Eduardo Melani Rocha.

A Síndrome de Sjögren primária (SSp) afeta a superfície ocular, a saúde bucal, e possui manifestações sistêmicas, inclusive neuropatias, independente de outras doenças. As causas e mecanismos fisiopatológicos são pouco compreendidos. Pela frequência da SSp na população e pelas dificuldades no diagnóstico e no tratamento dos casos refratários, informações das influências ambientais, da fisiopatologia e do potencial terapêutico de colírio com sistemas de liberação com insulina (INS) e canabidiol (CBD) justificam esse estudo. 
As hipótese são que 1) a exposição ambiental a desreguladores endócrinos (DE), presentes como contaminantes ambientais no dia-a-dia, produzem desequilíbrio hormonal e seriam marcadores diagnósticos da SSp, 2) que o desvio no metabolismo do triptofano têm papel pró-inflamatório na via das quinureninas e nas manifestações clínicas e neurológicas; e por fim que 3) O uso tópico ocular de INS e CBD terão benefício terapêutico em estudo caso-controle. 
Os objetivos gerais são investigar marcadores diagnósticos, potencialmente envolvidos na fisiopatologia e testar alternativas terapêuticas para a SS, incluindo nanoemulssões de insulina e de CBD

Estudo em modelos animais e cultura de células epiteliais da córnea, das respostas anti-inflamatórias e proliferativas do canabidiol e da insulina.

Projeto Jovem Pesquisador da Profa. Dra. Monica Alves, 
2014/19138-5

Projeto Temático liderado pela Profa. Dra. Renata Vianna Lopez, da FCFRP, processo 2014/22451-7 Auxílio Pesquisa - Projeto Temático. 
Atua como pesquisador principal

As doenças oculares possuem alta prevalência e grande impacto na qualidade de vida. Desde o olho seco até as degenerações de retina, passando pelas doenças da superfície ocular, glaucoma e catarata, quase todas tiveram um aumento substancial no conhecimento relativo a epidemiologia e fisiopatologia nas últimas décadas, além da aquisição de um vasto arsenal terapêutico, porém muitas vezes paliativo e de uso repetido. Nesse contexto, os limites impostos para obter maior compreensão dos mecanismos e passar de tratamentos crônicos para intervenções efetivas de correção chegaram a medicina molecular e a transferência gênica. Essas ferramentas associadas permitem identificar moléculas em falta ou excesso nos indivíduos acometidos e até mesmo nos órgãos ou linhagens celulares e através da transferência gênica, induzir a produção de proteínas em falta ou reparadoras. 
Para melhor compreender o potencial terapêutico dessas ferramentas nas doenças oculares, esse projeto se propõe a investigar em modelos de cultura celular e animais experimentais, a identificação de proteínas a serem manipuladas e a resposta estrutural e funcional da sua transferência gênica. O modelo de doença para estudo será o olho seco e suas repercussões sobre a córnea. O objetivo especifico é investigar estratégias promover a transdução de genes para a glândula lacrimal (GL) com potencial de serem acompanhados, através de vetores virais e observar seu destino, qual seja a secreção via sanguínea, lacrimal ou acumulo na GL e suas repercussões celulares e funcionais. 
Para tanto, técnicas de clonagem molecular de vetores, exame ocular, western blot, ELISA e histologia serão usadas.

Doenças da córnea estão entre as principais causas de cegueira e os mecanismos de lesão e reparação estão em grande parte concentradas no epitélio, porém os mediadores-alvo para possíveis intervenções terapêuticas são desconhecidas. No epitélio da córnea, a cicatrização é prejudicada pelas ativação do receptor de potencial transitório vanilóide 1 (TRPV1). Na comparação entre a cicatrização de córnea em camundongo sem esse receptor (TRPV1-/-) e controle, os TRPV1-/- tem o resultado de cicatrização muito melhor. Isso indica que nas lesões do epitélio da córnea, a formação de metabólitos endógenos, ativam os canais TRPV1, contribuindo para a inflamação exagerada que atrasa ou impede o fechamento da ferida e prejudica a restauração da transparência da córnea. 
Nossa hipótese geral é que o TRPV1, module a liberação de mediadores inflamatórios, interagindo com receptor canabinóide (CB1) e o receptor do fator de necrose tumoral-alfa (TNFαR) através da ativação do transforming growth factor activated kinase 1 (TAK1) e a interação entre essas vias promova o equilíbrio na resposta inflamatória frente a uma agressão ao epitélio da córnea. 
Para avaliar isso, o nosso objetivo é identificar os mecanismos de sinalização envolvidos na resposta inflamatória e proliferativa em células epiteliais da córnea. 
Técnicas de cultivo de células epiteliais de córnea, dosagens de citocinas por ELISA após estímulo inflamatório, e "Western blot" para identificação e comparação da expressão dos receptores TRPV1, TNFαR, CB1 e ativação (fosforilação) de TAK1 sob o estimulo de agonistas ou antagonistas dos respectivos receptores. Os resultados permitirão identificar as vias de sinalização envolvidas, a interação entre elas e assim propor estratégias de modulação com potencial terapêutico dessas vias em situações patológicas como defeito epitelial persistente, inflamação excessiva ou processos auto-imunes.

