Christie Ramos Andrade Leite Panissi.

O objetivo deste projeto é iniciar o treinamento de alunos de graduação, dos anos iniciais, para desenvolvimento de pesquisa científica na área da fisiologia, e da neurobiologia dos comportamentos defensivos e da analgesia.

Projeto de Pesquisa - Auxílio Individual Fapesp.

Diversas pesquisas ao longo da última década têm sugerido o envolvimento de fatores genéticos e ambientais na manifestação clínica das disfunções temporomandibulares dolorosas (DTM). Esta patologia caracteriza-se como condição multifatorial que afeta duas vezes mais mulheres do que homens, sugerindo o envolvimento dos estrogênios na suscetibilidade e fisiopatologia da DTM, mas os mecanismos pelos quais os estrogênios influenciam a dor da DTM ainda não estão esclarecidos. Como a percepção da dor crônica é um traço altamente variável, a epigenética pode fornecer promissora abordagem para compreensão sobre a manifestação desta síndrome dolorosa musculoesquelética, além de ampliar o olhar acerca de seus fatores predisponentes, desencadeantes e de piora, bem como demonstrar possíveis efeitos de intervenções de manejo cognitivo-comportamental, de natureza não farmacológica, como as Intervenções Baseadas em Mindfulness. Esta proposta tem como objetivo identificar posições CpG diferencialmente metiladas em uma amostra de mulheres com disfunção temporomandibular (DTM) dolorosa crônica; verificar a presença de polimorfismos do tipo SNP em genes específicos previamente relacionados com esta condição, incluindo os receptores para estrógenos; além de analisar diferentes fenótipos envolvidos com a manifestação clínica da DTM dolorosa (envolvimento cognitivo-comportamental-emocional) comparando-se os resultados antes e após intervenção por meio de um programa de mindfulness baseado na redução de estresse e ansiedade de 8 semanas. A amostra será composta por 46 mulheres com DTM dolorosa crônica e 23 mulheres controle, com idade entre 18 e 40 anos. As sessões de avaliação serão conduzidas durante a fase folicular do ciclo menstrual, entre os dias 4 e 10 após o início da menstruação em mulheres ciclando normalmente ou durante o período de tempo correspondente em mulheres que tomam contraceptivos orais. A confirmação do diagnóstico de DTM será com base nos critérios do Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders (RDC/TMD). Além da DTM, outras variáveis relacionadas ao fenótipo serão coletadas: dados demográficos, presença de comorbidades, áreas de dor em regiões corporais extra-trigeminais, percepção de hábitos parafuncionais, número de sítios orofaciais com presença de dor à palpação, padrão de sono, estresse, ansiedade, depressão, catastrofização da dor, hipervigilância, limiar de dor à pressão, presença de alodinia e hiperalgesia. Serão coletadas amostras de sangue das voluntárias, e então analisada a metilação do epigenoma-global do DNA, além da verificação dos seguintes SNPs em genes específicos: NR3C1 (rs2963155), HTR2A (rs9316233), CHRM2 (rs7800170), CAMK4 (rs3756612), IFRD1 (rs728273), GRK5 (rs12415832), SCN1A (rs6432860), ACE2 (rs1514280), PTGS1 (rs3842803), APP (rs466448) e MPDZ (rs10809907), ESR1 (rs2234693). Finalizadas as coletas basais, as participantes serão convidadas a participar de uma intervenção baseada em mindfulness, protocolo MBSR de 8 semanas, que será aplicada por instrutores capacitados. Ao final do programa, as coletas de sangue e avaliações clínicas serão repetidas a fim de que se possa analisar os efeitos da intervenção (parâmetros clínicos, genéticos e epigenéticos).

PERSPECTIVAS: Espera-se com este projeto poder contribuir com o conhecimento acerca dos eventos genéticos e epigenéticos na manifestação da DTM dolorosa e em seu manejo por intervenções baseadas em mindfulness. Para tanto serão investigados dados relacionados a fenótipos e polimorfismos tipos SNPs, previamente demonstrados pelo estudo OPPERA, por meio de colaboração estabelecida com a Universidade da Flórida, além da metilação global do DNA a fim de identificar posições CpG diferencialmente metiladas, em mulheres com DTM dolorosa crônica.

