Patricia Castelucci.

Este trabalho de cultura e extensão tem como objetivos: introduzir os conhecimentos sobre anatomia humana em alunos de creche ,EMEI (6 anos) e ensino fundamental e médio. Trabalha através de palestra e montagem do Museu de Anatomia Itinerante e visa introduzir os conhecimentos sobre os alimentos saudáveis, saúde e aplicações para o desenvolvimento do corpo humano. O trabalho foi relizado na da EMEI Barão de Rio Branco/Grajaú/ São Paulo (n=900), Creche Geraldo de Arruda/Interlagos/SP e E.E Inah de Mello/Santo Andre/SP. Finanaciado Fundo de Pro-reitoria de Cultura e Extensão/USP e Pro-Reitoria de Pesquisa/USP

As doenças inflamatórias intestinais (DII) é um termo usado para descrever a inflamação prolongada do trato gastrintestinal, inclui a Doença de Crohn (DC) e a Colite Ulcerativa. A Colite Ulcerativa afeta os neurônios entéricos e causa uma inflamação da mucosa de forma contínua, estendendo-se do reto ao colo proximal. O receptor P2X7 (P2X7R) é ativado por níveis aumentados de ATP extracelular na inflamação intestinal e ativa o inflamassoma NLRP3. O receptor P2X7 participa na regulação da resposta inflamatória através do processo de liberação de citocinas pró-inflamatórias, como IL-1, IL-18 e TNF-alfa. O objetivo deste projeto é analisar neurônios entéricos e células gliais entéricas na colite ulcerativa experimental crônica em camundongos deficientes para o gene do receptor P2X7 (P2X7R-/-, P2X7RKO) e C57BL/6 Wild Type (WT). Para isto, os camundongos deficientes para o receptor P2X7 (P2X7R-/-) e WT C57BL/6 receberão 2 (2g/100ml) de dextran sulfato de sódio (DSS) dissolvido em água potável por 5 dias seguido de água potável pelos próximos 14 dias. Os animais receberão 3 ciclos de DSS. Serão realizadas as técnicas de duplas e triplas marcações de imunofluorescência com o objetivo de analisar a) a dupla marcação do P2X7R com neurônios óxido nítrico sintase neuronal (NOSn), Calretinina (Carl), à Calbindina (Calb), ao receptor TNF1 (TNFR1), TNF-alfa, ao fator de transcrição NF-k, à Caspase 3 clivada, ao NLRP3 e ao marcador de célula glial GFAP; b) O número e a área de neurônios/gânglio imunorreativo (ir) ao NOSn, Calr, Calb; c) para a análise morfológica do intestino grosso será usado o método de histologia convencional; d) para a averiguação da motilidade intestinal será usado o sistema de banho de órgãos; e) para analisar a apoptose e/ou necrose, será feito o método de TUNEL; f) Para o estudo de vias de sinalização, será feito Western Blotting do receptor P2X7, receptor TNF1 (TNFR1), ao fator de transcrição NF-k, à Caspase 3 clivada e o NLRP3; g) para o estudo das citocinas TNF-alfa e IL-1B será utilizado o método de Elisa.

Projeto Temático FAPESP ( 2021/05445-7)A Bioengenharia Tecidual utiliza técnicas de descelularização, recelularização e bioimpressão 3D para permitir a produção de biomateriais funcionalizados para transplantes. A descelularização de órgãos produz biomateriais acelulares com preservação da composição e estrutura 3D da matriz extracelular (MEC). Esses biomateriais, quando recelularizados e aplicados in vivo, podem proporcionar estímulo local para migração e proliferação de células-tronco e/ou progenitoras, bem como diferenciação celular e/ou modulação da resposta imune inata no sítio de implantação. A bioimpressão 3D pode ser utilizada para otimizar a bioatividade do scaffold descelularizado, tanto pela customização estrutural, quanto por sua associação com outras moléculas e materiais, permitindo, assim, ampliar seu leque de aplicações. Este projeto baseia-se na hipótese de que as estratégias de descelularização, recelularização, bioimpressão 3D e implantação do tecido funcionalizado podem ser utilizadas para entender a quimiotaxia in vivo de células endógenas para estes biomateriais funcionalizados e validá-los para uso na Medicina Regenerativa Veterinária. Para testar esta hipótese, modelos de injúria tecidual in vivo e in vitro serão utilizados. Uma das fontes de diversos biomateriais são os tecidos placentários, que compartilham com tumores diversos mecanismos associados à oncogênese da MEC. Portanto, os Objetivos deste projeto são: a) otimizar o protocolo de descelularização de diferentes tecidos, visando à geração de scaffolds que possam ser associados a diferentes tipos celulares (recelularização) e biopolímeros, dando origem a tecidos funcionalizados a serem utilizados para o reparo de tecidos e órgãos e para o transplante em modelos animais; b) investigar os efeitos de biomateriais placentários na gênese, progressão tumoral. Uma equipe multidisciplinar envolvendo anatomistas, biologistas celulares, cirurgiões e imunologistas e o acesso a tecnologias e facilidades no estado da arte garantem a viabilidade desta proposta. Os resultados obtidos deverão contribuir para melhor compreender não só as interações celulares e moleculares que ocorrem no sítio de injúria tecidual e de tumores, mas, também, permitir o desenho de novas estratégias terapêuticas para o reparo tecidual e a intervenção no crescimento e na disseminação tumoral. Projeto Temático FAPESP

O uso de cadáveres e peças anatômicas humanas é de suma importância para o aprendizado da Anatomia Humana para alunos de cursos da área da saúde. No sentido de tornar o ensino ativo de anatomia humana, se faz necessário usar dissecções de regiões anatômicas do aparelho locomotor e sistema digestório em peças isoladas ou em cadáveres como um meio de auxiliar no processo ensino aprendizagem. Estas peças serão utilizadas nas aulas com o método teórico-prático das disciplinas BMA0138 Anatomia do Aparelho Locomotor e 6700004 (UC8) Anatomia do Sistema Digestório, para os cursos de Fisioterapia e Medicina, respectivamente. Devido a pandemia, os projetos PUBs de 2021-2022 que envolvem a dissecções ficaram paralisadas. Parte destes resultados sobre dissecações e vídeos foi apresentada nos Congressos de Graduação da USP (Castelucci et al., 2018; 2019; Silva et al., 2022), nos quais envolviam Projetos PUBs deste 2018. O projeto atual tem como objetivo dar continuidade ao trabalho de dissecação de peças anatômicas de Aparelho Locomotor ou Sistema Digestório. Além disso, também prosseguir com a edição de vídeos existentes e/ou elaborarem novos vídeos das regiões dissecadas. Este projeto é continuidade do Projeto PUB 2021-2022. Os vídeos confeccionados e editados das peças anatômicas dissecadas serão submetidos para o acervo do e-aulas da USP.

