Andréa da Silva Torrão.

A doença de Alzheimer (DA) é um distúrbio neurodegenerativo devastador que representa uma enorme carga socioeconômica afetando milhões de pessoas, e infelizmente não tem cura. A falta de entendimento da patogênese da doença dificulta o desenvolvimento de abordagens terapêuticas eficazes. A fim de ampliar o conhecimento sobre os processos neurodegenerativos relacionados à DA e com base em resultados anteriores do laboratório, este estudo tem como objetivo investigar as alterações morfológicas em um modelo de neurodegeneração in vitro induzido farmacologicamente pela estreptozotocina (STZ) em células da linhagem de neuroblastoma neuro-2a. As células neuro-2a serão expostas a 5mM de STZ em diferentes intervalos de tempo (por exemplo, 2, 24 e 48 horas). Para determinação da viabilidade e morte celular serão utilizados os métodos do MTT e LDH. A análise da morfologia neuronal será avaliada por imuno-histoquímica, e quaisquer alterações nucleares, como o tamanho do núcleo e a presença de células multinucleadas, serão investigadas através da técnica de fluorescência. O número total de células será quantificado por meio da contagem com o corante Azul de Tripan. Espera-se que este estudo forneça informações importantes sobre os mecanismos subjacentes à DA esporádica e contribua para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas mais eficazes visando melhora na qualidade de vida dos pacientes e redução no impacto crescente dessa doença na sociedade

O envelhecimento é o principal fator de risco para as doenças neurodegenerativas. O aumento da expectativa de vida e do ritmo de envelhecimento da população mundial constituem temas importantes dentro das neurociências e representa uma carga socioeconômica substancial às populações de todo o mundo. Infelizmente, os mecanismos patogênicos dessas doenças ainda não foram completamente esclarecidos, mas sabe-se que o envelhecimento e a neurodegeneração compartilham alterações celulares e moleculares. O desenvolvimento de modelos celulares que promovam a senescência pode ser bastante útil para a elucidação de mecanismos celulares e moleculares. A L-butionina-S R-sulfoximina (BSO) é um fármaco que inibe a síntese da glutationa (GSH), principal proteína responsável pela defesa anti-oxidante intracelular. Acredita-se que o BSO seja capaz de mimetizar aspectos chave do processo de envelhecimento, dessa forma sua aplicabilidade na geração de um modelo in vitro de envelhecimento deve ser avaliada. O objetivo do projeto é caracterizar um modelo de envelhecimento in vitro induzido farmacologicamente pela L-butionina-S R-sulfoximina (BSO) em células da linhagem neuroblastoma 2a.

O envelhecimento e as doenças neurodegenerativas compartilham algumas alterações celulares e moleculares do sistema nervoso, como alterações da composição de membranas, do metabolismo energético e disfunções mitocondriais, aumento da produção e redução da remoção de espécies reativas de oxigênio, alterações no processamento subcelular de proteínas e neuroinflamação. A Doença de Alzheimer (DA) é a forma mais comum de demência e é caracterizada pela degeneração neuronal de regiões relacionadas às funções cognitivas e sua etiologia ainda não é completamente conhecida. Estudos sugerem que distúrbios no metabolismo da glicose e na atividade mitocondrial, bem como da sinalização da insulina cerebral, estão associados com os estágios precoces e a progressão da DA. Os objetivos deste projeto são avaliar os efeitos de alterações de composição de membrana e do estresse oxidativo decorrentes do envelhecimento e do processo neurodegenerativo em ratos e em cultivos primários de astrócitos e micróglia e da linhagem neuro-2a. Os ratos serão avaliados quanto ao desempenho cognitivo relacionado à memória e os encéfalos e os cultivos celulares quanto a parâmetros bioquímicos e moleculares relacionados à via de sinalização de insulina, vias apoptóticas, parâmetros oxidativos e marcadores de neurodegeneração.

