Marilene Hohmuth Lopes.

FAPESP- Programa SPRINT e Instituto de Ciências Biomédicas -USP

A Doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa progressiva mais prevalente no mundo, afetando cerca de 10 milhões de pessoas globalmente. Sem uma cura conhecida, o manejo da DP ainda enfrenta desafios substanciais tanto no diagnóstico quanto no tratamento. A doença é caracterizada pela morte dos neurônios dopaminérgicos no mesencéfalo, resultando em alterações motoras e cognitivas significativas. Embora a causa exata permaneça indefinida, a literatura sugere que a DP pode ser resultante de uma combinação de fatores genéticos e ambientais, que afetam a homeostase celular e aumentam o estresse oxidativo, neuroinflamação e o acúmulo inadequado de proteínas, como a alfa-sinucleína, nos neurônios dopaminérgicos. Apesar dos avanços, as vias moleculares envolvidas na DP ainda não são completamente compreendidas, e a identificação de moléculas-chave para diagnóstico e prognóstico continua sendo um desafio crucial. Nesse cenário, o estudo do perfil do secretoma das células afetadas tem se destacado. Em particular, os microRNAs (miRNAs), moléculas chave na regulação da expressão gênica pós-transcricional presentes em vesículas extracelulares (VEs), têm mostrado um papel crucial na comunicação intercelular durante a progressão da doença. Recentemente, nosso grupo identificou que miRNAs enriquecidos em VEs durante a diferenciação dopaminérgica de precursores neurais estão associados à biologia da DP. No entanto, o papel desses miRNAs em modelos robustos de origem dopaminérgica expostos a neurotoxinas in vitro, ainda não foi elucidado. Desta forma, este estudo visa investigar a função dos miRNAs derivados de VEs de neurônios dopaminérgicos, obtidos através da diferenciação da linhagem SH-SY5Y e de organoides mesencefálicos, em modelos in vitro da DP. Utilizaremos plataformas 2D e 3D, incluindo linhagens neuronais e organóides cerebrais derivados de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs), que recapitulam as características estruturais da substância negra do mesencéfalo. Nosso objetivo é modular a expressão de miRNAs de interesse através de agomirs e antagomirs, que mimetizam e inibem miRNAs, respectivamente. Focaremos na análise do perfil de expressão desses miRNAs, seus mecanismos de ação e suas possíveis funções neuroprotetoras. Esta pesquisa tem o potencial de proporcionar novas perspectivas na identificação de biomarcadores que possam melhorar significativamente a predição, diagnóstico e tratamento da DP, com implicações importantes para a aplicação clínica futura.

O Transtorno do Espectro Autista (TEA) afeta aproximadamente 1 em cada 100 crianças em todo o mundo e engloba uma gama de condições do neurodesenvolvimento caracterizadas por prejuízos na interação social, déficits de comunicação e comportamentos estereotipados. A etiologia do TEA envolve uma complexa interação de fatores genéticos, epigenéticos, metabólicos, imunológicos e ambientais. Sua heterogeneidade apresenta desafios adicionais para o diagnóstico e tratamento, ressaltando a necessidade de biomarcadores confiáveis e de uma compreensão mais profunda de seus mecanismos subjacentes. Um subtipo específico de TEA, o TEA relacionado a autoanticorpos maternos (da sigla em inglês Maternal Autoantibodies-related autism, MAR-ASD), envolve autoanticorpos maternos (MAUAbs) que têm como alvo o tecido cerebral fetal. Esses autoanticorpos, incluindo aqueles contra a proteína Stress-inducible phosphoprotein 1 (STIP1), estão associados a formas mais graves de TEA. A STIP1, uma co-chaperona para as proteínas de choque-térmico HSP70 e HSP90, desempenha um papel crítico no neurodesenvolvimento através de sua interação com a proteína prion celular. Esse complexo é essencial para a homeostase proteica, neuritogênese, proteção neuronal e formação de memória. A deleção de STIP1 em camundongos resulta em letalidade embrionária precoce e deficiências na formação do tubo neural, destacando sua importância no desenvolvimento inicial. No entanto, os efeitos específicos da redução da expressão de STIP1 no neurodesenvolvimento humano e sua interação com autoanticorpos maternos no TEA não são bem compreendidos. Este projeto tem como objetivo investigar de forma abrangente as funções da STIP1 no neurodesenvolvimento e avaliar o impacto dos anti-STIP1, um tipo de MAUAbs, em modelos humanos, utilizando plataformas 3D para modelar o desenvolvimento neural e a função cerebral. Além disso, pretendemos iniciar o estudo de MAR-ASD no Brasil, testando a prevalência de MAUAbs em uma coorte de mães de crianças com TEA. Por meio deste projeto, elucidaremos as vias moleculares moduladas pela STIP1 e seus parceiros no contexto do neurodesenvolvimento e do TEA, fornecendo insights sobre potenciais biomarcadores e alvos terapêuticos para este transtorno.

