Ricardo Jose Garcia Pereira.

O presente tem por objetivo consolidar um banco genético in vitro para espécies da avifauna brasileira ameaçadas de extinção e contempladas em programas de conservação vinculados ao Zoológico de São Paulo. Esse criobanco será inicialmente constituído de fibroblastos cultivados a partir de penas coletadas da espécie mutum-de-Alagoas (Pauxi mitu) e posteriormente, arara-azul-de-Lear (Anodorhynchus leari) e ararinha-azul (Cyanopsitta spixii), conforme plano de trabalho disponível no anexo I

This partnership will seek to strengthen research, teaching, and extension collaborations betweenthe University of São Paulo and NC State University to contribute to the sustainabledevelopment of the poultry industry in both states. We will continue developing research inpoultry reproduction, incubation, nutrition, and health and seek to expand collaborations to othermultidisciplinary areas that may positively influence the poultry industry in São Paulo and NorthCarolina. The funding requested will support analyses to conclude a research project related toeggshell translucency an important parameter for incubation. This partnership will expand to allaspects of sustainable poultry production, such as antibiotic-free production, cage-freeproduction, animal welfare, reduction of environmental impact, poultry pathology, diseaseprevention, and food safety. We will promote graduate student exchange and apply to externalfunding bids to support co-designed and co-created research with industry partners. This projectwilldeliver three scientific papers, three co-applications to grants, one shared website, and foursocial media accounts.

Segundo a literatura, 60 das espécies de pinguins encontrarem-se atualmente classificadas comoameaçada ou vulnerável, por causas que vão desde a depleção de presas (consequênciada sobrepesca) a contaminação dos oceanos e degradação das áreas de nidificação. No Brasil, apenas uma espécie é habitualmente avistada na costa, o pinguim-de-Magalhães, que embora não forme colôniasreprodutivas em território nacional frequenta anualmente suas águas durante migração invernal embusca por alimentos. Infelizmente, durante esse período de migração muitos indivíduos ficam susceptíveis aos desafios ambientais e antropogênicos, acarretando no encalhe anual de centenas a milhares de animais em praias brasileiras, em sua maioria são animais juvenis. Muitos destes pinguins resgatadossão considerados inaptos a vida livre e, por conseguinte, os mesmos são encaminhados ao cativeiro.Apesar de diversas instituições no Brasil abrigarem esta espécie de pinguim em seus plantéis, suataxa reprodutiva em cativeiro é baixa e irregular em todo o país. Todavia, pinguins são animaiscarismáticos que despertam grande interesse no público em geral, circunstância que ressalta aimportância dessa ordem em populações ex situ não só para educação ambiental como também paraincentivo a visitação de parques e zoológicos. Desse modo, a implantação de técnicas e protocolos parapotencializar a reprodução de pinguins-de-Magalhães mostra-se extremamente interessante para intituições que mantem indivíduos dessa espécie.

O Pato-Mergulhão é uma das espécies de aves aquáticas mais ameaçadas do mundo, consideradacriticamente em perigo de acordo com a lista vermelha da IUCN. Estima-se que hoje existam apenas cercade 250 aves em vida livre. Neste contexto, foi criado o Plano Nacional de Conservação para a espécie queem 2015 culminou na primeira coleta de ovos em ambiente natural para posterior manutenção e criaçãoem cativeiro no Zooparque Itatiba. Apesar dos extraordinários avanços obtidos na criação em cativeiro doPato-Mergulhão desde então, existe uma expectativa do grupo de trabalho de incluir novas biotecnologias(colheita e congelamento de sêmen e inseminação artificial) para maximizar os resultados no que tangea produção de filhotes e aproveitamento do material genético da população cativa.

Proporcinar ao aluno e profissionais conhecimentos básicos nas áreas de:- Anatomia, fisiologia e endocrinologia reprodutiva de aves;- Fisiologia da incubação de ovos e processos industriais ligado ao tema;- Diferentes biotecnologias reprodutivas aplicadas as aves

Esse projeto teve por objetivo a realização conjunta de ações na área de reprodução nos Programas da ararinha-azul (Cyanopsitta spixii), arara-azul-de-lear (Anodorhynchus leari), mutum-de-alagoas (Pauxi mitu), mutum-do-sudeste (Crax blumenbachii), cardeal-amarelo (Gubernatrix cristata), albatrozes e petréis (Ordem Procellariiformes) vinculados aos Planos de Ação Nacional para a Conservação destas espécies

O segmento de reprodutores constitui um elo entre as empresas de genéticae produtores de frangos de corte e apesar de sua importância para a cadeia produtiva de carnede frango, encontra-se em vácuo sob a responsabilidade do desenvolvimento científico emnutrição. Um total de 26 artigos foram encontrados, sendo 9 publicados nos últimos seis anos,com agravante que não foram recuperadas publicações sobre exigências de aminoácidos parareprodutores na fase de crescimento, seja, macho ou fêmea. O problema a ser resolvido podeser resumido em fertilidade e consequente perdas na incubação. Dentre as causas para essesproblemas tem-se a dificuldade em desenvolver uma conformação corporal do macho e dafêmea durante o crescimento para possibilitar, na fase de reprodução, cópulas efetivas queresultem em ovos férteis. Esta pesquisa foi definida com objetivo de descrever a manipulaçãodo crescimento dos principais componentes corporais de reprodutores de corte por meio dosníveis de lisina da dieta. Para dimensionar a extensão dos efeitos da limitação de lisina nadieta sobre crescimento do corpo, de órgão, de tecidos e dos componentes químicos de fêmease machos reprodutores de cortes, um total de quatro ensaios serão realizados, com aves daslinhagens Cobb e Ross. A presente pesquisa utilizará 3.360 aves, sendo 840 em cada ensaio,que terá duração de 30 semanas. Os níveis dietéticos serão 60, 70, 80, 90, 100 e 120das recomendações de lisina para cada fase. Os níveis de lisina serão considerados comoefeito fixo e o tempo como efeito aleatório. Para cada nível de lisina será obtido oscoeficientes alométrico, que em seguida serão submetidos análise de identidade de modelo.Espera-se ao final dimensionar o efeito dos níveis de lisina sobre a manipulação seletiva docrescimento de tecidos que estão relacionados coma performance na fase reprodutiva.

