José Belasque Junior.

Trata-se de uma atividade extensionista curricular vinculada à ESALQ para a participação de alunos de graduação e pós-graduação. Os participantes prepararão materiais audiovisuais de ótima qualidade gráfica para divulgação em mídias eletrônicas. O primeiro canal criado para essa divulgação é o perfil @fitoinforma no Instagram

No presente projeto compararemos a efetividade de restos culturais e lesões na parte aérea em gerar novas infecções de podridão negra em couve-comum, causada por Xanthomonas campestris pv. campestris.

No presente projeto serão estudadas as dinâmicas espaciais e temporal da murcha de Curtobacterium em feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris). Especificamente, avaliaremos se há disseminação secundária do patógeno entre plantas presentes em parcelas experimentais, modelando as epidemias com ajustes de modelos temporais para determinar se a doença é monocíclica ou policíclica. Para isso serão estabelecidas parcelas com duas variedades de feijoeiro, com níveis diferentes de resistência à Cff, e porcentagens distintas de sementes infectadas com Cff nas semeaduras. Por último, amostras de água presentes na superfície de plantas com e sem sintomas da doença serão coletadas para se comprovar a disseminação secundária do patógeno por respingosde água a partir de plantas doentes.

Nesse projeto dois isolados da actinobactéria Streptomyces serão avaliados quanto aos potenciais no controle de doenças da soja em ensaios em laboratório, casa de vegetação e campo. As doenças para as quais esses bactérias serão avaliadas são mancha alvo, ferrugem, antracnose e mancha púrpura/crestamento foliar.

Nas últimas décadas as fitobactérias foram caracterizadas em magnitude e com um detalhamento nunca antes observados na história da Microbiologia. Foram os avanços nas técnicas e no conhecimento em biologia molecular que permitiram essa melhor caracterização de procariotos. Isso alterou a forma como as bactérias são identificadas e classificadas. Testes bioquímicos e de patogenicidade, antes essenciais para a identificação dos agentes causais de fitobacterioses, foram em grande parte substituídos por testes de genotipagem molecular, principalmente pela comparação de sequências do DNA ribossomal (16S-23S rDNA) e de genes essenciais ao metabolismo (housekeeping). No entanto, esses avanços ainda não foram incorporados como rotina em laboratórios e clínicas fitopatológicas no Brasil. Como consequência, pouco conhecemos da população de fitobactérias, no que se refere as espécies, subespécies e patovares, que afetam algumas das principais plantas cultivadas no País. Diante disso, no presente projeto caracterizaremos uma coleção de aproximadamente 150 fitobactérias isoladas de plantas sintomáticas de tomateiro, brássicas, cucurbitáceas, alface e batata, entre outras. Para essa caracterização empregaremos a análise de sequências multilocus (Multilocus Sequence Analysis - MLSA) a partir da amplificação e sequenciamento dos genes 16S rDNA e de 4 housekeeping para cada isolado bacteriano. Dessa forma, MLSA será aplicada para a correta identificação das espécies associadas a doenças importantes no Brasil, como exemplos canela preta/talo oco em batata (enterobactérias), manchas foliares em alface, brássicas, cucurbitáceas e tomateiro (Xanthomonas) e manchas em folhas e frutos em diferentes hospedeiros (Pseudomonas). Essa caracterização é necessária para reduzirmos o gap de conhecimento acerca de quais são algumas das espécies mais importantes de fitobactérias que ocorrem no Brasil. Essa falta de conhecimento é decorrente da ausência de estudos de populações de fitobactérias com algumas das técnicas de biologia molecular utilizadas nas mais recentes reclassificações desses patógenos. Como resultados, além do conhecimento científico acerca de algumas populações de fitobactérias importantes no Brasil, subsídios serão gerados para a melhoria dos processos adotados em sistemas de quarentena vegetal, no diagnóstico de doenças de plantas e no manejo dessas doenças

