Fabíola Attié de Castro.

Curso destinado a formandos da area de saude para aprimorar tecnicas laboratoriais de isolamento e cultivo celular

Projeto de pesquisa que visa descrever biomarcadores para selecionar pacientes com Leucemia Mielóide Crônica que podem se beneficiar da descontinuação do uso dos inibidores de tirosina quinase.Projeto Universal CNPq (chamada CNPq/MCTI/FNDCT N 18/2021 - Faixa A Grupos Emergentes). PROCESSO 406361/2021-5

Projeto visa o desenvolvimento de uma plataforma de obtenção de exossomos derivados de células estromais mesenquimais cultivadas em larga escala e incorporação dos mesmos como ativo em formulação de uso tópico para o tratamento de úlceras crônicas em modelo experimental de anemia falciforme(Chamada MS-SCTIE-Decit-DGITIS-CGCIS/CNPq no 26/2020 PlataformasInovadoras em Terapias Avançadas; Processo 442542/2020-8; Vigência: Janeiro de 2021a Dezembro de 2023).

As neoplasias mieloproliferativas (NMP) são desordens hematológicas caracterizadas por aumento da proliferação celular e acúmulo de células mielóides maduras e precursoras na medula óssea e no sangue periférico independentemente de estímulos de citocinas e fatores de crescimento. A descoberta de mutações genéticas associadas ao desenvolvimento dessas desordens, a partir de 2005, tem contribuído para a elucidação da fisiopatologia das NMP. Entretanto, apesar dos conhecimentos acumulados na última década, os mecanismos celulares e moleculares envolvidos no desenvolvimento e progressão das NMP para mielofibrose e leucemia mielóide aguda (LMA) precisam ser elucidados.Recentemente, as NMP foram consideradas doenças pré-leucêmicas oncoinflamatórias e caracterizam-se por apresentar atividade inflamatória exacerbada. Este estado inflamatório, principalmente a ativação da via do interferon, parece ser crucial para retardar a progressão dessas neoplasias, mas contribui para o aumento do risco de trombose e morbidade nos pacientes. Apesar da hematopoese desregulada presente nas NMP ser atribuída principalmente às alterações moleculares (mutações genéticas) na célula-tronco hematopoética (CTH), as anormalidades do sistema imune e das células do microambiente medular parecem contribuir para o desenvolvimento dessas doenças.O microambiente estromal da medula óssea é composto por matriz extracelular e células especializadas, com destaque para as células estromais mesenquimais multipotentes (MSC), que garantem a manutenção do potencial de auto-renovação e o pool das CTH. As MSC contribuem para a quiescência das CTH, protegendo-as de estímulos pró-apoptóticos e da diferenciação. Assim sendo, as MSC podem induzir as CTH pré-leucêmicas a permanecerem quiescentes ou a proliferarem, o que no segundo caso resultaria no surgimento das células tronco leucêmicas e na progressão das MPN para falência medular (mielofibrose) ou leucemia mielóide aguda.Diante disso, nossa hipótese é a de que alterações do perfil imunomodulatório das MSC, bem como as anormalidades funcionais do nicho medular hematopoético contribuem para a fisiopatologia e progressão das NMP. Especulamos que as MSC modulam o nicho hematopoético por meio da liberação de citocinas, mediadores lipídicos e fatores de crescimento, que alteram o funcionamento e a estrutura do microambiente medular, favorecendo a neoangiogênese e surgimento do clone leucêmico (leukemia stem cell).O presente projeto avaliará o potencial imunomodulador, pro-angiogênico e anti-clonogênico do nicho hematopoético medular e das MSC nas NMP em pacientes e no modelo murino de PV que progride para MF. O objetivo é estabelecer a relação entre as anormalidades do microambiente hematopoético e a fisiopatologia e a progressão das NMP. Estes conhecimentos auxiliarão no futuro o desenho de nova estratégia terapêutica, tendo como alvo o nicho hematopoético, que seja eficaz para o tratamento da fase pré-leucêmica das MPN e que impeça a progressão da doença.

Bolsa de Estágio no Exterior BPE-Processo FAPES 2015/21237-4

Projeto Temático nº 2011/23236-4 - Valor R$ 1.589.498,59 - US$ 1.191.234,53
Pesquisadora principal de 2014 a 2016
Pesquisadora Associada de 2016-2019

Membro do Conselho Deliberativo do Projeto NAP-TOXAM-USP: Núcleo de Apoio à Pesquisa em Toxinas Animais da USP