As células germinativas primordiais (PGCs, do inglês primordial germ cells) são as únicas células capazes de transmitir a informação genética ao longo de várias gerações. Esta característica se deve ao potencial de autorrenovação e diferenciação celular, no qual estas células são capazes de originar milhões de espermatozóides e oócitos. Dessa maneira, o uso das PGC tem gerado metodologias promissoras na preservação de recursos genéticos, por meio de transplante intra e interespecíficos. Todavia, o uso de tais metodologias ainda é limitado devido a manutenção e multiplicação das PGCs in vitro e os custos atrelados ao seu cultivo em laboratório. Assim, o presente projeto propõe avaliar a eficiência do cultivo de PGCs de frango sobre a membrana corioalantóide (CAM) de embriões de galinha, visando um método alternativo e de baixo custo para o cultivo destas células. Para tal, PGCs de frango serão coletadas através da corrente sanguínea de embriões com 2-3 dias de incubação e cultivadas in vitro com o propósito de seleção de linhagens com crescimento exponencial. Em seguida, linhagens que atingirem um número mínimo de 150.000/ mL células serão diluídas e aplicadas (aproximadamente 10.000 células/ 10 #61549;L) sobre a membrana corioalantóide de embriões de galinha. Concomitantemente, o mesmo número de células (10.000 células/ poço) serão semeadas em placas de cultivo de 48 poços e cultivadas como controle. As taxas de crescimento, viabilidade e expressão de marcadores germinativos (SSEA-1, VASA e EMA-1) serão avaliadas após 10 dias de incubação. Esperamos com esse experimento elaborar um protocolo prático de cultivo in ovo de PGCs capaz de manter as células viáveis e indiferenciadas a um baixo custo laboratorial.

De todas as aves identificadas no mundo, atualmente cerca de 12,1 estão ameaçadas de extinção. No Brasil, elas representam o segundo grupo mais diverso de vertebrados com quase 2000 espécies identificadas, dos quais 264 espécies sendo endêmicas e 154 consideradas ameaçadas. Com fatores como a perda de habitat, escassez de alimentos, tráfico ilegal, entre outros, há uma preocupação crescente com a acentuada perda de variabilidade genética dessas populações. Programas envolvendo a reprodução ex situ e a criação de criobancos de células e material genético são iniciativas cruciais para minimizar esses prejuízos. Este estudo tem o objetivo de investigar a relação entre diversidade genética (DG) e o fenótipo de fibroblastos em espécies que apresentam diferentes gargalos populacionais, tanto in situ quanto ex situ [Arara-azul (Anodorhynchus hyacinthinus) que apresenta boa DG, Arara-azul-de-Lear (Anodorhynchus leari) que apresenta DG intermediária e Ararinha-azul (Cyanopsitta spixii) que apresenta baixíssima DG]. Os fibroblastos serão obtidos a partir dos cálamos de penas em crescimento, uma abordagem minimamente invasiva que facilita a criação de criobancos de material genético destas espécies ameaçadas. Acreditamos que taxas elevadas de endogamia, resultantes dos afunilamentos populacionais ao longo do tempo, afetam negativamente as características celulares dos fibroblastos (proliferação, estresse e viabilidade celular), conectando perda de diversidade genética a fenótipos celulares através de mecanismos funcionais. Esses resultados serão capazes de informar estratégias de biobancos para a conservação dessas espécies ameaçadas.

A manutenção de serpentes peçonhentas em cativeiro é, sem dúvida, uma prática de grande importância para a saúde pública, tanto para a produção de soros antiofídicos, quanto para a conservação das espécies em risco de extinção. Neste contexto, cerca de 86 dos casos de acidentes ofídicos no Brasil são provocados por espécies do gênero Bothrops, ressaltando a necessidade da reprodução dessas serpentes em cativeiro à medida que ao decorrer dos anos a quantidade de serpentes recebidas no Instituto Butantan vem diminuindo. O uso de biotecnologias reprodutivas, como o congelamento de sêmen e a inseminação artificial, na propagação dessas espécies pode gerar inúmeros benefícios para as populações do grupo das jararacas ex situ e in situ. Um ponto imprescindível na aplicação de ambas as técnicas é a colheita de amostras seminais de boa qualidade. Desse modo, o desenvolvimento de abordagens que aprimorem os procedimentos de colheita de sêmen são desejáveis para a ampla aplicação das biotecnologias neste grupo de serpentes. Assim, este projeto tem como objetivo avaliar a resposta de machos da espécie Bothrops moojeni, uma das espécies cujo veneno é utilizado no pool de veneno para a produção do soro antibotrópico, ao feromônio extraído das ecdises de fêmeas, da mesma espécie, em fase de vitelogênese secundária. O extrato será aspergido em fêmeas imaturas (identificadas através de exames ultrassonográficos) e o interesse do macho será determinado através da visualização de comportamentos reprodutivos de côrte, como a perseguição tátil; o alinhamento; e a cópula, além da quantidade de dardejamento da língua/minuto. Havendo sucesso nesta etapa, um trabalho futuro será realizado para confeccionar um manequim para a colheita de sêmen de serpentes para o uso em biotecnologias reprodutivas, como congelação de sêmen e inseminação artificial.