A doença Huanglongbing (HLB, Greening) é umas das principais enfermidades que afeta a cultura dos citros em todo mundo. O HLB foi detectado oficialmente em São Paulo em 2004 e já se encontra em mais da metade dos pomares cítricos do estado. Não há métodos curativos para essa doença e minimizam-se seus danos com a eliminação frequente de plantas com sintomas da doença e com o controle do inseto vetor (o hemíptero Diaphorina citri). A manutenção de plantas doentes e de populações de D. citri infectivas resulta em risco para a viabilidade econômica de pomares nos quais são empregadas as estratégias de controle do HLB (eliminação de plantas e controle do vetor). Na presente proposta de pesquisa, pomares adjacentes, com e sem controle da doença (e do vetor), serão avaliados objetivando determinar as distâncias de influência de áreas mantidas com inóculo do patógeno (HLB) sobre áreas mantidas com controle. Os resultados a serem obtidos permitirão comparar a efetividade do emprego de estratégias regionais e locais na manutenção de baixas incidências do HLB. Também serão propostos protocolos para a amostragem de plantas com sintomas da doença e do vetor, metodologias essas ainda não determinadas nas condições de produção citrícola em São Paulo. Para isso serão aplicados métodos de modelagem estocástica, modelos de dispersão espacial e temporal, índices de agregação e de correlação espacial, estatística multivariada e análise de sobrevivência, para um conjunto de dados correspondentes a três anos de avaliação de pomares comerciais mantidos em São Paulo com e sem controle do HLB e de D. citri.

A presente proposta de pesquisa tem como objetivo o uso de oligonucleotídeos na identificação, clonagem e sequenciamento de genes candidatos envolvidos na resistência de citros e relativos (Rutaceae) ao cancro cítrico (Xanthomonas citri subsp. citri). Essa é uma das mais graves doenças da cultura dos citros e seu agente causal encontra-se distribuído em dezenas de países localizados na Oceania, Ásia e América. No Brasil o cancro cítrico está presente nos estados de São Paulo, Paraná, Santa Catarina, Rio Grande do Sul e Roraima. A descoberta e clonagem de genes de resistência ao cancro cítrico permitirão a transformação genética de variedades e espécies cítricas de uso comercial, as quais, sem exceções, não apresentam adequada resistência à doença. Como resultado, os citricultores poderão fazer uso de novas estratégias de controle da doença. No entanto, poucas informações estão disponíveis na literatura científica concernente à caracterização e clonagem de genes de resistência ao cancro cítrico. Os recentes trabalhos científicos publicados relacionados à geração de transgênicos com resistência a essa doença empregaram, sem exceção, peptídeos antibacterianos exógenos, ou seja, não originários de membros da família Rutaceae. Aproximadamente cinquenta genótipos de membros dessa família botânica serão adquiridos em bancos de germoplasma e herbários oficiais para caracterização quanto à existência e tipos de R-genes. Será escolhida uma gama de genótipos (aproximadamente cinquenta) caracterizados como imunes, altamente resistentes, moderadamente resistentes, levemente suscetíveis e altamente suscetíveis ao cancro cítrico. Serão empregados oligonucleotídeos degenerados anteriormente utilizados na identificação de R-genes em citros. Esses oligonucleotídeos serão empregados numa metodologia semelhante à AFLP, a qual envolverá clivagem do DNA genômico com endonucleases, ligação de adaptadores e duas PCRs. Após caracterização e consequente separação dos genótipos imunes.

