Pietro Sampaio Baruselli.

PROCESSO FAPESP 12/00889-5
VIGÊNCIA: 1/8/2012 A 31/7/2014
A quantidade de alimento ingerido por fêmeas Bos taurus e Bos indicus afeta características do ciclo estral, tais como dimensões de estruturas ovarianas e concentração circulante de hormônios esteróides. Estudos têm demonstrado que o tamanho máximo do folículo dominante e do corpo lúteo é maior em raças taurinas comparadas às zebuínas, o que poderia sugerir maior produção de hormônios esteróides nas fêmeas taurinas. No entanto, o que se tem observado é maior concentração de hormônios esteróides em zebuínos quando comparado aos taurinos, sob mesmo manejo. Acredita-se que esta menor concentração de hormônios esteróides em fêmeas taurinas seja devido ao maior metabolismo hepático, relacionado à maior ingestão de matéria seca, principalmente em animais selecionados para alta produção. Esta diferença na concentração de hormônios pode refletir diferença na fertilidade entre estes grupos genéticos. Em fêmeas zebuínas a maior concentração de hormônios esteróides influi na resposta destes animais a protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Novilhas zebuínas submetidas à sincronização da ovulação com dispositivos de progesterona apresentam comprometimento no crescimento do folículo dominante e da ovulação, quando comparadas com novilhas taurinas. Desta forma, os objetivos deste trabalho são avaliar em novilhas Bos indicus, raça Nelore (n = 32) e novilhas Bos taurus, raça Holandesa (n = 32), sob alta e baixa ingestão de matéria seca/energia, o perfil de secreção de progesterona e de hormônio luteinizante (LH), crescimento folicular, ovulação e expressão gênica em tecido hepático de enzimas relacionadas ao metabolismo de progesterona, a saber: citocromo P450 2C (CYP2C), citocromo P450 3A (CPY3A), e aldo-keto redutase (AKR1C). (AU)

Auxílio à Pesquisa - Organização de Reunião Científica
XXVI reunião anual da sociedade brasileira de tecnologia de embriões
processo 12/10543-9
período: 30/8 a 2/9/2012

Processo FAPESP 2009/00938-3 - Vigência 01/06/2009 a 30/11/2011 
O emprego da produção in vitro de embriões (PIV) visando maior aproveitamento da capacidade reprodutiva dos animais domésticos tem beneficiado significativamente a produção animal. No entanto, a PIV é ainda bastante ineficiente em vacas de leite de alta produção e influenciada por diversos fatores. Dentre estes fatores, as condições climáticas em que os animais são mantidos podem ser consideradas de grande importância. Além disto, a categoria do animal utilizado para a PIV também pode ser determinante para o seu sucesso. Assim, na presente proposta, o efeito da época do ano (época quente e úmida x época mais amena) será estudado em diferentes categorias (vaca em lactação de alta produção, repetidora de serviço e novilha) de fêmeas da raça Holandesa (Bos taurus). O objetivo principal do presente experimento é determinar, com base em análises fisiológicas e moleculares, o melhor momento e as melhores categorias a serem submetidas à aspiração intra-folicular para a PIV. Numa primeira etapa serão avaliados parâmetros fisiológicos, a taxa de recuperação e de oócitos viáveis obtidos através da técnica de ovum pick-up (OPU) in vivo. Num segundo momento, a qualidade desses oócitos será avaliada pela expressão de genes ligados ao estresse térmico (HSP70 e HSP90) e apoptose (Bax, Bcl2 e ITM2B) e pela quantidade de DNA mitocondrial (mtDNA) neles presentes. Além disso, serão analisadas as taxas de desenvolvimento embrionário após fecundação in vitro (FIV) e a qualidade dos blastocistos gerados (número total de células e freqüência de núcleos apoptóticos).

Processo FAPESP 2008/08508-5 - Vigência 01/03/2009 a 28/02/2011
O objetivo desse estudo será avaliar o efeito da dieta com diferentes níveis de energia na qualidade oocitária, na produção in vitro de embriões associado ao perfil metabólico e hormonal em novilhas Bos indicus e Bos taurus. Nesse estudo, 30 novilhas [15 Bos indicus (Gir) e 15 Bos taurus (Holandês)] serão distribuídas aleatoriamente em fatorial 3x2: 1) Baixa energia indicus - as novilhas Gir (Bos indicus) receberão 100% da dieta de manutenção, 2) Baixa energia taurus - as novilhas Holandesa (Bos taurus) receberão 100% da dieta de manutenção, 3) Moderada energia indicus - as novilhas Gir (Bos indicus) receberão 150% da dieta de manutenção, 4) Moderada energia taurus - as novilhas Holandesa (Bos taurus) receberão 150% da dieta de manutenção, 5) Alta energia indicus - as novilhas Gir (Bos indicus) receberão 200% da dieta de manutenção, 6) Alta energia taurus - as novilhas Holandesa (Bos taurus) receberão 200% da dieta de manutenção. Os grupos serão submetidos a doze (12) punções foliculares com intervalos de 14 dias. Serão analisadas a qualidade dos complexos cúmulos-oócitos (grau I, grau II, parcialmente Desnudo, desnudo, cúmulus expandido, degenerado, zona pelúcida) e a quantidade de folículos visualizados [pequenos (d5mm), médios (6-9mm) e grandes (e10mm)], diâmetro do maior e do 2º maior folículo. Na produção in vitro serão avaliadas a qualidade dos oócitos, as taxas de recuperação, clivagem e produção embrionária e o total de células presentes no embrião. Na avaliação metabólica serão analisadas as concentrações de ácidos graxos não-esterificados (AGNE), uréia, ²-hidroxibutirato, colesterol e glicose. Na avaliação hormonal serão analisadas as concentrações de insulina, IGF-1 e leptina. As variáveis dependentes de distribuição normal (paramétricas) serão expressas em média e erro padrão da média (média ± EPM) e analisadas por medidas repetidas no tempo usando o procedimento MIXED do SAS (SAS, 1995) e