O gás monóxido de carbono tem sido considerado um importante neuromodulador da nocicepção, interagindo com o gás óxido nítrico e modulando receptores opióides em nível espinal e periférico. O gás CO é sintetizado pela ação da enzima heme oxigenasse e o NO pela oxido nítrico sintase. Ambos exercem suas funções pelo aumento de GMPc intracelular e ativação de proteína cinase dependente de GMPc. Diversos trabalhos presentes na literatura têm se voltado para o estudo do aspecto sensorial da dor, carecendo de estudos que analisem seu aspecto motivacional-afetivo. Para isso tem sido proposto que testes operantes poderiam avaliar a dor em nível mais complexo. Até então o efeito dos gases CO e NO têm sido somente testados em modelos reflexo-nociceptivos. Entretanto, ainda não foi verificado o efeito da interação desses gases sobre o controle da aversividade ao estímulo doloroso. O hipocampo se apresenta como área integrativa em relação à consolidação de memórias aversivas relacionadas a experiências dolorosas. Estudos anteriores mostraram que a região CA1 do hipocampo expressa amplamente receptores opióides, as enzimas HO e NOS, assim como PKG. Sendo assim, o objetivo deste presente trabalho será o de avaliar o papel da interação CO-NO sobre receptores MOR e DOR do hipocampo na modulação do aspecto emocional-motivacional da dor em testes operantes de condicionamento aversivo e paradigma de fuga-esquiva. Os resultados obtidos poderão ajudar a compreender os mecanismos neurais da modulação da dor, elucidando o papel dos gases neuromoduladores neste processo. Compreender esses mecanismos pode se tornar um importante recurso no processo terapêutico de pacientes com dores crônicas ou agudas.

A dor persistente e crônica tem sido um dos grandes desafios da comunidade científica pois em geral, estas condições são associadas a desordens emocionais e cognitivas. Vários circuitos de neurotransmissores e substratos neurais participam desta condição inadaptada do organismo. Neste projeto, investigamos o sistema canabinóide, em particular, será avaliado se o tratamento sistêmico com canabidiol (CBD) modula a alodinia e hiperalgesia em modelo de dor neuropática. Este estudo inclui modelo animal padrão com constrição crônica do nervo ciático (CCI), a utilização de modelo animal distinto que apresenta alta ou baixa ansiedade (linhagem Wistar Carioca). Pretendemos neste conjunto de protocolos investigar os efeitos do tratamento com CBD em modelo de dor neuropática, avaliando a sensibilidade dolorosa de forma quantitativa e qualitativa, bem como seus efeitos na modulação do comportamento emocional.

Projeto de pesquisa a ser desenvolvido pela aluna de IC Renata Consiglieri.

Carbon monoxide (CO) gas is a neurotransmitter, which has the similar action of nitric
oxide (NO), acting as a pathway for intracellular signaling molecule production of the molecule guanosine 3', 5' monophosphate cyclic (cGMP) in biological systems. Three enzymes heme oxygenase (HO) have been identified, the HO-1, HO-2 and HO-3. Further, it is possible that CO can act preferentially altering cGMP levels in determined areas of the central nervous system where the enzyme nitric oxide synthase (NOS) is not expressed, or there is in small quantity. In particular, evidence has shown that the locus coeruleus (LC) exhibits high expression of HO-2 enzyme, whereas the expression of NOS is reduced. Recent data from our laboratory showed that activation of the HO-CO-cGMP pathway of LC promotes anxiolytic effect evaluated in the elevated plus maze test (EPM) and the light-dark box test (LDB). Furthermore, the administration of the HO substrate into LC increases the index of analgesia assessed in the tail flick test, but increases nociceptive responses in the formalin test evaluated, suggesting thermal hypernociceptive inflammatory and
antinociceptive effects, respectively. Thus, these results suggest that although nociceptive and defensive neural systems sharing similar substrate, it is possible that modulatory mechanisms are distinct, including differences in the modulation of inflammatory and thermal nociception. Furthermore, findings from the literature showed that there is interaction between the CO/NO in the modulation of neuropathic pain (PloS ONE, 7:e43693, 2012). The aim of this study is to evaluate whether there is interaction between carbon monoxide and nitric oxide in the emotional behavior and nociception modulation. In particular, this study is to evaluate whether systemic administration (i.p.)-releasing molecule CO (CORM-2) alters the rates of emotional behavior, evaluated the test of elevated plus maze (EPM) and light-dark box test (LDB) in wild-type mice and knock-out mice for the enzyme nitric oxide synthase (NOS); whether i.p. administration of inducing HO-1 (CoPP) alters the emotional behavior, evaluated by EMP and LDB in wild-type mice and knock-out mice for the enzyme nitric oxide synthase (NOS); whether treatment with CORM-2 or CoPP modifies expression of HO or NOS enzymes, particularly in cells located in the locus coeruleus, of wild mice and knock-out NOS. And finally, evaluate whether the persistent peripheral inflammation induced CFA subplantar, is able to alter the expression of HO-1, HO-2, NOS1, and NOS2 isoenzymes in the locus coeruleus from wild-type (WT), KO-NOS1 and KO-NOS2 animals.

