Paula Andréa de A. Salles Navarro.

Cerca de 5 a 10 de todos os casos de câncer estão relacionados às síndromes de predisposição hereditária ao câncer e tais condições possuem envolvimento de genes específicos que atuam em diversas vias e possuem um papel importante na manutenção da integridade do genoma. Nesse contexto é evidente a relação entre os mecanismos de instabilidade genômica promovidos por alterações gênicas ou cromossômicas e a infertilidade, uma vez que alguns genes interferem na recombinação meiótica e gametogênese. No entanto, poucos estudos foram realizados sobre a relação entre variantes patogênicas em genes de síndromes de predisposição oncológica e reprodução. Esse estudo tem como objetivo caracterizar o perfil reprodutivo de todas as pacientes e a reserva ovariana das pacientes em idade reprodutiva atendidas no ambulatório de Oncogenética do serviço de Genética Médica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto que possuem o diagnóstico de Síndrome de Li-Fraumeni e Síndrome de Lynch. Por meio de um estudo descritivo, convocaremos pacientes do sexo feminino com o diagnóstico molecular confirmado das síndromes e atendidas no Ambulatório de Aconselhamento Genético do Câncer do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP (HCFMRP-USP) no período de janeiro de 2014 a dezembro de 2024.

A infertilidade tem aumentado consideravelmente no mundo inteiro, chegando a atingir cerca de 48 milhões de casais e 186 milhões de pessoas. Diversos fatores podem estar relacionados a infertilidade, sendo considerada um problema de saúde pública. Com isso, as técnicas de reprodução assistida (TRA) são uma alternativa para auxiliar os indivíduos que desejam ter filho(s). No entanto, as TRA possuem custo elevado o que resulta na restrição de pessoas que tem acesso a esse tipo de tratamento. Além disso, também existe uma dificuldade no acesso da população às TRA pelo Sistema Único de Saúde (SUS), uma vez que não há política de assistência reprodutiva no SUS. Alguns poucos serviços com diferentes fontes de financiamento oferecem acesso gratuito ou de baixo custo às TRA, com destaque para o Serviço de Reprodução Assistida do Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto (HCRP). Mas, os pacientes encontram dificuldades em acessar o serviço de saúde pública, enfrentado tempo de espera de até 5 anos, o que pode comprometer de forma expressiva o sucesso do tratamento. Por isso, desenvolver estratégias capazes de ampliar o acesso populacional às TRA, reduzindo o tempo de espera entre o encaminhamento e o atendimento em serviços especializados é muito importante. Neste contexto, foi criado no HCRP o AFERT (Ambulatório de Fertilidade), com a intenção de reduzir o tempo de espera entre o encaminhamento pelas unidades básicas de saúde ou unidades de saúde da família e o primeiro atendimento no serviço, assim como prover o início mais precoce do tratamento para os casos de baixa complexidade, a otimização dos recursos disponíveis e o acolhimento aos usuários. Visto isso, os objetivos do projeto correspondem a realizar a caracterização sociodemográfica e clínica da população de casais inférteis e pessoas com outras indicações de TRA atendidas em um novo ambulatório especializado em fertilidade (AFERT) do Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto e comparar o tempo de espera para início do seguimento no ambulatório de infertilidade de alta complexidade (AEST) antes e depois da criação do AFERT, por meio da análise da data de encaminhamento dos pacientes pelas unidades básicas de saúde e a data do caso novo no AEST. Será realizado um estudo transversal, retrospectivo, envolvendo o levantamento dos prontuários médicos de todos os pacientes que realizaram triagem no AEST e AFERT de janeiro de 2014 a fevereiro de 2020. Também serão analisados os dados do setor de agendamento do Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto relativos à data de encaminhamento das pacientes das unidades básicas de saúde para os ambulatórios de infertilidade do Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto, a data da consulta de triagem e do caso novo nestes cenários. O presente estudo será submetido à aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital das clínicas de Ribeirão Preto, USP. Para realizar a caracterização sociodemográfica e clínica da população de estudo, serão obtidas as variáveis dos prontuários médicos: motivo do encaminhamento (infertilidade, gestação independente, homoafetividade, teste genético pré-implantação, outro), profissão, procedência, escolaridade, sexo, causa e duração da infertilidade, idade, índice de massa corporal, tratamento indicado (medicamentoso, cirurgia, inseminação intrauterina, fertilização in vitro), tempo para início do tratamento, tratamentos prévios, presença de comorbidades e de hábitos de vida (tabagismo, etilismo e uso de drogas ilícitas).