Auxilio Pesquisa FAPESP.A inflamação intestinal afeta os neurônios entéricos. O Butirato é um ácido graxo de cadeia curta produzido pelas bactérias da microbiota intestinal, a partir da fermentação das fibras alimentares. Ele se liga aos receptores de ácidos graxos acoplados à proteína G, como o GPR41, GPR43 e GPR109 e, contribui para a manutenção da barreira intestinal, proteção contra patógenos e como um anti-inflamatório. Tem sido observada a presença de receptores de ácidos graxos de cadeia curta no sistema nervoso entérico. A literatura demonstra que o Butirato de sódio tem sido promissor no tratamento da colite ulcerativa devido aos seus efeitos anti-inflamatórios e neuromoduladores. Diante disto, este projeto tem por objetivo estudar os receptores GPR41, GPR43 e GPR109 e, analisar o efeito do uso do Butirato de sódio nos neurônios do plexo mioentérico de camundongos submetidos à colite ulcerativa experimental que expressam os receptores GPR41, GPR43 e GPR109. Para isto, será injetado o 2, 4, 6, ácido trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) no intestino grosso de animais C57BL/6 e no grupo Sham será injetado o veículo (álcool). Os animais submetidos à colite serão tratados com Butirato de Sódio, via gavagem, e o grupo Sham receberá um volume equivalente de salina. Os animais serão eutanasiados 7 e 14 dias após a injeção de TNBS ou veículo e o tratamento do Butirado de Sódio. Serão analisados: A) A colocalização dos receptores GPR41, GPR43 e GPR109 com neurônios imunorreativos ao óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), Acetilcolina Transferase (ChAT), Calretina (Carl), PGP9.5 (pan- neuronal) e com o marcador pan-glial GFAP; B) Neurônios/gânglio positivos aos receptores GPR41, GPR43 e GPR109, à nNOS, ChAT, Calr, PGP9.5 e das células gliais entéricas imunorreativas à proteína fibrilar glial ácida (GFAP); C) As áreas dos perfis dos neurônios imunorreativos a nNOS, ChAT, Calr, PGP9.5; D) A morfologia do colo distal pela técnica de histologia, utilizando-se coloração de Hematoxilina Eosina, Ácido Periódico de Schiff (PAS) e Picrosirius Red; E) a motilidade intestinal; F) a expressão proteica e expressão gênica caspase-3, do NF-, da histona deacetilase, das MAPKinases; G) Análise da microbiota intestinal; H) Análise dos receptores de GPR41, GPR43 e GPR109 em pacientes com Retocolite Ulcerativa ou Doença de Crohn e I) Estudo de culturas de células primárias do neurônios plexo miontérico e estudo In vitro. Os resultados serão expressos em média erro-padrão e será feita a análise estatística.

As células intersticiais de Cajal (ICCs), células positivas para o receptor para fator de crescimento derivado de plaquetas alfa (PDGFRα+) e células musculo liso (CML) formam um sincício acoplado eletricamente denominado sincício (SIP). ICCs são o marcapasso do intestino, através da produção de ondas lentas que se propagam pelas células do músculo liso (CML) do trato gastrointestinal (TGI). ICCs são identificadas pela imunorreatividade ao receptor de tirosina quinase, c-Kit. As ICCs também são intermediárias da neurotransmissão nitrérgica, colinérgica e mecanossensor. As funções de PDGFRα+ ainda não foram completamente esclarecidas, até o momento sabemos que ela medeia à transmissão purinérgica. ICCs e PDGFRα+ são sensíveis às injúrias causadas pela inflamação, sofrendo transdiferenciação ou morrendo por apoptose frente a um agente inflamatório. A literatura demonstra que o receptor P2X7 expresso em neurônios entéricos está envolvido em processos pró-inflamatórios e seus antagonistas são capazes de diminuir os efeitos lesivos frente a um agente inflamatório. Diante disto, este projeto tem por objetivo analisar as ICCs e as células PDGFRα+ na colite ulcerativa experimental em animais deficientes para o receptor P2X7 (KO). Para isto, será injetado o 2, 4, 6, ácido trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) no intestino grosso de animais P2X7/KO e no grupo Sham será injetado o veículo (álcool). Os animais serão eutanasiados 24 horas e 4 dias após a injeção de TNBS ou veículo. Serão analisados: A) A colocalização dos receptores c-Kit e PDGFRα com fibras imunorreativas ao óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), Acetilcolina Transferase (ChAT), com o marcador pan-glial GFAP, receptor P2X7 e anti-músculo Actina; B) Contagem das ICCs e PDGFRα+; C) As áreas do perfil celular (μm2) de ICCs e PDGFRα+; D) A morfologia do colo distal pela técnica de histologia; E) Analisar as vias de sinalização caspase-3 e NF-KB e F) A motilidade intestinal. As análises qualitativas e quantitativas serão obtidas dos microscópios de fluorescência Nikon 80i e de Confocal de Varredura à Laser. Para a averiguação da motilidade intestinal será usado sistema de banho de órgãos e in vivo por gavagem oral de azul de metileno. Os resultados serão expressos em média ± erro-padrão e será feita a análise estatística.

