Daniel Youssef Bargieri.

Público alvo: professores da rede pública de ensino fundamental e médio.

Vagas: 20

Carga horária: 16 horas

Objetivo: formar e atualizar os professores de Biologia e Ciências de Escolas Públicas Estaduais para observação de lâminas de microrganismos, além de fornecer um laminário aos professores/escolas.

Justificativa: o conteúdo programático dos cursos de Biologia e Ciências da rede pública de ensino fundamental e médio contempla a apresentação aos alunos o conceito de microrganismos. Para isso, muitas escolas possuem laboratório de ciências com um ou mais microscópios disponíveis.
Entretanto a utilização dos microscópios depende da disponibilidade de material para ser observado, que por razões óbvias não está disponível na maioria das escolas. Por exemplo, ainda que os professores ensinem o que é um fungo, uma bactéria e um protozoário, eles não dispõem de lâminas com espécimes para demonstração no microscópio, já que a preparação deste material requer laboratórios mais sofisticados e culturas permanentes de microrganismos.
Além disso, e talvez por causa disso, os professores não estão treinados para observar lâminas de microrganismos ao microscópio.
Assim, pode-se identificar duas necessidades claras: disponibilidade de um laminário de microrganismos e treinamento para observar as lâminas ao microscópio.

Geramos no laboratório uma linhagem de Plasmodium berghei, modelo experimental de malária em camundongos, que produz luciferase quando se transforma em oocineto. O oocineto é o zigoto móvel do Plasmodium, formado cerca de 24 horas depois que formas sexuadas do parasita são ingeridas pelo mosquito vetor.
Essa nova linhagem possibilita testes em larga escala de compostos ou anticorpos capazes de inibir a formação de oocinetos in vitro. Assim, pretendemos identificar novos alvos antigênicos ou vias metabólicas importantes para a fertilização das formas sexuadas do Plasmodium no mosquito, criando novas alternativas para o desenvolvimento de ferramentas (novos fármacos ou vacinas) capazes de inibir a transmissão do parasita, interrompendo seu ciclo de vida.

Identificamos a proteína MTRAP como um antígeno essencial de formas sexuadas de Plasmodium. A MTRAP é necessária para que o parasita consiga infectar o inseto vetor.
Estamos explorando se este antígeno, presente na superfície de gametócitos e gametas, pode ser alvo de anticorpos capazes de inibir a fertilização no intestino do mosquito e portanto bloquear a transmissão.

Hemoparasitas são parasitas que se multiplicam na corrente sanguínea. O Plasmodium, causador da malária em mamíferos, e a Babesia, causador da babesiose, são hemoparasitas pertencentes ao filo apicomplexa que invadem e se multiplicam dentro dos eritrócitos. Estes parasitas têm enorme importância em saúde humana e animal. O Plasmodium é o parasita humano mais importante, causando mais de 1 milhão de mortes anuais, e a Babesia é responsável por prejuízos incalculáveis na agropecuária mundial.
Este projeto tem dois focos. Primeiro, estudos de biologia celular de Babesia através da geração de mutantes, utilizando a recém disponível técnica de transfecção de B. bovis com mutação por dupla recombinação homológa. Segundo, geração de uma plataforma de testes pré-clínicos de vacinas contra a malária causada pelo P. vivax, mais prevalente no Brasil, por meio da geração de parasitas murinos (P. berghei) híbridos mutantes, expressando antígenos candidatos vacinais de P. vivax.
Os resultados obtidos na realização deste projeto poderão auxiliar na melhor descrição dos mecanismos celulares e moleculares do ciclo sanguíneo da Babesia, contribuindo para o desenvolvimento de novas alternativas de controle e podendo levar à proposição deste parasita como um modelo de estudo de mecanismos celulares e moleculares conservados no filo apicomplexa. Além disso, a geração de parasitas murinos mutantes para testes vacinais contra P. vivax pretende preencher uma lacuna nesta área, acelerando os testes pré-clínicos de formulações vacinais e, possivelmente, todo o processo de pesquisa e desenvolvimento de uma vacina contra a malária mais prevalente no Brasil.
É importante ressaltar que não há no estado de São Paulo (ou mesmo no Brasil) nenhum laboratório realizando estudos de genética reversa em Plasmodium, uma lacuna a ser preenchida na malariologia brasileira. Além disso, poucos laboratórios no mundo, nenhum no Brasil, trabalham com biologia celular e genética reversa de Babesia bovis. Estes aspectos ressaltam o caráter inovador deste projeto.

