Patricia Cristina Baleeiro Beltrão Braga.

Curso ?Células-tronco e medicina regenerativa para aspirantes à cientistas?: Docente Responsável. Realizado nos dias 03 e 04 de Dezembro de 2015 na FMVZ-USP. Este curso foi teórico-prático, contou com a presença de 10 alunos do 1º ano do Ensino Médio e 1 aluno do 9º ano do Ensino Fundamental do Colégio Visconde de Porto Seguro. Importante ressaltar que o curso foi INCLUSIVO, tendo a participação de um adolescente com autismo, que participou junto com todos os outros alunos das aulas teóricas e das práticas. O objetivo do curso foi inserir alunos com prévio interesse em ciência em assuntos relevantes e de ponta na área da medicina e instigar o desejo desses alunos pela carreira de pesquisa científica.

Existe desde 2009, mas em 2015 se tornou uma OSCIP. Tem um site próprio (www.projetoafadadodente.org.br) e uma conta do facebook (projeto a fada do dente). A população que tem interesse em participar do projeto doando entra em contato pelo email ou pelo facebook e é instruída sobre como participar e também sobre assuntos atuais relacionados ao autismo, como comentários sobre publicações cientificas relevantes no assunto.

O projeto visa analisar e eficiencia dos mecanismos de comunicação do programa de triagem neonatal em uma região da cidade de São Paulo, entre os profissionais da área da saúde e os usuários.

A pele é o maior órgão do corpo humano, atuando como barreira protetora, reguladora da hidratação e mediadora de interações sensoriais. O uso de modelos animais em pesquisas dermatológicas apresenta limitações e questões éticas, o que reforça a necessidade de desenvolver modelos humanos in vitro mais representativos. Essa proposta busca criar um modelo organotípico de pele humana com inervação, incorporando neurônios periféricos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC), a fim de reproduzir de forma mais fiel a interface neuroepitelial. O modelo permitirá estudar processos fisiológicos e patológicos, como cicatrização, inflamação, dor, doenças cutâneas e infecções, além de servir como plataforma para testes farmacológicos e de neurotoxicidade. O projeto visa substituir integralmente o uso de animais, oferecendo uma alternativa ética, inovadora e fisiologicamente relevante para pesquisas em biomedicina e desenvolvimento de terapias.

Os transtornos que afetam o neurodesenvolvimento ocorrem ainda na gestação, ou se manifestam muito cedo na infância, persistindo durante toda a vida, o que acarreta em um grande impacto no funcionamento do indivíduo. Dentre os transtornos do neurodesenvolvimento, podemos destacar o Transtorno do Espectro do Autismo (TEA), caracterizado por déficits na comunicação e interação social, e por comportamentos restritivos e repetitivos, aliados a déficits sensoriais. A prevalência mundial do TEA é algo em torno de 1-2. Além disso, é importante considerar que houve um aumento exponencial dos casos de TEA nos últimos 30 anos, o que pode ser relativo a melhora da capacidade e competência para o diagnóstico clínico. Entretanto, não se pode descartar a possibilidade de uma maior interferência de agentes ambientais influenciando no neurodesenvolvimento, já que o TEA é postulado como um transtorno multifatorial, com fatores genéticos e ambientais envolvidos. Considerando a genética do TEA, mais de mil genes já foram relacionados, sendo inclusive alguns genes também enredados em síndromes monogenéticas que apresentam sinais de autismo. Entretanto, a maior parte destes genes ainda não tiveram seu papel esclarecido e, somado a isso, poucos são os estudos genéticos feitos no Brasil, acarretando em falta de dados da população brasileira com TEA. Em relação aos fatores ambientais, as infecções durante a gestação se apresentam fortemente relacionadas, o que torna fundamental mapear as epidemias no Brasil como fatores de risco específicos para nossa população. Importante lembrar os recentes episódios da infecção congênita causada pelo Zika vírus em nosso país, acometendo milhares de recém-nascidos que apresentaram alterações no neurodesenvolvimento. Tendo em vista o exposto, este projeto visa investigar as causas do TEA, avaliando a genética de crianças brasileiras com esse transtorno e os fatores ambientais encontrados em nosso país classificados como de risco, em especial a influência de infecções durante a gestação que interfiram no neurodesenvolvimento. Além disso, nossa abordagem permite a identificação de possíveis mecanismos implicados no TEA, os quais uma vez identificados poderão se tornas alvos terapêuticos.

We propose here to produce in vitro human organoid models to infect with SARS-Cov-2 and investigate mechanisms of disease and its progression. Additionally, these in vitro models will be used for drug screening against the virus or its harmful effects.

