Guilherme Pugliesi.

Novas tecnologias para detectar com segurança a prenhez antes do 21 dia após a inseminação permitiriam a oportunidade de um novo serviço no próximo estro e poderia melhorar o desempenho reprodutivo e a lucratividade para fazendas comerciais de leite e corte. Assim, a quantificação dos genes estimulados pelo interferon-Ä (ISG) em leucócitos do sangue periférico e a ultrassonografia Doppler do corpo lúteo (CL) foram testadas pelo nosso grupo como métodos precoces de diagnóstico gestacional. Embora a avaliação da luteólise por ultrassonografia Doppler seja um excelente preditor de prenhez, não é eficiente no monitoramento da viabilidade do concepto e na predição da mortalidade embrionária entre 20 e 30 dias em bovinos com CL ativo. Além disso, a proporção de resultados falso-negativos ainda não é adequada para o uso da expressão de ISG como um método com acurácia e viabilidade para detecção da prenhez antes do 20 dia. Portanto, a melhor compreensão dos eventos básicos envolvidos na modulação do sistema imunológico no início da gestação é o primeiro passo para a descoberta de novos biomarcadores para detecção da prenhez mais cedo do que as metodologias tradicionais. Portanto, nosso principal objetivo com o presente estudo é compreender a resposta materna à sinalização do concepto entre os dias 15 e 20 de gestação, a fim de compreender a modulação do sistema imunológico associada à perda embrionária precoce e identificar, em um estágio inicial, a estado gestacional em fêmeas bovinas. Para isso, o perfil de citocinas, ISGs clássicos e novos potenciais marcadores de prenhez envolvidos na resposta imune uterina e periférica serão determinados em (1) amostras de citologia uterina novilhas com sucesso ou falha gestacional após transferência de embriões; (2) em novilhas abatidas nos dias 15 e 20 de gestação; e (3) usando um sistema in vitro de cultura de células imunes associado a tratamentos com lavados uterinos. Esperamos validar uma plataforma multiplex para determinar as citocinas Th1 / Th2 nos meios de cultura e plasma. Antecipamos que a compreensão da resposta materna local e circulante ao concepto durante os dias 15 e 20 de prenhez usando os modelos in vivo e in vitro propostos têm o potencial de resultar na descoberta de novos marcadores de prenhez que podem ser determinados no sangue periférico ou em células imunes. Os novos conhecimentos e os métodos inovadores aqui propostos servirão de base para o desenvolvimento de novas tecnologias para bovinos. A praticabilidade é garantida pelo trabalho conjunto de especialistas em cada etapa analítica e pela infraestrutura das instituições envolvidas.

Missão Internacional a University of Agriculture and Veterinary Medicine-Obihiro, Japão - Programa Santander de Mobilidade Docente

Auxílio a pesquisa, Edital MCT/CNPq - Universal. Faixa A,

Auxílio a pesquisa concedido na linha de Acordos de Cooperação/SPRINT, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP

Projeto Jovem Pesquisador FAPESP

Tem-se com este projeto o objetivo geral de determinar os efeitos de três diluidores de sêmen a base de leite ou gema-de-ovo e duas temperaturas (5 e 15 °C) de refrigeração sobre a viabilidade do sêmen canino refrigerado para o transporte por 12 ou 24 horas. Desta maneira, tem-se como objetivo específico: 1) identificar qual dos três diluidores comparados possibilita melhor viabilidade do sêmen canino refrigerado por 12 ou 24 horas; e 2) determinar a melhor temperatura de estocagem do sêmen canino por 12 ou 24 horas utilizando-se um contêiner comercial desenvolvido para transporte de sêmen equino.

Tem-se como objetivo geral determinar se a administração de P4 de longa ação no quarto dia após em tempo fixo (IATF) melhora a fertilidade em vacas de corte. Desta maneira, se buscará através da suplementação de P4 exógena, elucidar o efeito embriotrófico da P4 sobre a fertilidade de vacas de corte pós-IATF. Objetiva-se testar as seguintes hipóteses: 1) a administração de P4 pós-IATF otimiza a fertilidade através do aumento na taxa de concepção em vacas com baixa funcionalidade luteal (CL menores) na fase inicial do diestro; e 2) a fertilidade de vacas com alta atividade esteroidogênica peri-ovulatória (folículo maior e CL maior) não é afetada pela administração de P4 exógena pós-IATF.

