Davi José de Almeida Moraes.

O automatismo respiratório e o controle químico da respiração são processos inseparáveis. O grupamento respiratório parafacial (pFV) constitui um grupo de neurônios excitatórios que expressam o fator de transcrição Phox2b e apresenta um papel relevante no processo da quimiorrecepção central (neurônios do núcleo retrotrapezóide- RTN) e no automatismo respiratório. O pFV é também regulado por informações aferentes dos quimiorreceptores periféricos e por diversas informações sinápticas neuromodulatórias de outros núcleos encefálicos como o hipotálamo. Assim, os neurônios do pFV possuem um envolvimento na modulação do ritmo e padrão respiratório (inspiração e expiração), controlando a atividade dos neurônios localizados na coluna respiratória do bulbo ventrolateral. O nosso grupo de pesquisa tem investigado como os neurônios do pFV alteram sua atividade mediante as diversas interações neuromodulatórias recebidas e, assim, influenciar no controle respiratório (Moreira et al., 2021). A sinalização ocitocinérgica apresenta uma contribuição importante na manutenção de funções fisiológicas, incluindo a respiração. No entanto, o envolvimento da sinalização ocitocinérgica na modulação da atividade dos neurônios do pFV impactando o controle da respiração ainda não foi investigada e consiste o principal objetivo do presente projeto. Assim, no presente projeto, estamos propondo investigar como que a sinalização ocitocinérgica é capaz de modular a atividade dos neurônios do pFV e contribuir no controle respiratório. Para isso, estamos propondo o uso e a implementação de novas técnicas experimentais que nos permitirão entender desde os componentes celulares até a fisiologia integrativa da sinalização ocitocinérgica na região respiratória parafacial Basicamente, iremos utilizar uma tecnologia que será baseada, principalmente, no uso de vírus neurotrópicos, animais geneticamente modificados e registros da atividade elétrica de populações neuronais. Ao combinar essas metodologias a um repertório de métodos neuroanatômicos e neurofisiológicos, propomos os seguintes objetivos:Estudar a origem da projeção ocitocinérgica para a região respiratória parafacial.Investigar se existe diferença na sinalização ocitocinérgica para região respiratória parafacial relativo ao dimorfismo sexual.Caracterizar a ação sináptica da ocitocina em células neuronais da região respiratória parafacial.Caracterizar a ação sináptica da ocitocina em células não neuronais (células gliais) da região respiratória parafacial.Estudar o possível mecanismo pelo qual a sinalização ocitocinérgica, atuando na região respiratória parafacial, poderia melhorar condições clínicas de depressão respiratória.Investigar a participação das vias ocitocinérgicas para a região respiratória parafacial no controle do ciclo sono-vigília.

Sob condições de repouso, e do ponto de vista de atividade motora no tórax e abdômen, a expiração é um processo passivo, que se torna ativa em situações de alta demanda ventilatória, como na hipercapnia/acidose. Nestas situações é observada atividade motora fásica de músculos da região abdominal, promovendo aumento do volume corrente e da ventilação pulmonar, favorecendo a saída de ar dos pulmões. Estudos mostraram que a região parafacial lateral (pFL) é determinante para gerar a atividade motora expiratória induzida pela hipercapnia/acidose. A região pFL contém populações heterogêneas de neurônios e interneurônios (com projeções locais) glutamatérgicos, GABAérgicos e glicinérgicos. Há evidências da presença de uma subpopulação de neurônios glutamatérgicos que são silentes em condições de repouso devido a inibição pós-sináptica. No entanto, estes neurônios se tornam ativos no final da expiração, simultaneamente com a expiração ativa, em resposta a hipercapnia/acidose. Estas evidências indicam a presença de uma rede local complexa, a qual está envolvida na geração e modulação da expiração ativa pela região pFL. No entanto, a contribuição funcional para a geração da expiração ativa, bem como as características eletrofisiológicas e a conectividade dos neurônios e interneurônios glutamatérgicos da região pFL ainda não foram devidamente esclarecidas. Neste contexto, as hipóteses do presente projeto são as seguintes: i) a ativação dos neurônios glutamatérgicos da região pFL evoca a expiração ativa e aumenta a ventilação pulmonar em condições de repouso, e; ii) a inibição dos neurônios glutamatérgicos da região pFL elimina a expiração ativa e reduz a ventilação pulmonar em condições de hipercapnia/acidose. Portanto, avaliaremos a contribuição dos neurônios e interneurônios glutamatérgicos da região pFL para a geração das atividades motoras inspiratória e expiratória e controle da ventilação pulmonar tanto em condições de repouso como durante a hipercapnia/acidose. Também avaliaremos as suas projeções, características eletrofisiológicas e sensibilidade ao CO2/H+. Para que estes estudos sejam realizados, utilizaremos a tecnologia de camundongos geneticamente modificados de forma sítio-específica, os quais expressam a enzima cre-recombinase em neurônios glutamatérgicos, associada às microinjeções de vírus adenoassociado para expressão dos Design Receptors Exclusively Activated by Designer Drugs (DREADDs), os quais permitirão a ativação ou inibição dos neurônios e interneurônios glutamatérgicos da região pFL. As atividades motoras inspiratória e expiratória e a ventilação pulmonar serão avaliadas em camundongos não-anestesiados, e as características elétricas dos neurônios e interneurônios glutamatérgicos da região pFL serão avaliadas por meio da técnica de whole cell patch clamp. O conjunto dos resultados a serem obtidos serão determinantes para o melhor entendimento dos mecanismos celulares por meio dos quais os neurônios glutamatérgicos da região pFL contribuem para a geração da expiração ativa e consequentemente para o seu impacto na ventilação pulmonar.

Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores - Fase 2
A insuficiência cardíaca é um problema de saúde pública e uma das principais causas de morte em todo o mundo. Apesar dos avanços atuais, o prognóstico é ruim e ainda não há cura para a insuficiência cardíaca. A insuficiência cardíaca é caracterizada por falta de ar (irregularidades respiratórias), broncoconstrição, edema nas pernas, perda progressiva do débito cardíaco, hipertrofia ventricular esquerda, apneia do sono e aumento da atividade simpática. Esta proposta visa determinar uma estratégia de tratamento para reduzir a hiperatividade simpática, a irregularidades respiratórias e a broncoconstrição na insuficiência cardíaca. Uma pista para a causa dessas alterações respiratórias e cardiovasculares surge da forte correlação entre a sensibilidade do quimiorreceptor periférico e a sobrevivência pós-infarto do miocárdio. De particular interesse é a sinalização purinérgica (ATP e receptores P2X3), que desempenha um papel essencial tanto na sensibilização (aumento do tônus) quanto na hiperreflexia de neurônios aferentes sensoriais periféricos em várias condições patológicas. A ativação do corpúsculo carotídeo produz a liberação de ATP das células do tipo I (glômus) e do tipo II (gliais) e estimula os receptores purinérgicos nas terminações aferentes do gânglio petroso, que formam terminações nessas células em forma de cesta. No presente projeto de pesquisa, iremos avaliar se a sinalização purinérgica e as células gliais medeiam o aumento do tônus aferente e a sensibilização do corpúsculo carotídeo na insuficiência cardíaca e explorar o benefício terapêutico potencial de abolir a sinalização purinérgica aberrante em um modelo animal de insuficiência cardíaca. As seguintes hipóteses serão testadas: I) a excitabilidade intrínseca e a expressão dos receptores P2X3 estão aumentadas nos neurônios quimiorreceptivos do gânglio petroso de ratos após o infarto do miocárdio; II) o aumento da expressão dos receptores P2X3 induz a sensibilização das respostas evocadas pela ativação dos quimiorreceptores periféricos (simpática, respiratória e dos neurônios quimiorreceptivos) após o infarto do miocárdio; III) a biodisponibilidade do ATP está aumentada no corpúsculo carotídeo após o infarto do miocárdio e; IV) após o infarto do miocárdio, a manipulação genética crônica da sinalização purinérgica nas células glômus e gliais do corpúsculo carotídeo irá diminuir a atividade simpática, melhorar a função cardíaca, reduzir as irregularidades respiratórias, broncoconstrição, massa ventricular esquerda e fibrose miocárdica. Propomos que a sinalização aberrante pelo ATP desencadeia aumento do tônus do corpúsculo carotídeo que via receptores P2X3 desempenha um papel crucial na progressão da insuficiência cardíaca e oferece um ângulo terapêutico para reverter vários componentes (hiperatividade simpática, irregularidades respiratórias e broncoconstrição) de sua patogênese.