A sobrevida global média de pacientes com glioblastoma (GBM), a forma mais grave de gliomas, é de cerca de um ano. As células de GBM infiltrativas no tecido cerebral adjacente são intrinsecamente quimioresistentes e ultrapassam as margens cirúrgicas, contribuindo definitivamente para a recidiva do GBM e, portanto, para a alta letalidade da doença. Novas opções terapêuticas são necessárias, mas uma questão fundamental no desenvolvimento de novas propostas terapêuticas é se os modelos in vitro e pré-clínicos disponíveis são suficientemente translacionais, ou seja, se representam fielmente a doença em humanos. As culturas de organoides cerebrais tridimensionais (3D), ou mini-cérebros, derivados de células-tronco de pluripotência induzida humana (iPSC), oferecem uma representação mais acurada do cérebro humano, com um resultado mais rápido e robusto do que os modelos pré-clínicos disponíveis atualmente podem oferecer. Co-culturas de organoides cerebrais e células tumorais representam uma ferramenta valiosa para estudos futuros sobre a dinâmica da invasão de GBM e para desenvolver estratégias de tratamento de inibição da invasão cerebral. Neste projeto, utilizaremos linhagens celulares de GBM estabelecidas e células de GBM derivadas diretamente de pacientes para co-cultivá-las com os mini-cérebros. Estes modelos serão utilizados para quantificar o fenótipo infiltrativo destas células no ambiente dos mini-cérebros e estudar o papel de moléculas de superfície celular implicadas na modulação deste fenótipo. Finalmente, iremos avaliar a relevância dos mini-cérebros para estudar o papel da terapia combinada, uma modalidade terapêutica que visa combinar dois ou mais quimioterápicos com outras pequenas moléculas inibitórias que possam influenciar não somente o componente proliferativo, mas também o comportamento invasivo destes tumores. Recriar o ambiente do cérebro para estudar o GBM e testar os tratamentos de maneira eficiente talvez seja o melhor caminho para sobrepujar a incurabilidade da doença. Pesquisas futuras devem buscar elucidar novas estratégias para alvejar especificamente as células invasivas do tumor, reduzir as taxas de recorrência e melhorar a sobrevida global do paciente.

O proteoma celular é constantemente exposto a uma ampla variedade de condições de estresse proteotóxico, incluindo: radiação, estresse oxidativo, infecção, agentes farmacológicos, inflamação, entre outros. Em todos os organismos, a indução da resposta ao estresse é essencial para a manutenção da homeostase proteica. Uma marca registrada das células e organismos em condições de estresse é a síntese aumentada de chaperonas moleculares que controlam mecanismos de biogênese, dobramento, tráfego e degradação de proteínas nas células. O desbalanço da proteostase pode levar ao acúmulo de proteínas mal-enoveladas ou excessiva degradação proteica, que estão associados a diversas doenças neurodegenerativas e câncer. A modulação da resposta ao estresse celular também desempenha um papel crítico na regulação do tempo de vida e doenças relacionadas ao envelhecimento, como doença de Alzheimer, Parkinson, Huntington e prion. Inúmeras pesquisas utilizam diferentes organismos modelos (leveduras, invertebrados e mamíferos) para identificar os mecanismos que regulam a homeostasia proteica através de diferentes abordagens (genéticas, bioquímicas, biologia celular, etc). O principal objetivo desse Workshop é unir diferentes grupos de pesquisa para discutir recentes avanços na área com enfoque em chaperonas e controle de qualidade, regulação da proteostase, proteostase no estresse e biologia do desenvolvimento e proteostase em doenças neurodegenerativas e câncer