pretende-se nesse estudo ter como base o diagnóstico precoce de gestação através da avaliação da funcionalidade do CL pela ultrassonografia Doppler transrectal e considerar estes métodos para reduzir o intervalo de inseminações em vacas de corte. Assim, tem-se como objetivo geral deste projeto estimar o impacto econômico de dois sistemas de re-sincronização do cio e IATF através do diagnóstico gestacional precoce pela ultrassonografia Doppler em vacas de corte em comparação com um sistema de re-sincronização convencional. Tal proposta se encontra dentro do escopo do projeto de Universal CNPq (471921/2013-0) em andamento sob a responsabilidade do orientador responsável pela presente proposta, o qual dentre outros objetivos visa utilizar de técnicas moleculares e ultrassonográficas para avaliar o CL no início da gestação em bovinos.

Em fêmeas bovinas a liberação de PGF2α pode ser induzida in vivo pelo estradiol (E2), entretanto, o papel do E2 na síntese de PGF2α ainda não foi esclarecido. Considerando que as concentrações plasmáticas de PGF2α aumentam 3,5 hms após a aplicação do E2 in vivo, acredita-se que o E2 ative não somente enzimas, mas também estimule a síntese de proteínas essenciais para a produção de PGF2α. Sabe-se que explantes endometriais bovinos provenientes de animais injetados com E2, e cultivo de células endometriais bovinas (BEND) expostas ao E2, ao serem tratados com ionóforo de cálcio (Cl) tiveram um aumento acentuado na liberação de PGF2cx quando comparados àqueles que não receberam E2 e aos tratados exclusivamente com E2 ou CL A hipótese é que o E2 estimule a expressão e/ou a atividade ias enzimas PKC e PLA2, ambas dependentes de cálcio para a ativação, envolvidas na síntese de PGF2α endometrial. O objetivo geral deste estudo é verificar a ação do E2 na atividade das proteínas PKC e PLA2 envolvidas na cascata geradora de PGF2α (Experimento 1); identificar grupos de genes envolvidos na síntese de PGF2α endometrial em fêmeas bovinas, cuja expressão seja modulada pelo E2 pela técnica de RT-qPCR (Experimento 2) e posteriormente comprovar as proteínas identificadas como diferenciadas no experimento 2 pela técnica de Western Blotting (Experimento 3). No Experimento 1. células endometriais bovinas (BEND) serão cultivadas e submetidas a presença ou ausência de um inibidor específico de PKC (10μM Bisindolimaleide I) ou inibidor de PLA2 (20μM, AACOCF3), durante 60 minutos. Amostras de meio de cultivo, no volume de 100μL, serão coletadas 60 minutos após a adição ou não dos diferentes inibidores (Tempo 0). Imediatamente após, será adicionado 100μL de meio sem soro contendo ou não E2 + CI, que será acrescentado aos 900μL restantes nos poços, em quantidade que determine uma concentração final de 10-6M de cálcio ionóforo e 10-13M de estradiol. Amostras de meio, no volume de 100μL, serão coletadas 12 horas após o tratamento ou não com CI (Tempo 12). Os tratamentos serão realizados em triplicata em um total de cinco repetições. As concentrações de PGF2α no meio de cultivo serão mensuradas por radioimunoensaio. A média e erro padrão da média (EPM) para a DIF 12, representada pela diferença de concentração entre o Tempo 12 e 0 Tempo 10, será comparada entre os diferentes grupos de tratamento. No Experimento 2. fêmeas Nelore cíclicas (n=60), não lactantes, serão pareadas no dia 17 de um ciclo estral sincronizado, injetadas com 0mg (n=30) ou 3mg de17β-estradiol (n=30) e em seguida serão subdivididas dentro de cada grupo para terem uma biópsia uterina do como uterino ipsolateral ao corpo lúteo realizada com 2 horas (n=6 para 0mg e n=6 para 3mg de17β-estradiol) ou 3 horas (n=6 para 0mg e n=6 para 3mg de17β-estradiol) ou 4 horas (n=6 para 0mg e n=6 para 3mg de17β-estradiol) ou 5 horas (n=6 para 0mg e n=6 para 3mg de17β-estradiol) ou 6 horas (n=6 para 0mg e n-6 para 3mg de17β-estradiol). As amostras teciduais serão avaliadas quanto à expressão de RN Am, pela técnica de RT-qPCR, para algumas proteínas específicas envolvidas na síntese de PGF2α endometrial, dentre estas aldo-keto redutase1B1, Aldo-keto redutase 1C3, receptor de ocitocina, fosfolipase A24A, PKCα, PKCβ, PKCγ, cicloxigenase 1 e cicloxigenase 2.

