Ester Alves Ferreira Bordini Galvani.

Programas educativos com objetivo da formação de multiplicadores de ações preventivas de doenças, como o câncer bucal e uso de próteses, além da preservação do meio ambiente (Com base nos Objetivos de Desenvolvimento Sustentável da ONU - ODS 3.9 e ODS 3.d) são essenciais para promover a saúde geral, favorecendo a economia familiar e do município. As ações visam capacitar as pessoas para sua aprendizagem e orientação como agente multiplicador. 1a. Etapa a) Formação das equipes de execução, docentes e alunos do Grupo de Estudos da FORP, FFCLRP, EERP e FCFRP b) Preparação dos estudantes e voluntários por meio de palestras ministradas por docentes e pós-graduandos envolvidos no projeto, além de leitura de artigos científicos relacionados à educação ambiental e treinamento. c) Preparação do material didático-educativo adequado para cada grupo e tema a ser abordado d) treinamento para a apresentação e) Solicitação de kits de auto-higiene para distribuição e realização do treinamento f) Convite a estudantes de faculdades da área da saúde, Centros Acadêmicos, ligas e associações para receberem as atividades propostas. 2. Etapa: a) Serão realizados Workshops palestras e oficinas adequados para cada grupo do público alvo, para informar, motivar e treinar as técnicas de higiene bucal e das próteses odontológicas e orientações para o descarte correto de medicamentos b) Agendamento das atividades pelos bolsistas junto ao público alvo, sob a supervisão da coordenadora, que deverão marcar o local e horários para realização das ações d) Serão organizados pequenos grupos para atividade demonstrativa, após palestra ministrada pelos alunos, com o objetivo de assegurar melhor aproveitamento das informações e do treinamento das técnicas de higienização de forma personalizada e humanizada. A etapa preparatória será semanal até o final do projeto, enquanto que a periodicidade das ações será determinada pelos órgãos parceiros e o tempo dos estudantes, com no mínimo 2 ações por mês.

Esta AEX buscará capacitar alunos e comunidade USP a realizarem ações de promoção de saúde bucal em pacientes que passaram por tratamento de câncer de mama com integração à fonoaudiologia e outras áreas afins. Espera-se que o atendimento integrado das pacientes proporcione relato da redução nos sintomas de desconforto bucal e percepção positiva sobre a qualidade do atendimento. Esta iniciativa busca atender uma demanda de Saúde Pública e reforça o protagonismo das principais áreas envolvidas com a Saúde Bucal, notoriamente a Odontologia nos cuidados estruturais da face, a Fonoaudiologia na adequação das funções orofaciais e comunicação, a Medicina, a Enfermagem, a Fisioterapia e a Nutrição na sustentação da saúde física. Neste contexto transdisciplinar, os estudantes serão estimulados a desenvolverem campanhas internas e externas, incluindo o uso de tendas nacomunidade e equipamentos audiovisuais, capacitando-se para a atuação extensionista comprometida com a transformação social e a melhoria da saúde da comunidade de modo integrativo.

Programa de Extensão oferecido nas dependências do Laboratório de Patologia Experimental e Biomateriais da FOAr./UNESP. Para este Programa, são selecionados 15 alunos de graduação, os quais desenvolvem 40 horas de atividades Teóricas/Práticas de Pesquisa na área de Patologia.

Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Profa. Dra. Marlise Inêz Klein Furlan em 16/07/2020.

Programa de Extensão oferecido nas dependências do Laboratório de Patologia Experimental e Biomateriais da FOAr./UNESP. Para este Programa, são selecionados 15 alunos de graduação, os quais desenvolvem 40 horas de atividades Teóricas/Práticas de Pesquisa na área de Patologia.

Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Profa. Dra. Marlise Inêz Klein Furlan em 16/07/2020.

Programa de Extensão oferecido nas dependências do Laboratório de Patologia Experimental e Biomateriais da FOAr./UNESP. Para este Programa, são selecionados 15 alunos de graduação, os quais desenvolvem 40 horas de atividades Teóricas/Práticas de Pesquisa na área de Patologia.

Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Carlos Alberto de Souza Costa em 20/02/2018.

Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Josimeri Hebling Costa.

Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Carlos Alberto de Souza Costa.

Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Luís Carlos Spolidorio.

Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Josimeri Hebling Costa em 03/06/2014.