ResumoA endometriose é uma doença altamente prevalente entre mulheres em idadereprodutiva, frequentemente associada à infertilidade, mas os mecanismos envolvidosainda não foram totalmente elucidados. O comprometimento da qualidade oocitáriaparece ter um papel fundamental na patogênese da infertilidade relacionada àendometriose, sendo que alterações no microambiente folicular dessas mulherespoderiam afetar a qualidade gamética, comprometendo sua fertilidade natural. Nosúltimos anos, o papel das Vesículas extracelulares (VEs), como mediadoras dacomunicação celular, têm sido investigadas em todas as fases do desenvolvimentooocitário. A comunicação celular dentro dos folículos ovarianos é vital para a maturaçãoe fertilização do oócito saudável. Microvesículas (MV) e exossomos foram identificadosno fluido folicular (FF) dos folículos ovarianos durante a maturação oocitária e estãoenvolvidos na comunicação entre o oócito em desenvolvimento e as células folicularesovarianas, sugerindo que as VEs estão envolvidas no desenvolvimento de gametas eembriões, tanto em animais quanto em humanos. miRNA é um dos conteúdos destasVEs. Desta forma, o estudo objetiva isolar e caracterizar VEs (exossomos e MV) eavaliar o perfil de 82 miRNAs maduros e precursores carregados por VEs no soro e FFde mulheres inférteis com endometriose e com infertilidade por fator tubário e/oumasculino submetidas à estimulação ovariana controlada (EOC) para realização defertilização in vitro.

Introdução: A progesterona tem um papel importante no sucesso gestacional após ciclos de reprodução assistida, visto que atua no desenvolvimento e receptividade endometrial, favorecendo a implantação embrionária. Muito se tem estudado sobre a participação desse hormônio nas diversas etapas dos ciclos de reprodução assistida. Alguns estudos sugerem que baixas concentrações séricas de progesterona no dia da transferência de embriões estão relacionadas a menor taxa de sucesso gestacional. Entretanto, os estudos ainda são insuficientes acerca de qual valor de referência deve ser utilizado em ciclos de transferência a fresco e após desvitrificação embrionária. Objetivo: Encontrar um ponto de corte da progesterona sérica, dosada no dia da transferência de embrião a fresco e desvitrificado, que se correlacione a maiores taxas de sucesso gestacional. Materiais e métodos: Estudo prospectivo de coorte. Serão elegíveis para o estudo todas as pacientes que serão submetidas à estimulação ovariana com gonadotrofinas para transferência embrionária a fresco ou a preparo endometrial para transferência de embrião aquecido, no período de agosto de 2021 a junho de 2023, que tiverem menos de 45 anos e índice de massa corporal (IMC) abaixo de 35 kg/m2. Será coletado sangue no dia da transferência embrionária para dosagem das concentrações séricas de progesterona por um imunoensaio que usa tecnologia de quimioluminescência direta (Atellica IM PRGE®), utilizando sistema da Atellica IM Analyzer da Siemens Healthineers. As variáveis idade, índice de massa corporal, causa da infertilidade, dose total de gonadotrofinas utilizada, número de dias de estimulação, protocolo de estimulação utilizado, espessura endometrial no dia do trigger, número de oócitos captados, maduros e fertilizados, número e morfologia dos embriões formados e transferidos, número e morfologia dos embriões vitrificados, espessura e característica endometrial no dia da transferência serão obtidas dos prontuários eletrônicos das pacientes e analisadas para os casos de transferência a fresco. Nos ciclos de transferência de embrião aquecido, serão considerados os seguintes parâmetros: protocolo utilizado, número de dias de uso de estradiol, protocolo de preparo endometrial utilizado, espessura endometrial no dia de início da progesterona, número e morfologia dos embriões transferidos, espessura e característica endometrial no dia da transferência, que serão obtidas dos prontuários eletrônicos das pacientes. Para estabelecer o melhor ponto de corte do nível sérico de progesterona em relação a ocorrência de gestação clínica será construída uma curva ROC. Um modelo de regressão logística multivariado será construído para verificar quais as variáveis exploratórias são fatores preditivos para o desfecho gestação clínica.