Glioblastoma (GBM), the most aggressive and frequent form of brain malignant tumors in adults, contains a subpopulation of tumor cells called GBM stem cells (GSCs), essential for tumor maintenance, invasion and resistance to therapy. Functionally relevant GSCs plasma membrane markers present potential as a therapeutic target for the treatment of this aggressive disease. Our group has shown that the GPI-anchored membrane glycoprotein, prion protein (PrPC) is enriched in GSCs and is co-expressed with conventional GSC markers. The loss-of-function of PrPC in GSC results in the inhibition of self-renewal, proliferation and capacity for tumor formation. We have proposed that PrPC acts as a scaffold protein on the cell surface, recruiting and organizing molecules on signaling platforms with different biological consequences. In light of these findings, this study aims to investigate the role of PrPC as a key molecule in GSC biology, modulating pathway signaling platforms associated with stemness and differentiation processes and as a target for GBM therapy. We proposed to address this question by using four different paradigms: 1) in vitro assays using patient-derived GSCs cultures to assess the function of PrPC and partners in the biology of these cells; 2) Transcriptome profiling using Exon Microarray and RNA-seq to define the PrPC and partners expression pattern, to quantify PrPC targets and downstream signaling pathways up/downregulated according to PrPC expression; 3) in vivo assays using GSCs to target PrPC, its partners and/or intracellular signaling-related proteins in combination with temozolomide; 4) in vitro assays to test the effect of extracellular vesicles into directed specification of GSCs toward the neuronal lineage as alternative for anti-GBM therapy. Thus, this proposal will employ the scaffold concept for PrPC as an alternative for the development of new strategies for the treatment of GBM and to demonstrate that PrPC might act as a key regulator interconnecting functions related to GSCs stemness maintenance.

SPRINT - São Paulo Researchers in International Collaboration / SPRINT - Projeto de Pesquisa - Mobilidade - Edição 2018/04 - CALDO Consortium - University of Waterloo and Western University.

Cellular resilience to stress depends in part on the concerted action of chaperones to control proper protein folding and function. Stress-inducible phosphoprotein 1 (STIP1, STI1, HOP for Hsp-organizing protein in humans) is a protein conserved from yeast to mammals that is thought to assist Hsp90 in regulating its client proteins by mediating their transfer from Hsp70. Our research program will allow for intensive HQP training in advanced cell and molecular biology, biochemistry and mouse genetics. Our experiments will delineate how STI1 levels influence chaperone activity and abundance and the consequences of altered levels of chaperones in embryonic stem cells. We expect to unveil the specific roles of STI1/Hsp70/Hsp90 machinery during development in controlling stem cell pluripotency.

Glioblastoma (GBM), a forma mais agressiva e frequente de tumores malignos cerebrais em adultos, contém uma subpopulação de células tumorais, denominadas células-tronco de GBM (CTG), essenciais para manutenção do tumor, metástase e resistência à terapia. Marcadores de membrana plasmática de CTG funcionalmente relevantes apresentam potencial como alvo terapêutico para tratamento dessa doença agressiva. Nosso grupo tem mostrado que a glicoproteína de membrana GPI-ancorada, proteína prion (PrPC) está enriquecida em CTG e é co-expressa com marcadores convencionais de CTG, como CD133. A perda-de-função de PrPC em CTG resulta na inibição da autorrenovação, proliferação e capacidade de formação de tumores. Vários ligantes já foram descritos para PrPC, incluindo proteínas da matriz extracelular e transmembrana, das quais algumas são funcionalmente relevantes para a biologia de CTG. Dos principais marcadores de CTG já descritos, CD133, CD44 e integrinas ±6 e ±7, interagem e/ou compartilham com PrPC o mesmo microdomínio de membrana, sendo preferencialmente localizados em lipid rafts. Propõe-se que PrPC atue como proteína scaffold na superfície celular, recrutando e organizando moléculas em plataformas de sinalização com diferentes consequências biológicas. Diante desses achados, este estudo visa investigar o papel de PrPC como molécula chave na manutenção do estado indiferenciado de CTG através da modulação de plataformas de sinalização de vias associadas ao stemness e como alvo para terapia de GBM. Para esse fim, estudos de perda-de-função de PrPC serão conduzidos pela técnica de CRISPR/Cas9 em CTG. A expressão, distribuição na superfície celular e tráfego intracelular de potenciais moléculas componentes da plataforma serão abordadas por imunofenotipagem, ensaios bioquímicos, microscopia confocal e ensaios funcionais de autorrenovação e proliferação. A participação de PrPC e seus parceiros, membros da plataforma de sinalização, também será avaliada em ensaios de resistência à quimioterápico (temozolomida). Dessa forma, pretende-se utilizar o conceito scaffold de PrPC como uma alternativa para o desenvolvimento de novas estratégias para o tratamento do glioblastoma, além de demonstrar que PrPC pode atuar como um regulador chave da manutenção de stemness de CTG.