Programa de Extensão oferecido nas dependências do Laboratório de Patologia Experimental e Biomateriais da FOAr./UNESP. Para este Programa, são selecionados 15 alunos de graduação (Bolsistas), os quais desenvolvem 40 horas de atividades Teóricas/Práticas de Pesquisa na área de Patologia.

Baseado nos avanços alcançados na Odontologia, através das técnicas de impressão tridimensional (3D), novos materiais estão sendo propostos para reabilitações protéticas definitivas, possibilitando o desenvolvimento de uma modalidade de tratamento mais acessível. No entanto, pouco se conhece sobre as propriedades físicas e mecânicas destes materiais quando em condições que simule o ambiente bucal. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar resinas de impressão 3D indicadas para confecção de coroas definitivas, e realizar a modificação desta resina por meio da adição de óxido metálico, com o intuito de melhorar as características físico-mecânicas destes materiais. Para isto, amostras cilíndricas serão preparadas em impressora m-SLA, sendo submetidas a avaliação de três tempos de pós-cura (5, 10 e 15 min) em câmara de luz UV (25 W, 405 nm) (Fase 1). Estas resinas serão funcionalizadas, por meio da adição de nanopartículas de óxido de zinco em diferentes concentrações (1, 2 e 5), e então serão submetidas ao envelhecimento térmico-mecânico in vitro, para que posteriormente sejam caracterizadas quanto a microtopografia de superfície, resistência compressiva, dureza e estabilidade de cor, quando comparadas a resina pura (Fase 2). Ao final, os dados qualitativos serão analisados descritivamente e os dados quantitativos serão submetidos a análise estatística específica.

O presente projeto de pesquisa tem por objetivo avaliar as propriedades físico-mecânicas de uma resina de impressão 3D nanohíbrida com adição de nanopartículas de óxido de zinco nas concentrações de 0, 0,5, 1, 1,5 e 2, após sua impressão por manufatura aditiva, utilizando três diferentes ângulos de impressão (0, 45 e 90). Inicialmente, estudos pilotos serão realizados a fim de determinar a melhor orientação de impressão e a concentração efetiva do óxido para melhorar a resistência à flexão da resina. Para isto, a impressora m-SLA Phrozen Sonic Mini 4K será utilizada para obtenção das amostras, sendo utilizadas amostras cilíndricas (15 mm diâmetro x 3 mm espessura) para os ensaios de rugosidade superficial e estabilidade de cor. Para o ensaio de sorção e solubilidade serão utilizados discos de resina de 15mm diâmetro x 1mm espessura, enquanto amostras em forma de barra (25 mm de comprimento x 2mm de largura x 2mm de altura) serão utilizadas para os ensaios de resistência à flexão e módulo de elasticidade. Previamente as etapas experimentais, os corpos de prova serão submetidos a lavagem em álcool isopropílico, pós-cura em câmara de luz UV (405 nm) por 30 min e então a superfície será padronizada por polimento com lixa dágua em diferentes granulações. As superfícies das resinas impressas serão avaliadas quanto a sua rugosidade superficial e estabilidade de cor por meio de rugosímetro e espectofotômetro, respectivamente. Em seguida, as propriedades mecânicas das resinas serão avaliadas pelos ensaios de módulo de elasticidade e resistência à flexão, utilizando a máquina de Ensaios Mecânicos. Os dados numéricos obtidos serão submetidos à análise estatística específica.

A engenharia tecidual, a qual caracteriza um campo de destaque dentro da Medicina Regenerativa, tem permitido estabelecer e experimentar diferentes estratégias com potencial de favorecer a regeneração de tecidos e órgãos por meio de métodos inovadores de biofabricação e cultura celular. Dentro deste campo, a impressão tri-dimensional (3D) tem aberto novas possibilidades para proporcionar controle preciso da arquitetura dos biomateriais. Neste projeto, está sendo proposta a translação de técnicas de manufatura aditiva para o desenvolvimento de estratégias de engenharia tecidual aplicáveis dentro do campo da Odontologia Regenerativa. Desta forma, serão propostas aplicações de variadas técnicas de impressão 3D para criar scaffolds biomiméticos e multifuncionais a partir da quitosana e metacrilato de gelatina (GelMA). Diversas técnicas de impressão 3D (indiretas e diretas), realizadas com impressoras 3D convencionais e bioimpressoras, serão empregadas na modulação da arquitetura interna e externa de scaffolds a serem usados em estratégias de indução celular (cell-homing) para regeneração da dentina, polpa e osso. A bioimpressão será realizada por meio do uso da técnica de estereolitografia com o objetivo de obter elevada precisão de detalhes. Propostas de personalização dos scaffolds utilizando prototipagem serão testadas.

