Gustavo Henrique Goldman.

Recursos concedidos dentro do Projeto 1 da Pró-Reitoria de Pesquisa da USP no valor de R$ 3.500,00

Recursos no valor de R$ 4.366,00 concedidos pela Pró-Reitoria de Pesquisa da USP

As MAP quinases e fosfatases são as principais vias de sinalização que coordenam respostas celulares de tolerância ao estresse em eucariotos. A natureza multifatorial do programa de virulência e patogenicidade de A. fumigatus no mamífero hospedeiro posiciona a resposta a diferentes tipos de estresses como um dos fatores mais importantes no processo de estabelecimento deste organismo como patógeno oportunista. Estas vias de sinalização e respostas celulares são importantes para a biossíntese, a organização e a remodelagem da parede celular, respostas a estresses oxidativos e a drogas antifúngicas, assim como a construção de biofilmes e a adesão tecidual. Além disso, as MAP quinases estão possivelmente envolvidas em outras características fundamentais relacionadas ao processo infeccioso e ainda não investigadas, tais como a disseminação na corrente sanguínea a partir do epitélio pulmonar e estratégias de evasão imunológica. A compreensão das redes metabólicas que são coordenadas pelas MAP quinases proporcionará uma oportunidade para a construção de vias de sinalização e respostas celulares importantes para a tolerância ao estresse e o estabelecimento do programa de virulência e patogenicidade de A. fumigatus no hospedeiro mamífero. Assim, os principais objetivos deste projeto são: (i) a identificação de fatores de transcrição específicos que são ativados durante diferentes estresses e que são dependentes de MAP quinases; (ii) a identificação de proteínas que interagem fisicamente com as MAP quinases quando A. fumigatus está exposto a diferentes tipos de estresse; (iii) a investigação de um possível "crosstalk" entre as diferentes MAP quinases de A. fumigatus durante diferentes tipos de estresse; (iv) a caracterização molecular de MpkB e a verificação se esta MAP quinase é importante para a virulência de A. fumigatus, e (v) a investigação das interações entre os mutantes de A. fumigatus gerados neste estudo com o hospedeiro murino imunossuprimido e imunocompetente.

A. fumigatus é um fungo patógeno primário e oportunista, alergênico, que 
também causa asma severa e sinusites em pacientes imunocompetentes. Devido ao fato de que A. fumigatus produz quantidades prodigiosas de conídios, o trato respiratório humano está continuamente exposto ao fungo. Os conídios alcançam as vias aéreas por inalação e chegam ao pulmão devido ao seu pequeno tamanho; nos alvéolos tornam -se ativos e germinam. O sensoriamento e a obtenção de nutrientes essenciais do ambiente 
são características fenotípicas que estão associados ao crescimento do saprófita A. fumigatus em ambientes inóspitos. Apesar da importância médica e ecológica, a biologia básica deste organismo é mal compreendida. Dentre os aspectos da fisiologia celular de A. fumigatus, o funcionamento do ajuste fino do balanço entre fosforilação e defosforilação de alvos proteicos ainda é pouco conhecido. Uma vez que as modificações pós-traducionais envolvendo transferência e remoção de grupamentos fosforil de proteínas é um dos mais importantes eventos que têm consequência na sinalização celular em células eucarióticas, os principais objetivos deste projeto são: (i) a caracterização molecular de genes modulados ao nível transcripcional por CrzA, um
fator de transcrição chave na via de sinalização de cálcio/calcineurina o qual está posicionado ?downstream? à fosfatase calcineurina. Os genes em questão foram previamente identificados por ?Chromatin Immunoprecipitation? seguida por sequenciamento de DNA (Chip-Seq); (ii ) a caracterização molecular de todos os genes que codificam proteínas fosfatases em A. fumigatus e o seu envolvimento em virulência e patogenicidade; (iii) a verificação da participação das diferentes fosfatases de A. fumigatus nas via de sinalização de integridade da parede celular (CWIP ? ?cell wall 
integrity pathway? e osmoresistência (HOG ? ?High Osmolarity Glycerol ?); e (iv) a identificação global de alvos regulados ao nível transcripcional e proteico por fosfatases de A. fumigatus. Para o cumprimento desses objetivos propostos esses genes serão deletados e os fenótipos das linhagens mutantes bem como a sua virulência e patogenicidade investigadas, tanto no modelo alternativo Galleria mellonella, assim como no modelo de imunossupressão em camundongos. As abordagens propostas neste trabalho poderão ser capazes de descrever novos genes reguladores (e não somente os efetores) nesses processos. Além disso, os resultados obtidos a partir do estudo desses 
genes irão proporcionar novos conceitos a respeito da biologia e dos mecanismos de sinalização e adaptação ao ambiente do hospedeiro em A. fumigatus.

470358/2008-4 , Universal 2008 FaixaC

Processo FAPESP 02/10129-6 no valor de R$ 100.000,00. Este projeto visou o estudo de diferentes aspectos do envolvimento dos genes scaA e npkA na resposta ao dano ao DNA em Aspergillus nidulans.

Auxílio para ida ao XXI Fungal Genetics Conference, Asilomar, EUA, processo FAPESP número 2000/13699-2 no valor de US$ 3,367.00

Processo FAPESP número 2000/09751-9 nos valores de R$ 73.031,70 e US$ 42,000.00. Este projeto visou o estudo dos genes scaA e npkA de Aspergillus nidulans e o seu envolvimento na resposta ao dano ao DNA nesta espécie.

Processo FAPESP número 2001/01942-2, nos valores de R$ 30.000,00 e US$ 25,000.00, Este projeto visou o isolamento de genes preferencialmente expressos na fase leveduriforme patogência de Paracoccidioides brasiliensis.

Auxilio para ida ao 5th European Conference on Fungal Genetics, Arcachon, França, processo FAPESP 2000/00613-2.

Processo FAPESP número 2000/12496-0, nos valores de R$ 19.252,45 e US$ 24.415,06.
Este projeto visou a finalizaçÃo de transcritos de genes humanos.

Vinda de Professor Visitante, Dr. David Perlin da New York Public Health Research Institute, Newark, EUA, processo FAPESP número 1998/15849-0, passagem aérea+R$ 1.155,00

Vinda de Pesquisador Visitante, Dr. Cees AMJJ Van den Hondel, TNO Nutrition and Food Research Insitute, Holanda, processo número 1999/05885-1, no valor de R$ 810,00

Auxílio para ida ao XX Fungal Genetics Conference, Asilomar, EUA, processo FAPESP número 1998/16579-6 no valor de US$ 2,965.00

Laboratório de Sequenciamento no programa genoma humano do cancer, processo FAPESP, valores de R$ 94.852,80 e US$ 89.266,23. Este projeto teve como oibjetivo principal o sequenciamento de ESTs de tumores malignos.

Processo FAPESP número 1998/14760-5, no valor de US$ 130,000.00. Este projeto visou o estabelecimento de uma metodologia para a quantificação da expressão gênica através da metodologia do "real-time" RTPCR.

Projeto FAPESP 1996/10064-9
Recursos no valor de R$ 17.851,00 para a ampliação do Laboratório de Biologia Molecular da FCFRP-USP