Introdução: A infertilidade é um problema de saúde pública que afeta cerca de 8-12 dos casais no mundo. A inseminação intrauterina (IUI) é um procedimento de menor custo e complexidade do que a fertilização in vitro, sendo indicada para o tratamento de casos específicos de subfertilidade. A determinação das taxas de sucesso e dos fatores prognósticos deste procedimento são relevantes para o aconselhamento dos casais com subfertilidade. Objetivos: Esse estudo visa avaliar a taxa de gravidez clínica e a taxa de nascidos vivos por ciclo de inseminação intrauterina, em relação à possíveis fatores prognósticos maternos, paternos e variações do protocolo do procedimento. Metodologia: Esse estudo retrospectivo observacional transversal analisará todos os casos de IUI realizados no Centro de Reprodução Humana de Ribeirão Preto, de 1 de janeiro de 2016 a 31 de dezembro de 2020. Serão analisadas as a taxa de gravidez clínica e de nascidos vivos por ciclo de IUI em relação a potenciais fatores de prognóstico do procedimento, a saber: idade e índice de massa corporal da mulher, regularidade menstrual, número total de folículos antrais no dia do US basal, concentrações séricas de FSH no terceiro dia do ciclo menstrual, etiologia da infertilidade, caraterísticas seminais no último espermograma antes da realização da IUI, concentração total de espermatozoides progressivos recuperados no último exame de capacitação seminal realizado antes da IUI, qualidade seminal no dia da IUI, protocolo de indução da ovulação utilizado, número de folículos #8805; 17 mm no dia da administração do hCG, número de horas entre a administração do hCG e a realização da IUI, duração da indução da ovulação, espessura endometrial no dia da administração de hCG e no dia da IUI e volume inseminado.

Recentemente foi desenvolvido um modelo murino de infertilidade relacionada à endometriose, cuja infertilidade foi avaliada por 1 a 2 meses após o procedimento cirúrgico de indução da endometriose experimental. Mas, para saber se este modelo poderá ser usado em estudos de intervenção terapêutica, é importante testá-lo por um período maior. Desta forma, objetivamos investigar se o transplante de fragmentos de tecido endometrial na parede peritoneal de camundongos fêmeas promove endometriose experimental e redução da fertilidade natural por 4, 8 e 12 semanas após a realização do procedimento cirúrgico. Além disso, iremos comparar a duração da prenhez, o tamanho da ninhada, os pesos dos filhotes e as concentrações séricas dos marcadores de estresse oxidativo 8-hidroxi-2?-deoxiguanosina (8-OHdG) e capacidade antioxidante total (CAT) entre animais dos 3 grupos experimentais.

A endometriose é uma doença fortemente associada à infertilidade. No entanto, os mecanismos envolvidos na etiopatogênese da infertilidade associada à endometriose ainda são pouco conhecidos. Acredita-se que haja um fator oocitário envolvido, com consequente comprometimento embrionário, o que contribuiria com a elevada prevalência de infertilidade entre as suas portadoras. Evidências apontam para a ocorrência de estresse oxidativo no microambiente folicular dessas pacientes, com dano ao DNA e formação de 8-hidroxi-2?-deoxiguanosina (8OHdG). Sabe-se que a 8OHdG pode interferir na metilação do DNA, o que poderia afetar o silenciamento de retrotransposons como o LINE-1, assim como, promover o encurtamento telomérico e, consequentemente, originar instabilidade genômica, comprometendo a qualidade oocitária dessas pacientes. No entanto, nenhum estudo avaliou a associação entre o dano oxidativo ao DNA, a ativação de retrotransposons e o comprimento telomérico em oócitos de pacientes inférteis com a doença. Os objetivos desse estudo são comparar o número de cópias do LINE-1 e o comprimento médio dos telômeros em oócitos maturados in vitro obtidos de mulheres inférteis com endometriose avançada com endometrioma e com fator masculino de infertilidade (controles) submetidas à estimulação ovariana controlada para a realização de ICSI. Para tanto, durante a captação oocitária, serão coletados oócitos imaturos e FF de mulheres inférteis com endometriose e controles, os quais serão destinados, respectivamente, à maturação in vitro com subsequente análise do número de cópias de LINE-1/comprimento médio dos telômeros em célula única por PCR em tempo real.