O presente projeto de pesquisa tem por objetivo avaliar a citocompatibilidade de diferentes concentrações dos óxidos metálicos em contato direto com células da papila apical humana (SCAPs), bem como formular um hidrogel de gelatina metacrilada associados aos óxidos, de forma que estes biomateriais sejam capazes de liberar dosagens bioativas para estimular a regeneração dentinária. Para isto, inicialmente células SCAPs serão semeadas (2x103 células/well) em placas de 96 compartimentos, seguido por incubação com os óxidos de estrôncio e magnésio (0.1, 0.2 e 0.3 p/v), a fim de avaliar a viabilidade celular após 24h. Em seguida, serão formulados hidrogéis injetáveis e fotoativados a base de metacrilato de gelatina (GelMA), contendo as melhores concentrações selecionadas dos óxidos, os quais serão injetados no interior dos poços de uma placa de 96 wells, seguido por fotoativação de 30 seg. Então, as SCAPs (1x 104 células) serão semeadas sobre as amostras e análises biológicas serão realizadas, sendo os parâmetros de metabolismo celular (Alamar blue), viabilidade (Live/dead), adesão/espalhamento celular (F-actina) e diferenciação odontogênica (Atividade de ALP e deposição de matriz mineralizada Alizarin red) avaliados após 14 dias de cultivo. Os dados numéricos serão submetidos à análise estatística específica.

O projeto de pesquisa tem por objetivo desenvolver hidrogéis tridimensionais bioimpressos com estrutura macroporosa/tubular ordenada, interconectada e com a presença de canais microfluídicos para estimular a regeneração dentinária por meio de células da polpa dental humana. Para tanto, inicialmente será formulada a solução do hidrogel a base de metacrilato de gelatina (GelMA) e a ela será adicionada o fotoiniciador lítio fenil-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate (LAP). Esta solução será submetida ao processo de bioimpressão para obtenção de amostras em formato cilíndrico com arquiteturas de superfície grid e honeycomb. Os hidrogéis impressos serão caracterizados fisicamente quanto sua morfologia, topografia de superfície, porosidade, distribuição dos poros e degradabilidade. Análises biológicas serão realizadas após semear células mesenquimais indiferenciadas da polpa sobre os hidrogéis, sendo os parâmetros de viabilidade celular (Alamar blue) e diferenciação odontogênica (Atividade de ALP e deposição de matriz mineralizada ? Alizarin red) avaliados após 21 dias de cultivo. Os dados serão submetidos à análise estatística específica.

Clinicamente a regeneração do tecido dentinário e pulpar ainda é um desafio, visto que a área afetada geralmente se apresenta irregular e com grande variação anatômica entre pacientes, ocasionando um sucesso limitado e de baixo potencial regenerativo com a aplicação dos tratamentos atualmente disponíveis. Devido a isto, tem-se buscado por novas modalidades de tratamento que estimulem a regeneração tecidual dentro de um contexto minimamente invasivo, por meio da aplicação de materiais que se adaptem perfeitamente ao defeito e que estimulem células residentes da polpa e da papila apical a migrarem para o interior do material e a se diferenciarem, com a consequente deposição de um novo tecido, o que é chamado de terapia cell homing. Assim, o presente projeto de pesquisa tem por objetivo desenvolver scaffolds tri-dimensionais bioimpressos e injetáveis com estrutura macroporosa ordenada, interconectada e com a presença de canais microfluídicos, associados a óxidos metálicos e polifenóis, que sejam capazes de liberar dosagens bioativas e pró-angiogênicas para estimular a regeneração dentinária e pulpar. Inicialmente serão determinadas as concentrações bioativas e pró-angiogênicas dos óxidos (óxidos de zinco, estrôncio, magnésio e silício) e polifenóis (proantocianidina, ácido tânico, resolvina e resveratrol) sobre células pulpares (DPCs) e endoteliais (HUVECs), (Fase 1). Em seguida, serão formulados hidrogéis injetáveis e fotoativados a base de metacrilato de gelatina (GelMA), contendo as melhores concentrações selecionadas das substâncias, os quais serão caracterizados quanto a morfologia, topografia superfície, composição química, degradabilidade, porosidade, módulo de elasticidade e resistência compressiva. Estes biomateriais também serão caracterizados quanto sua capacidade de estimular a deposição de matriz mineralizada e formação de uma rede de capilares, por DPCs e HUVECs semeadas sobre os hidrogéis ou encapsuladas em seu interior (Fase 2). Então, os hidrogéis serão bioimpressos em formato cilíndrico ou tubular, com diferentes arquiteturas de superfície (grid ou honeycomb), porosidade e distribuição dos poros, sendo cultivados em modelos do tipo in-a-chip e em biorreator, para avaliação dos parâmetros relacionados a viabilidade, proliferação, migração, adesão/espalhamento celular, diferenciação odontogênica e angiogênica (Fase 3). Por fim, os hidrogéis injetáveis e bioimpressos serão implantados em defeitos críticos de calvária (Rattus novergiccus) para análise da formação de tecido mineralizado in vivo e também serão implantados em subcutâneo de camundongos nude (nu/nu) após o preenchimento do espaço radicular de fragmentos de raízes, para avaliação do potencial indutor de formação de tecido vascularizado (Fase 4). Ao final, os dados qualitativos serão analisados descritivamente e os dados quantitativos serão submetidos a análise estatística específica.