A disciplina de Anatomia do Aparelho Locomotor é oferecida aos alunos do curso de Fisioterapia da Faculdade de Medicina da USP (FMUSP). Tem sido descrito, que aulas com abordagens práticas durante as aulas teóricas auxiliam a retenção dos conceitos apresentados das aulas. Normalmente, as aulas de anatomia são divididas em aulas teóricas realizadas em anfiteatros e aulas práticas feitas no laboratório de anatomia. Para esta disciplina, foram utilizados recursos integrativos digitais nas quais as aulas práticas eram ministradas concomitante as aulas teóricas no laboratório de anatomia. As aulas foram no Laboratório de Aprendizagem de Anatomia Integrada à Clínica (LAAIC) equipado pelo Projeto Pró-Inovalab 2011 (parceria do Departamento de Anatomia/ICB com a Disciplina de Telemedicina/FMUSP). Este laboratório consta de recursos como data-show, televisores, câmeras de filmagem e sistema de vídeo conferência. As aulas teórico-práticas constituíam de apresentações de aulas no Power Pointer juntamente com a demonstração de peças anatômicas com a utilização de câmera acoplada ao sistema audiovisual nos televisores. Desta maneira, os alunos tiveram acesso simultâneo às peças anatômicas e a transmissão explicativa pelo professor com peças anatômicas similares através de imagens transmitidas pelos televisores. Além disso, foi utilizado o sistema da câmera do Projeto Pro-Inovalab para confeccionar vídeos demonstrativos das peças anatômicas, que eram apresentados durante as aulas teórico-práticas do aparelho locomotor. Após os términos das aulas teórico-práticas, foram realizados estudos práticos com auxilio de roteiros pré-determinados das peças anatômicas com legendas, e exercícios práticos para auxiliar na fixação do conteúdo no próprio laboratório de anatomia. Foi aplicado um questionário para avaliação do método didático selecionado, que demonstra que houve uma melhor aceitação deste método de ensino-aprendizagem pelos alunos dos conceitos anatômicos e demonstrou um aumento nas interações dos alunos com os docentes. Conclui-se que as aulas teórico-práticas com o uso de recursos integrativos digitais realizadas no laboratório de anatomia pode ser um recurso alternativo para uma melhor consolidação dos conhecimentos anatômicos.

A disciplina de Anatomia do Sistema Digestório do ICB (UC 8/Sistema Digestório/ Nutricional) é oferecida aos alunos da FMUSP. As aulas teóricas-práticas constituíam de apresentações no Power Pointer juntamente com a demonstração de peças anatômicas, com a utilização de câmera acoplada ao sistema de televisores no laboratório de anatomia LAAIC-Projeto Pró-Inovalab. Além disso, foi utilizado o sistema da câmera para confeccionar vídeos demonstrativos das peças anatômicas. Este material ficou disponibilizado para os alunos na plataforma MedUSPdigital. Foi utilizado nas aulas práticas, transmissão de uma autópsia do abdômen, em tempo real por meio de videoconferência com o Serviço de Verificação de Óbitos da Capital (SVOC/FMUSP). Após o término das aulas teórico-práticas, foram feitos estudos práticos com roteiros e dissecções de blocos de sistema digestório. Após, foi aplicado um questionário de nível de satisfação com escala de 0 (pouco satisfação) e 10 (muita satisfação) para avaliação dos métodos didáticos para os alunos (n=178). Os resultados demonstraram que para as perguntas: 1) Qual o nível de satisfação para cada um dos métodos de ensino a seguir: a) aula teórica: (7,6±0,1), b) aula prática (8,1±0,2) e c) aula teórica-prática (8,6±0,2); 2) Como você avaliaria o seu nível de aprendizado para cada um dos métodos: a) aula teórica (6,6±0,2), b) aula prática (7,4±0,2) e c) aula teórica-prática (7,9±0.2); 3) Como você avaliaria a sua relação docente-discente para cada um dos métodos: a) aula teórica (8,1±0,2), b) aula prática (8,4±0,2) e c) aula teórica-prática (8,8±0,2) e 4) Com relação a fixação de conceitos, como você avaliaria cada método: a) aula teórica: (6,6±0,1), b) aula prática (7,6±0,2) e c) aula teórica-prática (8,2±0,2). Conclui-se que as aulas teórico-práticas com o uso de recursos integrativos digitais no realizados no laboratório de anatomia pode ser um recurso alternativo para uma melhor consolidação dos conhecimentos anatômicos.

Trabalhos têm demonstrado, que as abordagens práticas durante as aulas teóricas auxiliam a retenção dos conceitos apresentados das aulas. A disciplina de Anatomia do Sistema Digestório do ICB (UC 8/Sistema Digestório/ Nutricional) é oferecida aos alunos do curso de Medicina da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP). A partir de 2018, foi desenvolvido um método de aulas teórico-práticas que constituíam de apresentações no próprio laboratório de anatomia. Nas aulas usavam data show e Power pointer juntamente com a demonstração de peças anatômicas, com a utilização de câmera acoplada ao sistema de televisores no laboratório de anatomia LAAIC-Projeto Pró-Inovalab. Além disso, foi utilizado o sistema da câmera para confeccionar vídeos demonstrativos das peças anatômicas. Este material ficou disponibilizado para os alunos na plataforma MedUSPdigital. Foi utilizado nas aulas práticas, transmissão de uma autópsia do abdômen, em tempo real por meio de videoconferência com o Serviço de Verificação de Óbitos da Capital (SVOC/FMUSP). Após o término das aulas teórico-práticas, foram feitos estudos práticos com roteiros e dissecções de blocos de sistema digestório. Após a finalização das aulas teórico-práticas, foram realizados estudos práticos com auxilio de roteiros pré-determinados das peças anatômicas com legendas, e exercícios práticos para auxiliar na fixação do conteúdo no próprio laboratório de anatomia. Foram confeccionados vídeos de aulas praticas e disponibilizados na plataforma MedUSP digital (Castelucci et al., 2018, 2019). Nas aulas do aparelho locomotor da a Fisioterapia foram utilisados os métodos de aulas teóricos-praticas.Trabalhos têm demonstrado, que as abordagens práticas durante as aulas teóricas auxiliam a retenção dos conceitos apresentados das aulas. A disciplina de Anatomia do Sistema Digestório do ICB (UC 8/Sistema Digestório/ Nutricional) é oferecida aos alunos do curso de Medicina da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP). A partir de 2018, foi desenvolvido um método de aulas teórico-práticas que constituíam de apresentações no próprio laboratório de anatomia. Nas aulas usavam data show e Power pointer juntamente com a demonstração de peças anatômicas, com a utilização de câmera acoplada ao sistema de televisores no laboratório de anatomia LAAIC-Projeto Pró-Inovalab. Além disso, foi utilizado o sistema da câmera para confeccionar vídeos demonstrativos das peças anatômicas. Este material ficou disponibilizado para os alunos na plataforma MedUSPdigital. Foi utilizado nas aulas práticas, transmissão de uma autópsia do abdômen, em tempo real por meio de videoconferência com o Serviço de Verificação de Óbitos da Capital (SVOC/FMUSP). Após o término das aulas teórico-práticas, foram feitos estudos práticos com roteiros e dissecções de blocos de sistema digestório. Após a finalização das aulas teórico-práticas, foram realizados estudos práticos com auxilio de roteiros pré-determinados das peças anatômicas com legendas, e exercícios práticos para auxiliar na fixação do conteúdo no próprio laboratório de anatomia. Foram confeccionados vídeos de aulas praticas e disponibilizados na plataforma MedUSP digital (Castelucci et al., 2018, 2019). Em 2018, também iniciou-se o uso de aulas teóricas práticas no labortaório de anatomia para o curso de Fisioterapia.Nas aulas usavam data show e Power pointer juntamente com a demonstração de peças anatômicas, com a utilização de câmera acoplada ao sistema de televisores no laboratório de anatomia LAAIC-Projeto Pró-Inovalab. Além disso, foi utilizado o sistema da câmera para confeccionar vídeos demonstrativos das peças anatômicas. Este material ficou disponibilizado para os alunos na plataforma MedUSPdigital.