O projeto visa verificar as mundaças na expressão gênica no útero de vacas sincronizadas sob diferentes perfis endocrínos pre-ovulatórios. Mais especificamente, pretende-se avaliar as alterações uterinas promovidas pela exposição ao estradiol exógeno para indução da ovulação.

Em avaliação para financiamento pela FAPERGS, protocolo sob no. 14181.317.18821.22052014, enviado ao Edital "Edital 02/2014"

O reconhecimento materno da gestação, entre os dias 15 e 19 pós-ovulação, estabelece um dos principais desafios biológicos para a obtenção de índices reprodutivos satisfatórios em bovinos. A secreção de interferon-tau (IFN-tau) pelo concepto é primordial na manutenção do corpo lúteo e para estabelecer a gestação e estimula a maior abundância de genes específicos nas células imunes do sangue periférico em vacas de leite e ovelhas. Entretanto, não é conhececido como que a presença do concepto altera a expressão dos genes estimulados pelo interferon-tau (ISG) em vacas de corte. Desta maneira, o presente projeto objetiva: (1) avaliar a abundância de transcritos dos ISGs nas células imunes mononucleares do sangue periférico durante estágios iniciais de gestação em vacas de corte Bos Indicus; e (2) determinar a viabilidade da detecção de animais não-gestantes através da expressão de ISGs entre o 12º e 20º dia pós-IA. Para cumprir estes objetivos, vacas de corte terão o ciclo estral manipulado farmacologicamente e as ovulações sincronizadas para inseminação artificial em tempo fixo. As concentrações de progesterona, abundância de transcritos de genes estimulados pelo IFN-tau nas células imunes mononuclares do sangue periférico e o tamanho e fluxo sangúineo luteal serão mensurados entre o 8º e 30º dia pós-inseminação. Espera-se, estabelecer marcadores moleculares precoces do estado gestacional em vacas de corte Bos Indicus.

O reconhecimento materno da gestação, entre os dias 15 e 19 pós-ovulação, estabelece um dos principais desafios biológicos para a obtenção de índices reprodutivos satisfatórios em bovinos. A secreção de interferon-tau (IFN-tau) pelo concepto é primordial na manutenção do corpo lúteo e para estabelecer a gestação e estimula a maior abundância de genes específicos (ISGs) nas células imunes do sangue periférico em vacas de leite e ovelhas. Entretanto, o método para diagnóstico da gestação mais utilizado atualmente nos sistemas de criação de gado de corte é através da ultrassonografia transretal entre o 28º e 40º dia pós-inseminação, o que impossibilita a identificação de vacas não-gestantes antes do retorno ao cio (em torno de 21 dias pós-ovulação). Com isso, se faz necessário métodos diagnósticos que possibilitem detectar os animais não-gestantes mais precocemente e assim reduzir o tempo entre inseminações. Desta maneira, o presente projeto objetiva: (1) identificar as características funcionais do corpo lúteo em vacas gestantes e não-gestantes nos estágios inicias da gestação em vacas de corte; (2) avaliar a abundância de transcritos dos ISGs nas células imunes mononucleares do sangue periférico durante estágios iniciais de gestação; e (3) determinar a acurácia da detecção de animais não-gestantes através da avaliação da funcionalidade do corpo lúteo e da expressão de ISGs entre o 18º e 20º dia pós-IA. Para cumprir estes objetivos, vacas de corte terão o ciclo estral manipulado farmacologicamente e as ovulações sincronizadas para inseminação artificial em tempo fixo. As concentrações de progesterona, abundância de transcritos de genes estimulados pelo IFN-tau nas células imunes mononuclares do sangue periférico e o tamanho e fluxo sangúineo luteal serão mensurados entre o 8º e 30º dia pós-inseminação. A funcionalidade do corpo lúteo será determinada pelo tamanho e fluxo sangúineo do corpo lúteo através da ultrassonografia transretal e pelas concentrações de progesterona. Espera-se, estabelecer marcadores moleculares precoces e identificar características funcionais do corpo lúteo através da ultrassonografia que sejam eficazes em predizer precocemente o estado gestacional. O presente projeto de pesquisa científica objetiva contribuir significativamente para o desenvolvimento científico e tecnológico na área de fisiologia e biotecnologia aplicada a reprodução animal de fêmeas bovinas de corte. Dentro deste cenário, o projeto visa o desenvolvimento de conhecimento na área de fisiologia básica e aplicada que implicam na eficiência reprodutiva de vacas de corte criadas nas condições da produção pecuária brasileira. Desta maneira, o presente projeto objetiva, especificamente, realizar o diagnóstico precoce de gestação em vacas de corte da raça Nelore através da análise das mudanças na abundância de transcritos dos genes estimulados pelo interferon-tau em células imunes da circulação periférica, aliado a uma identificação precoce dos animais não-gestantes através da avaliação da funcionalidade do copro lúteo pela ultrassonografia transretal. Além de seu mérito científico, o desenvolvimento deste estudo possibilitará a qualificação de recursos humanos, através da participação indispensável de professores, pesquisadores, alunos de pós-graduação, iniciação científica e estagiários dos cursos de Medicina Veterinária e Zootecnia das instituições envolvidas.