Projeto de Auxilio a Pesquisa FAPESP: 2011/06013-1 e bolsa de pos-doc 2010/50470-5.
Resumo: Uma série de doenças com mecanismos fisiopatológicos e aspectos epidemiológicos distintos levam a olho seco, que por sua vez é reconhecido como uma das doenças mais freqüentes no mundo todo, capaz de reduzir a visão e colocar em risco a integridade ocular em casos graves. Por outro lado, um sinal ou exame que se apresente como denominador comum no diagnóstico de olho seco e apresente correlação com sintomas continua não existindo na pratica ou estudos clínicos. 
O presente estudo pretende avaliar exames clínicos, questionário dirigido a sintomas, citologia da córnea e a osmolaridade do filme lacrimal em portadores de olho seco relacionados a condições diversas, tais como síndrome de Sjögren, Diabetes Mellitus (DM), GVHD (graft versus host disease ou doença do enxerto contra o hospedeiro) e toxicidade relacionada a uso crônico de medicações anti-glaucomatosas. Para isso, dados epidemiológicos, oculares e amostras de lágrima serão colhidas entre pacientes e indivíduos saudáveis (controles). Essa análise permitirá identificar a associação entre os diversos exames do filme lacrimal em diferentes doenças que causam olho seco, e identificar um possível marcador para diagnóstico comum, bem como o valor de corte desse exame que melhor separa saudáveis de doentes (?cut-off?) comparado ao estadiamento clínico de olho seco e a possível coincidência desse valor nas diferentes doenças.

Projeto de Auxilio a Pesquisa Universal CNPq 476589/2009-6, Bolsa Novas Fronteiras FAPESP 2009/05253-9, para estudo em colaboração com o NIH e bolsa de pos-doc FAPESP 2010/50470-5.
Rsumo: Sjögren?s Syndrome (SS) leads to mucosal and skin dryness as consequence of exocrine glands dysfunction. Oxidative stress takes part in the mechanism of the disease and therefore antioxidant enzymes would be useful as preventive or therapeutical strategy. Although peroxidase superfamily enzymes are being used as biomarkers of tears expression and action, the specific role of different peroxidases was never explored in SS. The aim of this study is three fold a) to explore the role of oxidative stress in lacrimal (LG) and salivary glands (SG) of a mouse model of SS; b) to identify and distinguish the members of peroxidase superfamily in those tissues; c) and to evaluate the capacity to interfere in the tissue health and function modulating their expression with techniques of RNA interference and gene therapy. The main outcomes will be LG, SG histological biochemical and functional responses. 
	The contributions of this work will be the improvement of the understanding the role of oxidative stress and peroxidase enzymes to the physiopathological mechanisms of SS and the potential utility of these molecular tools and peroxidase as a target in future therapeutic strategies.

Bolsa FAPESP de IC: 2008/53913-5 e bolsa PIBIC?CNPq: O objetivo desse estudo foi reunir e avaliar de maneira sistemática e crítica a tendência atual em tratamento, relacionadas ao olho seco e doenças da superfície ocular. Isso será viabilizado através da busca de dados de patentes dos últimos 10 anos (1998 a 2008), utilizando bancos de dados digitais de domínio público na rede mundial de computadores, com palavra-chave de busca - Superfície Ocular ou sua equivalente em inglês Ocular Surface e olho seco ou seu equivalente dry eye.

O presente estudo irá investigar a morfologia das glândulas lacrimais, e superfície ocular além do funcionamento da secreção lacrimal de ratos em resposta a ablação, regeneração e enxerto livre da glândula lacrimal. 
Para isso ratos adultos jovens serão submetidos a remoção da glândula lacrimal do lado direito (grupo 1), ou da denervação desse órgão (grupo 2), ou ainda da remoção seguida de enxerto livre do órgão alógeno no mesmo sitio (grupo 3). No período entre uma semana e 2 meses, os dados de secreção serão comparados com o lado contra-lateral. Os tecidos serão removidos para avaliação histológica e molecular de proliferação tecidual, morte celular e inflamação. 
A partir da análise dos dados pretendemos determinar os parâmetros de regeneração tecidual, tolerância ao enxerto e capacidade de readaptação ao dano tecidual.