Células pluripotentes tem o potencial de se diferenciar em todos os tipos celulares de um organismo. Este estado celular único é governado por uma rede de fatores de transcrição interconectados sendo Oct4 um fator central na manutenção e indução da pluripotência. Evidências apontam o envolvimento da maquinaria de proteostase regulada pela co-chaperona STIP1 (Stress Inducible Phosphoprotein 1) e seus ligantes, Hsp70 e Hsp90, na embriogênese e na manutenção da pluripotência de células-tronco embrionárias. Dados do nosso grupo apontam que o silenciamento de STIP1 afeta a manutenção do estado pluripotente de células-tronco embrionárias com a redução da expressão proteica de múltiplos fatores de transcrição, incluindo Oct4, Sox2, Nanog e STAT3. Interessantemente, dados da literatura mostram que Hsp90 é capaz de manter os níveis de fatores de pluripotência estáveis, particularmente de Oct4. De fato, um estudo aprofundado do papel de STIP1 e seus parceiros na regulação e manutenção da pluripotência de células-tronco é fundamental para a compreensão dos mecanismos básicos do controle da pluripotência de células-tronco. Assim, o principal objetivo desta proposta é avaliar o papel de STIP1 na regulação da expressão de Oct4 em fibroblastos murinos derivados de animais geneticamente modificados expressando diferentes níveis de STIP1 (níveis normais, haploinsuficiente e que superexpressa STIP1) e uma isoforma truncada (sem o domínio TPR1 de ligação a HSP70), e consequentemente avaliar seu envolvimento na indução do estado pluripotente. Portanto, dissecar a base molecular da pluripotência de células-tronco é fundamental para compreender a biologia de células-tronco, o desenvolvimento embrionário inicial e para aplicação clínica em medicina regenerativa.

A proteína STI1 é um co-chaperonina que, juntamente com as proteínas de choque térmico Hsp90 e 70 formam um complexo proteico que auxilia no correto dobramento de uma série de proteínas clientes. STI1 pode ser secretada associada a vesículas endossomais e, uma vez no espaço extracelular, pode interagir com a proteína príon (PrPC) e desencadear diversos efeitos tróficos como proliferação, proteção contra morte celular, diferenciação e migração celular. Tais fenômenos foram observados em situações fisiológicas (desenvolvimento e plasticidade do sistema nervoso) e patológicas (câncer e isquemia cerebral). A deficiência de STI1 é letal, promovendo a morte de embriões de camundongos após o período de implantação. A haploinsuficiência (animais STI1+/-) está associada com uma maior vulnerabilidade a isquemia experimental. A secreção de STI1 (desencadeada pela hipóxia) promove sua interação com PrPC deflagrando sinais que estimulam a angiogênese e este fenômeno está associado ao mecanismo de recuperação pós-isquemia cerebral. Em conjunto, esses achados sugerem um envolvimento do complexo STI1-PrP com os mecanismos que governam a formação de vasos sanguíneos. Portanto, este projeto tem como objetivo estudar os processos envolvidos na angiogênese em duas situações: 1- durante o desenvolvimento de camundongo, associando à biologia de precursores vasculares; 2- em tumores cerebrais, onde a angiogênese representa um fenômeno fundamental para o crescimento e manutenção do tumor. Os achados deste trabalho contribuirão para um melhor entendimento das funções de STI1 e de seu receptor PrPC nos processos associados a angiogênese e, consequentemente, poderão ser utilizados para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para patologias humanas.