A endometriose é uma doença altamente prevalente entre mulheres em idade reprodutiva, frequentemente associada à infertilidade, mas os mecanismos envolvidos ainda não foram totalmente elucidados. O comprometimento da qualidade oocitária parece ter um papel fundamental na patogênese da infertilidade relacionada à endometriose, sendo que alterações no microambiente folicular dessas mulheres poderia afetar a qualidade gamética, comprometendo sua fertilidade natural. Acredita-se que o estresse oxidativo (EO) sistêmico e folicular, observado nessas pacientes, possa contribuir para o comprometimento da competência oocitária nas mesmas. Hipotetizamos que o EO poderia modificar o perfil lipídico do folículo ovariano dessas pacientes e, consequentemente, comprometer o desenvolvimento oocitário. Como o gameta feminino tem o importante papel de armazenar lipídios que serão utilizados durante toda a maturação oocitária e o desenvolvimento embrionário precoce, alterações no perfil e na quantidade desses lipídios tanto do oócito, quanto do ambiente ao seu redor, fluido folicular (FF) e células do cumulus (CC), pode resultar em prejuízo da qualidade oocitária e, consequentemente, embrionária. O objetivo deste estudo consiste em avaliar e comparar o perfil lipídico no sangue, FF, CC e oócitos maturados in vitro de mulheres inférteis com endometriose e com infertilidade por fator tubário e/ou masculino.

A vitrificação de oócitos teve o uso clínico liberado a partir de 2012 e representa um dos grandes avanços das técnicas de reprodução assistida, por propiciar taxas de nascidos vivos similares a de oócitos frescos. Todavia, a maioria dos estudos relacionados com a segurança do método envolve dados perinatais, neonatais e de curta duração. Tendo isso em vista, levanta-se a discussão da escassez de estudos a longo-prazo sobre o potencial impacto da vitrificação na prole. O objetivo geral deste projeto é avaliar se a vitrificação de oócitos, usando os meios padrão Tvitri4 e Irvine pode afetar o desenvolvimento, a fertilidade e a epigenética da prole em modelo murino. A partir dos oócitos desvitrificados, será analisada sua taxa de sobrevivência em comparação com os oócitos frescos e realizado PCR para mensurar seu comprimento telomérico, método também aplicado posteriormente, em embriões no estágio de desenvolvimento in vitro de blastocisto. Em seguida à transferência embrionária também será verificada a taxa de nascidos vivos. O desenvolvimento físico da prole será avaliado por meio do peso corporal, distância anogenital, verificação da separação prepucial, abertura do orifício vaginal e identificação do primeiro estro. Na vida adulta, a maturidade sexual a ser analisada ocorrerá por meio do acompanhamento do ciclo estral e comportamento sexual em fêmeas, concentração hormonal e peso dos órgãos reprodutivos, em ambos os gêneros. Conjuntamente, será conduzida a investigação de possíveis comorbidades relacionadas com o metabolismo, por meio da análise da pressão arterial sistólica, glicemia, triglicerídeos, colesterol total e frações. Além disso, realizar-se-á o perfil epigenético de tecidos coletados da prole. Ademais, será executado PCR para determinar o comprimento telomérico em leucócitos, como forma de estimar a duração de vida da prole. Espera-se com este estudo fornecer maiores dados sobre a segurança do método, relativamente recente, de criopreservação de oócitos em vista de sua aplicabilidade na reprodução assistida humana, dada a dificuldade e delonga da obtenção de dados clínicos.

