/ou vitamina C e selênio durante 70 dias. Neste período, colheitas e congelação de sêmen serão realizadas com intervalo de 14 dias. No sêmen fresco, avaliações imediatas, como volume, vigor, aspecto, turbilhonamento, concentração e motilidades progressiva e total serão realizadas, além de outros exames complementares: aglutinação de cabeça em contraste de fase, integridade de membrana plasmática com iodeto de propídeo e diacetato 6-carboxifluoresceína, integridade de acrossoma (PNA e iodeto de propídeo), capacitação espermática com hidroclorido de clortetraciclina, integridade de cromatina e morfometria espermática com azul de toluidina. Além disso, sangue será colhido para posterior dosagem de testosterona, concentração de selênio e atividade da enzima glutationa peroxidase.

A utilização e o desenvolvimento de biotecnologias da reprodução são indispensáveis para o aumento da eficiência reprodutiva dos rebanhos. Neste sentido, o Brasil conta com o maior rebanho bovino comercial do mundo e é um dos países que mais geram produtos utilizando biotécnicas da reprodução, especialmente em zebuínos. A nutrição está intimamente relacionada com a reprodução e ainda há muito a se aprender sobre essa inter-relação, principalmente porque há muita controvérsia na literatura. Por exemplo, alguns estudos sugerem ser benéfico o uso do "flushing" nutricional na produção de embriões em bovinos, entretanto, a maioria dos trabalhos mostra resultados negativos. Dessa forma, existe a necessidade em se avançar estudos comparando a fisiologia reprodutiva e produção de embriões em vacas sob diferentes níveis nutricionais. Para o presente estudo serão utilizadas 32 vacas Nelores não lactantes recebendo uma das quatro dietas a seguir: Mantença (M); 0,7M - restrição; 1,5M - alta ingestão de matéria seca; ou alta ingestão de energia (E), porém, com a mesma ingestão de matéria seca do grupo M, utilizando o modelo crossover. Estes animais terão o ciclo estral sincronizado e observação de cio (24 horas ao dia) até confirmada a ovulação por ultrassonografia. Posteriormente, nos dias 7 e 10 do ciclo estral será avaliado o volume do corpo lúteo. Concentrações circulantes de hormônios esteróides (progesterona e estradiol) e de IGF-I e insulina também serão avaliados durante este período experimental. Em seguida, entre os dias 10 e 16 do ciclo estral, as vacas serão superovuladas, os embriões serão colhidos, avaliados, criopreservados e posteriormente transferidos a aproximadamente 400 receptoras sincronizadas para avaliação das taxas de concepção. Acredita-se que esse estudo deva contribuir significativamente com os avanços nesta área tão promissora e de fundamental importância no panorama da pecuária brasileira, facilitando, inclusive, o intercâmbio de material genético ze