A citricultura paulista está sofrendo clara migração das regiões norte e central do estado, tradicionais regiões de plantio de citros que concentram 75% da produção, para novas áreas ao sudoeste, com o intuito de manter competitivo o agronegócio citrícola (Neves et aI., 2007). Essa migração tem como motivos mais importantes: o menor valor da terra na região sudoeste, em comparação com as áreas citrícolas tradicionais, e o menor custo de produção (Neves & Jank, 2006; Tozatti, 2007). A região sudoeste também apresenta como vantagem uma elevada frequência de chuvas, que dispensa a necessidade de irrigação. Essa nova geografia da citricultura paulista submete a cultura a mudanças macroambientais, que certamente irão se refletir em modificações no seu manejo. O clima dessa região é favorável à ocorrência da podridão floral dos citros (Tozatti, 2007), causada por Collefofrichum a cufafum, doença de baixo impacto nas demais regiões citrícolas do estado (noroeste/norte e centro) por sua ocorrência esporádica, mas de grande importância econômica na região sudoeste, devido à sua frequente ocorrência (Feichtenberger et al., 2005). A podridão floral dos citros, por ocasionar queda de até 100% de frutos jovens, torna seu controle mandatório nos locais em que ocorre com frequência. Esse controle tem sido feito com pulverizações preventivas de fungicidas no momento da florada. A premência de pulverização em grandes áreas e em curto espaço de tempo (somente na florada) acarreta um problema logístico importante, pois as aplicações são feitas ininterruptamente, com tratores pulverizando as áreas dia e noite. Os custos diretos (mão de obra, máquinas e insumos) do tratamento químico para a podridão floral são da ordem de US$ 553,00/ha, levando-se em consideração a necessidade de dois tratores para cada 100 ha (Salvo Filho, 1994). O controle preventivo baseado unicamente no estádio fenológico do hospedeiro muitas vezes acarreta exagero de aplicação de fungicidas, com prejuízos de curto prazo ao produtor e de médio e longo prazo ao ambiente. Além disso, a aplicação sequencial de um mesmo princípio ativo no controle de patógenos pode levar à seleção de indivíduos resistentes, com consequente perda de eficiência do fungicida. Para melhorar o manejo da doença e reduzir os custos de pulverização, é fundamental o conhecimento da epidemiologia da podridão floral, com caracterização clara do patossistema na região sudoeste paulista. No entanto, há pouquíssima informação disponível sobre a doença e, em sua maioria, produzida na América Central e na Flórida, EUA. São desconhecidos, por exemplo, o tempo e a forma de sobrevivência do inoculo entre as floradas, os requisitos ambientais para a infecção e a colonização das flores, a variabilidade do inoculo nos pomares e sua especificidade à cultura dos citros, o padrão e a distância de disseminação do patógeno, os fatores ambientais que afetam o progresso da doença no campo e a distribuição espacial das plantas doentes nas várias fases epidêmicas. Com tantas lacunas no conhecimento, não é surpreendente constatar que sistemas de previsão da doença desenvolvidos na Flórida não foram adotados pelos citricultores paulistas e que o controle da doença permanece na forma de pulverizações preventivas de fungicidas, nem sempre eficientes ou necessárias. Os principais objetivos do presente projeto são: (i) caracterizar a distribuição espacial da doença e seu progresso temporal na região sudoeste paulista; (ii) elucidar os diferentes mecanismos que compõem o ciclo da doença, com ênfase na sobrevivência e variabilidade do inoculo e nos mecanismos de infecção e colonização; (iii) testar alternativas ao controle químico vigente e adaptar/validar sistemas de previsão da doença desenvolvidos no exterior.

O avanço tecnológico ocorrido nas últimas décadas tem permitido a geração de informações relevantes acerca do material genético de inúmeros microrganismos. O estudo da diversidade genética de um patógeno vegetal pode fornecer subsídios no conhecimento da sua interação com o hospedeiro, no estabelecimento de hipóteses a respeito da sua história evolutiva e na definição de estratégias de controle, entre outros. O cancro cítrico é uma das principais doenças da cultura dos citros. Em razão da sua presença no Brasil desde 1957 há uma campanha de erradicação do patógeno e, dentre outras medidas, estratégias de exclusão e erradicação são aplicadas em diferentes escalas. Seu agente causal, Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), é uma bactéria gram negativa, aeróbia, de formato tipo bastonete com um flagelo polar, capaz de induzir sintomas em praticamente todas as espécies de Citrus, além de outros gêneros da família Rutaceae. O estudo de patógenos bacterianos geneticamente similares (populações clonais), objetivando a caracterização da estrutura genética da população, tem sido feito para patógenos humanos e vegetais por Southern blot empregando-se como sondas seqüências de inserção ou genes avr. Como melhores exemplos da aplicação dessa técnica têm-se os estudos realizados com X. oryzae pv. oryzae, X. pv. mangiferaeindicae e X. axonopodis pvs. citri e manihotis. A caracterização molecular de isolados de Xanthomonas patogênicos em citros tem sido feita objetivando, preferencialmente, a diferenciação dos patovares existentes. Mais recentemente, a genotipagem de uma coleção mundial de isolados de Xac por BOX (BOX elements) e ERIC-PCR (enterobacterial repetitive intergenic consensus) permitiu uma relativa caracterização de grupos genéticos e separou parcialmente isolados distantes geograficamente, como os originários da Ásia e América, e também os com patogenicidade diferenciada. Outra adequada caracterização da estrutura genética de Xac foi realizada por Southern blot, empreg