As Doenças Inflamatórias Intestinais (DII) constituem a colite ulcerativa e Doença de Crohn com processos patofisiológicos como a necrose do intestino e efeitos nos neurônios entéricos e glias entéricas Estudos recentes sugerem que o Fator de Necrose Tumoral (TNF) é uma das principais citocinas pró-inflamatórias envolvidas na patogênese das DII. O TNF-alfa (#945;) é um mediador em processos inflamatórios intestinais, sendo uma das principais citocinas envolvidas na patogênese de DII, sendo que seus níveis quando dosados, estão presentes no soro de ambos pacientes com DII. Este projeto tem como objetivo estudar os efeitos do anti-TNF#945;, o Adalimumabe, no plexo mioentérico de camundongos submetidos a colite ulcerativa experimental no sentido de elucidar os mecanismos envolvidos neste tratamento com o medicamento e verificar os potenciais alvos terapêuticos na inflamação intestinal. Para isto, os animais C57BL/6 receberão sulfato de sódio dextran (DSS) dissolvido em água potável por 7 dias até que todos os camundongos dos grupos administrados desenvolvam inflamação intestinal equivalente a de humanos, o grupo sham receberá água pelo mesmo período e o grupo anti-TNF-#945; (TNF#945;) receberá o adalimumabe no 4 dia de ingestão do DSS. Serão analisados no colo distal: a) a avaliação das análises macroscópicas e microscópicas do grau de lesão da colite ulcerativa e o índice de atividade da doença; b) a colocalização do receptor TNF com neurônios imunorreativos (ir) ao óxido nítrico sintase (NOS), acetil colina tranferase (ChAT), Calbindina e as células gliais entéricas imunorreativas a GFAP; c) a densidade (célula/cm2) e as áreas dos perfis dos neurônios imunorreativos ao receptor TNF, à NOS, à ChAT, à Calb e a das células gliais imunorreativas a GFAP; d) a histologia do intestino grosso; e) a expressão proteica do receptor TNF; f) a motilidade intestinal, e g) a presença de citocinas inflamatórias. Para tanto, será usado a técnica de dupla e triplas marcações de imunofluorescencia, as análises qualitativas e quantitativas serão obtidas dos microscópios da fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Para o estudo da expressão proteica, usará Western Blotting; para a averiguação da motilidade intestinal será usado sistema de banho de órgãos; para o estudo das citocinas será utilizado os métodos de Elisa e para a análise morfológica do intestino grosso será usado o método de histologia convencional.

O uso de vídeos tem sido um recurso didático que auxilia no processo de ensino-aprendizagem. Tem sido utilizados vídeos em aulas de anatomia das disciplinas Aparelho do Sistema Locomotor e Sistema Digestório em cursos de Fisioterapia e Medicina da FMUSP, respectivamente. A anatomia humana é uma disciplina que faz parte da grade curricular de muitos cursos da área da saúde da Universidade de São Paulo, no sentido de melhorar a aprendizagem, são confeccionados vídeos aulas e um banco de imagens de peças anatômicas como uma ferramenta para auxílio métodos de ensino.

A 5??adenosina trifosfato (ATP) é conhecido como um neurotransmissor e seus receptores são os da família P2X1-7. Foi demonstrada a presença de receptor purinérgico P2X2, 3, 7 no sistema nervoso entérico. A colite ulcerativa e Doença de Crohn apresentam processos patofisiológicos, a necrose do intestino e atingem os neurônios entéricos e glias entéricas. Tem sido demonstrada a participação do receptor P2X7 no processo inflamatório e necrose de células. Este projeto visa estudar o papel do receptor P2X7 no plexo mioentérico e célula glial entérica na colite ulcerativa de camundongos deficientes para o receptor P2X7 (P2X7-/-, KO). Para isto, será injetado 2, 4, 6, ácido trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) no intestino grosso de camundongos C57BL/6 e P2X7-/- (KO), no grupo Sham será injetado veículo. Os grupos são: WT-Sham, WT-Colite, KO-Sham e KO-Colite. Serão analisados: a) a colocalização do receptor P2X7 com óxido nítrico sintase (NOS), colina acetil transferase (ChAT), e células gliais entéricas imunorreativas a S100β ou ao GFAP; b) neurônio ou glia por gânglio (célula/gânglio) e área do perfil celular (μm2) dos neurônios imunorreativos ao receptor P2X7, NOS, ChAT e glias entéricas; c) a histologia do colo distal; d) a motilidade intestinal; e) a presença de citocinas inflamatórias; f) as vias de sinalização das MAPK: ERK-1/2, p38 MAPK e da caspase-3; g) a expressões proteica e gênica do receptor P2X7. Para tanto, serão usadas técnicas de dupla e triplas marcações de imunofluorescencia, as análises qualitativas e quantitativas serão obtidas dos microscópios da fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Para a averiguação da motilidade intestinal será usado sistema de banho de órgãos, para o estudo das citocinas será utilizado o métodos de Elisa e para a análise morfológica será usado o método de histologia convencional. Para o estudo das vias de sinalização e expressão proteica e gênica, será usado Western Blotting e PCR-RT, respectivamente. Após, serão feitas análises estatísticas. O projeto tem a justificativa de elucidar as classes neuronais afetadas modelo de inflamação intestinal em animais deficientes para o gene P2X7-/- e verificar os potenciais alvos terapêuticos.