A atividade parassimpática para as vias aéreas respiratórias gera broncoconstrição e secreção de muco. Sabe-se que os motoneurônios parassimpáticos, que inervam as vias aéreas respiratórias, se encontram no bulbo, especificamente no Núcleo Motor Dorsal do Vago (DMV) e Núcleo Ambíguo (NA). Entretanto, não foi estabelecida a contribuição específica dos motoneurônios parassimpáticos de ambos os núcleos no controle da broncoconstrição e secreção de muco em condições fisiológicas, muito menos em patológicas. Sabe-se que em doenças inflamatórias pulmonares como a asma, as respostas parassimpáticas para as vias aéreas respiratórias estão desreguladas, promovendo exacerbação da broncoconstrição e secreção de muco. Neste sentido, achados recentes demonstraram que a ativação dos quimiorreceptores periféricos (corpúsculos carotídeos - CBs) por fatores inflamatórios, presentes em elevados níveis em doenças inflamatórias pulmonares, representa um mecanismo neuronal importante para gerar a hiperresponsividade brônquica em modelos experimentais de asma e em humanos asmáticos. Diante disso, no presente Projeto de Pesquisa levantamos as seguintes hipóteses: i) os motoneurônios parassimpáticos respiratórios do DMV e NA controlam diferentemente a broncoconstrição e secreção de muco das vias aéreas respiratórias de camundongos controle e asmáticos, e; ii) o modelo experimental de asma afeta diferentemente as propriedades eletrofisiológicas dos motoneurônios parassimpáticos respiratórios do DMV e NA de camundongos por meio da ativação dos CBs. Para testarmos estas hipóteses, vamos inicialmente excitar e inibir seletivamente os motoneurônios parassimpáticos respiratórios do DMV e NA de camundongos controle e asmáticos, por meio da técnica de optogenética e transfecção viral, para avaliar a contribuição especifica dos mesmos no controle da broncoconstrição e secreção de muco. Além disso, utilizaremos a técnica de whole cell patch clamp em fatias do tronco encefálico de camundongos controle e asmáticos, com (grupo SHAM) e sem os CBs (grupo CBX), para avaliarmos as propriedades eletrofisiológicas dos motoneurônios parassimpáticos do DMV e NA que se projetam para as vias aéreas respiratórias. A elucidação desses fenômenos fisiológicos e patológicos pode auxiliar no melhor entendimento dos processos eletrofisiológicos dos motoneurônios do DMV e NA envolvidos no controle da broncoconstrição e secreção de muco, bem como para possíveis tratamentos e terapias voltadas a asma.

A inervação eferente parassimpática para o sistema respiratório tem como função controlar predominantemente a contração da musculatura lisa e secreção mucosa das vias aéreas inferiores. Sabe-se que os corpos celulares dos motoneurônios pré-ganglionares parassimpáticos que se projetam para o sistema respiratório se encontram no bulbo, especificamente no Núcleo Ambíguo (NA) e no Núcleo Motor Dorsal do Vago (DMV). A atividade parassimpática para o sistema respiratório também é modulada por neurônios sensoriais presentes em toda a via aérea respiratória e tais aferências são os principais meios de transmissão de informações relativas às alterações das condições físicas e químicas das vias respiratórias e dos pulmões para o sistema nervoso central. No entanto, nossa compreensão permanece vaga e carente de clareza de como as aferências vagais são processadas e integradas no tronco encefálico, levando a alterações respiratórias (broncoespasmo e secreções da mucosa), desejo de tosse e dispneia e quais são os mecanismos celulares e neurotransmissores pelos quais os nervos aferentes vagais regulam a atividade dos motoneurônios geradores da atividade parassimpática para os brônquios localizados no NA e no DMV. O estudo destes mecanismos se torna importante considerando que os sintomas das doenças respiratórias mais comuns (infecções virais do trato respiratório, rinite, bronquite, asma, DPOC, tosse crônica) são consequência de alterações no sistema nervoso. Sendo assim, para a melhor compreensão dos mecanismos centrais celulares envolvidos nestas condições patológicas, é necessário primeiramente entender como os neurônios no tronco cerebral participam no processamento central das aferências sensoriais vagais e no controle das respostas motoras vagais broncoconstritoras. Para isto, utilizaremos a técnica de whole cell patch clamp, marcação retrógrada e a manipulação genética (optogenética) em fatias do tronco cerebral e em preparações in situ de ratos para avaliar: I) as características eletrofisiológicas dos motoneurônios brônquicos parassimpáticos do DMV, com ênfase no controle do potencial de repouso e na excitabilidade celular; II) como os motoneurônios brônquicos parassimpáticos do DMV processam as informações sinápticas espontâneas e evocadas pela estimulação das aferências vagais e quais os neurotransmissores envolvidos, e; III) qual o papel dos motoneurônios brônquicos do DMV no controle da resistência das vias aéreas inferiores. A elucidação desses fenômenos eletrofisiológicos pode auxiliar no melhor entendimento dos mecanismos celulares envolvidos na geração central da atividade parassimpática para os brônquicos em condições fisiológicas e patológicas, bem como no desenvolvimento de possíveis terapias voltadas para o tratamento de patologias associadas às disfunções no controle aferente sensorial e eferente vagal das vias áreas inferiores respiratórias.