Resultados preliminares revelaram perfis espectroscópicos diferentes para tecidos sadios e doentes, e também que estes perfis variam com a espécie vegetal analisada. Desta forma, o objetivo da presente proposta é a identificação de quais são alguns dos fenômenos biológicos envolvidos nas respostas obtidas por tecidos vegetais sadios e com cancro cítrico quando excitados por laser. Plantas cítricas das espécies C. sinensis, C. reticulata e C. limonia serão inoculadas com X. a. pv. citri e terão seus perfis espectroscópicos coletados antes e após a inoculação para a identificação de possíveis correlações com a taxa fotossintética e a severidade da doença. Os dados obtidos serão comparados por análise de variância (teste F) e teste de médias (Tukey, 0,05), pela técnica matemática de Análise de Componentes Principais (PCA), e também na identificação de possíveis correlações entre os parâmetros avaliados e os perfis espectroscópicos obtidos.

Desenvolvimento e validação de suporte tecnológico para produção, rastreabilidade e certificação em citricultura

O projeto de pesquisa compreendeu a produção e caracterização de dois anticorpos monoclonais distintos: um para identificação de ascósporos de Guignardia citricarpa (Phyllosticta citricarpa) e outro para a identificação de Xanthomonas axonopodis pv. citri. Ambos serão utilizados para imunolocalização "in vivo". Uma vez produzidos, os anticorpos serão marcados para funcionarem em armadilhas "caça-esporos".

O projeto de pesquisa objetivou avaliar a eficácia de um quebra-vento na redução da velocidade do vento e nas alterações micrometeorológicas em um pomar cítrico, no Estado de São Paulo. Para tanto, foram realizadas medições da velocidade do vento, da direção do vento, da estabilidade atmosférica, do perfil de temperatura do ar e de velocidade do vento e da porosidade do quebra-vento. As medições micrometeorológicas foram da umidade relativa do ar (UR), temperatura do ar (t), do molhamento foliar (MF), precipitação pluviométrica (P), radiação solar global (Rs), saldo de radiação (Rn), fluxo de calor no solo (G) e da radiação solar fotossinteticamente ativa (RFA) disponível para a cultura

Resultados preliminares indicaram que a técnica de espectroscopia de fluorescência pode ser capaz de detectar o Cancro Cítrico em folhas de citros, bem como distingui-la de outras doenças. Contudo, este estudo tem se limitado apenas a uma variedade de citros e poucas doenças. Para uma possível aplicação desta tecnologia no campo há a necessidade de se estender este estudo. No presente projeto determinou-se os padrões espectroscópicos via fluorescência de várias doenças. A escolha das doenças e das espécies cítricas foi baseada na sua importância econômica para o parque citrícola do estado de São Paulo.

Técnicas ópticas podem melhorar a eficiência da inspeção de pomares cítricos, contribuindo para uma melhoria no processo de erradicação do cancro cítrico. Técnicas ópticas poderão também ser empregadas na avaliação de outras doenças cítricas, com benefícios na amostragem e detecção de plantas sintomáticas em pomares

O projeto de pesquisa compreendeu dois subprojetos independentes que, analisados em conjunto, permitiram um melhor entendimento da estrutura e do comportamento do patossistema 'citros-Xanthomonas-Phyllocnistis'. Os dois subprojetos têm os títulos: (i) Cancro Cítrico: Dinâmica Espacial e Temporal em Condições Naturais de Epidemia e (ii) Cancro Cítrico: Componentes Monocíclicos em Condições Controladas.

Com objetivos a médio e longo prazo e em cooperação com diferentes grupos de pesquisa dentro de uma rede temática, cinco subprojetos foram desenvolvidos relacionados a diversidade genética, técnicas para detecção/diagnóstico e a ecologia de Xanthomonas axonopodis pv. citri.

Foram realizados estudos envolvendo a criação da larva minadora dos citros (Phyllocnistis citrella) e seu inimigo natural Ageniaspis citrícola, bem como suas relações com o cancro cítrico