Processo FAPESP 2007/0478-2 - Vigência 01/10/2007 a 30/9/2009
No presente estudo serão desenvolvidos dois experimentos a fim de investigar o efeito do dia de aspiração de folículos recrutados de uma onda de crescimento folicular previamente sincronizada (D2, D4 e D6 após a emergência folicular) sobre a produção de embriões in vitro em novilhas de três diferentes grupos genéticos (Bubalus bubalis, Bos indicus e Bos taurus). A fim de eliminar o efeito individual sobre as variáveis analisadas, o delineamento experimental será de cross-over, ou seja, todos os animais passarão por todos os tratamentos. Para sincronizar a emergência folicular, os animais serão submetidos a tratamento à base de progestágeno e benzoato de estradiol associado a progesterona injetável no início do protocolo hormonal. Serão analisados a taxa de recuperação in vivo, a qualidade oocitária (número de camadas e aspecto do cumulus oophorus e do citoplasma) e a qualidade dos embriões produzidos in vitro (taxa de clivagem, taxa de produção de blastocistos, taxa de eclosão e contagem do número de núcleos nos embriões eclodidos).

PROCESSO FAPESP 2004/06096-0
Descrição: o presente projeto procura estudar os aspectos envolvidos na produção in vitro de embriões bovinos e bubalinos. Procura-se avaliar o efeito do estresse calórico na qualidade oocitária e na produção in vitro de embriões zebuínos. Ainda, estuda o efeito do BST na população folicular na qualidade dos oócitos e na produção in vitro de embriões bubalinos.

SUMÁRIO DO PROJETO TEMÁTICO (FAPESP 2002/08363-0): "Controle do desenvolvimento folicular e da ovulação para inseminação artificial, superovulação e transferência de embriões em tempo fixo" - A dificuldade de observação do cio nos zebuínos (Bos taurus indicus) e bubalinos (Bubalus bubalis) limita a utilização da inseminação artificial e transferência de embriões, biotecnologias fundamentais para o melhoramento genético de nosso rebanho. Um das formas de contornar este problema é desenvolver tratamentos hormonais que sincronizem o momento da ovulação, de forma a permitir a inseminação artificial ou a inovulação de embriões em tempo fixo (IATF), ou seja, sem a necessidade de observação do cio. O presente projeto tem como objetivo explorar diversos aspectos relacionados ao controle farmacológico do ciclo estral, desde as bases fisiológicas e farmacológicas até a aplicação no campo de tratamentos hormonais capazes de facilitar e/ou melhorar a inseminação artificial e a transferência de embriões bovinos e bubalinos. Além disso, será dada ênfase à formação de pessoal (treinamento científico de alunos de graduação e pós-graudação) e difusão do conhecimento gerado pelo projeto, por meio de um Congresso específico sobre o tema e palestras a serem proferidas em diversos estados do país.

Auxílio concedido pela Pró-Reitoria de Pesquisa da USP.
Descrição: Este estudo procuou avaliar o efeito do tratamento com somatotrofina recombinante bovina (bST) na população folicular, na taxa de recuperação e qualidade dos oócitos e na produção in vitro de embriões bubalinos. A hipótese foi de que o bST aumenta o número de folículos recrutados e a qualidade oocitária, melhorando a eficiência da técnica de aspiração folicular em fêmeas bubalinas. Foram quantificados o número total de folículos e o tamanho destes a cada sessão. Os oócitos recuperados foram quantificados e classificados de acordo com a sua qualidade (A, B, C, D, E), sendo os A+B+C considerados de boa qualidade. Os embriões produzidos foram vitrificados, e uma parte destes, transferidos em tempo fixo. Com este estudo obteve-se taxa de concepção de 10,53 % (2/19) após a inovulação dos embriões, gerando o nascimento de dois bezerros normais, os primeiros produzidos por essa técnica nas Américas.