O reconhecimento materno da gestação, entre os dias 15 e 19 pós-ovulação, estabelece um dos principais desafios biológicos para a obtenção de índices reprodutivos satisfatórios em bovinos. Entretanto, o método para diagnóstico da gestação mais utilizado atualmente nos sistemas de criação de gado de corte é através da ultrassonografia transretal entre o 28º e 40º dia pós-inseminação, o que impossibilita a identificação de vacas não-gestantes antes do retorno ao cio (em torno de 21 dias pós-ovulação). Com isso, se faz necessário métodos diagnósticos que possibilitem detectar os animais não-gestantes mais precocemente e assim reduzir o tempo entre inseminações. Desta maneira, o presente projeto objetiva: (1) identificar as características funcionais do corpo lúteo em vacas gestantes, não-gestantes, e com perda gestacional nos estágios inicias da gestação em vacas de corte Bos Indicus; e (2) determinar a acurácia da detecção de animais não-gestantes através da avaliação da funcionalidade do corpo lúteo entre o 18º e 20º dia pós-IA. Para cumprir estes objetivos, vacas de corte terão o ciclo estral manipulado farmacologicamente e as ovulações sincronizadas para inseminação artificial em tempo fixo. As concentrações plasmáticas de progesterona e o tamanho e fluxo sangúineo luteal serão mensurados entre o 8º e 30º dia pós-inseminação. A funcionalidade do corpo lúteo será determinada pelo tamanho e fluxo sangúineo do corpo lúteo através da ultrassonografia transretal e pelas concentrações de progesterona. Espera-se, identificar características funcionais do corpo lúteo através da ultrassonografia que sejam eficazes em predizer precocemente o estado gestacional em vacas de corte Bos Indicus.

Necessários aumentos na eficiência reprodutiva em bovinos dependem da compreensão dos mecanismos endócrinos, celulares e moleculares que resultam em maiores taxas de concepção. Recentes evidências indicam que a secreção de progesterona (P4) pelo corpo lúteo (CL) na fase inicial do diestro pode ser influenciada pelo tamanho do folículo ovulatório e possui um efeito signifivativo no desenvolvimento embrionário inicial e taxas de gestação em bovinos. Entretanto, não é conhecido os efeitos do crescimento folicular na função luteal e como a fertilidade é afetada pela manipulação do crescimento folicular para alterar o ambiente endócrino periovulatório. Desta maneira, o presente projeto objetiva (1) estudar como o crescimento do folículo pré-ovulatório afeta os mecanismos endócrinos, celulares e moleculares envolvidos na função luteal e (2) avaliar o efeito do ambiente endócrino peri-ovulatório na fertilidade de vacas inseminadas após a sincronização do estro e ovulação. No Experimento 1, o crescimento folicular será manipulado objetivando a avaliação da composição celular, expressão gênica e características ultrassonográficas de CLs originados de folículos pré-ovulatórios maiores ou menores. No Experimento 2, o ambiente endócrino peri-ovulatório será modulado através do crescimento folicular e da suplementação exógena de P4 para resultar em concentrações de P4 pós-ovulação mais altas ou mais baixas, e assim, permitir estudar seus efeitos sobre a fertilidade em vacas de corte. Espera-se, estabelecer um modelo experimental que eleve gradualmente as concentrações de P4 no início do diestro e permita identificar o efeito do crescimento folicular sobre a funcionalidade do CL, assim como identificar tratamentos hormonais que alterem o ambiente endócrino peri-ovulatório possibilitando a melhoria da fertilidade em bovinos de corte.