A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa caracterizada pela perda progressiva neuronal que levam ao declínio cognitivo e da memória. As causas e os mecanismos subjacentes desta doença ainda são pouco esclarecidos, sendo a idade o principal fator de risco. Outras características patológicas além do acúmulo de A#946; e hiperfosforilação da proteína Tau tem sido relacionadas à DA, como por exemplo a ativação inflamatória da microglia e astrócitos, o estresse oxidativo bem como prejuízos no metabolismo da glicose e na via da insulina (i.e. PI3K-Akt). Estudos recentes fornecem evidências de que a DA pode na verdade ser uma doença metabólica. Em particular, os astrócitos são a porta de entrada do sistema nervoso central fazendo parte da barreira hematoencefálica (BHE) e estão intimamente relacionados com o seu bom funcionamento. Portanto, disfunções metabólicas seriam capazes levar a alterações no funcionamento astrocitário que poderiam funcionar como um componente essencial e até precoce de muitas doenças neurodegenerativas. A busca por estratégias terapêuticas mais eficazes capazes de atuar nos estágios iniciais da DA são de extremamente importânciapromissoras. A Benfotimanina (BFT), um análogo da vitamina B1 é capaz de reduzir o estresse metabólico e modular vias que atuam na sobrevivência, reparo e morte celular (i.e. GSK3), além de mediar a resposta inflamatória e o estresse oxidativo. O objetivo deste projeto é avaliar o efeito da BFT sobre os parâmetros comportamentais, bioquímicos e moleculares relacionados ao estresse oxidativo, à disfunção mitocondrial, à sinalização da insulina e aos mecanismos de morte celular em um modelo de DA induzido por injeção intracerebroventricular de estreptozotocina em ratos e em cultura primária de astrócitos e microglia.

A Doença de Alzheimer (DA) é a principal causa de demência da população, sendo a de origem esporádica (DAe) responsável por mais de 90 dos casos. A DAe tem como principal fator de risco o envelhecimento. Diversas alterações relacionadas a idade prejudicam o funcionamento celular, dentre elas destaca-se o envelhecimento natural das membranas celulares. A hipótese do envelhecimento das membranas foi proposta porque, durante o envelhecimento, as membranas celulares, principalmente a plasmática e as mitocondriais apresentam alterações de composição, fluidez e maior predisposição a lipoperoxidação lipídica, levando a um aumento do estresse oxidativo, ativação de vias apoptóticas e alteração da interação de lipídios-proteínas nos rafts lipídicos, consequentemente alterando o funcionamento de proteínas de membrana, a transdução de sinal e cascatas de sinalização. Dentre as possíveis proteínas de membrana afetadas, destacam-se alterações no receptor de insulina e seus efetores que já foram associados a alterações de membrana em outros tecidos e a outros processos patológicos, incluindo a DA. Portanto, o objetivo proposto é avaliar o efeito de alterações de composição e fluidez de membrana desenvolvidas pelo envelhecimento nas vias de sinalização da insulina, funcionamento mitocondrial, vias apoptóticas e parâmetros oxidativos em cérebros e mitocôndrias isoladas de ratos idosos e na linhagem de células neuro-2a após alteração da fluidez de membrana.

A Doença de Alzheimer (DA) é a forma mais comum de demência em indivíduos a partir dos 60 anos de idade, e é caracterizada pela degeneração neuronal de regiões relacionadas às funções cognitivas. Sua etiologia ainda é desconhecida e a idade é o principal fator de risco, mas fatores genéticos e ambientais parecem contribuir para o desenvolvimento e progressão da doença. Estudos sugerem que distúrbios no metabolismo da glicose e da sinalização da insulina cerebral estão associados com os estágios precoces e a progressão da DA. Nesse sentido, a DA pode ser decorrente da diminuição do metabolismo de glicose e da função mitocondrial no encéfalo, com diminuição da expressão e da atividade de enzimas e menor atividade da cadeia transportadora de elétrons. Assim, a busca de estratégias terapêuticas que possam interferir na função mitocondrial e melhorar o metabolismo de glicose no sistema nervoso é de extrema importância.O objetivo deste projeto é avaliar os efeitos da suplementação de benfotiamina (um análogo sintético da tiamina, vitamina B1) e com o hormônio tireoideano triiodotironina (T3), moléculas relacionadas ao metabolismo e à função mitocondrial, em um modelo experimental de neurodegeneração que reproduz alguns aspectos da DA (injeção intracerebroventricular de estreptozotocina) em ratos. Após o período de suplementação os animais serão avaliados quanto ao seu desempenho cognitivo no teste comportamental de reconhecimento de objetos e quanto a parâmetros bioquímicos e moleculares como dosagem de tiamina, atividade de enzimas mitocondriais e expressão proteica e gênica relacionadas à atividade mitocondrial e marcadoras de neurodegeneração.