Orofacial pain has a high prevalence associated with debilitating disorders in modern society involving the neck, face, head and all intra-oral structures. In addition, temporomandibular joint (TMJ) -associated inflammation is considered to be one of the reasons for the pain reported by patients with temporomandibular disorders (TMD). To study orofacial pain mechanisms, although many animal models were development, pain assessment involves the use of tests originally developed for other regions of the body, therefore adapted tests to orofacial area. To overcome limitations and expand the knowledge in orofacial pain, the research group led by Dr. Robert M. Caudle, at the University of Florida validated and characterized an operant assessment paradigm in rats with both hot and cold stimuli as well mechanical stimuli. Nevertheless, the persistent inflammation of TMJ has not been evaluated by this operant orofacial pain assessment device (OPAD). It is noteworthy that persistent inflammation in the TMJ induced by Complete Freund Adjuvant (CFA) correlates anxiety like behavior and pain responses. Moreover, the OPAD is the first assay that correlates orofacial pain with psychological processes. The general aim of this study is to characterize the thermal orofacial sensitivity during development of TMJ using the operant behavior. In additional, we want evaluate the role of transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) on nociception response of rats with TMJ persistent inflammation. Finally, we will evaluate the response of rats with TMJ inflammation with and without analgesic treatment. The experiments will be performed with hairless Sprague-Dawley rats (250-300g) with or not TMJ inflammation induced by CFA. The orofacial pain will be evaluated on the OPAD in the presence of a range of cold, neutral and hot stimuli. Resiniferatoxin (RTX) will be administered into TMJs prior CFA to lesion TRPV1-expressing neurons. And rats will be treated or not with morphine or pregabalin to evaluate the nociceptive behavior on OPAD in rats with TMJ inflammation induced by CFA.

Este projeto de pesquisa integra o Núcleo de Apoio a Pesquisa-USP, Neurobiologia das Emoções - NUPNE, contemplado no edital da Pró-reitoria de Pesquisa da USP/2011. A resposta de imobilidade tônica é um comportamento de medo inato desencadeada em situações de confronto inescapável entre presa-predador. Esta resposta caracteriza-se por perda do reflexo de endireitamento e relativa falta de responsividade aos estímulos ambientais. Estudos consistentes tem demonstrado o envolvimento de distintas áreas encefálicas na modulação desta resposta, entre elas a substância cinzenta periaquedutal, o hipotálamo e a amígdala. Considerando a amígdala em particular, nossos estudos mostraram o envolvimento de diferentes circuitos de neurotransmissores (Brain Research Bulletin, 58: 13 - 19, 2002; Brain Research Bulletin, 60: 167 - 178, 2003; Brain Research Bulletin, 69: 356 - 364, 2006; Brain Research Bulletin, 79: 358 - 364, 2009) dentre eles os sistemas colinérgico, opióidergico, serotoninérgico e GABAérgico, bem como interações entre estes sistemas. Recentemente, temos demonstrado a participação dos receptores para o fator liberador de corticotropina (CRF), dos núcleos basolateral (BLA) ou central (CEA) da amígdala na modulação do medo inato (Behavioural Brain Research, 225: 23-30, 2011, Advances in Bioscience and Biotechnology, 4: 20-27, 2013). Além dos núcleos central e basolateral , os núcleos medial/basomedial da amígdala (Advances in Zoology Research, vol. 1. Jenkins O.P. (ed.), Nova Science Publishers, New York; 2012, pp 172-188) estão intimamente relacionados com a modulação comportamental do medo inato e condicionado, possivelmente devido a suas conexões recíprocas com núcleos hipotalâmicos responsáveis pelo controle de comportamentos de defesa. Desta forma, o objetivo deste projeto será investigar o envolvimento dos receptores específicos para o fator liberador de corticotropina, CRF1 e CRF2 dos núcleos basolateral e central da amígdala na modulação da resposta de IT em cobaias. Em adição, uma segunda etapa deste projeto, irá avaliar a participação do sistema GABAérgico (receptores GABAA e GABAB) do núcleo medial/basomedial da amígdala na modulação da resposta de IT em cobaias. Em adição serão avaliadas as conexões anatômicas do núcleo basomedial (BMA) da amígdala na tentativa de fundamentar o mecanismos de participação deste núcleo na modulação da resposta de imobilidade tônica. Para excluir a possibilidade de que o tratamento realizado promova alteração do comportamento motor, e altere a resposta de IT de forma inespecífica, será realizado o teste do campo aberto, com todas as drogas utilizadas no estudo.