Segundo a Associação Brasileira Proteína Animal (ABPA, 2016), a produção de ovos totalizou no ano de 2015, 39,5 bilhões de unidades, mas o mercado interno está aumentando, em 2015 o consumo foi de 191,7 unidades per capita, um aumento considerado de 5,2 em relação ao consumo de 2014 que foi em média de 182 per capita. O consumo de ovos tem sido incrementado devido ao seu reconhecimento como fonte proteica, somado aos altos valores biológicos para a saúde humana. As pesquisas em genética conseguiram selecionar fêmeas com um elevado potencial produtivo, com isto, a exigência sobre a eficiência reprodutiva dos machos tornou-se maior, tendo aumentado o número de pesquisas com a finalidade de equiparar o potencial reprodutivo dos machos em relação às fêmeas. Em algumas linhagens brancas é observado uma diminuição na eclosão quando comparado a linhagens vermelhas. Por essa razão, nos interessamos por esse desafio, dado ao impacto econômico causado pela perda de eclodibilidade, aumento de consumo de ração por machos inférteis que poderiam ser descartados, e o custo na aquisição de 2 a mais destes machos para manutenção da fertilidade. Assim, o objetivo geral dessa pesquisa é avaliar qualidade seminal, condição corporea e plantar, índice testicular e fertilidade de galos reprodutores de duas linhas de matrizes leves em diferentes idades, e correlacionar esses resultados com os índices de fertilidade apresentados pelos mesmos no incubatório. Os resultados desse projeto podem definir diferentes estratégias de manejo para as linhagens estudadas , assim como responder alguns questionamentos referentes aos resultados de eclosão nas diferentes idades destes reprodutores. A longo prazo, esse trabalho visa contribuir para um conhecimento mais profundo dessas linhagens a campo em um estudo nunca realizado no Brasil.

The scarlet ibis (Eudocimus ruber) is a tropical bird with a relatively well breedingperformance in captivity, however, as the majority of wild bird captive breeding programs, itsreproductive management remains rudimentary and basic reproductive practices are notincorporated. The aim of this work is to assess the influence of zootechnical variables widelyused in industrial poultry farming such as breeder age, laying time, egg removal frequency, eggstorage, egg shape index and weight on the indexes of laying rate, fertility and hatchability of acaptive breeding population of scarlet ibis during the reproductive season between July andJanuary of 2022, 2023 and 2024. The eggs are collected daily in one of the seven nest checkson the day. They are weighted and taken measures of height and width and stored at 16o C for 3days, to start incubate for 21 days taking weight registers every 6 days to assess the percentileof weight loss. Data of fertility and hatching success of the egg are collected and correlatedwith the age of the parents, the laying period, the egg weight loss, shape, shell thickness andstorage time to assess the influence of each factor on the overall reproductive efficiency of thebreeders to define a profile of breeder selection for the species.

A estocagem dos ovos em baixas temperaturas (15 a 18C) antes do processo de incubação artificial é uma prática comum na produção de aves domésticas. Todavia, quando prolongada, conhecidamente pode gerar danos irreversíveis à qualidade do ovo e, a maior susceptibilidade a contaminações por microrganismos. Portanto, uma ferramenta que vem sendo utilizada para reduzir os danos inerentes à estocagem é a vedação da casca do ovo com revestimentos à base de biofilmes de quitosana, a qual funciona como uma barreira impedindo a troca exacerbada de líquidos e gases, bem como a entrada de bactérias pelos poros da casca. Estudos anteriores comprovaram sua eficácia na manutenção da qualidade de ovos de consumo mesmo após longos períodos de estocagem, no entanto pouco se sabe sobre a influência da vedação sobre os parâmetros de incubação dos ovos. Desta forma, o objetivo deste projeto será avaliar os efeitos da vedação da casca com biofilme de quitosana sobre a qualidade dos ovos e neonatos e taxas de eclodibilidade e mortalidade. Para isso, 400 ovos de matrizes serão primeiramente distribuídos de forma aleatória nos grupos tratamento (vedado com biofilme de quitosana) e controle (ausência de vedação). Posteriormente cada grupo será subdividido de acordo o tempo de estocagem em: E1: 3 dias a 18C, E2: 7 dias a 18C, E3: 14 dia a 18C e E4: mais de 21 dias a 18C. Ao final deste projeto espera-se determinar se a vedação da casca com biofilme de quitosana durante a estocagem reduz os efeitos negativos atrelados à técnica e com isso representa uma biotecnologia viável para a indústria.

Nas últimas décadas, a crescente demanda por produtos de origem animal assim como aexigência por vias mais sustentáveis tem exigido uma constante otimização na produção defrangos. Por essa razão, e sendo o Brasil o maior exportador de carne de frango no mundo(ABPA, 2020), uma das principais preocupações da indústria avícola está relacionada à baixaqualidade de casca do ovo, que tem sido responsável por um prejuízo financeiro deaproximadamente 600 milhões de dólares anualmente (RADWAN, 2016). Além disso, aprodução deve ser acrescida em 28,6 até o final da atual década, para atender a demandacrescente por carne de frango (MAPA, 2019). Desta forma, ferramentas que avaliem aqualidade do ovo e de suas estruturas antes do processo de incubação são extremamenterelevantes e aplicáveis a campo, sobretudo buscando avultar a produção. Visto isso, o objetivodeste projeto é comparar parâmetros de qualidade do ovo e do neonato, de frangos de corte,relacionando-os com a coloração e a densidade da casca do ovo (gravidade específica). Paraisso, ovos brancos e marrons de aves em seu pico produtivo, com 33 semanas de idade,foram divididos de acordo com a densidade de casca em dez grupos de acordo com adensidade de casca (1.065, 1.070, 1.075, 1.080, 1.085) e a coloração da casca (claro eescuro) e, após o período de incubação, as taxas de eclodibilidade, mortalidade embrionáriae o peso dos neonatos foram analisados.