As Neoplasias Mieloproliferativas Crônicas (NMPC) cromossomo Philadelphia negativas, Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose Primária (MF) são doenças hematológicas resultantes da expansão clonal da célula tronco hematopoética alterada. Essas entidades nosológicas caracterizam-se por apresentar progenitores hematopoéticos independentes ou hipersensíveis a numerosas citocinas associadas à diferenciação e proliferação celular. Os mecanismos celulares e moleculares que participam da patogênese e progressão dessas neoplasias não foram totalmente elucidados e conseqüentemente raros marcadores de diagnóstico e prognóstico foram descritos. Provavelmente a mutação JAK V617F contribui para a fisiopatologia das NMPC, contudo ela explica parcialmente a mieloproliferação e o mieloacúmulo presente na TE e MF. Como apenas cerca de 50% dos pacientes com TE e MF apresentam a JAK2 V617F, a hipótese de nosso grupo de pesquisa é que contribuam ainda para a patogênese dessas doenças alterações nos processos de proliferação e apoptose celular, mutações como no gene MPL, TET2 e anomalias epigenéticas. Assim sendo, essa investigação visa à descrição de potenciais alterações relacionadas à apoptose, ciclo celular, via JAK/STAT e regulação epigenética nas NMPC, principalmente nos pacientes JAK2 V617F negativos. O estudo analisará a expressão protéica (Array Reverso de Proteína), analisará o perfil de metilação de genes relacionados à apoptose e ciclo celular (qPCR Array System) e detectará a presença de mutações no éxon 12 e éxon 14 do gene JAK2 e no gene MPL nos pacientes com PV, TE e MF. Outra abordagem experimental do estudo será a avaliação do efeito da atividade quinase constitutiva da JAK2 sobre as alterações epigenéticas e na maquinaria apoptótica por meio do tratamento das linhagens celulares SET-2 e MB-02 JAK2 V617F+ com os inibidores de tirosina-kinase JAK2. A linhagem tratada com o inibidor, com agentes apoptogênicos clássicos e relacionados à via de receptor de morte TRAIL será avaliada quanto a susceptibilidade à apoptose, perfil epigenético e proteico. Esse estudo contribuirá com a descrição de novos alvos terapêuticos e de modificações epigenéticas e moleculares de pacientes JAK2 positivos e negativos que participam da patogênese dessas doenças.

O presente projeto contribuirá com a quantificação dos microRNAs que possuam como alvos, genes que codificam proteínas relacionadas a regulação da apoptose celular. A expressão de microRNAs será avaliada em células precursoras mielóides e leucócitos maduros em 60 pacientes com PV, TE e MIC ao diagnóstico. A expressão dos microRNAs genes será quantificada pelo método de PCR em tempo real e a expressão das proteínas (alvos dos microRNA) por Western-blot. Os resultados obtidos nesse estudo poderão contribuir para melhor compreensão da fisiopatologia e na descrição de novos alvos terapêuticos nas doenças mieloproliferativas crônicas.
Projeto - Edital MCT/CNPq 14/2010-Universal Faixa A - R$18000,00

Projeto que visa o estudo da fisiopatologia das doenças mieloproliferativas cronicas

Toxinas animais têm contribuindo significativamente para o desenvolvimento das Ciências Biológicas e Biomédicas. Essas moléculas, utilizadas como elementos importantes na investigação de mecanismos celulares e moleculares, estão envolvidas em processos imunológicos, farmacológicos e de intoxicação. Além disso, essas toxinas constituem modelos moleculares interessantes para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas aplicáveis na geração de agentes terapêuticos e/ou de ferramentas experimentais para a pesquisa básica e aplicada. Entretanto, venenos/toxinas animais ainda necessitam de caracterização biológica e/ou funcional adicionais, incluindo as de serpentes, sapos e escorpiões. Nesse sentido, o isolamento e a caracterização bioquímica, funcional e estrutural de proteínas/componentes biologicamente ativos desses venenos poderão gerar informações importantes para o melhor entendimento da composição e dos efeitos fisiopatológicos dessas toxinas. Os objetivos deste trabalho serão as análises funcional e/ou estrutural de novas toxinas e de toxinas modelos (já descritas) derivadas de serpentes (Bothrops jararacussu, B. pirajai, B. alternatus, B. atrox e Crotalus d. terrificus); de escorpião (Tityus serrulatus), e sapo (Bufo paracnemis). O isolamento dos componentes biologicamente ativos será realizado com o uso de técnicas cromatográficas clássicas, como filtração, troca iônica, interação hidrofóbica, bioafinidade e CLAE (fase reversa). Esta etapa do projeto é fundamental para todas as demais a serem desenvolvidas, visto que fornecerá os componentes ativos que serão, juntamente com os venenos brutos, os objetos de estudo deste trabalho. A investigação das atividades biológicas dos venenos e/ou toxinas será multi-paramétrica, considerando a adequação dos ensaios com o caráter das toxinas (novas ou modelos). Serão avaliados efeitos ainda pouco explorados destas toxinas sobre o sistema imune (sistema complemento), apoptose e inflamação.


