Ana Carolina Japur de Sá Rosa e Silva.

Este projeto tem por objetivo avaliar o impacto da administração do CXCL12 no útero de camundongos com endometriose nas vias de ativação da progesterona no endométrio e as taxas de gestação. Para tal propósito será utilizado um modelo experimental em murinos, onde os animais serão divididos em dois grupos para serem submetidos ou não à indução cirúrgica de endometriose ou sham. Posteriormente, tanto o grupo com endometriose quanto o grupo sham serão subdivididos para receber CXCL12 através de injeções na parede uterina (CXi) durante laparotomia ou flush vaginal (CXv), ou placebo. Após administração de CXCL12 ou placebo, os animais serão colocados para acasalamento, onde serão avaliados posteriormente os desfechos reprodutivos (taxas de gestação, tempo para o nascimento e tamanho da ninhada), e em seguida será realizada eutanásia a fim de avaliar a expressão gênica dos genes PGR, NR3C3 e PGRMC através da técnica de PCR.

OBJETIVOS
-Identificar a prevalência das disfunções sexuais femininas específicas (disfunção de desejo, disfunção de excitação, disfunção orgástica e dor coital) em mulheres atendidas no Ambulatório Especializado em Sexualidade (AESH) do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto no período de 2004 a 2015.
-Identificar fatores associados a ocorrência de eventuais disfunções

Neste estudo objetiva-se avaliar o desenvolvimento dos folículos pré-antrais inclusos em tecido ovariano e de folículos secundários isolados de ovários bovinos no cultivo in vitro em diferentes sistema de cultivo 3D, sendo eles de nanopartículas associadas a levitação magnética, matriz de alginato e matriz de fibrina-alginato, avaliando-se o desenvolvimento folicular, recuperação de complexos cumulus ovócito e respiração do tecido cultivado.

Este estudo propõe realizar um screening de 43 genes relacionados ao desenvolvimento da capacidade oócitária em células derivadas de folículos secundários e pré-antrais cultivadas em cultivo tridimensional in vitro comparando-as com aquelas que se desenvolveram in vivo.

Este estudo pretende comparar a indução de ovulação em pacientes más respondedoras submetidas a Reprodução Assistida com protocolo convencional ou estimulação mínima, em relação à custo-efetividade.

This project aims to investigate the impact of CXCL12, a stem cell chemotaxic substance, and of its antagonist (the ADM3100), in BMDSCs trafficking, in endometrial receptivity molecules and in implantation rates in a mice model of endometriosis.

Propor um modelo de predição de risco de infertilidade das pacientes que foram submetidas a tratamento quimioterápico para câncer hematológico durante o período reprodutivo, adolescência e infância, a fim de nortear a tomada de decisão na indicação dos procedimentos para preservação de fertilidade.

OBJETIVO 

-Comparar a viabilidade do tecido ovariano murino vitrificado por três diferentes protocolos de vitrificação. E verificar a eficiência do sistema OTC (Ovarian Tissue Cryosystem) na conservação do tecido ovariano em comparação com o sistema convencional, avaliando-se a taxa de formação de antro a partir de folículos cultivados (diferenças maiores que 10% serão consideradas como clinicamente relevantes).

-Avaliar a morfologia, a viabilidade, crescimento, formação de antro, recuperação de oócitos, capacidade de maturação in vitro de oócitos recuperados e produção de estradiol de folículos pré-antrais após cultivo in vitro de tecido ovariano previamente vitrificado;
-Avaliar morfologia e a viabilidade do tecido ovariano vitrificado, bem como a formação de fibrose, após o transplante do tecido em camundongos receptores, através de análise histológica em coloração com HE e análise de proliferação celular por imunomarcação para Ki-67.

Objetivo geral
Avaliar o impacto da utilização do meio de cultivo e da técnica de vitrificação de folículos pré-antrais bovinos isolados na qualidade e competência dos oócitos recuperados.

Objetivos específicos
I.	Avaliar a expressão gênica de oócitos e da parede folicular obtidos de folículos frescos e criopreservados que não apresentaram crescimento significativo.
II.	Avaliar a expressão gênica de oócitos e da parede folicular obtidos de folículos frescos e criopreservados que apresentaram crescimento significativo.
III.	Avaliar o estágio meiótico dos oócitos recuperados de folículos frescos e criopreservados que apresentaram crescimento lento.
IV.	Avaliar o estágio meiótico dos oócitos recuperados de folículos frescos e criopreservados que apresentaram crescimento rápido.

Objetivo geral
Analisar a influência do hormônio de crescimento (GH) em mulheres más respondedoras submetidas a ciclos de Reprodução Assistida com relação ao número e qualidade dos oócitos captados, bem como a expressão gênica de marcadores moleculares envolvidos no processo de maturação oocitária expresso nas células do cumulus.