Projeto FAPESP 2005/59766-6, Projeto CNPq: 480818/2007-0, Bolsa CNPq PQ: 305562/2006-1. Resumo: o nosso objetivo foi estabelecer uma linhagem de cultura de células acinares de GL de rato e promover variações das condições de cultivo, estimulos secretórios positivos e negativos para avaliar oefeito na secreção de insulina e outras substâncias presentes na secreção lacrimal. Para isso, técnicas de cultivo de células acinares de GL, dosagens por ELISA, RIE, "Western blot" e RT-PCR serão aplicadas nas comparações. Os resultados permitiram identificar a viabilidade dessas células em cultura, a magnitude dos estímulos positivos e negativos para os fatores investigados e assim estabelecer estratégias de modulação da secreção desses fatores em situações patológicas.

O presente estudo investigou as alterações do filme lacrimal e superfície ocular por drogas anti-glaucomatosas. Para isso, dados epidemiológicos, oculares e amostras de lagrima e citologia de impressão foram colhidos entre pacientes com diferentes medicações e controles. Essa análise permitiu identificar a associação entre olho seco e tratamento anti-glaucomatoso, as drogas com maior potencial adverso e as repercussões na saúde ocular do glaucomatoso.

As ceratites fungicas vêm cada vez mais se tornando responsáveis por comprometimento visual. A etiologia implicada parece variar de acordo com a localização geográfica e o período do ano de sua apresentação. Esta patologia esta mais freqüentemente presente em paises em desenvolvimento. Os fatores em paises subdesenvolvidos risco mais comuns são trauma, dentre eles o vegetal. Quanto ao agente etiológico há também variação geográfica. Esse estudo procura compreender a epidemiologia e desdobramentos da ceratite fúngica.

O estudo investigou o maquinário secretor das glândulas lacrimais de ratos Wistar e o impacto do Diabetes Mellitus (DM) e da insulina nos aspectos bioquímicos e estruturais dessa secreção. Para isso, animais adultos submetidos ao DM com estreptozotocina e após 5 e 10 semanas foram observados na estrutura histológica da GL, foi feita a dosagem de neurotransmissores e dos grânulos de secreção por microscopia eletrônica, a expressão, localização de elementos da SNARE e a avaliação da ativação desses elementos diante estímulos secretores.
A partir da análise dos dados procuramos determinar os parâmetros alterados pelo DM , o paple da insulina e assim avaliar estratégias para reverter essas alterações.

Projeto FAPESP: 2003/04459-6, Bolsa de Apoio técnico CNPq 504528/2003-3, bolsa de IC CNPq 501453/2004-0 e bolsa de PQ CNPq 305123/2003-3. A disfunção lacrimal no Diabetes Mellitus (DM) pode ocorrer através da diminuição do conteúdo de substâncias na lágrima e/ou mecanismos desencadeados pela hiperglicemia, levando a perturbação da sinalização intra-celular. O objetivo desse projeto é conhecer as interações da insulina com a glândula lacrimal (GL) e superfície ocular (SO) e os mecanismos moleculares relacionados a disfunção lacrimal no DM. As hipóteses do presente estudo são que (1) a superfície ocular recebe insulina através da secreção lacrimal e sua concentração é regulada por fatores locais e sistêmicos; (2) a hiperglicemia crônica associada ao DM interfere na qualidade da lágrima, na secreção lacrimal de insulina, no acúmulo deprodutos finais de glicosilação avançada (AGEs) em GL e SO e produz distúrbios na sinalização da insulina como o aumento na atividade de NF-kB. Por serem pouco compreendidos os mecanismos de secreção desse hormônio na SO e os fenômenos pelos quais o DM acarreta alterações da SO e olho seco, esperamos trazer informações que contribuam para melhorar esse entendimento e aprimorar o arsenal terapêutico para o olho seco e doenças da superfície ocular.

Bolsa de IC para aluna Suzana C. Leite. processo Fapesp: 2003/11547-9 e Projeto Universal CNPQ 478342/2003-9. Oprojeto caracterizou as alterações oculares presentes em pacientes submetidos ao transplante de células progenitoras hematopoiéticas (TCPH), entre elas a catarata, a retinopatia e o olho seco. As hipóteses desse estudo são: a) fatores prognósticos relacionados ao