A Doença de Alzheimer (DA) é caracterizada pela degeneração neuronal de regiões relacionadas a funções cognitivas. Estudos sugerem que distúrbios no metabolismo da glicose e da sinalização da insulina cerebral estão associados com a progressão da DA e com o déficit cognitivo. A tiamina, um co-fator limitante para a atividade de enzimas críticas do ciclo do ácido cítrico e eficiência no metabolismo de glicose na mitocôndria, representa uma potencial alternativa no tratamento da DA. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar os efeitos da suplementação de benfotiamina, um análogo sintético da tiamina, no metabolismo energético e progressão da DA em um modelo experimental da DA induzido pela injeção intracerebroventricular de estreptozotocina (STZ). Após a indução da DA os animais serão tratados por 30 dias com benfotiamina e divididos nos seguintes grupos: animais que receberão citrato (veículo) tratados com carboximetilcelulose (veículo) (Controle=C); animais que receberão STZ tratados com carboximetilcelulose (STZ); animais que receberão citrato tratados com benfotiamina (B); animais que receberão STZ tratados com benfotiamina (STZ+B). Após o período de suplementação os animais serão avaliados quanto ao seu desempenho cognitivo no teste comportamental de reconhecimento de objetos e eutanasiados para coleta do sangue e das regiões do córtex cerebral, hipocampo, córtex entorrinal e nos núcleos da base para dosagem de tiamina, avaliação da atividade de enzimas mitocondriais e expressão proteica e gênica relacionadas à atividade mitocondrial e marcadoras de neurodegeneração.

Os hormônios tiroidianos (HT) atuam regulando a expressão de genes/proteínas envolvidos no metabolismo, crescimento e desenvolvimento, por meio de ações denominadas genômicas. Contudo, outras ações dos HT, as não genômicas, ocorrem na presença de inibidores da transcrição gênica e em curto espaço de tempo, sendo também desencadeadas por T2 e rT3, classicamente considerados metabólitos inativos dos HT. Várias ações genômicas dos HT são conhecidas, mas algumas são pouco exploradas, como as relacionadas aos processos cognitivos, metabolismo cardíaco, estresse e homeostase energética. Menos ainda se sabe sobre as ações não genômicas dos HT, seus alvos, sítios de interação e vias empregadas para o seu desencadeamento; e sua compreensão pode ter um grande potencial de aplicação, em situações em que o uso crônico do HT, embora desejável, poderia ser deletério. O conhecimento dessas ações torna-se muito relevante uma vez que a disfunção tiroidiana é a segunda endocrinopatia mais frequente na população mundial, que a prevalência de disfunções tiroidianas aumenta com a idade, quando alterações nos processos cognitivos, homeostase energética e função cardiovascular são mais frequentes, e que é elevada a associação entre tiropatias e diabetes. Assim, pretendemos neste estudo explorar as ações genômicas dos HT, metabólitos e agonistas nos processos relacionados acima e suas bases moleculares, e identificar novos alvos de ações não genômicas dos HT, seus mecanismos e potencialidades. Acreditamos que este estudo ampliará o conhecimento na área, e indicará interessantes perspectivas terapêuticas, possibilitando a implementação de estratégias de intervenção.

As doenças neurodegenerativas são caracterizadas pela perda progressiva dos neurônios no sistema nervoso central e, de modo geral, apresentam causas desconhecidas. Fatores como idade, genéticos e ambientais, o aumento da formação de radicais livres, disfunção mitocondrial, neuroinflamação, acúmulo de elementos neurotóxicos, alterações na homeostasia do Ca2+ e no metabolismo energético podem contribuir para o desenvolvimento do processo neurodegenerativo. Nos últimos anos, vários estudos empregando diferentes modelos experimentais de neurotoxicidade e neuroinflamação têm sugerido propriedades neuroprotetoras do sistema canabinóide, com a participação de endo e/ou exocanabinóides e dos receptores canabinóides CB1 e CB2 nesses processos. No entanto, os mecanismos subjacentes à neuroproteção não são claros e os dados da literatura são ainda conflitantes. O objetivo deste projeto é avaliar a participação do sistema canabinóide em modelos in vivo e in vitro de neurodegeneração, investigando aspectos relacionados ao estresse oxidativo, neuroinflamação, homeostase do cálcio e do retículo endoplasmático e os efeitos do tratamento com compostos canabinóides. Utilizaremos um modelo de neurodegeneração in vivo que reproduz alguns aspectos da Doença de Alzheimer em ratos (injeção intracerebroventricular de estreptozotocina) e modelos in vitro de cultivos de uma linhagem de neuroblastoma e cultivos primários de neurônios e células da glia. Serão avaliados parâmetros como distribuição dos receptores, viabilidade celular/proliferação e produção de espécies reativas, bem como abordagens que permitam elucidar possíveis mecanismos de ação dos canabinóides pela análise de níveis de proteína e de expressão gênica.

