Pietro Ciancaglini.

Especialização em Ciências Forenses com ênfase em análises Laboratoriais (CURSO DE EXTENSÃO UNIVERSITÁRIA)

Acordos de Cooperação / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Fixação de Jovens Doutores - Projeto de Pesquisa - Regular - Chamada de Propostas (2023) (https://fapesp.br/16495/2a-chamada-fapespcnpq-programa-de-apoio-a-fixacao-de-jovens-doutores-no-brasil)

Projeto de colaboração Internacional França- Brasil (2023- 2027) 
IPCMS Strasbourg, CNRS (INP) ? Université de Strasbourg : LCMCP Paris, CNRS (INC) ? Sorbonne Université - Collège de France; UFRJ-Brasil; Depto. Química FFCLRP-USP; Laboratorio Nacional de Luz Sincrotron & Laboratorio Nacional de Nanotecnologia, Campinas

CNPq/MCTI/FNDCT n. 18/2021 Faixa B - Grupos Consolidados

Bolsas no Exterior (Doutorado e Pós-Doutorado)

Vesículas extracelulares (VEs) têm sido relacionadas a uma ampla gama de funções em desenvolvimento na imunologia, angiogênese e biologia de células-tronco, bem como à diversas patologias. As VEs são organelas bioativas que podem transportar informações genéticas, lipídios, proteínas e ácidos nucléicos entre as células, influenciando assim sobre diversas funções moleculares, como na sinalização e regulação da expressão gênica das células-alvo. Uma classe especial de VEs chamadas Vesículas da Matriz (MVs) são protagonistas em uma das teorias mais aceitas para a formação dos primeiros cristais de hidroxiapatita e propagação mineral para a formação óssea em vertebrados. Porém, ainda existem impotantes lacunas nesta teoria que necessitam ser investigadas, como: Qual o papel efetivo das vesículas no processo? Qual o papel das proteínas/enzimas que as compõem? Como as interações entre o colágeno e as proteínas/enzimas presentes nas vesículas podem ser responsáveis pela nucleação e consequente propagação da mineralização? Como estas interações regulam o processo de mineralização mediado por MVs? Como o pH e fosfo-substratos influenciam na formação e propagação dos cristais de hidroxiapatita mediados por MVs? Mediante tais questionamentos, o presente projeto visa isolar VEs com qualidade e quantidade suficiente para entender a natureza das interações entre vesículas nativas e proteínas osteogênicas. Modelos de membrana como proteolipossomos e monocamadas de Langmuir enriquecidos com proteínas importantes no processo de mineralização servirão para determinar em detalhes os mecanismos de formação de apatita e a função dessas proteínas durante o processo. O projeto é inovador e interdisciplinar, tendo como proponente e colaboradores pesquisadores das áreas de bioquímica, físico-química, farmácia e odontologia. Desta forma, será abrangido desde o estado da arte biofísica (reologia, fluidez), metodologias de instrumentos (Microscopia de força atômica acoplada a espectroscopia Raman aumentada por ponta (AFM-Tip Enhanced Raman Spectroscopy), microscopia TEM, BAM, microanálises de raios-X por energia dispersiva, RAMAN e SPR), metodologias bioquímicas (isolamento e caracterização de VEs nativas, produção de proteínas recombinantes), biologia celular (condrócitos primários, osteoblastos e osteoclastos), até funções e aplicações das VEs in vitro e in vivo utilizando sistemas miméticos de proteolipossomos na área de regeneração óssea. Detalhes altamente resolvidos sobre a natureza das interações entre VEs nativas ou proteolipossomos com proteínas importantes no processo de biomineralização poderão ser obtidos. A proposta de pesquisa fornecerá informações detalhadas de capacidade de mineralização das VEs, detalhando sua capacidade de nucleação, propagação, regeneração e ainda degradação (reabsorção). Outro ponto muito forte da proposta de pesquisa é o desenvolvimento de abordagens metodológicas que podem ser generalizadas para investigações de VEs. Poucos laboratórios no mundo focam suas pesquisas no descobrimento das funções dessas vesículas, tornando a proposta de pesquisa muito original. Vesículas modelo e nativas apresentam um grande potencial biotecnológico e poderão ser utilizadas para selecionar inibidores com o intuito de prevenir a calcificação patológica, bem como propiciar a regeneração/reabsorção óssea.