A disfunção temporomandibular (DTM) tem alta prevalência em nossa sociedade, sendo caracterizada por uma condição severa de dor dos músculos da mastigação e ou articulação temporomandibular. Apesar da indicação de múltiplos fatores iniciadores contribuindo para a DTM, dentre eles o estresse emocional, ainda há controvérsia quanto a sua etiologia e, é pouco compreendida a sua fisiopatologia. Usando o rato como modelo experimental animal, este estudo tem o propósito de investigar o efeito do estresse crônico variado associado à exodontia unilateral, e a administração ou não do diazepam sobre o músculo pterigóideo medial, encéfalo e na concentração plasmática de cortisol. Nossa hipótese é que o estresse crônico variado associado à maloclusão induzirá modificações plásticas, provocando modificações na morfologia das fibras, na densidade dos capilares, na capacidade contrátil das fibras, no metabolismo oxidativo, no processo inflamatório muscular, na concentração plasmática de cortisol e na ativação neuronal de regiões específicas do sistema nervoso central. O pré-tratamento dos animais com diazepan, um ansiolítico clássico, neutralizará ou diminuirá as respostas celulares e neuronais. Assim, o objetivo deste trabalho será avaliar o músculo pterigóideo medial, bilateralmente, o encéfalo e o sangue desses animais. Serão utilizados 64 ratos machos Wistar, adultos jovens, pesando em média 200g, divididos aleatoriamente em dois grandes grupos: Grupos Maloclusão (GM): ratos expostos a exodontia unilateral esquerda (n=32); e Grupo Sem Maloclusão (GS): ratos sem exodontia (n=32). Em cada grupo haverá os seguintes subgrupos (n=8) em cada: I - sem estresse; II: estresse crônico variado; III: sem estresse e tratados com diazepam; IV: estresse crônico variado e tratados com diazepam. Os animais do grupo maloclusão (GM) serão submetidos à exodontia unilateral dos molares superiores esquerdo, sob a anestesia intraperitoneal, com Xilazina 4% (10mg/kg) e Cetamina 10% (80mg/kg), no dia zero. Em ambos os grupos: GM e GS, os ratos dos subgrupos II e IV serão submetidos a protocolos diferentes de estresse, a partir do 14º dia após a exodontia. Os protocolos serão diferentes a cada dia por cinco dias consecutivos, os quais serão repetidos a partir do 6º dia por mais cinco dias. Os ratos serão submetidos à eutanásia no 24º dia após início do experimento, para obtenção do músculo pterigóideo medial bilateral, e posterior análises morfológicas, imunoistoquímicas, histoquímicas e ultraestruturais; obtenção do encéfalo para análise do c-Fos e/ ou Fos-B e; coleta do sangue para análise da concentração plasmática de cortisol.

Evidências clínicas sugerem que o estresse emocional pode ser um fator de risco para a doença periodontal, bem como para outras funções desempenhadas pelo sistema estomatognático. Entretanto, há estudos sobre possíveis alterações nos músculos da mastigação em indivíduos submetidos à situações de estresse. Assim, o objetivo deste projeto será avaliar a hipótese de que os diferentes tipos de estresse agudo e crônico (repetido e variado) induzem alterações morfofisiológicas no músculo pterigóideo lateral esquerdo em animais submetidos ou não à exodontia unilateral. Em uma segunda etapa, será avaliada se o procedimento de exodontia unilateral promove alteração da sensibilidade nociceptiva orofacial. Esta musculatura foi escolhida, pois está intimamente envolvida com a execução dos movimentos de abertura e fechamento bucal, necessários para desempenho adequado do ciclo mastigatório. Serão utilizados 60 ratos machos Wistar (250g), divididos aleatoriamente em 2 grandes protocolos: Maloclusão (GM): expostos a exodontia unilateral (n = 30); e Sem Maloclusão (GSM): sem exodontia unilateral (n = 30). Cada protocolo será composto por 6 subgrupos (n = 5 ratos cada): I: Estresse agudo; II: Estresse crônico repetido; III: Estresse crônico variado; IV: Avaliação nociceptiva orofacial; V: Avaliação nociceptiva orofacial (controle formalina); e VI: sem estresse (Controle estresses). O GM será submetido à exodontia unilateral dos molares superiores esquerdo, sob anestesia com associação de Xilazina 4% (10mg/kg) e Cetamina 10% (80mg/kg), i.p. Em ambos os grupos: GM e GSM, os ratos dos subgrupos II e III serão submetidos aos protocolos de estresse (por 10 dias) a partir do 14º dia após a exodontia; e no 25º, os animais do subgrupo I, serão submetidos ao estresse agudo, e dos subgrupos IV e V serão submetidos ao protocolo de Formalina orofacial. Com o término dos experimentos, os animais serão submetidos à eutanásia para obtenção dos músculos para análise por meio de técnicas: morfológic