A neurodegeneração é resultado da destruição progressiva e irreversível dos neurônios no sistema nervoso central, apresentando causas desconhecidas e mecanismos patológicos não totalmente elucidados. Fatores genéticos, ambientais e a idade contribuem para o desenvolvimento das doenças neurodegenerativas. Além destes, também são fatores de risco, o aumento da formação de radicais livres e/ou estresse oxidativo, defeito mitocondrial, acúmulo de elementos neurotóxicos, defeito no metabolismo energético e defeitos genéticos. O acúmulo de proteínas mal dobradas no lúmen do Retículo Endoplasmático (RE), causando o chamado estresse de RE, levando a ativação de vias e respostas chamadas UPRs (unfolded protein response), podendo levar a morte celular. Estudos sugerem a participação do sistema canabinóide como neuroprotetor em diversos modelos de neurodegeneração como, hipóxia aguda e epilepsia, isquemia cerebral, lesão cerebral e modelos de estresses oxidativos. O objetivo deste projeto será avaliar os efeitos do estresse oxidativo, gerado pelo peróxido de hidrogênio (H2O2), e sua relação com o mecanismo de estresse de RE e a participação do sistema canabinóide em uma linhagem de neuroblastoma (Neuro 2a). Para isso, as células serão tratadas com diferentes concentrações de H2O2 e compostos canabinóides em tempos variados e posteriormente avaliados por métodos de viabilidade celular. O estresse de RE e a via de canabinóides serão analisados a partir da ativação de vias de sinalização pelo método de immunoblotting. Acreditamos poder contribuir para uma melhor compreensão sobre o papel do sistema canabinóide nos processos neurodegenerativos.

Nos últimos anos, tem sido sugerido que a deficiência e a resistência à insulina no encéfalo podem estar relacionadas à Doença de Alzheimer (DA), sugerindo que a DA tenha uma relação com o Diabetes melito. Além da relação entre disfunções da sinalização de insulina e a DA, vários estudos sugerem uma modulação dos hormônios tireoideanos (HT) na sinalização de insulina e na função do sistema nervoso, e que sua falta ou seu excesso estão envolvidos em sintomas neurológicos. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos dos HT na função do sistema nervoso adulto. Além disso, os HT parecem modular os níveis de fatores neutróficos, como o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fundamental na regulação da sobrevivência, crescimento e manutenção dos neurônios. O objetivo deste projeto é analisar os efeitos do tratamento com HT sobre a sinalização de insulina, envolvendo o BDNF no encéfalo de ratos diabéticos. Para isso, ratos Wistar serão injetados com monoidrato de aloxana (ratos diabéticos) ou citrato (ratos controle) e serão tratados com T3 durante 30 dias. Esses animais serão testados com um método comportamental para avaliar alterações cognitivas de memória e as regiões do córtex e hipocampo serão avaliadas quanto aos níveis de proteínas relacionadas à sinalização de insulina e do BDNF e proteínas relacionadas à sobrevivência e manutenção neuronal por immunoblotting e por imuno-histoquímico e análise dos níveis de BDNF por ELISA. Acreditamos assim, poder contribuir para um melhor entendimento do papel dos HT na função do sistema nervoso adulto.

Vários estudos têm demonstrado o papel da glicose como principal nutriente do encéfalo e mostrado o aumento da sua utilização em processos de aprendizado e memória em regiões cerebrais tais como hipocampo, amígdala e córtex pré-frontal. Além disso, esses estudos têm indicado que a insulina afeta várias funções cerebrais incluindo cognição e memória. Evidências mais recentes sugerem que a Doença de Alzheimer (DA) possa ser o resultado de uma insuficiência progressiva da capacidade do cérebro em utilizar a glicose. A DA é a causa mais comum de demência, caracterizada clinicamente por comprometimentos cognitivos e histologicamente pela formação de placas senis e de emaranhados neurofibrilares intracelulares resultantes de alterações do metabolismo do peptídeo β-Amilóide e da hiperfosforilação da proteína Tau, respectivamente. Essas alterações parecem, em parte, ser decorrência de uma deficiência na sinalização da insulina e conseqüente resistência do encéfalo a esse hormônio, sugerindo que a DA tenha uma relação com o Diabetes melito. Neste contexto, sabe-se que os hormônios tireoidianos (HT) são capazes de estimular a expressão e a atividade das enzimas das vias glicolítica e oxidativa, e favorecer a captação de glicose pelas células. O objetivo deste projeto é analisar os efeitos do tratamento com HT sobre a expressão de proteínas relacionadas à sinalização de insulina e marcadoras de degeneração no encéfalo de ratos diabéticos.