Os desafios inseridos na medicina regenerativa e na engenharia genética, nos últimos anos, têm governado os novos rumos da pesquisa em inovações terapêuticas. Além disso, tem aumentado as possibilidades das investigações inter, multi e transdiciplinares que alicerçam os novos horizontes da bioengenharia e transplante de tecidos e órgãos. O conhecimento atual sobre a heterogeneidade, a flexibilidade e plasticidade celular, sustenta a hipótese da associação de biomateriais biológicos bioativos, com células tronco e/ou moléculas bioativas, como uma alternativa promissora na reconstrução de grandes perdas teciduais. Este é um problema de saúde pública relevante e de difícil solução, uma vez que enxertos e transplantes embora indicados, demonstram resultados clínicos nem sempre satisfatórios. De um lado a falta de órgãos e de tecidos destinados a tal finalidade, e do outro a plasticidade da placenta (estrutura presente em mais de 4000 espécies de Eutheria, com enorme variedade de arranjos morfológicos e estruturais) sugere considerar o órgão como uma excelente fonte alternativa para biomaterial acelularizado bioativo para geração de novos tecidos. O potencial terapêutico da placenta tem recebido especial atenção devido a sua capacidade imuno supressora e angiogênica e por ser uma estrutura temporária, geneticamente idêntica ao feto, portadora de rica matriz extracelular, onde são identificados hormônios e citocinas, quimiocinas, colágeno (I, III, IV, V, VI), enzimas, proteínas anticoagulantes, antioxidantes e fatores de crescimento tais como o HGF (fator de crescimento do hepatocito), EGF (fator de crescimento endotelial) e TGF-B. As respostas biológicas da matriz placentária dependem dos métodos utilizados para sua descelularização, pois estes afetam as propriedades da matriz e este resultado interfere na escolha dos tipos celulares a serem utilizados na sua recelularização. Portanto a presente investigação objetiva, primeiramente, analisar as características morfo funcionais, estruturais e ultra estruturais da matriz placentária de espécies distintas priorizando eleger um modelo de scaffold biológico no qual células adultas e embrionárias possam ser associadas isoladamente, ou em co-cultivo, para produzir novos tecidos, incluindo os tecidos vascularizados. A análise das alterações matriciais extracelulares é de fundamental importância para o entendimento de doenças, tais como, tumores e outras que levam à fibrose tecidual. Desta forma, as matrizes extracelulares do tecido ósseo e do pulmão serão caraterizadas em condições normais e durante a evolução de osteosarcomas e de doença inflamatória das vias aéreas, em modelos animais. Em paralelo, alterações na matriz placentária de gestações, produzidas por clonagem, serão investigadas por analise proteomica, para estudar os genes superexpressos relacionados ao aumento do desenvolvimento matricial nesse tipo de gestação.

As doenças inflamatórias intestinais (DII) são doenças crônicas do trato gastrointestinal e incluem a colite ulcerativa e a Doença de Crohn. A colite ulcerativa caracteriza-se como uma inflamação limitada ao colo, normalmente iniciando no reto e espalhando de maneira contínua. A frequência da colite ulcerativa é maior nos países desenvolvidos e áreas urbanas e infecções gastrointestinais prévias podem dobrar o risco de desenvolvimento da doença. A inflamação intestinal, seja ela causada por infecções ou por resposta imune anormal podem levar a alterações que resultam em mudanças estruturais, intrínsecas e sinápticas que alteram a função neuronal. Estudos em modelos animais têm demonstrado o efeito da inflamação intestinal sobre o sistema nervoso entérico, após a indução de colite com substâncias ácidas, como o 2,4,6 Trinitrobenzeno sulfônico (TNBS). Tem sido descrito a presença de receptores purinérgicos P2X1-P1X7 no sistema nervoso entérico. O receptor P2X7 é o maior entre os membros da família P2X e participa na regulação de diversos processos, como a permeabilidade células, apoptose e liberação de citocinas. Um estudo recente demonstrou que a colite ulcerativa reduz o número de neurônios imunorreativos a P2X7 no plexo mioentérico. A redução na densidade neuronal também resultou em perda de motilidade intestinal. Este projeto visa avaliar o efeito do Brilliant Blue G, antagonista do receptor P2X7, no sistema nervoso entérico do intestino grosso de animais submetidos à colite ulcerativa. Serão analisados o colo distal e código químico dos neurônios de ratos Wistar submetidos a indução da colite ulcerativa pela administração TNBS no intestino grosso.

As células gliais entéricas são consideradas apoio estrutural para os neurônios entéricos, no entanto evidências recentes indicam uma interação na comunicação glia-neurônio que contribui para a manutenção neuronal e, que alterações funcionais ou morfológicas, podem exercer um papel nas disfunções gastrintestinais. A isquemia e reperfusão intestinal são eventos clínicos graves com elevada taxa de mortalidade que ocorrem em transplante, embolismo e obstrução intestinal que por consequência afetam os neurônios e células gliais entéricas. O ATP está envolvido na regulação de diversos processos fisiopatológicos e, pode ser co-liberado com outros neurotransmissores e sua sinalização extracelular pode acontecer via receptores da família P2X e P2Y. Algumas características foram descritas para panexina-1 como, mediar à sinalização purinérgica no sistema nervoso, através da sinalização de receptores ionotrópicos e metabotrópicos. O receptor P2X7 tem papel em diversos eventos intracelulares e atua conjuntamente com a panexina-1. Este projeto visa estudar os efeitos da isquemia/reperfusão intestinal (I/R) sobre as células gliais entéricas do íleo de ratos que expressam o receptor P2X7 e panexina-1. A isquemia intestinal será obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo dos vasos ileais no período de 45 minutos, seguida por períodos de reperfusão de 24 horas, 14 dias e 28 dias. No grupo sham não ocorrerá a oclusão dos vasos ileais. Após a I/R serão utilizados os antagonistas do receptor P2X7 (Brilliant Blue G - BBG) e da panexina-1 (Probenecida). Os tecidos serão preparados para métodos de imunohistoquímica de duplas/triplas marcações do receptor P2X7, S100β (pan glial) ou GFAP (pan glial) e Hu (pan neuronal) e da panexina-1. As análises qualitativa e quantitativa serão feitas em microscópio de fluorescência e de confocal de varredura a laser. Também, serão feitas análises de ultra-estrutural, expressão proteica por western blotting (receptor P2X7, panexina-1, S100β/GFAP e Hu) e expressão gênica. Além disso, será estudada a participação das vias de sinalização das proteínas quinases ativadas por mitógeno (MAPK) ERK-1/2, p38 MAPK, NF-KB e o NFAT e da morte celular como a caspase 3. Serão realizados ensaios imunoenzimáticos das citocinas IL-1β, IL-6, IL-10 e TNF-α e análises dos aspectos funcionais da motilidade intestinal nos grupos sham e I/R. O entendimento do papel da glia entérica e da interação do receptor P2X7 com a panexina-1 pode contribuir em estratégias terapêuticas para os transtornos gastrintestinais causados pela isquemia e reperfusão intestinal.