Objetivos específicos
?	Analisar comparativamente as taxas de fertilização, qualidade oocitária e embrionária entre as pacientes;
?	Avaliar comparativamente a expressão dos genes P450 aromatase (CYP19A1), Prostaglandin synthase 2 (PTGS2) e o gene para receptor de LH (LHR) nas células do cumulus correlacionando com as vias nas quais o GH possa estar envolvido.

Objetivo Geral
Este projeto se propõe a identificar e localizar fatores supressores e ativadores da transição de folículos primordiais para primários em tecido ovariano bovino.

Objetivos Específicos 
Serão objetivos específicos deste estudo: 
a)	Identificação e localização de substâncias supressoras da transição de folículos primordiais para primários: Foxo3a e PTEN, em tecido ovariano bovino através de marcação imunohistoquímica. 
b)	Identificação e localização de substâncias ativadoras da transição de folículos primordiais para primários: mTORC1, LIF, GDF-9 e BMP-15, em tecido ovariano bovino através de marcação imunohistoquímica.

Objetivos Gerais 
- Analisar a possível influência do processo de maturação no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento folicular e a aquisição da competência oocitária em bovino.
- Analisar a possível influência do processo de vitrificação no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento folicular e a aquisição da competência oocitária em bovino.

Objetivos Específicos
- Avaliar a influência da maturação in vitro dos oócitos bovinos na expressão de genes relacionados a:
	a. desenvolvimento folicular e competência ovariana
	b. metabolismo celular
	c. ciclo celular e organização do citoesqueleto
	d. regulação da transcrição
	d. receptores de superfície e proteínas transmembrana
	e. moléculas de adesão, proteínas de zona pelúcida
	f. fatores de crescimento e de sinalização celular
	g. fatores de adaptação ao estresse, de resposta imune e apoptose
- Avaliar a influência da vitrificação dos oócitos bovinos na expressão dos grupos de genes citados acima (a-g).

Objetivo Geral
Considerando os dados apresentados, este projeto se propõe a desenvolver um sistema de cultivo in vitro capaz de garantir o crescimento completo de folículos pré-antrais para obtenção de oócitos fertilizáveis a partir de biópsias criopreservadas de fragmentos de tecido ovariano bovino. 

Objetivos Específicos 

1. Para a caracterização da funcionalidade dos folículos ovarianos serão avaliados:

a) Diâmetro folicular e oocitário durante o cultivo dos folículos isolados em meio tridimensional;
b) A produção de hormônios esteróides pelas células foliculares somáticas durante o cultivo dos folículos isolados;
c) A viabilidade e maturidade oocitária após a maturação in vitro (MIV) dos oócitos obtidos dos folículos cultivados;
d) O potencial de desenvolvimento embrionário após fertilização in vitro (FIV) dos oócitos obtidos dos folículos cultivados;

Objetivo Geral: 
-Avaliar o impacto do acréscimo de fosfolipídio ao meio de maturação in vitro de oócitos bovinos na criotolerância e competência oocitária para o desenvolvimento embrionário precoce.

Objetivos Específicos: 
-Avaliar os efeitos da suplementação do meio de maturação in vitro com fosfolipídio na resistência ao congelamento dos oócitos vitrificados através da avaliação das taxas de clivagem, formação de blastocisto e eclosão dos embriões resultantes cultivados in vitro.
 - Determinar se a suplementação do meio de maturação in vitro com fosfolipídio altera a expressão dos genes DNMT3A, SLC2A1 e IGFR2 nos embriões obtidos após a fertilização in vitro dos oócitos suplementados.

Objetivo geral
Este trabalho tem como objetivo implementar a técnica de criopreservação de células de granulosa humana obtidas em procedimentos de Reprodução Assistida para posterior aplicação como suporte para co-cultivo de folículos e oócitos imaturos, tendo em vista a otimização e a segurança dos processos de co-cultivo aplicados na rotina da prática assistencial. E avaliar o impacto da criopreservação na viabilidade e função das células da granulosa. 

Objetivos específicos:
?	Verificar se a técnica de congelamento lento de acordo com o protocolo descrito por Tirelli et al. (2005) se aplica para criopreservação de granulosa humana. 
?	Avaliar o impacto da criopreservação de células da granulosa humana sobre a viabilidade celular através da semeadura e cultivo de células descongeladas e análise por técnica de Azul de Tripan após 192 horas.
?	Avaliar o impacto da criopreservação de células da granulosa humana sobre a função celular através da semeadura e cultivo de células descongeladas e posterior dosagem de hormônios esteroides (estradiol e progesterona) produzidos no meio de cultivo por técnica de quimioluminescência.