Diversos estudos tem demonstrado a participação do sistema canabinoide nos processos neurodegenerativos tanto em modelos in vivo como in vitro, onde se observa a atenuação dos déficits cognitivos e sua função neuroprotetora e anti-inflamatória. Tem sido proposto que o comprometimento da integridade neuronal na Doença de Alzheimer (DA) esporádica está relacionado com uma deficiência na sinalização da insulina e consequente resistência do encéfalo a esse hormônio que podem desencadear alterações na via de sobrevivência celular, no metabolismo do peptídeo β-amiloide (βA) e na desregulação da fosforilação da proteína Tau. A estreptozotocina (STZ) tem sido utilizada em baixas doses injetada no espaço intracerebroventricular (icv) como um modelo experimental da DA esporádica em ratos. Deste modo, o objetivo desse trabalho é avaliar a participação dos compostos canabinoides no processo neurodegenerativo relacionado à DA, em modelos in vitro (exposição da linhagem de neuroblastoma - Neuro 2a à STZ) e in vivo (injeção icv de STZ) de resistência à insulina no Sistema Nervoso. Para isso, avaliamos a expressão de proteínas (Immunoblotting) relacionadas à morte neuronal, à sinalização da insulina e ao sistema canabinoide e do TRPV1. Nossos resultados preliminares sugerem que a exposição à STZ desencadeia uma deficiência na resposta a insulina, gerando uma possível resistência a insulina. No modelo in vitro, a STZ desencadeou uma morte celular através de mecanismos apoptóticos e no modelo in vivo, a injeção icv de STZ provocou um déficit de memória nos animais, alterações na sinalização de insulina e uma complexa variação temporal dos receptores de canabinoides e do TRPV1. O tratamento in vivo com agonista do CB1 reverteu algumas alterações das proteínas da via da insulina, e no modelo in vitro participou na sobrevivência celular possivelmente através da regulação positiva das proteínas pró e anti-apoptóticas, sugerindo uma participação do sistema canabinoide em processos neurodegenerativos, como neuroprotetor.

O sistema canabinóide parece desempenhar uma função modulatória em processos de plasticidade, neurodegenerativos e de neuroproteção. A Doença de Parkinson (DP), caracterizada pela degeneração de neurônios dopaminérgicos dos núcleos da base, com consequente comprometimento motor, tem sido alvo de estudos no contexto de um possível papel neuroprotetor do sistema canabinóide. Entretanto, os dados da literatura são ainda muito controversos, e esse papel parece depender de fatores como a idade e espécie animal analisados, do tipo e gravidade da degeneração e dos mecanismos de morte celular ativados, bem como dos agentes canabinóides utilizados. Os objetivos deste projeto são avaliar o papel do sistema canabinóide em modelos experimentais in vivo e in vitro da DP, investigando os efeitos do tratamento com compostos canabinóides. Para isso, realizaremos a injeção intraestriatal unilateral da neurotoxina 6-hidroxi-dopamina (6-OHDA) e a exposição de uma linhagem de neuroblastoma diferenciada em células dopaminérgicas a 6-OHDA, ao peróxido de hidrogênio ou ao lipopolisacarídeo (LPS). Os animais e as células serão tratados com um agonista e um antagonista canabinóides e avaliados quanto a aspectos histológicos/químicos e de expressão de marcadores de elementos neuronais, de morte neuronal e de possíveis mecanismos celulares envolvidos no processo neurodegenerativo. Nossos estudos podem contribuir com informações importantes para um melhor conhecimento dos processos subjacentes às doenças neurodegenerativas e da participação do sistema canbinóide.