Para aferir as prováveis causas da baixa taxa de recuperação de estruturas embrionárias em fêmeas bubalinas superovuladas serão realizados 5 experimentos: Exp. 1: Morfometria comparativa dos sistemas genitais de fêmeas bovinas e bubalinas em fase pós ovulatória; Exp. 2: Movimento ciliar de células epiteliais de oviduto bovino e bubalino submetidos a diferentes concentrações hormonais; Exp. 3: Transporte de oócitos pelos ovidutos bovino e bubalino submetidos a diferentes concentrações hormonais; Exp. 4: Transporte de oócitos no trato genital de fêmeas bovinas e bubalinas com ovulações únicas e múltiplas; Exp. 5: Efeito da rBST na taxa de recuperação de oócitos em búfalas superovuladas. Supõe-se que as fêmeas bubalinas superovuladas apresentem alguma diferenciação na anatomia do sistema genital que possa comprometer a utilização da MOET; além disso, as alterações hormonais verificadas durante o tratamento superovulatório podem afetar os movimentos ciliares das células da endosalpinge e o transporte de oócitos nessa espécie. (AU)
PROCESSO FAPESP 00/00798-0

PROCESSO CNPq 300914/2003-2
A realização do projeto proporcionou grande avanço científico e tecnológico na área de sincronização da ovulação para inseminação artificial em tempo fixo em bubalinos. Na atualidade, inúmeras propriedades rurais estão empregando essa biotecnologia, haja visto os resultados satisfatórios e a praticidade do seu emprego. Tal fato é muito significativo em função de que os criadores de búfalos passaram a utilizar uma poderosa ferramenta para melhorar geneticamente seus rebanhos. Do ponto de vista científico os conhecimentos gerados permitiram otimizar os protocolos de sincronização e identificar as particularidades na resposta a diferentes tratamentos hormonais. Foi verificada baixa eficiência do tratamento com Benzoato de estradiol, o que desqualifica seu emprego como indutor de ovulação em búfalas sincronizadas com GnRH e prostaglandina. A substituição do último tratamento com GnRH no protocolo "Ovsynch" por hCG aumentou a concentração plasmática de progesterona, no entanto, não se verificou aumento na taxa de concepção. O mesmo foi observado com o tratamento com dispositivo intravaginal de P4 administrado entre o tratamento com GnRH e a prostaglandina, que não incrementou a eficiência do protocolo. Esses resultados foram amplamente divulgados em artigos publicados em periódicos, congressos, simpósios e reuniões científicas.

O objetivo deste trabalho foi comparar as taxas de concepção utilizando três protocolos de sincronização de estro e inseminação artificial em tempo fixo. Duzentos e cinqüenta e cinco vacas Nelore lactantes, com 41 a 65 dias pós-parto foram divididas em três grupos equiparados quanto à condição corporal e ao período pós-parto. No grupo controle (n=87) os animais receberam em estágio aleatório do ciclo estral, um dispositivo intravaginal de 1.9 g de progesterona e uma aplicação intramuscular de 2 mg de benzoato de estradiol (D0). No oitavo dia (D8) os implantes foram retirados e os animais receberam 25 mg de PGF 2 alfa. Após 24h todos os animais receberam uma aplicação IM de 1 mg de benzoato de estradiol (D9). Todos os animais foram inseminados 52 a 56 horas após a retirada dos implantes (D10). O grupo ECG (n=84) recebeu o mesmo tratamento do controle adicionando-se uma dose de 400 UI de ECG no momento da retirada dos implantes. O grupo desmame (n=84) recebeu o mesmo protocolo descrito para o controle tendo seus bezerros separados por 52-56 horas a partir do momento da retirada dos implantes. O diagnóstico de gestação foi realizado através de ultra-sonografia (Aloka SSD 500, 5 MHz) 45 dias após a inseminação artificial. As taxas de gestação de concepção obtidas foram 50,57% (44/87), 54,76% (46/84) e 53,57% (45/84) respectivamente para grupos controle, ECG e desmame temporário. Portanto, neste experimento, o uso do ECG e do desmame temporário não incrementaram as taxas de prenhez, provavelmente devido ao bom estado corporal dos animais.

Processo FAPESP 1999/10116-7
Descrição: O projeto procurou estudar os tratamentos de sincronização de crescimento folicular e da ovulação em fêmeas bubalinas durante a estação reprodutiva favorável e desfavorável, com o intuito de viabilizar a inseminação artificial em tempo fixo durante todo o ano, independentemente da marcante estacionalidade reprodutiva verificada na espécie.

PROJETO FAPESP 2000/08764-0
Descrição: O respectivo projeto procurou estudar a resposta folicular aos protocolos de sincronização da ovulação para inovulação em tempo fixo em receptoras de embriões bovinos. Estudou-se o efeito de diferentes indutores de ovulação (LH, HCG, GnRH, Be) e da formação de corpos lúteos acessórios na taxa de concepção. Avaliou-se, ainda, o efeito do tratamento com eCG em protocolos que empregam progesterona e ou progestágeno para sincronização, bem como sua ação luteotrófica.