A formulação de scaffolds biocompatíveis e bioativos, capazes de induzir a quimiotaxia de células tronco residentes para o sítio da exposição da polpa, seguido de diferenciação odontoblástica e deposição de matriz extracelular mineralizada, é de grande interesse para a área da biotecnologia e engenharia tecidual aplicada à regeneração do complexo dentino-pulpar. Nesta situação específica, a superfície do biomaterial em contato com a polpa exposta deveria promover a regeneração tecidual mediada pelas células tronco, enquanto a superfície oposta do produto promoveria um selamento local. Assim, no presente estudo será proposto o desenvolvimento de um scaffold bicamada à base de quitosana, composto por uma face densa interposta a uma face macro-porosa bioativa, com o objetivo de obter um biomaterial inovador para capeamento pulpar direto. Inicialmente, serão determinadas as tecnologias para obtenção de uma camada densa capaz de se co-polimerizar com materiais forradores cavitários e impedir a difusão de componentes tóxicos através de sua estrutura. Em seguida, um scaffold bioativo e contendo uma rede de macro-poros interconectados também será preparado, para então obter-se o scaffold bicamada pela interposição dos biomateriais desenvolvidos. A análise do potencial do scaffold bi-camada como capeador pulpar direto será avaliado em modelo de câmara pulpar artificial com pressão intra-pulpar simulada (pCPA). A capacidade de células pulpares migrarem para a superfície do scaffold a partir de uma cultura 3D, bem como de apresentar diferenciação odontoblástica será avaliada neste modelo realista in vitro. Os dados numéricos, obtidos através da aplicação dos protocolos laboratoriais, serão submetidos à análise estatística específica.

Applying tissue engineering strategies to modulate tertiary dentinogenesis has emerged as a promising approach to improve success rate in local dentin regeneration. Scaffolds with nanofiber architecture are capable of increasing the odontoblastic phenotype expression of dental pulp stem cells (DPSCs) due to the similarity with natural extracellular matrix. Additionally, nanofibrous mats can act as drug delivery systems, creating actively designed surfaces. The aim of the present study is to develop a functionally graded nanofibrous scaffold for dentin regeneration. A blend of artificial and natural polymers will be prepared, to provide mechanical strength and adequate cell response. The surface layer to contact the dentin substrate will be enriched with antibiotics (ABL) in order to provide local antibacterial activity. Antibiotic concentration will be selected by agar diffusion and colony-forming units assays, against Actinomyces naeslundii and Lactobacillus casei species. A bioactive layer (BL) will be designed to interact with pulp tissue and modulate dentin regeneration by resident DPSCs. This layer will be enriched with calcium oxide at a concentration capable of enhancing odontoblastic marker overexpression (pNPP assay) on DPSCs, but with no cytotoxic effect (live/dead and MTS assays). ABL and BL will be characterized by scanning electron microscopy, contact angle, atomic force microscopy, fourier transform infrared spectroscopy and thermo-gravimetrically analysis. Thereafter, a multilayer membrane (FGM) will be obtained by sequential electrospinning technique and further characterized. This innovative biomaterial will be designed to feature an antibacterial layer, a core layer and a bioactive layer. The potential of FGM to inhibit bacterial adhesion to its surface and to induce an odontoblastic phenotype on dental pulp cells as a cell-free tissue engineering system will be tested. Data obtained will be submitted to specific statistical analysis.