O Zika vírus (ZIKV) é um flavivírus capaz de causar infecção em humanos após a picada por mosquitos do gênero Aedes contaminados com o vírus. Em 2015, a linhagem brasileira deste vírus - ZIKVBR causou uma epidemia no Brasil, causando uma infecção congênita com a geração de vários casos de malformação cerebral em bebês de mães infectadas por ZIKVBR. Através do estudo em células progenitoras neurais, neurônios e organoides derivados de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC), nosso grupo e demais pesquisadores revelaram o neurotropismo do ZIKVBR e ajudaram a clarificar sua relação com o Sistema Nervoso Central (SNC), mostrando que essas células são significantemente afetadas pela infecção. Neste projeto, propomos analisar biologicamente os efeitos da infecção do ZIKVBR em cultura celular de astrócitos, células da glia extremamente importantes para a manutenção homeostática de neurônios e resposta inflamatória do SNC. Para tanto, usaremos astrócitos produzidos a partir de iPSC humanas e verificaremos aspectos da morfologia e fisiologia celular, bem como da expressão gênica e proteica após a infecção com o vírus. Esperamos assim auxiliar na elucidação dos mecanismos utilizados pelo vírus na patogenicidade causada no SNC.

Através do uso de iPSC derivadas de células de polpa dentária (dente-de-leite) de crianças com autismo, produzimos células do SNC em sistemas in vitro 2 e 3D para estudar os mecanismos envolvidos no transtorno.

Nesse projeto, apresentamos uma proposta de terapia celular, através do uso de células-tronco mesenquimais da polpa de dente humana cultivadas em conjunto com biomateriais para restauração de osso e cartilagem. Nosso modelo experimental será testado em ovinos podendo gerar informações para futuras aplicações em humanos. Além disso, as células implantadas nesse projeto expressam genes repórteres que serão usados para monitoramento do comportamento das mesmas in vivo.
O projeto conta com a colaboração internacional do Friedrich-Baur-Forschungsinstitut für Biomaterilien/ Universitat Bayreuth e Biocerentwicklungs ? GMBH, na Alemanha, para o desenvolvimento e produção do biomaterial que está sendo utilizado nesse projeto.

Muitas doenças genéticas permanecem ainda sem sua causa definida. A dificuldade de estudar algumas dessas doenças remontam a problemática de obtenção de material clinico, sugerindo situações extremas para a coleta, dependendo da patologia. Além disso, para estudos genéticos é necessário que se obtenha material genético em quantidade adequada para os ensaios e que, de preferência, venha de uma fonte celular que não esteja diretamente exposta a mutações. 
Nesse trabalho sugerimos o uso de células epiteliais de mucosa oral (CEMO) como fonte de células para estudos de doenças genéticas. A praticidade do cultivo das CEMO foi demonstrada em diversos trabalhos recentemente publicados. Entretanto, na maioria desses trabalhos, o método de coleta é por biópsia. No presente projeto, pretendemos testar a cultura de CEMO através da coleta das células por raspagem da mucosa oral de doadores voluntários sadios.

No presente projeto apresentamos uma tentativa, através do uso células-tronco placentárias humanas, de terapia celular, apenas como um modelo experimental para futuras aplicações em humanos. As células serão geneticamente modificadas com genes exógenos que servirão como repórteres para que essas células possam ser identificadas após o implante e monitoradas quanto às suas alterações e comportamento in vivo. As células serão implantadas em camundongos distróficos mdx para verificação de seu comportamento in vivo.

A reprogramação induzida de células diferenciadas 
em células embrionárias (iPS) apresenta-se como uma importante ferramenta livre de implicações ético-religiosas para estudos em biologia básica, de desenvolvimento e transplantes, sendo seu potencial muito interessante nesse último aspecto por ser material autólogo. Diversas células já foram usadas para a reprogramação, incluindo fibroblastos, queratinócitos, progenitores neurais, células do estômago, do fígado e linfócitos, de várias espécies como humanos, camundongos e macacos. Entretanto, a eficiência para a derivação e obtenção de células iPS é recente e ainda é baixa, o que torna o método trabalhoso e demorado. Além disso, muitas das células que foram usadas até hoje são células terminalmente diferenciadas, e por isso talvez não sejam ideais para serem usadas como modelos de estudo de doenças genéticas cujas causas ainda não estejam definidas, como por exemplo, os fibroblastos e queratinócitos que podem ter um acúmulo de danos no DNA causados pela luz solar. No presente trabalho propomos uma nova estratégia para produção de iPS, usando uma célula-tronco adulta mesenquimal, nunca antes usada na geração de iPS. O modelo celular será a célula da polpa dentaria humana, pois as mesmas já expressam alguns marcadores de pluripotência e dessa forma testaremos se a reprogramação celular poderia ser mais rápida e eficiente.