Projeto USP-COFECUB (Uc Sv 184/20) Matrix vesicles and proteoliposomes: Tools to determine mineralization mechanism and bone defects

O tecido ósseo é constituído por uma combinação de uma matriz de colágeno e uma matriz mineral, que é formada por cristais de fosfato de cálcio, sob a estrutura de hidroxiapatita. Este processo de acúmulo de mineral no tecido ósseo é denominado biomineralização e é realizado por células chamadas osteoblastos, por intermédio de liberação de vesículas da matriz (MVs). Estas vesículas surgem por brotamento das superfícies das células e são secretadas no local específico do início da biomineralização na matriz do tecido ósseo. MVs contém altas concentrações de íons Ca2+ e fosfato inorgânico (Pi), proporcionando um microambiente adequado para a formação inicial e propagação dos cristais de hidroxiapatita. Para que isso ocorra corretamente são necessárias várias proteínas/enzimas, bem como microambientes com condições bastante particulares. Uma atenção especial deve ser dada a algumas proteínas presentes nas MVs: Anexina V (AnxA5) e Anexina VI (AnxA6) e a Fosfatase Alcalina de tecido não especifica (TNAP). Dentre as anexinas, especificamente a AnxA5, uma proteína de ~35 kDa, é responsável pela formação de canais de cálcio através de sua associação tanto com a face externa quanto interna da membrana das MVs. AnxA6 é o maior membro da família das anexinas presentes nas MVs, com aproximadamente 68 kDa. Análises bioquímicas revelaram que a AnxA6 está presente em três regiões distintas nas MVs, indicando diversas funções durante o processo de mineralização. As anexinas também são responsáveis pela desorganização da membrana celular, que por sua vez resulta no processo de apoptose. A TNAP pertence a uma família multigênica que codifica diferentes formas dessa enzima, sendo que níveis elevados desta isoforma têm sido encontrados em membranas de osteoblastos durante a mineralização do tecido ósseo. No presente projeto pretendemos estudar especificamente a incorporação das proteínas AnxA5, AnxA6 e TNAP em lipossomos constituídos por diferentes composições lipídicas, mimetizando assim as MVs, Estes sistemas de proteolipossomos nos ajudarão a elucidar as diferenças estruturais das proteínas para assim correlacionarmos como as associações proteínas-lipossomos podem regular e/ou modular o processo de mineralização.