OBJETIVO GERAL
1.	Determinar os parâmetros quantitativos do escore de birrefringência da zona pelúcida em oócitos bovinos maturados in vitro e avaliar sua correlação a ultraestrutura da mesma e com a qualidade oocitária.
2.	Caracterizar detalhadamente a ultraestrutura da zona pelúcida de oócitos bovinos frescos maturados in vitro e comparar com oócitos submetidos ao processo de vitrificação para fins de preservação de fertilidade. 


OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1.	Determinar os parâmetros quantitativos do escore de birrefringência da zona pelúcida em oócitos bovinos maturados in vitro e sua correlação com qualidade oocitária, avaliado pelas taxas de fertilização, clivagem, formação e eclosão de blatocisto após ativação partenogenética, visando a potencial aplicação da microscopia de polarização (OCTAX polarAIDE) na reprodução humana.
2.	Correlacionar os parâmetros quantitativos do escore de birrefringência da zona pelúcida em oócitos bovinos maturados in vitro medidos pela microscopia de polarização (OCTAX polarAIDE) com as características ultraestruturais da zona pelúcida avaliada pela microscopia eletrônica de transmissão.
3.	Descrever detalhadamente a ultraestrutura da zona pelúcida de oócitos bovinos frescos maturados in vitro analisado por microscopia eletrônica de transmissão. 
4.	Comparar a ultraestrutura da zona pelúcida de oócitos bovinos frescos maturados in vitro analisado por microscopia eletrônica de transmissão com a de oócitos submetidos a vitrificação-desvitrificação para fins de preservação de fertilidade.

OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito das gonadotrofinas e dos andrógenos no desenvolvimento de folículos pré-antrais bovinos cultivados em sistema tridimensional. 

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
-Verificar o efeito do FSH isoladamente ou em associação com o LH na viabilidade e crescimento folicular; produção de esteróides; maturidade oocitária e desenvolvimento embrionário.
-Estabelecer o melhor estágio (fase inicial ou fase pós-formação de antro) para a adição do LH.
-Verificar o efeito da androstenediona isoladamente ou em associação com as gonadotrofinas na viabilidade e crescimento folicular; produção de esteróides; maturidade oocitária e desenvolvimento embrionário.
-Estabelecer o melhor estágio (fase inicial ou fase pós-formação de antro) para a adição da androstenediona.

Neste projeto objetiva-se avaliar o impacto da vitrificação sobre a zona pelúcida de oócitos bovinos, uma vez que esta parece ser uma estrutura bastante prejudicada pela vitrificação. 
Para tal foram propostas duas etapas: 
A.	Determinação dos parâmetros quantitativos da birrefringência da zona pelúcida de oócitos maturados in vitro e sua correlação com qualidade oocitária, utilizando o bovino como modelo experimental.
Nesta etapa pretende-se padronizar as características da zona pelúcida de oócitos bovinos submetidos a MIV, inclusive para definir parâmetros de normalidade das variáveis numéricas referentes à birrefringência da zona obtidos pela análise por microscopia de polarização e avaliando-se a ultra-estrutura através de microscopia eletrônica. Como padrão ouro será utilizada a taxa de formação de blastocisto. 
B.	Avaliação do impacto da vitrificação sobre os parâmetros quantitativos da birrefringência e sobre a ultra-estrutura da zona pelúcida de oócitos bovinos. 
Nesta etapa serão analisados os efeitos da vitrifcação sobre a zona pelúcida tendo como parâmetros de normalidade os dados da etapa anterior.

Este projeto tem pro objetivo avaliar o efeito da suplementação dos meios convencionais para MIV de bovino e posteriormente os meios de vitrificação para congelamento de oócitos bovinos com fosfatidilcolina, com o objetivo de melhorar a integridade e resistência da membrana plasmática (bicamada fosfolipídica) durante estes processos. 
Para tal este projeto foi subdividido em 4 etapas:
A.	Avaliação do efeito da suplementação de fosfolipídio nos meios de maturação in vitro(MIV) e de produção de embriões in vitro (PIV) na composição lipídica de oócitos e embriões. 
Nesta etapa grupos de MIV e PIV com e sem a suplemtação de fosfatidilcolina tiveram seus oócitos avaliados através de técnicas de lipidômica por espectofotometria. 
B.	Avaliação do efeito da suplementação de fosfolipídio nos meios de vitrificação de oócitos. 
Nesta etapa os oócitos serão vitrificados em meio com e sem a adição de fosfatidilcolina em diferentes concentrações para verificar se há melhora da qualidade dos oócitos recuperados pós desvitrificação. Esta avaliação será feita através da análise das taxas de fertilização, clivagem e formação de blastocistos. Além disso serão avaliados alguns marcadores de qualidade embrionária por PCR real time (ainda a ser definido).