A proteína prion de mamíferos (PrPC) tem sido intensivamente estudada devido seu papel crucial no desenvolvimento de encefalopatias espongiformes transmissíveis, as quais podem ser classificadas em três subtipos: formas infecciosa, esporádica ou familial. A conversão de PrPC em uma isoforma insolúvel (PrPSC), a qual acumula no cérebro causando morte neuronal, é o principal evento associado a TSEs1. Uma vez que as manifestações clínicas das doenças por prion ocorrem antes ou na ausência da formação de depósitos, acredita-se que a perda ou alteração da função normal de PrPC pode contribuir para a etiologia dessas doenças neurodegenerativas1,2. Vários achados da literatura revelam que PrPC é capaz de orquestrar diferentes processos neurotróficos relacionados ao desenvolvimento cerebral e plasticidade neural em encéfalo adulto, sendo considerada uma molécula fundamental para a atividade cerebral1,2. Interessantemente, evidências recentes mostram que PrPC apresenta um importante papel na neurogênese de encéfalo adulto, regulando positivamente a proliferação celular de células-tronco neurais (CTN), células multipotentes capazes de se auto-renovar e gerar os principais fenótipos cerebrais (células da glia e neurônios), sendo encontradas em sítios neurogênicos como por exemplo, zona subventricular (ZSV) e giro dentado (GD) do hipocampo 3,4. Adicionalmente, inúmeros estudos demonstram que os efeitos neurotróficos mediados por PrPC dependem de sua associação com diferentes moléculas na superfície celular e da ativação de vias de sinalização específicas como por exemplo, PKA, MAPK e mobilização de cálcio, indicando PrPC como uma molécula chave na formação de uma plataforma dinâmica contendo vários módulos sinalização1,5,6. Portanto, a elucidação das vias de sinalização deflagradas por PrPC na neurogênese, juntamente com o entendimento de vias envolvidas em outros processos celulares, proverá pistas de como a isoforma infecciosa de PrPC conduz esta devastadora doença neurodegenerativa. Portanto, o principal objetivo deste projeto será avaliar se a perda de função de PrPC em CTN pode contribuir para a etiologia de doenças priônicas. Desta forma, mutantes de PrPC carregando mutações associadas a doenças priônicas genéticas (tipo-selvagem ou mutações nos códons 101L, 104L, 116V, 177N, 179I, ou 199K) serão expressos em CTN derivadas da ZSV de animais deficientes para PrPC (Prnp0/0). As CTN expressando PrPC mutante ou selvagem serão cultivadas como neuroesferas para análise da auto-renovação, proliferação, sobrevivência, diferenciação e sinalização celulares. Finalmente, a capacidade de PrPC em modular a formação de complexos multi-protéicos na superfície de células neurais é provavelmente a base para sua propriedade neurotrófica e pode ser relevante para a perda de função de componentes de doenças priônicas, em particular aquelas associadas a morte neuronal.

O estudo da biologia de parasitas, vírus e príons e de sua interação com o hospedeiro é fundamental para o desenvolvimento de novas estratégias que resultem em avanços nas áreas da saúde pública, agricultura e economia. Embora atualmente ocorra um crescente progresso na elucidação de mecanismos pelos quais os patógenos desenvolvem-se, nosso completo entendimento sobre as bases moleculares e celulares do processo de patogenicidade ainda é escasso. 
Portanto, o objetivo de se formar o NUSCEP é promover a integração de esforços em três abordagens: 1) caracterização das vias de sinalização e validação de sua relevância no ciclo infeccioso de patógenos a fim de identificar novas estratégias de controle; 2) investigação dos mecanismos pelos quais a resposta imune é modulada pelo patógeno; 3) uso da bioinformática para integração funcional de redes de sinalização dos processos biológicos.
A proposta engloba pesquisadores de diferentes áreas, tais como, bioquímica, biologia celular e molecular, imunologia e bioinformática. A integração dessas áreas em torno de questões relevantes aos diversos aspectos da patogenicidade é chave na identificação dos componentes envolvidos em vias de sinalização que regulam interação e desenvolvimento dos patógenos.
Nesse sentido nossas pesquisas incluirão estudos com Plasmodium falciparum e Plasmodium vivax, agentes etiológicos da malária humana, HPV, vírus responsável pela progressão do câncer de colo uterino em 99% dos casos relatados e príon, que desempenha papel crucial em encefalopatias espongiformes transmissíveis. Outro aspecto abordado incluirá a modulação da resposta imune na infecção. Tendo-se em vista a complexidade dos problemas, o uso de modelos computacionais será uma ferramenta complementar importante na integração e formação de redes de sinalização. Portanto, o apoio ao NUSCEP trará enormes frutos na formação de recursos humanos, geração de novas ideias e integração de áreas distintas, porém complementares.