O tecido ósseo é constituído por uma combinação de uma matriz de colágeno e uma matriz mineral, que é formada por cristais de fosfato de cálcio, sob a estrutura de hidroxiapatita. Este processo de acúmulo de mineral no tecido ósseo é denominado biomineralização e é realizado por células chamadas osteoblastos, por intermédio de liberação de vesículas da matriz (MVs). Estas vesículas surgem por brotamento das superfícies das células e são secretadas no local específico do início da biomineralização na matriz do tecido ósseo. MVs contém altas concentrações de íons Ca2+ e fosfato inorgânico (Pi), proporcionando um microambiente adequado para a formação inicial e propagação dos cristais de hidroxiapatita. Para que isso ocorra corretamente são necessárias varias proteínas/enzimas, bem como microambientes com condições bastante particulares. Uma atenção especial deve ser dada a algumas proteínas presentes nas MVs: Anexina V (AnxA5), fosfatase alcalina (TNAP) e nucleosídeo trifosfato difosfohidrolase 1 (NPP1). Tais proteínas regulam a formação de cristais de fosfato de cálcio, atuando assim diretamente no processo de mineralização óssea. Dentre as anexinas, especificamente a Anexina V, uma proteína de ~35 kDa, é responsável pela formação de canais de cálcio através de sua associação tanto com a face externa quanto interna da membrana das MVs. As anexinas também são responsáveis pela desorganização da membrana celular, que por sua vez resulta no processo de apoptose. A TNAP é uma fosfomonohidrolase inespecífica, capaz de hidrolisar monoésteres de fosfato, pirofosfato, diésteres de fosfato, bem como catalisar reações de transfosforilação. Está inserida à membrana plasmática das MVs por uma âncora de glicosilfosfatidilinositol (GPI) e é denominada ?alcalina? por sua habilidade de efetuar estas reações de hidrólises de substratos mais eficientemente em pH acima do neutro (pH 8-11). Além disso, a TNAP tem um papel crucial em limitar a concentração de pirofosfato inorgânico extracelular (ePPi), um potente inibidor da mineralização, para manter uma razão Pi/PPi adequada para a mineralização óssea normal. A função primária da TNAP é degradar o ePPi, que é produzido ectoplasmicamente pela NPP1. Assim, a NPP1 tem a função de inibir a precipitação de hidroxiapatita por sua propriedade de geração de PPi, controlando a razão Pi/PPi. No presente projeto pretendemos estudar especificamente o envolvimento da proteína AnxA5 e da enzima NPP1, ambas reconstituídas em lipossomos, com o objetivo de formarmos sistemas miméticos de MVs e estudarmos como estas associações podem regular e/ou modular o processo de mineralização mediado por estas vesículas. Cabe destacar que é sempre dado um papel secundário a NPP1 (a TNAP que tem o papel principal) e deste modo pretendemos desvendar a verdadeira função desta enzima no processo de biomineralização.

Projeto Universal CNPq

Projeto de 3 anos - Professor Visitante Especial

Projeto Individual a FAPESP

Projeto de Cooperação Internacional - Argentina, Brasil, Chile e Cuba

Nanobiotecnológica aplicada à osteogênese: uso de compósitos baseados em estruturas de carbono para o estimulo da biomineralização

Acelerar o porcesso de mineralização biológica

Projeto individual a Pesquisa - (FAPESP Processo No 2009/17407-0 no valor de R$ 80.193,00 + US$ 49.800,00 e Reserva técnica R$ 24.093,00. + Aditivo 14392,15 US$ e 38.885,85 Reais.

10.5.26	Coordenador da equipe Associada II do projeto (projeto 10) aprovado no âmbito do edital Rede Nanobiotec-Brasil: ?Desenvolvimento nanobiotecnológico de produtos (prevenção, tratamento e diagnóstico) para o combate de doenças negligenciadas com especial ênfase em Leishmaniose e Malaria?. Valor Total aprovado para 4 anos R$: 2.392.480,00 sob a coordenação geral do Prof. Dr. Rodrigo Guerino Satbeli.

Coordenador da equipe Associada III do projeto (Projeto 27) aprovado no âmbito do edital Rede Nanobiotec-Brasil: ?Avanços, Benefícios e Riscos da Nanobiotecnologia Aplicada à Saúde?. Valor Total aprovado para 4 anos R$: 2.400.000,00 sob a coordenação geral da Profa. Dra. Yvone Primerano Mascarenhas.

GENOPROT 07/2007

Edital MCT/CNPq Nº 014/2008 ? Universal (Processo No 472768/2008-5) no valor de R$ 15.992,00.

Projeto Pesquisa de MEstrado

Projeto de Mestrado

Projeto individual a pesquisa: 01/12/2006 a 30/11/2008 - (FAPESP Processo No 2006/03936-3 no valor de R$ 32.200,00 + US$ 91.859,88 + US$ 48.174,00 (ADITIVO 09/02/2007) e Reserva técnica R$ 30.096,87 + R$ 33.069,55 + R$ 16.258,73 (ADITIVO 14/02/2007) reserva p/ pagamento de despesas de importação).

Projeto de Doutoramento

Projeto de Doutoramento