Processo FAPESP: 05/54855

Doenças mieloproliferativas crônicas (DMPC) representam um grupo de doenças hematológicas malignas clonais da célula tronco hematopóetica caracterizadas pela independência ou hipersensibilidade dos progenitores hematopoéticos a numerosas citocinas. Esse grupo de doenças é constituído por sete entidades nosológicas segundo classificação da OMS e o presente projeto tem como foco três delas: Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose Idiopática Crônica (MIC), pois os mecanismos celulares e moleculares envolvidos na etiologia e progressão dessas DMPC permanecem ainda desconhecidos. São numerosos os indícios de que PV e TE sejam estágios iniciais das DMPC que precedem a evolução para MIC e para leucemia aguda, contudo nenhum estudo comprovou essa teoria. O acúmulo das células da linhagem mielóide presente nessas doenças parece estar intimamente associado à alteração do processo de apoptose celular, no qual há participação direta das proteínas pró- e anti-apoptóticas. Assim, as possíveis alterações dos mecanismos de regulação da apoptose celular e sua relação com o prognóstico e fisiopatologia das DMPC precisam ser elucidadas. O presente projeto contribuirá com a investigação dos mecanismos de apoptose envolvidos na resistência das células precursoras mielóides e leucócitos maduros à apoptose em pacientes com PV, TE e MIC. Nesse estudo, será avaliada a expressão de genes e proteínas pró- e anti-apoptóticas da família Bcl-2 e da via extrínseca da apoptose celular em leucócitos do sangue periférico e células precursoras de 40 pacientes com DMPC (20 com PV, 15 com TE e 5 com MIC) ao diagnóstico, comparando os resultados com aqueles obtidos em indivíduos saudáveis. A expressão dos genes será quantificada pelo método de PCR em tempo real e a expressão das proteínas por Western-blot. Os resultados obtidos nesse estudo poderão contribuir para melhor compreensão da fisiopatologia e evolução das DMPC.

O Diabete Melito do tipo 1 (DM-1) e a Esclerose múltipla (EM) são doenças auto-imunes (DAI) que se caracterizam por alterações no processo de regulação da tolerância imunológica e resposta aos antígenos próprios do indivíduo pelo sistema imune Embora muito se saiba sobre essas doenças, os eventos que interrompem a auto-tolerância e causam a auto-imunidade ainda não são bem compreendidos. Supõe-se ainda que, uma desregulação na maquinaria apoptótica possa contribuir para o desenvolvimento do DM-1 e EM. Alterações na expressão de genes reguladores da apoptose parecem interferir no processo de manutenção da tolerância central e periférica de linfócitos auto-reativos. Este projeto propõe-se a investigar a expressão dos genes e proteínas reguladores da apoptose da família Bcl-2 em indivíduos saudáveis e em pacientes com DM-1 e EM antes e após imunossupressão em altas doses seguida pelo transplante autólogo de células tronco hematopoéticas (TACTH). Os resultados obtidos da análise de expressão gênica e protéica dos pacientes serão comparados aos resultados dos controles e entre si nos diferentes tempos pós-TACTH e associados à evolução clínica dos pacientes após o transplante. Este projeto auxiliará na melhor compreensão da relação entre a desregulação da maquinaria apoptótica e a fisiopatologia do DM-1 e da EM, bem como do efeito do TACTH na modulação dos genes e proteínas relacionados à apoptose celular.

A Leucemia Mielóide Crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa, cuja leucemogênese está relacionada a uma alteração citogenética, o cromossomo ?Philadélphia? (Ph). O Ph resulta de uma translocação recíproca entre os cromossomos 9 e 22, surgindo assim o neogene bcr-abl, o qual codifica a proteína Bcr-Abl com alta atividade de tirosina-quinase. A proteína Bcr-Abl é a responsável pelo fenótipo maligno da célula leucêmica, que apresenta adesão alterada ao estroma medular, alto potencial mitogênico e resistência à apoptose. O tratamento da LMC é realizado com hidroxiuréia, IFN- associado à citarabina, inibidores de tirosina-quinase (TK) (Glivec e BMS-354825) e transplante de medula óssea. O Glivec induz remissão citogenética na maioria dos pacientes, mas casos de refratariedade foram descritos e sua eficácia é limitada nas fases avançadas da doença e outros inibidores da TK têm sido testados nesses pacientes, como o BMS-354825. Contudo, os mecanismos pelos quais esses medicamentos atuam potencializando a apoptose celular e conduzindo os pacientes à remissão não foram totalmente elucidados. O presente projeto tem como objetivo principal avaliar o efeito dos inibidores da TK na expressão de proteínas e de genes anti- e pró-apoptóticos em pacientes com LMC, pelos métodos western blotting e PCR em tempo real. Os resultados serão associados aos resultados clínico-laboratoriais dos pacientes. Este projeto auxiliará na compreensão da modulação da apoptose celular e da resposta terapêutica da LMC aos inibidores da TK.

Projeto

Projeto

Determinação dos parâmetros imunologícos que determinam a resposta imune anti-tumoral do interferon-alfa na LMC