O desenvolvimento de scaffolds com poros interconectados e arquitetura de superfície modificada é de grande interesse na área da Odontologia, visto que este substrato apresenta potencial para induzir a regeneração do complexo dentino-pulpar, estimulando a migração de células tronco residentes da polpa (DPSCs) para a área da ferida pulpar. Assim, este projeto de pesquisa tem como objetivo empregar diferentes técnicas de engenharia tecidual e biotecnologia, associando soluções ricas em cálcio e sódio-fosfato à scaffolds com nano-topografia de superfície, para estimular a expressão do fenótipo odontoblástico pelas DPSCs e induzir o processo de dentinogênese in vitro. Para isto, serão formulados scaffolds com diferentes composições e topografia de superfície lisa ou nano-fibrilar, os quais serão caracterizados quanto as suas propriedades físico-químicas, o que envolve morfologia, grau de degradabilidade, módulo de elasticidade e resistência compressiva. Em seguida, as DPSCs serão obtidas por desagregação enzimática do tecido pulpar de terceiros molares hígidos, sendo caracterizadas quanto aos marcadores de células-tronco por meio de imunofluorescência. Então, essas células serão semeadas sobre a superfície dos scaffolds para avaliação da viabilidade, proliferação e migração celular, adesão e espalhamento, expressão gênica, bem como deposição de matriz mineralizada, os quais estão envolvidos na expressão do fenótipo odontoblástico e diferenciação celular. Por fim, para aproximar este estudo das condições encontradas in vivo, serão empregados modelos de cultura 3D associados à discos de dentina e scaffolds, os quais serão adaptados no interior de câmaras pulpares artificiais com pressão (pCPA). Os scaffolds e a cultura 3D serão avaliados quanto aos parâmetros de viabilidade, proliferação, adesão/espalhamento celular e expressão do fenótipo odontoblástico por um período de até 21 dias. Os dados numéricos, obtidos através da aplicação dos protocolos laboratoriais, serão submetidos à análise estatística específica.

A regeneração de tecidos mineralizados sob estímulo inflamatório degenerativo apresenta-se como um desafio, visto que a capacidade de reparo mediado pelas células residentes pode ser negativamente influenciada na presença de elevadas concentrações de mediadores pró-inflamatórios. Neste projeto de pesquisa, objetiva-se empregar uma associação de técnicas da engenharia tecidual para o desenvolvimento de scaffolds macro-porosos com arquitetura e composição similar aos tecidos mineralizados, capazes de liberar dosagens específicas de drogas com efeitos pleiotrópicos (estatinas) para modulação da inflamação, angiogênese e regeneração tecidual por células residentes, visando a regeneração do osso e dentina. Técnicas de engenharia tecidual também serão empregadas para o desenvolvimento de modelos de cultura-3D realistas para análise biológica dos scaffolds in vitro. Inicialmente, será determinado o modelo inflamatório degenerativo in vitro capaz de reduzir em torno de 50 a capacidade de deposição de matriz mineralizada por células tronco da medula óssea (BMSC) e do tecido pulpar (DPSC), baseado na co-cultura com monócitos humanos ativados com LPS (Fase 1). Em seguida, serão determinadas as concentrações anti-inflamatórias, pró-angiogênicas e bioativas das drogas alvo (sinvastatina, atorvastatina rouvastatina), sendo a associação das concentrações terapêuticas específicas analisadas em modelo de inflamação degenerativa (Fase 2). Na terceira etapa deste projeto (Fase 3), serão testados diferentes parâmetros para formulação de scaffolds de quitosana biomineralizados com hidroxiapatita, apresentando uma rede de macro-poros interconectados e topografia nano-fibrilar. Estes scaffolds serão associados à microesferas de quitosana para promoção da liberação controlada das doses previamente selecionadas da estatina. O efeito bioativo do scaffold desenvolvido sobre as BMSCs e DPSCs sob estímulo inflamatório degenerativo será avaliado, bem como o potencial de promover o fenômeno de angiogênese (Fase 4). Finalmente, serão desenvolvidos dois modelos de estudo para avaliação da capacidade dos scaffolds em modular o processo de regeneração tecidual em sítios de aplicação específicos in vitro (Fase 5). Para tanto, serão coletadas amostras de osso trabeculado e do tecido pulpar de bovinos, os quais serão submetidos à descelularização tecidual, seguido de cultivo com as BMSC e DPSC, em co-cultura ou não com células endoteliais, em biorreator de perfusão. Os scaffolds serão posicionados em sítios criados nos construtos teciduais, sendo os conjuntos incubados em biorreator de perfusão para avaliação da capacidade dos scaffolds em induzir o processo de reparo. Por fim, será realizada análise de aplicação em sítios específicos em animais (Rattus novergiccus), empregando-se modelos de indução de lesão inflamatória crônica em tecido ósseo e pulpar.Auxílio à Pesquisa Jovem Pesquisador (FAPESP 2016/15674-5)