Subprojeto: E

Stress inducible protein 1 foi originalmente identificada como uma co-chaperonina capaz de modular a atividade de proteínas de choque térmico (Hsps) de 70 e 90 kDa. No entanto, um grande número de evidências sugere que STI1 não é apenas uma proteína adaptadora para manter Hsps unidas. A interação de STI1 com inúmeros parceiros como membros da família Hsps, fatores de transcrição, proteína prion (PrPC) entre outros, mostra sua versatilidade funcional. As diversas localizações subcelulares de STI1 indicam que essa proteína pode formar complexos multiprotéicos no núcleo, citoplasma e no meio extracelular, com diferentes atividades biológicas. Interessantemente, quando no espaço extracelular, a forma solúvel de STI1 é capaz de interagir com PrPC, uma glicoproteína de membrana plasmática, e orquestrar importantes fenômenos biológicos relacionados ao desenvolvimento do sistema nervoso e plasticidade neural, como auto-renovação de progenitores neurais, controle de diferenciação e sobrevivência neurais e consolidação da memória. Recentes achados mostram STI1 envolvida na regulação do status pluripotente de células-tronco embrionárias, sugerindo um papel para essa molécula na embriogênese.
	Diante desses dados que mostram inúmeras funções biológicas associadas a STI1, e na tentativa de explorar o papel de STI1 no desenvolvimento de mamíferos, um camundongo nocaute constitutivo, deficiente para o gene de STI1, foi gerado. Dados preliminares mostram que animais em homozigose a deleção de STI1 é letal e leva à má-formação embrionária que parece ocorrer entre o sexto e o décimo dia do desenvolvimento murino (E6.5 - E10.5), indicando assim que STI1 pode ser um fator indispensável no desenvolvimento de mamíferos. 
	Desta forma, o cultivo de células-tronco embrionárias pluripotentes torna-se a abordagem mais adequada para estudarmos o mecanismo envolvido na letalidade de embriões deficientes para STI1 no período inicial do desenvolvimento, pois é o único modelo que mimetiza o desenvolvimento do epiblasto in vitro com capacidade de contribuir para todas as células do tecido fetal, incluindo linhagem germinativa. 	Considerando-se que pouco se conhece a respeito da contribuição de STI1 para a manutenção de células-tronco embrionárias e desenvolvimento embrionário, e baseando-se nos dados da literatura que mostram um papel central de STI1 em mecanismos que governam a plasticidade cerebral durante o desenvolvimento, o principal objetivo desta proposta é investigar a função de STI1 no desenvolvimento embrionário murino utilizando como modelo células-tronco embrionárias e avaliar a relevância do seu principal parceiro, PrPC, nestes processos.
Portanto, esse estudo contribuirá para a elucidação das propriedades tróficas de STI1 sobre os mecanismos moleculares que regulam a proliferação e/ou a diferenciação de CTEs, acarretando na potencial aplicação desta molécula como uma ferramenta terapêutica na medicina regenerativa.

Gliomas são tumores derivados de células da glia ou de seus precursores. Clinicamente, gliomas são classificados de acordo com sua agressividade em graus I a IV, sendo o grau IV o mais agressivo, invasivo e neurologicamente destrutivo. O astrocitoma grau IV, também conhecido como Glioblastoma Multiforme (GBM), é também o tumor cerebral mais comum em humanos. Apesar de inúmeros esforços para o tratamento, o tempo médio de sobrevida para pacientes diagnosticados com GBM varia de 9 a 12 meses, uma variação que quase não tem mudado ao longo das últimas décadas. Células-tronco de gliomas (CTG), uma pequena sub-população de células tumorais que exibem propriedades de células-tronco como auto-renovação e relativa quiescência, têm sido implicadas como um fator chave no insucesso do tratamento e recorrência devido suas propriedades de quimio e radio-resistência. Portanto, novas modalidades de tratamento direcionadas a redução da proliferação celular e aumento da morte de CTG são essenciais para a eficácia na terapia de glioblastomas.
 	Nosso grupo tem caracterizado STI1/hop (Stress Inducible Protein 1/Hsp70-Hsp90 organizing protein) como um ligante específico da proteína prion (PrPC), uma glicoproteína de superfície celular. Além de exercer a atividade de co-chaperonina, STI1/hop é secretada por astrócitos e apresenta funções neurotróficas através de sua ligação com PrPC. O complexo PrPC-STI1/hop é capaz de modular mecanismos que governam a proliferação celular, diferenciação, sobrevivência, plasticidade neuronal e formação de memória. Interessantemente, nós temos demonstrado que a interação de PrPC com STI1/hop também participa da auto-renovação de células-tronco neurais de embrião e encéfalo adulto.
	Resultados recentes do nosso grupo mostraram que STI1/hop é mais expressa em GBM humano que em tecido cerebral normal. Nossos achados mostraram que a proteína STI1/hop é secretada por células de glioblastoma e funciona como um fator autócrino, promovendo a proliferação dest