A Doença de Alzheimer (DA) é a causa mais comum de demência e é caracterizada clinicamente por comprometimentos cognitivos. Histologicamente é caracterizada pela formação de placas senis e de emaranhados neurofibrilares intracelulares resultantes de alterações do metabolismo do peptídeo βA e da hiperfosforilação da proteína tau, respectivamente. Essas alterações parecem, em parte, ser decorrência de uma deficiência na sinalização da insulina e conseqüente resistência do encéfalo a esse hormônio, sugerindo que a DA esporádica tenha uma relação com o Diabetes mellitus. A estreptozotocina (STZ) em baixas doses injetadas intracerebroventricular (icv) parece alterar o metabolismo de glicose encefálico e tem sido utilizada mais recentemente como modelo experimental da DA em ratos. Vários estudos sobre o sistema canabinóide têm revelado de modo geral, que compostos canabinóides e seus receptores parecem desempenhar uma função neuroprotetora em diversos modelos de neurodegeneração, como na DA. Nossos objetivos para esse projeto de pesquisa são avaliar um possível papel neuroprotetor do sistema canabinóide neste modelo experimental de DA (in vivo) e em um modelo de cultura primária de hipocampo (in vitro) causada pela administração de estreptozotocina, utilizando tratamentos com agonistas canabinóides. Serão utilizados diferentes métodos de análise, tais como testes comportamentais, análise protéica por westernblotting e de expressão gênica por RT-PCR de marcadores da via de sinalização de insulina e de morte celular, e métodos histoquímicos para avaliar a expressão de marcadores de neurodegeneração.

Vários estudos têm implicado o processo de excitotoxicidade em uma série de doenças crônicas neurodegenerativas, como por exemplo, na esclerose múltipla (EM). A busca por drogas anti-excitotóxicas para uso em humanos que não apresente efeitos colaterais indesejáveis tem sido alvo de várias investigações, e nos últimos anos os compostos canabinóides têm sido considerados extremamente promissores nessa área. O canabidiol (CBD), que não apresenta efeitos psicoativos e parece possuir propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e neuroprotetoras, tem despertado um maior interesse. No entanto, pouco ainda se sabe sobre os mecanismos de ação do CBD. Assim, os objetivos desse projeto são o de avaliar os efeitos do CBD na patogenia de modelos experimentais in vivo de EM (modelo de Theiler) e de encefalomielite autoimune experimental (EAE), avaliados por métodos comportamentais. Além disso, serão utilizados modelos in vitro de linhagens de oligodendrócitos submetidos a condições de neuroinflamação e avaliados quanto à viabilidade/proliferação celular, homeostase intracelular de Ca2+ e produção de radicais livres de oxigênio e nitrogênio. Esperamos, com isso, obter informações novas a respeito da possível participação neuroprotetora do sistema canabinóide em processos neurodegenerativos, que tem sido a linha de pesquisa principal do nosso laboratório nos últimos anos.

A Doença de Alzheimer (DA) é a causa mais comum de demência e é caracterizada clinicamente por comprometimentos cognitivos. Histologicamente, a DA é caracterizada pela formação de placas senis e de emaranhados neurofibrilares intracelulares, resultantes de alterações do metabolismo do peptídeo β-Amilóide e da hiperfosforilação da proteína tau, respectivamente. Essas alterações parecem, em parte, ser uma decorrência de uma deficiência na sinalização da insulina e conseqüente resistência do encéfalo a esse hormônio, sugerindo que a DA esporádica tenha uma relação com o Diabetes mellitus. A estreptozotocina tem sido utilizada como modelo de indução do Diabetes, e mais recentemente, como modelo experimental da DA. Os estudos sobre a neuroproteção do sistema canabinóide na DA têm revelado, de modo geral, que compostos canabinóides e seus receptores parecem desempenhar uma função neuroprotetora. Nossos objetivos para esse projeto de pesquisa são o de avaliar um possível papel neuroprotetor do sistema canabinóide em modelos de morte celular em uma linhagem celular de neuroblastoma (Neuro 2A) induzida pela estreptozotocina e pela hiperglicemia, como forma de gerar informações adicionais aos estudos in vivo já vigentes em nosso laboratório. As culturas serão analisadas com métodos enzimáticos para avaliar a viabilidade celular e com métodos de detecção de proteínas relacionadas ao processo neurodegenerativo. Esperamos, com isso, obter informações a respeito da possível participação neuroprotetora do sistema canabinóide em processos neurodegenerativos como a DA