A distrofia muscular do Golden Retriever é uma miopatia hereditária, recessiva e fatal. Achados clinicopatológicos no trato gastrintestinal desses cães, como atrofia muscular, megaesôfago, dilatação gástrica são relatados, com possíveis alterações nos plexos entéricos. Este trabalho tem como objetivo analisar os neurônios colinérgicos e nitrérgicos do plexo mioentérico, a expressão do receptor P2X7 e a morfologia do íleo de cães afetados pela distrofia muscular comparados aos de cães não afetados. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de marcação do Óxido Nítrico Sintase (NOS), Acetilcolina Transferase (ChAT), do pan-neuronal anti-HuC/D e do receptor P2X7. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas dos Microscópios de Fluorescência, de Confocal de Varredura à Laser, e Microscópio Eletrônico de Transmissão. Os resultados qualitativos demonstraram que neurônios NOS-ir e ChAT-ir apresentaram morfologia Dogiel Tipo I com fibras que colocalizam com o receptor P2X7 e a musculatura intestinal com núcleos picnóticos e maior quantidade de fibras colágenas no grupo distrófico. Os dados quantitativos demonstraram: a) diminuição na área do perfil neuronal dos neurônios NOS-ir e ChAT-ir no grupo distrófico b) maior densidade de neurônios NOS-ir no grupo distrófico. O presente estudo adicionou informações sobre o código químico do plexo mioentérico de cães que podem facilitar o entendimento de desordens intestinais nesses animais.

Este trabalho tem como objetivo analisar o efeito do antagonista Brilliant Blue Green (BBG) sobre o receptor P2X7 e o sistema nervoso entérico do íleo de ratos Wistar submetidos à I/R-i (isquemia e reperfusão). Foram utilizados ratos (Rattus novergicus albinus) machos. A isquemia intestinal foi obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo dos vasos ileais no período de 45 minutos, seguida pelos períodos de reperfusão de 0 hora, 24 horas e 14 dias. Foi utilizado o antagonista seletivo do receptor P2X7, o Brilliant Blue G (BBG) nos grupos I/R 24 horas e I/R 14 dias nas dosagens de 50 e 100 mg/Kg. As injeções de BBG (50 e 100 mg/Kg) ou salina no grupo de I/R 24 horas, foram subcutâneas com períodos de 1 hora e 24 horas após a isquemia. No grupo I/R 14 dias o BBG (50 e 100 mg/Kg) ou salina foram injetados 1 hora após a isquemia e nos 5 dias seguintes, uma vez ao dia. O grupo I/R 0 h é grupo sem reperfusão. No grupo sham não houve a oclusão dos vasos ileais, e o grupo controle é aquele que não sofreu nenhuma intervenção cirúrgica. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X7 com a Óxido Nítrico Sintase (NOS, marcador de neurônios inibitórios), Neurofilamento-200 (NF, marcador de neurônios sensoriais), Acetilcolina Transferase (ChAT, maracdor de neurônios colinérgicos) e com o pan-neuronal anti-HuC/D. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das duplas marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas do microscópio de fluorescência. Os resultados do presente estudo demonstraram que as duplas marcações do receptor P2X7 com os neurônios NOS-ir, NF-ir, ChAT-ir e Hu-ir foi de 100%. Houve uma diminuição na densidade (neurônios/cm2) dos neurônios P2X7-ir, NOS-ir, NF-ir, ChAT-ir e Hu-ir nos grupos I/R 0 h, I/R 24 h salina e I/R 14 dias salina. Nos grupos I/R onde foi injetado o antagonista BBG, houve restauração da densidade neuronal em algumas classes. Em relação à análise morfométrica, as diferentes classes neuronais apresentaram diversas alterações na área do perfil nos grupos estudados, com recuperação com o uso do antagonista. Na marcação do TUNEL, nossos dados preliminares mostraram alguns neurônios em apoptose. Nossos resultados demonstram que a I/R afetou a densidade e a área do perfil das diferentes classes neuronais. Com o uso do antagonista BBG, os efeitos da isquemia sobre os neurônios foram restaurados ou diminuídos, demonstrando desta forma uma provável neuroproteção pelo uso do BBG e da participação deste receptor nas alterações dos neurônios na isquemia (Financiado pela FAPESP Proc 12/00259-1).