Os gliomas são tumores originados de células gliais e são classificados de acordo com sua agressividade em graus I a IV. Este último, também chamado de glioblastoma multiforme tem o prognóstico associado à sua capacidade proliferativa sendo que sua resposta a qualquer terapia é pouco eficaz. Portanto, o estudo de proteínas associadas com processos proliferativos em células tumorais é bastante relevante. Nossos achados mostraram que a proteína STI1/Hop é secretada por células de glioblastoma e funciona como um fator autócrino, promovendo a proliferação destas células via ligação com a proteína prion celular (PrPC). Nosso grupo demonstrou que o peptídeo STI1/Hop230-245 , que representa o domínio de ligação de STI1/Hop à PrPC, compete pela ligação entre estas duas proteínas inibindo a proliferação de células de glioblastoma humano in vitro. Adicionalmente, dados recentes do nosso grupo apontam para um possível efeito do peptídeo STI1/Hop230-245 na regressão tumoral in vivo. Frente a estas evidências, o Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer depositou uma patente para o uso deste peptídeo no tratamento de tumores humanos, particularmente glioblastomas. 
Assim, o presente projeto tem como principal objetivo avaliar o efeito do peptídeo STI1/Hop230-245 na proliferação/crescimento de glioblastoma humano xenoenxertados intracranialmente em animais imunodeficientes. O entendimento dos efeitos associados ao peptídeo STI1/Hop230-245 sobre o crescimento tumoral in vivo permitirá a determinação de uma nova abordagem terapêutica para glioblastomas, uma vez que há poucas e limitadas alternativas para o tratamento destes tumores.

A co-chaperonina STI1 (?stress inducible protein one?) foi caracterizada pelo nosso grupo como ligante específico da proteína prion celular (PrPC), a isoforma normal da proteína relacionada à doenças neurodegenerativas. A interação ente PrPC e STI1 é capaz de modular a sobrevivência e diferenciação neuronais. Além disso, PrPC desempenha uma função importante na biologia de células tronco neurais (NSCs) e dados preliminares do nosso grupo mostram que sua interação com STI1 participa na auto-renovação (expansão e manutenção) destas células. As NSCs além de estarem envolvidas com a neurogênese do sistema nervoso central adulto, podem originar ou controlar neoplasias cerebrais, particularmente gliomas, meduloblastomas e ependimonas. Sabe-se que STI1 é secretada tanto por astrócitos normais quanto tumorais (linhagens de glioblastoma) e sua interação com PrPC modula a proliferação celular de glioblastoma humano. Interessantemente, estudos recentes in vivo mostram que as NSCs podem ser recrutadas para xenotransplantes de glioblastoma e que este evento está associado com redução do tamanho do tumor e ao aumento da sobrevida dos animais. Diante desses dados torna-se aparente um possível envolvimento de STI1 na biologia de tumores cerebrais, uma vez que o bloqueio de sua interação com PrPC e sua participação na auto-renovação de NSCs poderiam modular a progressão tumoral. Considerando-se que as NSCs constituem um modelo relevante para explorar a biologia de gliomas e para a triagem de novos agentes terapêuticos, esse projeto tem como objetivo investigar a participação de STI1 e PrPC na biologia de células tronco neurais de animais adultos e estudar uma possível relação entre essas células com neoplasias cerebrais. Finalmente, cabe ainda ressaltar que a concretização desse projeto implantaria novas linhas de pesquisa no grupo: neurogênese, estudos de neoplasias associadas ao SNC (i.e, glioblastomas) e a relação entre neurogênese e tumorigênese cerebral.