Este projeto de pesquisa integra o Núcleo de Apoio a Pesquisa-USP, Neurobiologia das Emoções - NUPNE, contemplado no edital da Pró-reitoria de Pesquisa da USP/2011.

A sensibilidade dolorosa, ou simplesmente, a dor pode ser definida de acordo com a IASP (International Association of the Study of Pain) como uma ?experiência sensorial e emocional desagradável, associada a uma lesão tecidual atual, ou potencial, ou descrita em termos de tal lesão?.
Especificamente, a dor da região orofacial é um problema muito comum na sociedade moderna (Crombie e cols., 1999) e pode ser considerada uma das mais importantes razões pelas quais a população procura tratamento na clínica odontológica. Entretanto, grande parte dos aspectos normais e patofisiológicos das vias neurais trigeminais ainda necessitam ser esclarecidos (Lobbezoo e cols., 2002).
Um teste muito utilizado para o estudo da dor de origem orofacial é o teste da formalina orofacial. Neste teste é realizada uma injeção subcutânea de formalina (em diluições que podem variar de 2,5% a 6%) na região orofacial de ratos, entre o nariz e o lábio superior, sendo observado como resposta nociceptiva o comportamento de coçar a área atingida com a pata anterior ipsilateral.
Em tempo, trabalho de Hermanson & Blonqvist (1997) mostra que a expressão da proteína FOS em subnúcleos da área parabraquial de ratos apresenta padrão diferente, após a administração de formalina 1,85% no lábio superior ou na pata.
Com base na literatura apresentada, o interesse deste projeto será comparar a expressão da proteína FOS em áreas amigdalóides após a estimulação nociceptiva orofacial ou da pata posterior de ratos anestesiados. Desta forma, acreditamos que podemos avaliar de uma maneira mais precisa o envolvimento das áreas amigdalóides na dor de origem orofacial comparada com a informação nociceptiva desencadeada outras áreas corporais.

A imobilidade tônica (IT) é uma resposta comportamental de defesa inata, caracterizada por profunda inibição motora emitida em situações de intenso medo, tendo como objetivo proteger o animal durante o ataque do predador. Na última década, esforços têm sido feitos para avaliar os substratos neurais acionados durante a expressão de respostas defensivas, utilizando para isto a imunorreatividade da proteína FOS (Campeau e cols., 1997; Canteras & Goto, 1999). Em particular, modelos experimentais que utilizam confronto entre presa-predador como estímulo, Canteras & Goto (1999) mostraram que ocorre imunorreatividade à proteína FOS nas regiões lateral e ventrolateral da substância cinzenta periaquedutal (SCP) de ratos expostos a um gato. Comoli e cols. (2003) mostraram que em ratos, durante a emissão de comportamento predatório, frente a baratas, ocorre indução à proteína FOS, também na SCP, porém, nos dois terços rostrais da SCP lateral. Juntos estes trabalham corroboram a proposta de que a emissão de diferentes estratégias comportamentais, pode acionar mecanismos distintos.
Desta forma, este projeto tem como objetivo estudar a imunorreatividade da proteína FOS em áreas do complexo amigdalóide, do hipotálamo e da substância cinzenta periaquedutal após a emissão do comportamento de imobilidade tônica em cobaias. Após esta análise, acreditamos que poderemos conhecer melhor o substrato neural mobilizado na expressão da resposta de imobilidade tônica. Atualmente estamos dando continuidade a este projeto realizando avaliações da resposta de imobilidade tônica em cobaias após a realização de lesões químicas em estruturas do sistema cerebral aversivo que foram identificadas pela marcação da proteína FOS.

Projeto realizado com a finalidade de solicitar equipamentos de grande porte, com características de multi-usuários.