Dentre os setores do agronegócio Brasileiro, a avicultura se destaca como uma das atividadescom maior projeção mundial, desempenhando um importante papel na geração de empregose desenvolvimento da economia nacional. Nesse contexto, os bons índices produtivos, quedemonstram a elevada competitividade na quantidade e qualidade de produtos produzidosanualmente, podem ser em grande parte atribuídos à adoção de biotecnologias na cadeia deprodução avícola, cuja ampliação vem se tornando ainda mais necessária com o aumento docrescimento populacional e da demanda por produtos de origem animal no mundo. Nasúltimas décadas, a injeção de substâncias in ovo é uma técnica que vem sendo implementadaem grande escala na indústria avícola, e estudos diversos têm sugerido que a modificação doambiente embrionário através dela pode auxiliar no desenvolvimento das aves neonatais,gerando grandes ganhos para a avicultura. No entanto, a aplicação dessa técnica exige aabertura de um pequeno orifício na casca do ovo por meio de uma perfuração com agulha oqual, se não vedado corretamente, pode tornar-se uma via de contaminação por patógenos,especialmente se a injeção for realizada em um momento mais precoce da incubação. Naprática industrial as consequências associadas à má vedação após injeções in ovo podemresultar em menor eclodibilidade e uniformidade dos lotes. Para contornar esse problema, ospesquisadores têm utilizado diferentes materiais e metodologias para vedar o orifício abertona casca em seus estudos que utilizam dessa técnica, entretanto pouco se sabe com relaçãoà eficiência de cada protocolo, fato que limita a aplicação dessas tecnologias em incubatóriosindustriais. Assim, este projeto tem como objetivo comparar parâmetros de qualidade do ovoe eclodibilidade, associados à eficiência da selagem realizada com esmalte, cola bastão,pasta de silicone, fita adesiva, parafina e uma mistura de detergente e cola, que foramconsiderados materiais de fácil obtenção e aplicação, dos quais muitos já foram amplamenteutilizados em estudos prévios. Neste projeto foram feitos dois ensaios, realizados com os seismateriais citados e dois grupos controle, sendo um deles com o orifício aberto e o outro nãosubmetido a injeção in ovo

Em sistemas comerciais de incubação é comum os ovos permanecerem estocados, porém o tempo e as condições de estocagem tanto nas granjas quanto nos incubatórios podem influenciar na mortalidade embrionária. Apesar de ser uma prática necessária, quando prolongada por períodos superiores a 7 dias, este processo pode gerar danos irreversíveis à qualidade do ovo devido a morte celular, perda de água, trocas gasosas, e alteração das condições físico-químicas do ovo, gerando em perdas expressivas na eclodibilidade. Desta forma, o desenvolvimento de tecnologias para reduzir os danos inerentes à estocagem está se tornando de grande importância para o setor produtivo. Uma alternativa que vem ganhando destaque é a produção de nanocompósitos formados por um polímero biodegradável (p.e. quitosana e nanopartículas lamelares) para recobrir a superfície externa da casca do ovo, funcionando como uma barreira de restrição impedindo a troca exacerbada de líquidos e gases, selamento de microfissuras, impedindo a colonização\entrada de bactérias pelos poros da casca e melhorando a sanidade dos ovos. Desta forma, o objetivo do projeto é preparar soluções filmogênicas com nanocompósitos (polímeros naturais) para o recobrimento da superfície da casca de ovos férteis objetivando avaliar seus efeitos sobre os parâmetros de incubação (taxa de eclosão, eclodibilidade, mortalidades inicial, média e final, etc.) e qualidade dos neonatos. Para isso, ovos de matrizes serão distribuídos de forma aleatória com aplicação de biofilmes a várias concentrações e tempos de estocagem. Neste propósito as superfícies dos ovos serão recobertas por tratamento de filmes com quitosana, quitosana, Laponita e sais de prata e controle (ausência de selamento/ vedação). Posteriormente cada grupo será subdividido de acordo espessura do filme depositado (concentração da solução), concentração de partículas de Laponita, tempo de estocagem (3, 7, 14 e 21 dias). Espera-se determinar a influência de cada um dos parâmetros experimentais sobre a qualidade dos ovos e embriões (neonatos) em diferentes tempos de armazenamento, estabelecendo um protocolo de aplicação do produto para a formação de filmes poliméricos protetivos empregáveis em incubatórios industriais.