Necessários aumentos na eficiência reprodutiva em bovinos dependem da compreensão dos mecanismos endócrinos, celulares e moleculares que resultam em maiores taxas de concepção em vacas. A tese central do projeto é que há uma "assinatura molecular" associada com condições ótimas de receptividade maternal ao embrião. Tal assinatura se constitui em um padrão característico de abundância de moléculas de diversas naturezas bioquímicas. O Objetivo Geral é caracterizar e quantificar o conjunto de moléculas nos tecidos e fluidos maternos associados à receptividade. Para tanto, o transcriptoma, proteoma e lipidoma reprodutivo materno serão interrogados de forma holística pela abordagem de Biologia de Sistemas. No Experimento 1, a composição de lavados uterinos, biopsias endometriais e fluido folicular colhidos no dia 6 (D6) pós-inseminação será relacionada retrospectivamente ao sucesso gestacional, medido no D30 nos mesmos animais. No Experimento 2, o ambiente endócrino peri-ovulatório será modulado para resultar em concentrações de progesterona pós-estro mais altas (associadas com maior fertilidade) ou mais baixas. A composição de lavados e tecidos tubáricos e endometriais será comparada entre os grupos. Moléculas com distintas abundâncias entre os grupos definirão assinaturas moleculares associadas à maior ou menor probabilidade de sucesso gestacional; o posicionamento de tais moléculas em vias metabólicas permitirá a proposição de mecanismos potencialmente envolvidos com o controle do sucesso gestacional; ainda, tais moléculas poderão servir como marcadores prognósticos ou diagnósticos do sucesso gestacional. Novos conhecimentos embasarão o desenvolvimento de tecnologias. A exeqüibilidade será garantido pelo trabalho integrado de especialistas em cada etapa analítica e pela infra-estrutura das instituições envolvidas.

Projeto sob orientação do Prof. Giovanni R. de Carvalho, vinculado a duas dissertações de mestrado da UFV. O projeto visa avaliar a utilização a incorporação de colesterol na membrana plasmática do espermatozóide asinino, através do uso do carreador ciclodextrina. Será avaliada a viabilidade in vitro do sêmen, assim como a fertilidade in vivo através da taxa de concepção de éguas inseminadas após a ovulação.

Projeto constituinte de parte de experimento de mestrado.

projeto vinculado a UFV sob orientação do Prof. Giovanni R. de Carvalho destinado a confecção da dissertação de mestrado do aluno de pós-graduação da UFV Pedro Gama Ker. O projeto visou a determinação do melhor momento para realizar-se a inseminação de éguas mestiças Bretão-Polstier e éguas da raça Campolina utilizando-se sêmen congelado de Jumento da raça Pêga. Avaliou-se a taxa de concepção da inseminação pré e pós a ovluação.

O projeto objetivou avaliar a taxa de concepção de éguas da cavalaria da Plícia Militar do estado de minas gerais submetidas a dois regimes de inseminação artificial - um com a deposição do corpo do útero e outro depositando-se o sêmen no ápice do corno uterino.

O projeto visa a elaboração e avaliação de novos diluidores e dispositivos de envase seminal para melhorar os índices de sobrevivência espermático pós-descongelação e melhor fertilidade in vivo quando utilizadas em marrãs em granjas de melhoramento genético e comerciais.

Projeto realizado na Cavalaria de Policia de Belo Horizonte -MG junto ao Stor de Reprodução animal do Departamento de Clínica e Cirrurgia Veterinárias da Universidade Federal de minas Gerais, sendo parte constituindo de experimento de mestrado do estudande de pós-graduação Fernando Andrade Souza.