No presente projeto apresentamos uma nova tentativa, através do uso de células-tronco da membrana amniótica para uso terapêutico em Distrofias Musculares Progressivas em cães GRMD (Golden Retriever Muscular Dystrophy), como modelo experimental para futuras aplicações em humanos que apresentam a distrofia muscular progressiva. As células implantadas serão geneticamente modificadas com genes exógenos que servirão como repórteres para que as mesmas possam ser identificadas após o implante e monitoradas quanto às suas alterações e comportamento in vivo.

Esse projeto foi realizado pela pesquisadora Dra. Graciela Pignatari, no Laboratório de Comunicação Celular do Instituto de Ciências Biológicas da USP (ICB-1), sob a supervisão do Prof. Dr. Emer Ferro, com os quais fizemos colaboração, em 2006. 
O projeto visava investigar o possível papel de peptídeos intracelulares na cascata de sinalização do receptor AT1 para a angiotensina II. Nosso alvo era a enzima EP 24.15. 
A EP24.15 é tradicionalmente classificada como uma enzima processadora de neuropeptídeos, mas alguns trabalhos têm demonstrado sua participação na regulação do sistema imune através de um possível envolvimento com a apresentação de antígenos via MHC-I. Neste caso dois tipos de envolvimentos surgiram na literatura: um considerando que a enzima protege os peptídeos da degradação e outro sugerindo que ela degrada os peptídeos. Nosso objetivo é silenciar a EP24.15 através de RNA de interferência e verificar seu papel.

Nesse projeto visamos construir um vetor plasmidial carregando o gene da Galectina-3 murina para verificar seu papel em linhagens celulares de melanoma humano. 
A Galectina-3 é uma lectina presente em vários tipos celulares. No processo de transformação celular, a expressão de Galectina-3 encontra-se alterada em alguns sistemas, sendo um eficiente marcador para alguns tumores humanos, como o Melanoma. Em alguns casos se observa a relação direta do acúmulo da proteína e a aquisição de um fenótipo mais agressivo. Nessas situações, o acúmulo de Galectina-3 poderia estar modulando vários eventos que ocorrem durante o processo de transformação maligna, como o aumento da proliferação, resistência ao anoikis (induzido quando as células perdem sua interação com a matriz extracelular) e a apoptose induzida por drogas quimioterápicas.

Diversos vetores retrovirais carregando o gene do hormônio de crescimento humano (hGH) foram construídos. A produção do hormônio de crescimento humano in vivo funcionaria como tratamento para indivíduos portadores de nanismo hipofisário com deficiência na produção do hormônio. Além disso, o hormônio de crescimento humano poderia ser usado como gene repórter para a verificação e monitoramento de todo o protocolo que realizamos. 
Os vetores retrovirais foram usados para produção dos vírus recombinantes, através de experimentos de transfecção e infecção das linhagens celulares empacotadoras de retrovírus PE 501 e PA 317. Esses vírus foram então recolhidos e usados na infecção de células musculares lisas vasculares (CMLv) provenientes de cultura primaria de células de aorta de ratos Wistar isogênicos fornecidos pelo Biotério da EPM. 
Após seleção das células infectadas, as mesmas eram transplantadas para a região adventícia da aorta abdominal de ratos Wistar isogênicos mediante cirurgia. Esses ratos eram então monitorados via retiradas periódicas de sangue via veia caudal para posterior dosagem de hormônio de crescimento humano pelo método de ELISA. 
Os resultados obtidos indicaram que o protocolo funcionou, observando-se a produção de hormônio humano nos ratos, por um tempo médio razoável. As células transplantadas eram posteriormente visualizadas mediante o sacrifício dos animais seguido de experimento de imunohistoquímica.

O projetos de pesquisa realizadono laboratório de Retrovírus do IAL mostrou que cultivando os linfócitos de pacientes portadores de HIV com linfócitos não infectados provenientes de outros indivíduos (os quais eram isolados de bolsas de sangue doadas ao banco de sangue do Hemocentro de São Paulo), o co-cultivo aumentava as chances de detecção na maioria dos casos após alguns dias de cultura celular (7 a 20 dias). Nesses casos, as proteínas do HIV podiam ser detectadas através da técnica de ELISA comercial usando-se como amostra alguns microlitros do sobrenadante da cultura celular.