Os ovos de incubação fornecidos aos incubatórios têm origens diversas, variando emlinhagens e idade das reprodutoras. Esses ovos podem apresentar diferenças notamanho, peso, fertilidade, gravidade específica, qualidade da casca e suaspropriedades, o que pode influenciar a disponibilidade de nutrientes e,consequentemente, afetar o desenvolvimento embrionário e a qualidade do pintinho.O objetivo desta tese foi investigar o efeito dos parâmetros de incubação e qualidadedos ovos, como gravidade específica, peso dos ovos e percentuais de ovos férteis,nas respostas da qualidade dos neonatos durante a incubação, e aprimorar aavaliação do impacto gerado pela produção de calor embrionário, utilizando a cascado ovo como medida. Com base nesses objetivos, relacionar a produção de calor comperda de peso durante a incubação, eclodibilidade, janela de nascimento, rendimentodos pintinhos, peso e qualidade dos neonatos, fornecendo subsídios para estratégiasmais eficientes e sustentáveis na incubação e contribuindo para o conhecimentocientífico com práticas de manejo sugeridas. O primeiro estudo concentrou-se emmedir a influência da gravidade na geração de calor metabólico. No segundo estudo,investigou-se o efeito da geração de calor metabólico em diferentes pesos de ovos(leves, médios e pesados), dentro de uma mesma faixa de gravidade específica. Oterceiro estudo avaliou a produção de calor metabólico ao longo de toda a incubação,em bandejas com 60, 80 e 100 de ovos férteis, com pesos e gravidadesespecíficas semelhantes. As descobertas gerais desta tese sugerem que os ovos deincubação com gravidade específica muito baixa tendem a perder mais água enutrientes essenciais para o desenvolvimento embrionário durante a incubação,reduzindo a eclodibilidade e a qualidade dos pintinhos. O peso dos ovos influencia otempo de incubação e nascimento do pintinho, sendo afetado pela precocidade najanela de nascimento e podendo até mesmo causar a desidratação desses pintinhos.Quanto aos níveis de fertilidade, a produção excessiva ou insuficiente de calor podeprovocar o superaquecimento dos pintinhos, reduzindo a qualidade no momento do27nascimento. Pode-se concluir que não apenas a produção de calor do embrião, mastambém a transferência de calor, deve ser levada em consideração para melhorar odesenvolvimento embrionário durante a incubação em diversas situações ao longo doprocesso. Essas descobertas ressaltam a importância de compreender esses fatorespara otimizar as práticas de incubação na indústria e proporcionar uma produção maiseficaz de pintinhos de um dia.

A jararaca-da-Amazônia (Bothrops atrox, Linnaeus 1758) é uma serpentepeçonhenta, de importância em saúde, encontrada por toda a região da Amazônia. Alémde ser a serpente mais envolvida em acidentes ofídicos na região, sua importância consistena promoção do avanço em pesquisas farmacológicas obtidas a partir de sua peçonha. Nopassado, o Instituto Butantan recebia as serpentes através dos colaboradores rurais, porémcom a diminuição das áreas naturais e a matança indiscriminada desses animais, arecepção das serpentes tem diminuído significativamente nas últimas décadas. Portanto,é importante o instituto tornar-se independente no que se refere a manutenção do plantelde serpentes em número adequado, para atender não só às demandas de pesquisasfarmacológicas e produção de venenos, como também por questões conservacionistas. Afim de aprimorar as técnicas de reprodução das serpentes no cativeiro, foi proposto umestudo com 6 jararacas-da-Amazônia fêmeas, cujo objetivo é determinar os níveis doshormônios progesterona (P4) e estradiol (E2) dessas serpentes ao longo das estações doano e associar esses valores ao ciclo ovariano monitorado por ultrassonografia. Asserpentes foram examinadas periodicamente com o uso de equipamentoultrassonográfico, com o qual foram contabilizados os folículos ovarianos, ovos eembriões no oviduto. No mesmo dia das análises ultrassonográficas, foram coletadasamostras sanguíneas para dosagem das concentrações de progesterona e estradiol. Osfolículos ovarianos foram classificados como E-I e E-II (não vitelogênicos), E-III e EIV(vitelogênicos), conforme o estágio de vitelogênese em que se encontravam. Nosmeses correspondentes ao outono e inverno, as fêmeas participaram de pareamentosreprodutivos.

Avaliar características seminais (volume, concentração, motilidade e viabilidade espermática, peroxidação lipídica e outras características que o corpo técnico responsável pelo projeto julgar necessárias) de galos da linhagem Cobb500 tratados com duas fontes diferentes de selênio (com dois níveis diferentes cada) e compara-las com amostras coletadas indivíduos controle da mesma linhagem.

A avicultura se destaca entre os setores do agronegócio brasileiro, uma vez que o Brasil é o segundo maior produtor e o maior exportador mundial de carne de frango. Portanto, o emprego de biotecnologias que otimizem este tipo de criação é extremamente relevante, destacando-se a inseminação artificial (IA). Todavia, em virtude da cloaca ser uma via comum ao ejaculado e às excretas, altos graus de contaminação são frequentemente observados no sêmen de aves domésticas. Para contornar esta situação muitos diluidores de sêmen para aves possuem antibióticos em sua composição, uma prática que intensifica a problemática da resistência bacteriana. Deste modo, com o objetivo de gerar alternativas ao uso de antibióticos, nosso laboratório deu início aos estudos buscando adaptar as terapias não térmicas baseadas em luz para o tratamento antimicrobiano do sêmen de galos domésticos (Projeto IC FAPESP n 2017/04457-6). Nossos dados preliminares demonstraram o potencial antimicrobiano destas técnicas, no entanto também evidenciaram a necessidade de diversos ajustes para a definição de um protocolo eficaz no controle da microbiota seminal que seja ao mesmo tempo inócuo aos espermatozoides. Portanto, visando melhor adequar a terapia fotodinâmica (PDT) para sua utilização em sêmen de aves domésticas, estudaremos como alterações no tempo de pré-irradiação com azul de metileno (AM), na exposição radiante (J/cm2) e irradiância (mW/cm2) da luz influenciarão a viabilidade espermática e as bactérias presentes no sêmen. Por fim, analisaremos os efeitos da PDT sobre a fertilidade (in vivo) das amostras seminais irradiadas.