A resposta do sistema nervoso entérico a diversas lesões acarreta a ativação das células gliais entéricas. Essa ativação tem sido sugerida como um mecanismo de sinalização precoce, responsável pela degeneração neuronal subsequente. Este trabalho tem como objetivo analisar o efeito da isquemia e reperfusão intestinal (I/R-i) sobre as células gliais entéricas, neurônios e receptores purinérgicos P2X2 e P2X7. A isquemia intestinal foi obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo dos vasos ileais no período de 35 minutos, seguida pelos períodos de reperfusão de 0 hora (h), 24 h e 14 dias. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações dos receptores P2X2 e P2X7 com Hu (pan-neuronal) e S100 (marcador glial), e marcações de Hu com proteína fibrilar ácida glial (GFAP marcador glial)/DAPI (marcador nuclear) e S100 com GFAP/DAPI. As análises qualitativas e quantitativas das contagens de duplas marcações, densidades, área dos perfis e proliferação celular foram obtidas dos microscópios de fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Os resultados quantitativos demonstraram: a) os neurônios e células gliais do plexo mioentérico foram imunorreativos (-IR) aos receptores P2X2 e P2X7; b) houve diminuição nas densidades das células aos receptores P2X2-IR e P2X7-IR, neurônios Hu-IR nos grupos I/R-i 0 h, 24 h e 14 dias; c) houve aumento na densidade das células gliais entéricas S100-IR e GFAP-IR; d) na área do perfil de neurônios Hu-IR não apresentaram diferenças significantes, no entanto a área do perfil das células gliais S100-IR apresentaram uma diminuição nos grupos I/R-i; e) foi detectado proliferação de células gliais entéricas S100-IR e GFAP-IR nos grupos I/R-i 0 h e 24 h. O presente estudo demonstrou que a I/R-i está associada com a perda significativa de neurônios, alterações da expressão de receptores purinérgicos e aumento de células gliais entéricas e estas alterações podem contribuir para disfunções na motilidade intestinal.

No trato digestório a Colite Ulcerativa e a doença de Crohn apresentam a necrose intestinal como processos fisiopatológicos. Este projeto teve como objetivo estudar o receptor P2X7 e o código químico do colo distal no SNE de ratos submetidos à colite ulcerativa experimental. O código químico, área e densidade neuronal foram analisados nos neurônios entéricos imunorreativos para óxido nítrico sintase (NOS), colina acetil transferase (ChAT), Calb, Calr e células gliais (S100) com o receptor P2X7. Foi analisado no colo distal de ratos: a) a colite ulcerativa com aDMínistração de TNBS (2, 4, 6 ácido trinitrobenzeno sulfônico) (Grupo Colite) b) ratos Sham injetados com PBS, e c) os animais sem a intervenção (grupo controle). Os tecidos foram preparados para métodos imunohistoquímicos de dupla marcação do receptor P2X7 com NOS, ChAT, Calb, Calr, HuC/D e S100. Houve colocalização no SNE do receptor P2X7-ir (imunorreativos) com os neurônios NOS-ir, ChAT-ir, Calb-ir, Calr-ir, HuC/D-ir, e células S100-ir nos grupos controle, PBS e Colite. No grupo colite os neurônios apresentaram características deformadas, principalmente nos neurônios NOS-ir, no plexo mioentérico. No plexo mioentérico houve diminuição na colocalização do receptor P2X7 com os neurônios NOS-ir em 4,7%, ChAT-ir em 9,7%, Calb-ir em 10%, Calr-ir de 3,4%, HuC/D-ir em 6,8%, e S100 em 9,5%. No plexo submucoso do grupo colite houve aumento dos neurônios Calb-ir de 6%, e dos neurônios Calr aumento de 13,5%, HuC/D-ir houve redução de 18,5%. Foi visto também nesse estudo alterações morfológicas, como aumento de neutrófilos, desintegração do epitélio intestinal e células caliciformes e diminuição de colágeno. A densidade neuronal no plexo mioentérico mostrou diminuição de 42,3%, 34,9%, 22,9%, 60,6%, 14,7% e 29,2% dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir, Calb-ir, Calr-ir, HuC/D-ir e células S100-ir, respectivamente. No plexo submucoso houve diminuição de 34,7%, 11,7%, 33,4% e 44,2% nos neurônios Calb-ir, Calr-ir, HuC/D-ir e células S100-ir, respectivamente, no grupo colite. A área de perfil foi reduzida em 6,8% e 21% nos neurônios NOS-ir e ChAT-ir, respectivamente, tendo aumentado 20% dos neurônios Calb-ir. No plexo submucoso houve diminuição nas áreas, diâmetros máximo e mínimo nos neurônios Calb-ir, não houve alteração desse parâmetros nos neurônios Calr-ir. Este estudo demonstrou que a colite afetou os neurônios do SNE, com seus respectivos códigos químicos que podem causar alterações da morfologia e motilidade intestinal.

A isquemia é definida pelo fluxo arterial insuficiente para manter as funções e necessidades teciduais. As principais condições para a isquemia intestinal incluem transplante, trombose mesentérica aguda venosa ou arterial, embolismo e obstrução intestinal. No trato digestório a Isquemia/Reperfusão-intestinal (I/R-i) acarreta alterações morfológicas nos neurônios entéricos. Este projeto teve por objetivo analisar, no sistema nervoso entérico do íleo, os efeitos da I/R-i sobre a expressão do receptor purinérgico P2X2 e caracterizar estas alterações sobre as diferentes classes neuronais no plexo mioentérico e células gliais entéricas, nos períodos de 24 horas e 1 semana de reperfusão. Foram analisados íleo de ratos dos seguintes grupos (n=5 por período): a) submetidos à cirurgia de isquemia com oclusão da artéria mesentérica superior (AMS) por 45 minutos, com pinça vascular, com reperfusão de 24 horas e 1 semana, b) ratos falsos operados, os ratos foram submetidos aos procedimentos da cirurgia, porém sem o pinçamento da AMS e c) animais controle (CT), sem nenhuma intervenção cirúrgica. Os tecidos foram preparados para métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X2 com a Óxido Nitrico Sintase (NOS), a Acetilcolina transferase (ChAT), a calbindina (Calb), a calretinina (Calr), S100 (pan-glial) e do marcador pan-neuronal (anti-HuC/D). As análises qualitativas e quantitativas das contagens das colocalizações, das densidades neuronais e perfis neuronais foram obtidos dos microscópios de fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Foram feitas análises estatísticas das colocalizações, densidade e perfil neuronal. O presente estudo demonstrou que os neurônios submetidos I/R-i da AMS e Shams, com períodos de 24 horas e 1 semana, respondem de maneira diferenciada. O receptor P2X2 foi encontrado em todas as classes de neurônios do plexo mioentérico nos grupos CT, Sham e I/R-i de 24 h e 1 semana. Houve diminuição na colocalização do receptor P2X2 com a NOS no grupo I/R-i 1 semana e com a ChAT e o anti-HuC/D nos grupos I/R-i 24 h e 1 semana e um aumento com o S100 no Sham e I/R-i 1 semana. A expressão e a densidade do receptor P2X2 no grupo I/R-i 24 h, estava diminuída, porém aumentada no grupo I/R-i 1 semana. Foi observada uma diminuição da densidade e da estimativa da ChAT e do anti-HuC/D nos grupos I/R-i 24 h e 1 semana. A área do perfil neuronal apresentou um aumento dos neurônios NOS, ChAT, Calb, Dogiel II e Calr no grupo I/R-i 1 semana. Pode-se concluir que a I/R-i induz mudanças na expressão do receptor P2X2, neurônios entéricos e células gliais entéricas que podem resultar em mudanças na motilidade intestinal (Universal CNPq).