As infecções fúngicas e bacterianas bucais vem sendo cada vez mais descritas na literatura. Terapias alternativas para melhor controle microbiano estão sendo desenvolvidas particularmente para microrganismos resistentes. Extratos vegetais e compostos fitoquímicos abrem novas perspectivas para prevenção e controle eficiente das doenças infecciosas na busca de efeitos terapêuticos favoráveis. O Terpinen4ol é um monoterpeno que atua na indução da perda da membrana, interferindo na integridade e na fisiologia da célula do microrganismo e apresenta amplo espectro de atividade antimicrobiana e antinflamatória. Os objetivos deste estudo serão: i) avaliar a atividade sinérgica do Terpinen4ol e nistatina, o potencial citotóxico, sua propriedade antifúngica na forma de nanopartículas aplicados em células orais normais imortalizadas (NOK) e a adesão celular de Candida albicans após o tratamento com Terpinen4ol; ii) Verificar a ação antibacteriana e a expressão de fatores de virulência do Terpinen4ol sobre bactérias cariogênicas; iii) Analisar a descontaminação das superfícies de titânio sobre as propriedades de molhabilidade, energia livre de superfície, estrutura química e rugosidade. Biofilmes serão preparados usandose o modelo de placa de microtitulação estática e avaliados pela viabilidade celular (teste de XTT), contagem das unidades formadoras de colônias (UFC/mL) e por microscopia confocal a laser. A atividade antimicrobiana do Terpinen4ol será determinada pelo método de microdiluição em caldo para as células planctônicas, os biofilmes serão avaliados pelo ensaio de XTT e a citotoxicidade sobre linhagem de células NOK será avaliada pelo ensaio da sulforodamida B (SRB) 0,1%. Adicionalmente, a microscopia eletrônica de varredura será utilizada para observação da arquitetura dos biofilmes e microscopia confocal a laser. Complementando os ensaios, o sinergismo do Terpinen4ol será avaliado pela metodologia do tabuleiro xadrez. Os protocolos de descontaminação das superfícies de titânio serão avaliados por microscopia de força atômica e espectroscopia de fotoelétrons de raios X.

O uso de substâncias auxiliares na higienização, prevenção e tratamento de doenças bucais tem sido amplamente difundido. A prevenção e controle do biofilme dentário devem ser realizados mediante remoção mecânica e para auxiliar nesse controle e reduzir o biofilme, recomendam-se bochechos contendo flúor e agentes antimicrobianos que podem ser produtos químicos ou naturais. Estes agentes antimicrobianos devem ser eficazes contra os microrganismos, agir rapidamente, não ter efeitos colaterais e serem utilizados sem causar desconforto. Terapias alternativas com extratos naturais abrem novas perspectivas para prevenção e controle das doenças bucais na busca de efeitos terapêuticos favoráveis. Assim, o Terpinen-4-ol (componente do óleo de Melaleuca alternifolia), biocida membrana-ativo, de amplo espectro de ação, tem sido empregado como agente antimicrobiano e sua indicação inclui o uso em dentifrícios, sem causar resistência bacteriana ou efeitos citotóxicos quando em contato com as células da mucosa oral. Este componente também apresenta capacidade de atuar na indução da perda da membrana, interferindo na integridade e na fisiologia da célula do microrganismo. Portanto os objetivos deste estudo serão: i) avaliar o efeito antimicrobiano do Terpinen-4-ol sobre biofilme cariogênico em esmalte e dentina com Streptococcus mutans e Lactobacillus acidophilus por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL); ii) avaliar os fatores de virulência expressos por essas bactérias cariogênicas na presença do Terpinen-4-ol por PCR em tempo real.