Em muitos casos, para ser utilizado, o sêmen de vários animais precisa ser estocado e refrigerado, de modo a manter condições mínimas para seu uso. A maneira como ocorre o armazenamento do sêmen e principalmente a temperatura de estocagem, influenciam diretamente sobre a qualidade das células espermáticas. Geralmente, para aumentar a durabilidade, as células espermáticas são refrigeradas e estocadas à 5 C, de modo que, em alguns casos a viabilidade do sêmen passa de algumas horas para até 24 horas. No entanto, o entendimento sobre o que acontece com os espermatozoides nesse processo e como a temperatura o afeta é pouco estudado, principalmente em aves. Dessa maneira, o objetivo deste estudo é avaliar os efeitos de diferentes temperatura e do tempo de estocagem sobre os espermatozóides de galos (Gallus gallus). Para a realização do estudo, amostras seminais de 18 galos da linhagem Hy-Line W-36 serão agrupadas em pools (n = 12) e divididas em 3 tratamentos correspondendo à temperatura de estocagem (5 C, temperatura ambiente e 37 C), que serão avaliados em diferentes tempos 0, 2, 4, 8 e 24 horas após a estocagem. Todas as amostras serão avaliadas quanto ao seu movimento espermático, análise de integridade acrossomal, análise da integridade da membrana plasmática, avaliação do potencial da membrana mitocondrial, susceptibilidade a peroxidação lipídica da membrana celular, avaliação da fragmentação de DNA e produção de espécies reativas de oxigênio. Espera-se com este estudo, ampliar o conhecimento sobre os efeitos da estocagem sobre o espermatozoide fornecendo subsídios para o aprimoramento da estocagem de sêmen em aves.

A criopreservação do sêmen é uma ferramenta importante para programas de gerenciamento da diversidade genética e de conservação de raças e espécies ameaçadas. Em aves, o método de conservação do sêmen mais utilizado é o congelamento lento. No entanto, durante o processamento a célula espermática sofre crioinjúrias que reduzem as taxas de motilidade, viabilidade e fertilidade tornando-o um protocolo inviável para a produção comercial e programas de conservação de germoplasma. Diante disso, este projeto tem como objetivo avaliar a qualidade e a fertilidade do sêmen de galos domésticos submetidos a diferentes protocolos de vitrificação cinética e congelamento lento. Em um primeiro momento diferentes testes de validação serão efetuados para padronizar diferentes sondas fluorescentes (sondas) na avaliação de espermatozoides de galos domésticos. Posteriormente, amostras seminais de galos submetidas a protocolos de vitrificação cinética e congelamento lento (XXXX) serão avaliadas in vitro quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia e morfometria, além de integridade da membrana plasmática, status acrossomal, estresse oxidativo, peroxidação lipídica, dano ao DNA e atividade mitocondrial usando combinações de sondas fluorescentes. Por fim, inseminações artificiais serão conduzidas com amostras submetidas aos mesmos protocolos para avaliação da capacidade fecundante dos espermatozoides. Espera-se com os resultados desse estudo, obter as bases tecnológicas para novos protocolos de criopreservação, que viabilizem a aplicação dessas técnicas nos laboratórios de pesquisa, na indústria e também na conservação de material genético aviário.

As células-tronco espermatogoniais (SSCs, do inglês spermatogonial stem cells) são as únicas células masculinas capazes de transmitir a informação genética ao longo de várias gerações. Esta característica se deve ao potencial de auto-renovação e diferenciação celular, capaz de originar milhões de espermatozoides. Dessa maneira, o uso das SSCs tem gerado metodologias promissoras na preservação de recursos genéticos animais, por meio de transplante intra e interespecíficos. Todavia, o uso de tais metodologias ainda é limitado devido aos problemas inerentes a manutenção e multiplicação das SSCs in vitro e os custos atrelados ao seu cultivo em laboratório. Assim, o presente projeto propõe avaliar a eficiência do cultivo interespecífico de SSCs em membranas corialantôides de embriões de galinha, visando um método alternativo e de baixo custo para o cultivo destas células. Para tal, testículos de codornas serão dissociados e uma suspensão de células-tronco espermatogoniais será diluída e injetada (aproximadamente 1 x 106 células/ 50l) sobre a membrana corioalantôide do embrião de galinha. As taxas de crescimento, viabilidade e diferenciação celular serão avaliadas a cada 48 horas perfazendo um total de 192 horas (8 dias de incubação após a inoculação). Esperamos com esse experimento elaborar um protocolo prático de cultivo in ovo de SSCs capaz de manter as células viáveis e indiferenciadas a um baixo custo laboratoriais.