O foco principal desse Projeto Temático é o estudo da modulação astrocítica sobre a transmissão sináptica em neurônios de áreas do tronco encefálico envolvidas com a geração e controle das funções autonômicas e respiratórias em situações fisiológicas e frente aos desafios hipóxicos. O desenvolvimento desse Projeto se fundamenta nos nossos estudos anteriores relacionados ao tema. Avaliaremos a participação dos astrócitos e dos seus gliotransmissores na modulação da transmissão sináptica das redes neuronais do núcleo do trato solitário (NTS) e nos grupamentos neurais e de regiões ventrais do tronco encefálico [rostral ventrolateral medula (RVLM), Complexos Bötzinger e pré-Bötzinger], as quais estão envolvidas com a geração e modulação da atividade simpática e a geração e modulação do ritmo e do padrão respiratório. Tendo em vista as dificuldades metodológicas para se estudar a interação entre os componentes das sinapses tripartites, nos diferentes subprojetos adotaremos como estratégia experimental a inibição ou a ativação de astrócitos em situações de hipóxia, com a finalidade de revelar a possível modulação dos astrócitos sobre a transmissão sináptica das vias neurais envolvidas com o controle cardiovascular e respiratório. Faremos uso da eletrofisiologia simultaneamente à análise funcional de imagens em tempo real e os protocolos experimentais serão realizados em ratos e camundongos. A utilização de técnicas e procedimentos atuais como camundongos geneticamente modificados, transfecção viral combinada com a farmacogenética e optogenética permitirá estudos sobre a participação de diferentes mecanismos celulares e moleculares na comunicação entre astrócitos e neurônios. O conhecimento fundamental a ser obtido sobre a modulação astrocítica dos neurônios eu constituem as vias neurais envolvidas com o controle cardiovascular e respiratório em situações de desafios hipóxicos será relevante, especialmente para o entendimento dos mecanismos envolvidos nas alterações dessas funções fisiológicas que ocorrem em situações fisiopatológicas como a apnéia obstrutiva do sono, insuficiência cardíaca, acidente vascular cerebral e doenças crônicas pulmonares.

Em mamíferos, a atividade rítmica inspiratória (ritmo respiratório) é gerada por neurônios glutamatérgicos, GABAérgicos e glicinérgicos, compropriedades intrínsecas de marca-passo em burst, localizados no complexo pré-Bötzinger (pre-BötC). Estudos recentes demonstram que a corrente catiônica ativada por Ca2+e a corrente persistente d eNa+ contribuem de forma substancial para a geração dos bursts despolarizantes de marca-passo nos neurônios inspiratórios do pre-BötC. Além disso, a manipulação da [Ca2+] extracelular interfere significativamente na duração dos bursts despolarizantes nestes neurônios inspiratórios. Neste sentido, a hipótese do presente Projeto de Pesquisa é que correntes de saída mediadas pelos canais para K+modulados por Ca2+ (KCa) contribuem para o término dos burts despolarizantes das atividades de marca-passo dos diferentes neurônios inspiratórios do pre-BötC de camundongos, e consequentemente, para a geração central do ritmo respiratório.Para testar esta hipótese, utilizaremos preparações de fatias rítmicas do pre-BötC in vitro de camundongos neonatos, registros extracelulares do ritmo inspiratório e intracelulares (whole cell patch clamp) dos neurônios inspiratórios de marca-passo desta região. Avaliaremos as correntes de K+mediadas pelos canais KCa, bem como a identidade molecular das diferentes subunidades destes canais e o fenótipo dos diferentes neurônios inspiratórios de marca-passo por meio da técnica de RT-qPCR de uma única célula. Avaliaremos também os efeitos do bloqueio farmacológico dos canais KCa na duração dos bursts despolarizantes dos diferentes neurônios inspiratórios de marca-passo do pre-BötC de camundongos. Os resultados a serem obtidos no presente Projeto de Pesquisa revelarão quais as correntes mediadas pelos canais KCa, e a identidade molecular destes canais, estão presentes e funcionalmente ativas nos diferentes neurônios inspiratórios de marca-passo do pre-BötC de camundongos. Estabeleceremos também se esses canais estão fundamentalmente envolvidos na geração do ritmo respiratório e se os mesmos contribuem criticamente para a formação de padrões motores respiratórios.