O sistema canabinóide parece exercer um papel modulador em vários processos neurobiológicos, incluindo processos de neuroproteção, neurodegeneração e plasticidade neuronal. Por ser um processo neurodegenerativo a Doença de Parkinson (DP) também tornou-se alvo dos estudos de neuroproteção possivelmente desempenhada pelo sistema canabinóide. Contudo, os estudos sobre as relações do sistema canabinóide com a DP ainda são muito controversos.
Assim, os objetivos principais deste projeto são: investigar as possíveis alterações histológicas e comportamentais decorrentes do pré e pós-tratamento com agonistas e antagonistas canabinóides no modelo de Parkinson induzido por 6-OHDA (6-hidroxi-dopamina) através da injeção unilateral no estriado. Para ambos os tratamentos os animais serão divididos em 10 grupos, sendo 5 grupos injetados com 6-OHDA (experimentais) e 5 grupos injetados com salina (controles): (1) tratados com agonista canabinóide (metanandamida), (2) tratados com antagonista canabinóide (AM251), (3) tratados com essas duas drogas conjugadas, (4) tratados com inibidor do transportador do anandamida (AM 404) e o veículo das drogas (DMSO).
O controle da lesão será feito por meio de análises comportamentais e histológicas. Os aspectos avaliados serão a identificação de morte celular e degeneração, a geração de espécies reativas de oxigênio, possíveis alterações da expressão dos receptores canabinóides após a lesão e vias de sinalização do sistema canabinóide envolvidas no possível processo de neuroproteção. Para tanto utilizaremos as técnicas de imuno-histoquímica e immunoblotting para diversos marcadores, incluindo marcadores de elementos do sistema canabinóide como os receptores CB1 e CB2, de proteínas da via de sinalização do sistema canabinóide como AKT e ERK, de tirosina hidroxilase, de morte celular por apoptose (Caspase-3), de células da glia e de NADPH oxidase. Utilizaremos ainda as técnicas de histoquímica (TUNEL E Fluoro-Jade B) e de fluorescência da dihidr

A Doença de Alzheimer (DA) é causa mais comum de demência e é caracterizada clinicamente por comprometimentos cognitivos. Histologicamente é caracterizada pela formação de placas senis e emaranhados neurofibrilares intracelulares resultantes de alterações do metabolismo do peptídeo beta amilóide e da hiperfosforilação da proteína tau, respectivamente. Essas alterações parecem, em parte, ser uma decorrência de uma deficiência na sinalização da insulina e consequente resistência do encéfalo a esse hormônio, sugerindo que a DA esporádica tenha uma relação com o Diabetes mellitus. A streptozotocina tem sido utilizada como modelo de indução do Diabetes, e mais recentemente como modelo experimental da DA. Os estudos sobre a neuroproteção do sistema canabinóide na DA têm revelado, de modo geral, que compostos canabinóides e seus receptores parecem desempenhar uma função neuroprotetora. Nossos objetivos para esse projeto de pesquisa são o de avaliar um possível papel neuroprotetor do sistema canabinóide em um modelo experimental de DA causada pela administração intracerebroventricular de streptozotocina, utilizando tratamentos com agonistas e antagonistas canabinóides. Serão utilizados métodos imuno-histoquímicos e de western blotting para avaliar a expressão de marcadores de neurodegeneração. Esperamos, com isso obter informações a respeito da possível participação neuroprotetora do sistema canabinóide em processos neurodegenerativos como a DA.

A Doença de Alzheimer (DA) é causa mais comum de demência e é caracterizada clinicamente por comprometimentos cognitivos. Histologicamente é caracterizada pela formação de placas senis e emaranhados neurofibrilares intracelulares resultantes de alterações do metabolismo do peptídeo beta amilóide e da hiperfosforilação da proteína tau, respectivamente. Essas alterações parecem, em parte, ser uma decorrência de uma deficiência na sinalização da insulina e consequente resistência do encéfalo a esse hormônio, sugerindo que a DA esporádica tenha uma relação com o Diabetes mellitus. A streptozotocina tem sido utilizada como modelo de indução do Diabetes, e mais recentemente como modelo experimental da DA. Os estudos sobre a neuroproteção do sistema canabinóide na DA têm revelado, de modo geral, que compostos canabinóides e seus receptores parecem desempenhar uma função neuroprotetora. Nossos objetivos para esse projeto de pesquisa são o de avaliar um possível papel neuroprotetor do sistema canabinóide em um modelo experimental de DA causada pela administração intracerebroventricular de streptozotocina, utilizando tratamentos com agonistas e antagonistas canabinóides. Serão utilizados métodos imuno-histoquímicos e de western blotting para avaliar a expressão de marcadores de neurodegeneração. Esperamos, com isso obter informações a respeito da possível participação neuroprotetora do sistema canabinóide em processos neurodegenerativos como a DA.