O mutum-de-Alagoas (Pauxi mitu) e#769; um galiforme origina#769;rio da Mata Atla#770;ntica nordestina que desde 2004 e#769; considerado extinto da natureza. Apesar dos avanc#807;os obtidos em cativeiro nas u#769;ltimas de#769;cadas, com o incremento da populac#807;a#771;o de 3 indivi#769;duos (1979) para quase 170 (2015), o programa de reproduc#807;a#771;o atravessa se#769;rias dificuldades com o plantel fundador tais como idade avanc#807;ada, elevada consanguinidade e alto grau de hibridizac#807;a#771;o com o mutum-cavalo (Pauxi tuberosa). Este panorama desfavora#769;vel ressalta a importa#770;ncia das biotecnologias reprodutivas no manejo da biodiversidade da espe#769;cie. Entretanto, te#769;cnicas consagradas em aves dome#769;sticas como a inseminac#807;a#771;o artificial e a criopreservac#807;a#771;o de se#770;men ainda possuem aplicac#807;a#771;o limitada em craci#769;deos, ale#769;m de na#771;o solucionar certos problemas como senilidade dos machos ou baixa qualidade seminal. Uma alternativa para contornar algumas destas adversidades e#769; a conservac#807;a#771;o de germoplasma por meio de transplantes intra ou interespeci#769;ficos de ce#769;lulas germinativas. Recentemente, nosso grupo de pesquisa comprovou que o transplante de espermatogo#770;nias de codornas para galos pre#769;- puberes resulta no reestabelecimento completo da espermatoge#770;nese, abrindo a perspectiva dessa te#769;cnica ser utilizada em situac#807;o#771;es cri#769;ticas como a do mutum-de- Alagoas. Assim, o objetivo desse projeto e#769; avaliar se transplantes de espermatogo#770;nias de craci#769;deos para testi#769;culos de galos dome#769;sticos receptores resultara#769; na colonizac#807;a#771;o dos tu#769;bulos semini#769;feros, e em casos de espermatoge#770;nese completa, na produc#807;a#771;o de espermatozoides dos doadores. As informac#807;o#771;es obtidas aqui servira#771;o de ponto de partida para a aplicac#807;a#771;o dessa metodologia na disseminac#807;a#771;o de material gene#769;tico de machos de mutum-de-Alagoas considerados velhos, subferte#769;is ou comportamentalmente inaptos.

A criopreservação de sêmen em aves é uma biotecnologia com grande potencial na avicultura industrial e na conservação de espécies ameaçadas. Contudo, tal técnica ainda é pouco explorada devido à alta susceptibilidade do espermatozoide aviário ao processo criogênico. Embora o motivo exato da alta susceptibilidade do processo criogênico não ter sido completamente elucidado, estudos apontam os danos à membrana celular como um dos prováveis fatores da baixa eficiência do congelamento. Assim, o objetivo deste projeto é avaliar o efeito da suplementação de soro fetal bovino (SFB) e colesterol via ciclodextrina na proteção da membrana celular e aumento da capacidade fecundante do sêmen de galo submetido ao congelamento e descongelamento. Para tanto, amostras seminais de 15 machos da linhagem Dekalb White serão agrupadas em pools e submetidas ao processo de criopreservação utilizando diferentes concentrações de soro fetal bovino e soro fetal bovino suplementado com 1mg/ml de colesterol via ciclodextina. Todos os pools seminais serão avaliados antes e após o processo de congelamento por avaliações in vitro incluindo: motilidade, integridade de membrana e acrossoma, atividade mitocondrial, peroxidação lipídica e fragmentação de DNA. Espera-se com esse experimento proporcionar um protocolo e meio que forneça maior proteção para a membrana celular aumentando a eficiência fecundante do sêmen aviário submetido ao processo de criopreservação.

O agronegócio desempenha um papel fundamental na economia brasileira gerando empregos, renda e garantindo a distribuição de alimentos para toda a população. Neste contexto, a avicultura industrial se destaca uma vez que o Brasil em 2015 foi considerado o segundo maior produtor e o maior exportador mundial de carne de frango gerando uma receita de 7,167 bilhões de dólares. Portanto, o desenvolvimento de biotecnologias que otimizem este tipo de criação mostra-se extremamente relevante pois podem diminuir custos e agregar valor ao produto final. A inseminação artificial (IA) é um método com grande potencial no setor avícola tendo em vista seus benefícios econômicos, genéticos e sanitários. No entanto, não é raro que amostras seminais de aves domésticas tenham altos graus de contaminação bacteriana em virtude da cloaca ser uma via comum ao ejaculado e as excretas. Para contornar esta situação muitos diluidores de sêmen para aves possuem antibióticos em sua composição, uma prática que tem sido debatida por alguns pesquisadores dadas as suas implicações no que tange a resistência bacteriana. Deste modo, com o objetivo de gerar alternativas ao uso de antibióticos, este projeto irá analisar o impacto da terapia fotodinâmica (PDT) sobre os espermatozoides e os coliformes fecais presentes no plasma seminal de galos domésticos. Para tanto, amostras seminais de galos adultos (Lohmann LSL) serão inicialmente misturadas à diluidores contendo diferentes concentrações de agente fotosensibilizador (azul de metileno) e depois expostas a diferentes tempos de irradiação de luz. Definidos os protocolos que menos interferem na viabilidade espermática, um segundo experimento será conduzido para investigar os efeitos destes tratamentos sobre a microbiota seminal. Esperamos com estes resultados determinar um protocolo de PDT que reduza a contaminação bacteriana em amostras seminais sem afetar a viabilidade espermática, criando assim uma opção que poderá abolir o uso de antibióticos em diluidores de sêmen para aves domésticas.

Embriodiagnóstico refere-se a prática de examinar ovos não eclodidos ao final do período de incubação, com o intuito de identificar possíveis erros de manejo e, por conseguinte, efetuar medidas corretivas para evitar futuras perdas embrionárias.. Apesar da incubação artificial de ovos de aves selvagens ter progredido nas últimas décadas, essa ferramenta mostra-se ainda rudimentar quando comparada a tecnologia aplicada na indústria avícola, que apresentou avanços consideráveis a fim de maximizar a eclodibilidade dos ovos. Em espécies silvestres, parâmetros como temperatura e umidade da incubadora são muitas vezes determinados por tentativa e erro, levando em consideração apenas a taxa de eclosão dos ovos incubados. Neste sentido, as informações geradas pelo embriodiagnóstico são de grande valia na incubação de ovos não convencionais por oferecem um maior detalhamento sobre as causas de falha de nascimento (p.e. infertilidade, transporte, estocagem, idade e nutrição dos reprodutores, etc.). Assim, o presente projeto tem como objetivo aperfeiçoar as técnicas de embriodiagnóstico em aves silvestres ao descrever os diferentes estágios do desenvolvimento embrionário de alguns representantes das ordens Anseriformes, Galliformes e Psittaciformes. Posteriormente, esses quadros descritivos serão empregados no embriodiagnóstico de ovos não eclodidos (incubados artificialmente ou não) provenientes de espécies dessas ordens, para verificar a aplicabilidade dos mesmos na rotina de zoológicos ou criadores. Acreditamos que estes resultados fornecerão subsídios para o aperfeiçoamento das técnicas de incubação artificial de ovos, instrumento hoje indispensável em programas de conservação de diversas espécies de aves selvagens.