A malária é uma das prioridades da pesquisa mundial na área de desenvolvimento de vacinas, sendo o Plasmodium vivax a espécie com maior distribuição geográfica no mundo e a mais prevalente nas Américas. Ao contrário do Plasmodium falciparum, atualmente não há nenhuma vacina contra o P. vivax em fase de testes clínicos avançados sendo feito no homem. Nos últimos 15 anos, estudamos diversos aspectos da resposta imune naturalmente adquirida contra proteínas recombinantes derivadas de antígenos de formas sanguíneas de Plasmodium vivax. Dentre os antígenos considerados promissores como candidatos a vacina, destacamos o Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA1), o qual foi caracterizado pelo nosso grupo como sendo altamente imunogênico em infecções naturais (Rodrigues et al. 2005; Morais et al. 2006; Barbedo et al. 2007; Múfalo et al. 2008) e em camundongos imunizados (Múfalo et al. 2008 ; Gentil et al. 2010). Mais recentemente, adenovirus recombinantes baseados em AMA1 foram gerados e utilizados para imunização de camundongos, utilizando protocolo de indução e reforço (prime-boost) heterólogo com proteína e/ou vírus recombinante (Bouillet et al. 2011). Estes estudos serviram de base para testes pré-clínicos em macacos do gênero Aotus. Por outro lado, pouco se sabe sobre a função dessa proteína, assim como dos anticorpos anti-AMA1 induzidos pela infecção natural ou pela imunização com proteínas recombinantes, na presença de adjuvantes. No caso específico do P. vivax, isso se deve a algumas dificuldades técnicas, como a ausência de um sistema eficiente de cultura do parasita in vitro e a falta de um modelo experimental para estudos de proteção, uma vez que essa espécie não infecta camundongos. Com base em estudos recentes com Toxoplasma gondii e P. falciparum que demonstraram que AMA1 interage com proteínas das roptrias (RON2 e RON4), durante o processo de invasão do eritrócito, o nosso objetivo é expressar e caracterizar a proteína RON2 de P. vivax visando responder as seguint

Apicomplexan invasive stages, such as Plasmodium sporozoites and merozoites, invade host cells by forming a tight junction (TJ). The identification of the molecular players that constitute the TJ has been one of the major questions on molecular parasitology in the last 5 years. The currently accepted model is that two parasite proteins form the TJ: the major vaccine candidate AMA1 at the parasite surface, and RON2 inserted underneath the host cell membrane and working as a receptor for AMA1. Recent work casts doubts on this model. Our hypothesis is that AMA1 acts only as an adhesin that increases the frequency of merozoite invasion by promoting correct positioning in relation to the host cell, but is not completely essential for the life cycle of Plasmodium, and that the AMA1-RON2 complex is not forming the TJ, but is involved in AMA1 intramembrane cleavage during invasion. The goal of this project is to test these hypothesis using conditional mutagenesis in P. berghei and Imaging Flow Cytometry.

The sporozoite is the Plasmodium stage that is transmitted by a mosquito bite to the mammalian hosts. When injected in the skin, the sporozoites migrate to invade blood vessels and reach the liver, where it will invade hepatocytes and transform into merozoites, the forms that are released back into the bloodstream and invade erythrocytes.
The journey of a sporozoite from the mosquito salivary gland until the liver is extraordinary and completely dependent of its capacity to move, which is called gliding motility.
The Thronbospondin Related Anonymous Protein (TRAP) is a transmembrane protein that translocates at the surface of the sporozoite while it moves. TRAP hes in its ectodomain two known adhesive modules: one TSR and one A-domain. Both have been implicated in invasion of salivary glands by the sporozoites, but their involvement in gliding motility is still elusive.
The A-domain is a module found in several proteins, like integrins, and is often involved in protein-protein interactions. The TRAP A-domain is a ~200 residue-long module that has a metal ion-dependent adhesion site (MIDAS) composed of five highly conserved residues (DXSXS-T-D).
This project aim is to test the hypothesis that the MIDAS of TRAP is involved in sporozoite gliding motility by generation of sporozoites that conditionally mutate the TRAP MIDAS after they have invaded the mosquito salivary glands.

O objetivo geral deste projeto é avaliar a viabilidade de se utilizar a via de imunização de mucosa como uma alternativa para a via de imunização parenteral quando utilizamos proteínas recombinantes baseadas na PvMSP119, testando a hipótese de que a flagelina de S. typhimurium, toxina colérica (CT) e toxina termo-labil de E. coli (LT) tem atividade adjuvante de mucosa.

1.1.	expressar e purificar proteínas recombinantes em E. coli e;
1.2.	avaliar e comparar a imunogenicidade das proteínas recombinantes purificadas quando administradas pela via mucosa (intranasal) e via subcutânea com diferentes adjuvantes.