O cultivo de folículos em matriz tridimensional parece ser a solução para o problema dos cultivos destas estruturas, uma vez que permite a manutenção de sua característica circular sem espalhamento sobre a placa. Apesar deste experimento ter como finalidade o cultivo de folículos humanos, devido a raridade do material humano optamos por desenvolver a metodologia (já existente na literatura) em nossos laboratórios para ajustes locais utilizando-se de tecido ovariano e folículos bovinos. Portanot este projeto foi dividido em duas etapas: 
A.	Cultivo in vitro de folículos ovarianos bovino a partir de biópsias de tecido fresco e criopreservado de bovino.
Nesta etapa propõe-se a padronização e ajustes da técnica para cultivo em nossos laboratórios. Os testes deverão ser feitos em tecido/folículos frescos e descongelados, com folículos secundários inicialmente. Serão avaliados: 
A1. Produção de esteróides no meio de cultivo e Hormônio anti-mulleriano, crescimento dos folículos, formação de antro e se possível FIV. 
ANDAMENTO: a padronização da técnica e ajustes já foram concluídos, atualmente temos folículos já cavitados (antro) com 55 dias de cultivo sem contaminação (em seguimento), de tecidos fresco e descongelado. Várias novas baterias serão inicadas. 
B.	Cultivo de folículos ovarianos humanos extraídos de tecido ovariano crioprservado. 
O mesmo será realizado com tecido ovariano humano com amostras do bando de tecido ovariano do HC-FMRP (amostras doadas para pesquisa).

É sabido que os níveis estrogênicos no meio de cultivo estão diretamente relacionados com qualidade oócitária, também é conhecido que oócitos maturados in vitro produzem menor quantidade de estradiol. Neste projeto avaliou-se o efeito da suplementação de androstenediona no meio de MIV a fim de melhorar a produção de estradiol in vitro e melhorar a qualidade do oócito maturado e aumentar taxa de formação de blastocisto.

O objetivo deste estudo é verificar o estágio de maturação, a presença e posição do fuso meiótico em relação ao primeiro corpúsculo polar de oócitos obtidos de ciclos induzidos de pacientes inférteis analisados imediatamente antes da realização da ICSI e comparar com a formação de embriões de boa qualidade . Mais especificamente pretende-se avaliar a taxa de fertilização e clivagem dos oócitos de pacientes inférteis submetidas aos procedimentos de ICSI e o número de embriões de boa qualidade formados no dia 2 do desenvolvimento embrionário in vitro.

Objetivo geral: Avaliar a qualidade do tecido ovariano criopreservado considerando-se o índice de apoptose, índice de proliferação celular e índice de homeostase tecidual, comparando o tecido fresco com o criopreservado após 30 e 180 dias do descongelamento, a fim de verificar a influência do tempo de congelamento nesta viabilidade.
Objetivos específicos:
a) Avaliar a qualidade do tecido ovariano, antes do congelamento e após 30 e 180 dias do descongelamento, de acordo com:
?	Contagem do número de folículos através da análise histológica pela técnica de coloração com Hematoxilina e Eosina (HE);
?	Avaliação imunohistoquímica do índice de marcação imunorreativa, para positividade na coloração celular unicamente nuclear, com o anticorpo primário para PCNA para verificação de proliferação celular (Novocastra®, NCL ? PCNA (clone PC 10 at 1:100);
?	Avaliação imunohistoquímica do índice de marcação imunorreativa, para positividade na coloração celular citoplasmática e perinuclear, com o anticorpo primário para CASPASE-3 para verificação de apoptose celular (Novocastra®, NCL ? CPP32 (clone JHM62 at 1:300).
?	Cálculo do Índice de Homeostase Tecidual utilizando os índices de proliferação celular e apoptose. 
b) Avaliar a qualidade do tecido ovariano CULTIVADO após o descongelamento, comparando-o com o tecido fresco não cultivado, de acordo com:
?	Contagem do número de folículos através da análise histológica pela técnica de coloração com Hematoxilina e Eosina (HE);
?	Avaliação imunohistoquímica do índice de marcação imunorreativa, para positividade na coloração celular unicamente nuclear, com o anticorpo primário para PCNA para verificação de proliferação celular (Novocastra®, NCL ? PCNA (clone PC 10 at 1:100);
?	Avaliação imunohistoquímica do índice de marcação imunorreativa, para positividade na coloração celular citoplasmática e perinuclear, com o anticorpo primário para CASPASE-3 para verificação de apoptose celular (Novocastra®, NCL ? CPP32 (clone JHM62 at 1:300).
?	Cálculo do Índice de Homeostase Tecidual utilizando os índices de proliferação celular e apoptose.

A Ethylnitrosourea (ENU) rotineiramente utilizada como indutor de cancer em estudos experimentais pode ter uma fuçao demarcador de atividade proliferativa local. Utilizando-se desta substância como marcador buscamos confirmar a presença e localizaçao de células tronco no parênquima ovariano de ratas.