A reprodução de répteis ex situ é uma ferramenta importante na conservacção de espeecies. O emprego de biotecnologias como coleta de seemen, criopreservação de gametas e inseminação artificial pode ser vantajoso para aumentar o sucesso reprodutivo das espécies em cativeiro. Assim, os objetivos deste trabalho foram verificar a viabilidade das técnicas de massagem ventro-lateral com anestesia e eletroestimulação na coleta de sêmen de diferentes serpentes das famílias Boidae, Colubridae, Dipsadidae, Pythonidae e Viperidae e descrever a sazonalidade dos parâmetros seminais das espécies estudadas. Para tanto, conforme disponibilidade de machos no plantel mantido na Fundação Parque Zoológico de São Paulo (FPZSP) foram selecionadas serpentes das espécies Eunectes murinus (n=1), Boa constrictor (n=2), Corallus caninus (n=2), Epicrates crassus (n=1), Epicrates cenchria (n=1), Spilotes pullatus (n=2), Philodryas olfersii (n=4), Python bivittatus (n=1), Python regius (n=1) e Bothrops insularis (n=2). As serpentes foram contidas fisicamente e anestesiadas em quatro pontos da região cloacal com lidocaína 1 na dose de 15 mg/Kg e, após 10 minutos foi iniciada a massagem para limpeza intestinal. Após a eliminação de fezes, foi realizada a massagem digital ventro-lateral na direção caudal no terço final do animal. O sêmen foi então coletado com um tubo capilar e foram aferidos volume e pH da amostra. Em seguida, a amostra foi diluída em meio HAMs F10 na proporção de 1:100 (v/v) e foram aferidos motilidade total e progressiva. Para eletroestimulação, após a massagem para limpeza intestinal e massagem pré-estímulo, foram aplicados estímulos elétricos de 1, 2, 3 e 4v, sendo cada tensão repetida 4x. Em Dipsadidae e Viperidae, os estímulos aplicados foram 0,8; 1,2; 1,8 e 2,2v. A massagem ventro-lateral foi realizada após aplicação dos estímulos. As amostras foram coletadas e analisadas conforme descrito anteriormente. Foram realizadas 56 tentativas de coleta de sêmen por massagem ventro-lateral e 32 por eletroestimulação. Em animais das famílias Dipsadidae e Viperidae, a eficiência na massagem ventro-lateral foi superior à da eletroestimulação. Em Boidae, Colubridae e Pythonidae a eletroestimulação teve eficiência superior à massagem, sendo 100 em Colubridae, 66,7 em Pythonidae e 58,3 em Boidae. O volume médio das coletas de sêmen foi superior em amostras colhidas por massagem em Boidae, Colubridae, Pythonidae e Dipsadidae. A motilidade total e progressiva em Boidae foi 40,8 e 27,0 em amostras colhidas por eletroestimulação e 25,7 e 11,1 em amostras colhidas por massagem ventral. Nas famílias Colubridae, Dipsadidae e Viperidae a massagem ventral forneceu amostras com maior motilidade total e progressiva. O estudo demonstrou que é possível coletar amostras seminais de animais pertencentes às famílias Boidae, Colubridae, Dipsadidae, Pythonidae e Viperidae utilizando as técnicas de massagem ventro-lateral com anestesia local e eletroestimulação.

O estudo de embriões é alvo de interesse científico, visando à diversas aplicações, como células-tronco, origem e síntese de tecidos, teratologia, fatores de crescimento, produção de animais quimeras, entre outros. Porém, observar e manipular o embrião durante o seu desenvolvimento se apresentam como grandes obstáculos. O desenvolvimento embrionário é uma característica bem conservada evolutivamente, sendo muito similar entre várias espécies animais. Assim, ovos de galinha apresentam-se como modelos excelentes para a embriologia, visto que o desenvolvimento embrionário ocorre em apenas 21 dias, possuem tamanho reduzido e são obtidos de maneira simples, rápida e em grandes quantidades, o que acelera análises e possibilita maior número amostral. Classicamente, diversos ovos eram incubados e abertos em diferentes estágios embrionários para possibilitar tais estudos. A técnica de transferência do embrião para uma casca de aluguel, maior e coberta com uma membrana de filme plástico transparente, permite a visualização do mesmo durante seu desenvolvimento sem que haja a necessidade de interrompê-lo. Além disso, possibilita manipulações e procedimentos diretamente aplicados a este embrião de uma maneira simples e prática. Entretanto, a transferência do embrião para outra casca é uma manobra de alto risco e difícil execução, podendo causar lesões importantes no embrião o que muitas vezes resulta, em sua morte. Por essas razões, sugere-se a abertura da janela de observação e manipulação na casca do próprio ovo do embrião, afim de diminuir as chances de mortalidade embrionária ocasionadas pelo procedimento de transferência além de facilitar e tornar mais prática essa metodologia de pesquisa.