Os mecanismos neurais envolvidos na geração e modulação das atividades simpática e respiratória são determinantes para o controle fisiológico dos sistemas cardiovascular e respiratório. Alterações nesses complexos mecanismos neurais podem trazer sérias repercussões para o funcionamento ideal desses sistemas, podendo resultar em situações fisiopatológicas como, por exemplos, a hipertensão arterial e a apnéia obstrutiva do sono. Tendo em vista que os mecanismos neurais geradores tanto da atividade simpática quanto do ritmo e do padrão respiratório estão localizados em áreas adjacentes do tronco cerebral, e que há evidências experimentais do acoplamento entre as atividades respiratória e simpática, o presente Projeto Temático tem como objetivo principal estudar os mecanismos neurais envolvidos no acoplamento simpático e respiratório, e para isso serão utilizados diferentes métodos e abordagens experimentais. Com a finalidade de provocar a ativação das vias neurais do quimiorreflexo e consequentemente alterações no acoplamento simpático-respiratório, serão utilizados diferentes modelos de hipóxia (intermitente e mantida). As abordagens experimentais da complexa rede neuronal envolvida na geração e controle das atividades simpática e respiratória serão feitas por meio de técnicas eletrofisiológicas e celulares, as quais explorarão desde os animais inteiros e com livre movimentação até as correntes iônicas dos diferentes grupamentos neuronais envolvidos nesse processamento, e consequentemente os mecanismos neurais envolvidos na gênese das disfunções cardiovasculares e respiratórias. Com essa abordagem integrada e complexa do animal inteiro ao neurônio e as suas propriedades intrínsecas, os resultados a serem obtidos durante o desenvolvimento desse projeto trarão contribuições importantes para o melhor entendimento dos mecanismos neurais envolvidos em diferentes situações fisiopatólogicas, com especial destaque para a hipertensão arterial.

O ritmo respiratório (oscilações rítmicas inspiratórias) e o padrão respiratório de três fases (inspiração, pós-inspiração e segunda metade da expiração) são gerados por uma rede neuronal localizada na superfície ventral do bulbo, coordenada por interações sinápticas, especificamente no Grupamento Respiratório parafacial (pFRG), Complexo Bötzinger (BötC) e no Complexo pré-Bötzinger (pré-BötC). Interações sinápticas entre os neurônios geradores do ritmo e do padrão respiratório na superfície ventral do bulbo foram objeto de intensa investigação nos estudos relacionados ao controle central da respiração. Entretanto, os mecanismos eletrofisiológicos e moleculares dos diferentes neurônios respiratórios envolvidos na geração do ritmo e do padrão respiratório ainda são pouco conhecidos e constitui um dos objetivos do presente projeto. Além disso, pouco se sabe sobre as alterações nos mecanismos eletrofisiológicos e moleculares dos diferentes neurônios respiratórios ao longo do desenvolvimento pós-natal, mecanismos estes que poderiam explicar as alterações do ritmo e do padrão respiratório nas diferentes fases do desenvolvimento. Neste sentido, os objetivos do presente projeto são investigar as propriedades eletrofisiológicas dos diferentes neurônios respiratórios da superfície ventral do bulbo (pFRG, BötC e pré-BötC), a expressão de canais iônicos voltagem-dependentes e de "vazamento" que determinam essas propriedades eletrofisiológicas e a morfologia destes neurônios ao longo do desenvolvimento pós-natal (P0-P40). Os resultados a serem obtidos a partir do presente projeto, utilizando técnicas avançadas de eletrofisiologia e biologia molecular, fornecerão importantes informações funcionais de como as propriedades eletrofisiológicas intrínsecas e a identidade molecular de cada grupamento de neurônios respiratórios da superfície ventral do bulbo contribuem para os seus respectivos padrões de disparo e consequentemente para geração do ritmo e do padrão respiratório ao longo do desenvolvimento pós-natal.