A Doença de Alzheimer (DA) é a causa mais comum de demência e é caracterizada clinicamente por comprometimentos cognitivos. Histologicamente, a DA é caracterizada pela formação de placas senis e de emaranhados neurofibrilares intracelulares, resultantes de alterações do metabolismo do peptídeo β-Amilóide e da hiperfosforilação da proteína tau, respectivamente. Essas alterações parecem, em parte, ser uma decorrência de uma deficiência na sinalização da insulina e conseqüente resistência do encéfalo a esse hormônio, sugerindo que a DA esporádica tenha uma relação com o Diabetes mellitus. A estreptozotocina tem sido utilizada como modelo de indução do Diabetes, e mais recentemente, como modelo experimental da DA. Os estudos sobre a neuroproteção do sistema canabinóide na DA têm revelado, de modo geral, que compostos canabinóides e seus receptores parecem desempenhar uma função neuroprotetora. Nossos objetivos para esse projeto de pesquisa são o de caracterizar o modelo e avaliar um possível papel neuroprotetor do sistema canabinóide em um modelo experimental de DA causada pela administração intracerebroventricular de estreptozotocina, utilizando tratamentos com agonistas e antagonistas canabinóides. Serão utilizados métodos imuno-histoquímicos e de westernblotting para avaliar a expressão de marcadores de neurodegeneração. Esperamos, com isso, obter informações a respeito da possível participação neuroprotetora do sistema canabinóide em processos neurodegenerativos como a DA.

A insulina e o fator de crescimento parecido com a insulina (IGF-I) são hormônios essenciais para a manutenção da homeostase, inibição de apoptose, crescimento e diferenciação celular. Porém, existem alterações de sensibilidade à insulina tanto em condições fisiológicas como em algumas doenças como diabetes mellitus e hipertensão tornando a ação deste hormônio plausível de estudo. Tanto o receptor de insulina quanto o de IGF-I pertencem à família dos receptores com atividade tirosina quinase intrínseca e são capazes de transferir fosfatos de ATP para resíduos de tirosina. A neurogênese na retina e no encéfalo exige uma ação combinada de três diferentes processos celulares: proliferação, diferenciação e apoptose. A apoptose tem sido descrita em retina de embriões de pintos, sendo este um modelo clássico para o estudo da neurogênese do Sistema Nervoso Central. Estudos comprovaram que a retina de adultos e embriões contém receptores de insulina e de IGF-I e IGF-II e que esses fatores de crescimento também desenvolvem importante papel na homeostase, crescimento e diferenciação celular nos fotorreceptores. O objetivo deste trabalho foi avaliar a localização e expressão dos receptores de insulina e de IGF-I na retina e no tecto óptico nos diferentes estágios do desenvolvimento embrionário. Para isto, embriões de pintos (Gallus gallus) com 6 a 21 dias de vida (E6 ? E21) foram fixados, cortados e submetidos à técnica de imunohistoquímica. Não foi possível observar marcação do receptor de insulina tanto na retina como no tecto óptico. Observamos uma marcação transiente do receptor de IGF-I ao longo do desenvolvimento sugerindo uma correlação deste hormônio com eventos importantes do desenvolvimento embrionário, como a neurogênese, a sinaptogênese e talvez processos neuroprotetores e apoptóticos ao final do desenvolvimento embrionário. Este estudo sugere que o receptor de IGF-I apresenta um papel importante no crescimento e em outros processos relacionados ao desenvolvimento embrionário da retina e do encéfalo de pintos.

Este projeto visa estudar alguns aspectos ligados à organização funcional do sistema colinérgico no encéfalo de vertebrados, em especial a regulação da expressão das diferentes subunidades dos receptores nicotínicos neuronais da acetilcolina. Lesões e administração crônica de agonistas e antagonistas nicotínicos serão usados para o estudo das alterações na expressão dos diversos tipos de receptores nicotínicos no sistema nervoso do animal adulto e ao longo do desenvolvimento. Esses procedimentos serão combinados a métodos imuno-histoquímicos, de hibridação "in situ", de "immunobloting" e culturas primárias de neurônios para a detecção de subunidades que compõem os receptores nicotínicos no encéfalo de vertebrados.
Espera-se com este projeto a geração de modelos "in vivo" que possam ser úteis para o conhecimento da regulação da expressão dos receptores nicotínicos neuronais da acetilcolina. Esses experimentos potencialmente contribuirão também para uma melhor compreensão de mecanismos de sinalização química no sistema nervoso.