Dor abdominal pode ser consequente a inúmeras causas, entre as várias possibilidades precisamos ficar atentos aos quadros de isquemia intestinal. O ATP é conhecido como um neurotransmissor e seus receptores são os da família P2X1-7 e, foi demonstrada a presença de receptor purinérgico P2X2-3 no sistema nervoso entérico. No trato digestório a isquemia/reperfusão intestinal (I/R-i) acarreta alterações morfológicas nos neurônios entéricos. Este trabalho tem como objetivo analisar o comportamento das diferentes classes neuronais e do receptor P2X7 no plexo mioentérico do íleo de ratos Wistar submetidos à I/R-i. A isquemia intestinal foi obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo das artérias ileais no período de 35 minutos, seguida pelos períodos de reperfusão de 6, 24, 72 horas e 1 semana. No grupo sham não houve a oclusão das artérias ileais. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X7 com a Óxido Nítrico Sintase neuronal (NOSn), calbindina (Calb), calretinina (Calr) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e do receptor P2X7, da NOSn e da ChAT com o pan-neuronal anti-HuC/D. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das duplas marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas dos microscópios de fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Os resultados qualitativos demonstraram diminuição da expressão do receptor P2X7 no grupo I/R-i de 24 horas e retorno da expressão nos grupos I/R-i de 72 horas e 1 semana. Os dados quantitativos demonstraram: a) os neurônios do plexo mioentérico foram imunorreativos ao receptor P2X7; b) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7 com os neurônios NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir e ChAT-ir nos grupos sham e I/R-i; c) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7, e dos neurônios NOSn-ir e ChAT-ir com o pan-neuronal anti-HuC/D nos grupos sham e I/R-i; d) houve diminuição nas densidades nos grupos I/R-i com 6, 24, 72 horas e 1 semana dos neurônios P2X7-ir, NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir, ChAT-ir e anti-HuC/D-ir quando comparados aos grupos sham; e) houve um aumento na área do perfil dos neurônios NOSn-ir nos grupos I/R-i de 6 e 24 horas, nos neurônios ChAT-ir houve um aumento no grupo I/R-i de 1 semana e nos neurônios Calr-ir houve uma diminuição no grupo I/R-i de 6 horas e um aumento no grupo I/R-i de 24 horas quando comparados aos grupos sham. O presente estudo demonstrou que a I/R-i está associada com a perda significativa de diferentes subpopulações de neurônios do plexo mioentérico acompanhada por diversas alterações morfológicas, o que pode acarretar problemas na motilidade intestinal (Financiado FAPESP 08/05314-5).

As atividades intestinais são coordenadas pelo sistema nervoso entérico e, disfunções na motilidade intestinal são observadas em indivíduos obesos. O ATP é um co-transmissor e seus receptores estão distribuídos nos neurônios entéricos constituindo a família P2X e P2Y. O presente estudo tem como objetivo analisar a expressão do receptor P2X2 e o código químico nos neurônios mioentéricos na obesidade. Foram utilizados íleo de camundongos obesos machos (OBM) e fêmeas (OBF) (C57BL/6J ob/ob), e controles (CF; CM) (+/+), que foram submetidos à técnica imuno-histoquímica de duplas marcações em neurônios imunomarcados ao receptor P2X2 com NOS (inibitórios), ChAT (excitatórios) ou Calr (excitatórios e sensoriais). Resultados dos grupos CF e OBF: Foi verificado a imunomarcação ao receptor P2X2, NOS, ChAT e Calr no citoplasma e nas membranas celular e nuclear dos neurônios mioentéricos de ambos os grupos. As duplas marcações dos neurônios imunorreativos (-ir) ao receptor P2X2 com NOS, ChAT ou Calr em CF foram 244%, 24±2% e 24±4%, e em OBF foram 19±4%, 25±4% e 22±1%, respectivamente. As duplas marcações dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir ou Calr-ir com os neurônios receptor P2X2-ir foram 100% nos dois grupos. A densidade dos neurônios P2X2-ir aumentou em 62%, enquanto que a dos neurônios NOS-ir e ChAT-ir reduziram em 49% e 57%. A morfometria demonstrou aumento na área dos neurônios NOS-ir (CF 234±63, OBF 312±67); ChAT-ir (CF 210±24, OBF 253±14) e Calr-ir (CF 203±41, OBF 315±47), no entanto, neurônios P2X2-ir não apresentaram alterações (CF 325±23, OBF 336±67). A histoquímica demonstrou não haver diferença estatística entre os grupos quanto á densidade e a morfometria dos neurônios NADH-diaforase positivos. Resultados dos grupos CM e OBM: A expressão do receptor P2X2 foi identificada somente em CM e a imunomarcação a NOS, ChAT e Calr nos dois grupos. Em CM as duplas marcações dos neurônios P2X2-ir com NOS-ir, ChAT-ir ou Calr-ir foram 233%, 345% e 326%, respectivamente, e nos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir com o receptor P2X2 foram 100%. A densidade dos neurônios NOS-ir e Calr-ir reduziram em 31% e 16%, enquanto que a densidade da população ChAT-ir aumentou 31%. A morfometria demonstrou que neurônios NOS-ir (CM 390±49, OBM 350±22); ChAT-ir (289±18, OBM 312±44), Calr-ir (CM 375±49, OBM 360±38) e P2X2-ir (CM 437±190) não apresentaram diferenças entre os grupos. A expressão protéica pela técnica do Western Blotting mostrou que houve uma redução de 36,5% no grupo OBM. Concluímos que neste modelo experimental tanto a obesidade (C57BL/6J ob/ob) como os gêneros podem contribuir com alterações: na expressão do receptor P2X2, na densidade e na morfologia dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir, promovendo mudanças nas atividades intestinais (Financiado FAPESP 05/04752-0).