Estudos do nosso laboratório mostram que a exposição à hipóxia intermitente (HI) promove alterações na atividade dos neurônios respiratórios e simpáticos localizados na superfície ventral do bulbo, acarretando em signifcativas alterações na função respiratória e autonômica. Contudo, não há estudos evidenciando de que forma a HI interfere com a atividade dos neurônios envolvidos com o controle das atividades respiratória e simpática. Dessa forma, no presente projeto exploraremos as alterações eletrofisiológicas nos neurônios do tronco encefálico e os mecanismos envolvidos nas alterações induzidas pela HI. Considerando nossos resultados prévios mostrando que a alteração simpática e hipertensão induzida pela HI parecem estar relacionadas com um aumento da modulação respiratória da atividade simpática, no presente projeto exploraremos a hipótese de que a HI em neurônios respiratórios do tronco encefálico, por meio do aumento da excitabilidade, promove uma maior modulação dos neurônios simpáticos. Para explorarmos essa hipótese, utilizaremos a técnica de registros eletrofisiológicos (extracelular e intracelular) de neurônios da superfície ventral do bulbo, da porção dorso-lateral da ponde e da superfície dorsal do bulbo em preparações in situ de ratos submetidos à HI. Por estas técnicas, analisaremos o efeito da HI sobre os neurônios simpáticos e geradores do ritmo respiratório basal em conjunto com o registro simultâneo das atividades respiratória e autonômica, como também analisaremos o efeito direto da HI na atividade intrínseca dos diferentes neurônios respiratórios e simpáticos, as quais serão importantes para explorarmos detalhadamente os mecanismos pelos quais à HI promove alterações na atividade respiratória e simpática e conseqüentemente hipertensão arterial.

A ativação dos quimiorreceptores periféricos, que detectam reduções na pressão parcial de oxigênio arterial (PaO2), promove, em ratos não anestesiados, ajustes respiratórios e cardiovasculares com o objetivo de normalizar PaO2 e a pressão de perfusão sanguínea. Como conseqüência da ativação do quimiorreflexo, observamos aumento da pressão arterial, taquipnéia, bem como uma resposta comportamental. Há evidências de que os neurônios geradores das atividades simpática e respiratória localizados na região ventral e lateral do bulbo (aproximadamente 600 µm de extensão; VLM) fazem parte das vias neurais responsáveis pelas respostas cardiovasculares e respiratórias frente à ativação do quimiorreflexo. Nossos resultados anteriores obtidos em animais não anestesiados sugerem a participação do L-glutamato e do ATP no VLM na neurotransmissão dos componentes cardiovascular e respiratório à ativação do quimiorreflexo. Além disso, estudos existentes na literatura apontam a participação do VLM, e da neurotransmissão glutamatérgica e purinérgica na gênese das alterações simpáticas e respiratórias decorrentes da exposição à hipóxia crônica intermitente (HCI). Entretanto, a participação da transmissão purinérgica e glutamatérgica em diferentes aspectos ântero-posteriores do VLM na neurotransmissão dos componentes cardiovascular e respiratório basal e em resposta à ativação do quimiorreflexo, bem como nas alterações autonômicas e ventilatórias observadas no modelo experimental de HCI, não tem sido claramente estabelecida em modelos experimentais livres de anestesia. A hipótese do presente projeto é a seguinte: as neurotransmissões glutamatérgica e purinérgica desempenham funções distintas nos diferentes aspectos ântero-posteriores do VLM no controle cardiovascular e respiratório basal e nas respostas à ativação do quimiorreflexo. Além disso, consideramos também a hipótese de que após a HCI ocorrem alterações nesses mecanismos glutamtérgicos e purinérgicos no VLM.