Má resposta à estimulação ovariana controlada (EOC) acomete cerca de 15% das mulheres submetidas às Técnicas de Reprodução Assistida (TRA), estando associada a reduzida chance de gravidez. Alguns ensaios clínicos controlados reportam uma melhora dos resultados reprodutivos em mulheres que utilizaram testosterona transdérmica como tratamento prévio à EOC, de modo que esta estratégia tem sido utilizada na prática clínica. Todavia, os mecanismos de ação da testosterona ainda permanecem pouco elucidados e o estudo do perfil de expressão gênica nas células do cumulus, fundamentais para a aquisição da competência oocitária, pode agregar importantes informações neste contexto. Desta forma, como objetivo primário, iremos avaliar o perfil de expressão gênica das células do cumulus (CCs) de mulheres com má-resposta esperada à EOC que utilizaram testosterona transdérmica por 60 dias (grupo testosterona) antes da estimulação ovariana e que não utilizaram testosterona (grupo controle). Como objetivo secundário propomos avaliar a concentração sérica de testosterona, globulina de ligação de hormônios sexuais (SHBG), estradiol e leptina no dia de início da indução da ovulação e no dia da captação de oócitos. Será realizado um estudo caso-controle prospectivo analisando dois grupos de mulheres candidatas à má-resposta à EOC que A) usaram testosterona transdérmica por 60 dias antes de início da EOC e contraceptivo oral combinado (COC) por 21 dias antes de início da EOC (grupo testosterona) e B) Pacientes que utilizaram apenas COC por 21 dias antes do início da EOC (grupo controle). Todas as pacientes serão submetidas ao mesmo protocolo de EOC, usando 300 UI/dia de Menopur e antagonista do GnRH. Planejamos incluir um total de 80 mulheres. Os complexos cumulus oócitos obtidos durante a captação serão desnudados, e as CCs serão separadas do oócito através de microdissecção com a utilização de duas agulhas de insulina. As CCs de todos os complexos cumulus oócito de cada paciente serão armazenadas juntas. As CCs serão preservadas em RNAlater® Solutions e mantidas em nitrogênio líquido até a realização dos experimentos para avaliação da expressão diferencial dos transcritos por Sequênciamento de Nova geração que será realizado com o TruSeq SBS kit v5 (Illumina Inc.), single-read 72 ciclos em equipamento Illumina Genome Analyzer IIx (GAIIx). A partir da análise dos dados de sequenciamento, genes de interesse serão selecionados, e a expressão diferencial desses genes será confirmada por PCR em tempo real. Será coletado sangue no dia de início da EOC e no dia da captação de oócitos. A SHBG e estradiol serão dosados pelo método de quimiluminescência, a testosterona por radioimunoensaio e a leptina por ELISA. Os seguintes desfechos secundários também serão avaliados: número de óvulos captados, óvulos MII captados, óvulos fertilizados, número de embriões formados, duração da EOC (em dias), cancelamento do ciclo por má resposta, taxa de gravidez clínica, de abortamento e de nascimento vivo.

Os gastos com os fármacos e com a monitorização usualmente realizada durante a estimulação ovariana (EO) contribuem para tornar a reprodução assistida mais cara, rígida e inacessível para a maioria da população. Este problema é particularmente importante em países em desenvolvimento onde os gastos apenas com a EO podem levar a despesas catastróficas. Além disso, vários casais desistem do tratamento antes de conseguir a gravidez devido aos desgastes físico e psicológico, que poderiam ser amenizados com o uso de abordagens amigáveis. Desta forma, iremos comparar um novo protocolo de EO amigável e de baixo custo com a EO padrão usando FSH diário e antagonista de GnRH em mulheres com alto risco de SHO. Será um estudo randomizado controlado em dois grupos paralelos em uma proporção de 1: 1, incluindo um total de 60 participantes (30 por grupo). Um grupo receberá o novo protocolo para EO combinando clomifeno contínuo, corifolitropina alfa, baixa dose de hCG na fase folicular final, desencademaneto com agonista de GnRH e congelamento de todos os embriões/óvulos resultantes. O outro grupo receberá um protocolo padrão de EO, com FSH contínuo na dose de 150UI/dia e antagonista de GnRH. O desfecho principal será o número de óvulos maduros captados (MII). Os desfechos secundários serão casos de SHO requerendo internação, número total de óvulos captados, número de embriões formados, número de embriões de excelente qualidade morfológica, a satisfação das participantes com o tratamento e resultado, proporção cumulativa de nascimento vivo, e número médio de visitas durante o tratamento. Vamos comparar as variáveis avaliadas entre os grupos usando o teste mais adequado dependendo da natureza da variável: Mann-Whitney, teste t não pareado, e χ². Se uma diferença significativa for observada para a idade, peso, IMC ou AFC, em alguma destas comparações, vamos realizar análises adicionais (modelo linear geral, GLM) tentando ajustar para estes fatores de confusão.

Os lipídios espermáticos são fundamentais para a integridade do sistema de membranas e determinam muitas de suas importantes propriedades físico-químicas que, por sua vez, estão intimamente relacionadas com a capacidade de fertilização. Apesar de sua clara importância, os dados disponíveis sobre o perfil lipídico das células espermáticas humanas são limitados. As técnicas de espectrometria de massas mais comumente utilizadas para obter esses dados têm resultados informativos, porém amplamente dominados por sinais de fosfatidilcolina (PC) e liso-fosfatidilcolina (LPC) que impedem a detecção de outras classes lipídicas. Sendo assim, um dos objetivos deste estudo será implementar o método de MRM-profiling utilizando um equipamento de espectrometria de massas com ionização por electrospray (ESI-MS) para a análise de células espermáticas de homens férteis e subférteis possibilitando a detecção simultânea de diversas classes lipídicas de interesse. Além disso, objetiva-se comparar os valores observados nos dois grupos a fim de identificar espécies lipídicas diretamente relacionadas à fertilidade masculina. Objetiva-se também investigar lipídeos candidatos a marcadores de resultados de reprodução assistida em pacientes submetidos a ICSI.

A injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) é uma técnica de reprodução assistida consolidada e indicada em casos de infertilidade por fator masculino severo. No entanto, sua relativa simplicidade e eficácia, juntamente com o grande aumento na procura por tratamentos de infertilidade, levaram a um recente uso indiscriminado da técnica. Acredita-se que os procedimentos envolvidos na ICSI possam levar a fragmentação do DNA e alteração do perfil lipídico espermáticos, podendo resultar em problemas obstétricos e perinatais. Um dos principais focos em estudos sobre a segurança da ICSI é a utilização do meio de imobilização espermática contendo polivinilpirrolidona (PVP), polímero artificial de tamanho molecular grande associado em estudos prévios a danos na ultraestrutura e fragmentação no DNA espermáticos. Uma recente alternativa ao meio contendo PVP é o uso de meio a base de ácido hialurônico (HA), composto fisiológico cujas propriedades garantem função similar na seleção e imobilização de espermatozoides durante a ICSI. No entanto não existem estudos conclusivos avaliando a alteração que esses dois polímeros podem causar em parâmetros da competência espermática. Desta forma, o objetivo deste estudo consiste em analisar os efeitos do PVP e do HA no índice de fragmentação do DNA e no perfil lipídico de espermatozoides em condições experimentais que mimetizam o procedimento de ICSI. Será realizado um estudo experimental utilizando amostras seminais de homens com fator masculino severo. Para tanto, serão recrutados pacientes encaminhados ao Laboratório de Ginecologia e Obstetrícia para a realização de espermograma como parte do protocolo assistencial de investigação da infertilidade conjugal do Ambulatório de Esterilidade (AEST) e de Infertilidade (AIFE), que aceitarem participar voluntariamente do estudo mediante a assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE) e que apresentarem uma contagem total de espermatozoides móveis menor que 1 milhão por mililitro. As amostras seminais serão expostas aos meios de imobilização espermática contendo PVP, HA ou meio HTF suplementado com tampão HEPES e soro sintético substitutivo 10% (controle) sob condições que mimetizarão o procedimento de preparo do espermatozoide para a ICSI. Os espermatozoides recuperados após exposição aos meios de imobilização ou controle serão então analisados quanto à fragmentação do DNA e perfil lipídico da membrana plasmática pelas técnicas de TUNEL e espectrometria de massas com ionização por eletrospray (ESI-MS), respectivamente.

Em um recente estudo, utilizando leveduras como modelo, evidenciou-se que agregações amiloides, amplamente conhecidas por seu estado inativo e tóxico na maioria dos ensaios, na verdade exercem um papel central e determinante no processo de divisão celular para formação dos gametas e consequentemente no processo reprodutivo em geral. Todavia, até o presente, não há estudos investigando a presença e padrão de distribuição de placas de amiloide em oócitos e embriões pre-implantação de mamíferos. Iremos descrever a presença e caracterizar o padrão de distribuição das placas de amiloide em óvulos maduros e embriões pré-implantação, usando o modelo murinho. Será realizado um estudo experimental piloto utilizando oócitos e embriões de camundongos. Os oócitos em metáfase II e embriões (1 célula, 2 células, 4 células, 8-12 células, mórulas e blastocisto) de camundongos criopreservados serão obtidos da Embryotech Laboratories. Imediatamente após o descongelamento, as amostras serão fixadas para imunocoloração, usando como anticorpo primário o Ac anto fibras de amilóide, para avaliação por microscopia confocal (Zeiss 880 laser scanning confocal microscope) e para análise por microscopia eletrônica de transmissão (ME), utilizando o processo de reforço em prata, sendo a captura das imagens realizada com o microscópio Philips CM-12 (FEI; Eindhoven, The Netherlands), equipado com a câmera digital Gatan 4K x 2.7K (Gatan, Inc., Pleasanton). Inicialmente, será realizada uma análise descritiva dos achamos (presença e distribuição/localização das placas) nos oócitos e nos embriões (1 célula, 2 células, 4 células, 8-12 células, mórulas e blastocisto) de camundongos. Após padronizada a metodologia de avaliação das referidas placas por microscopia confocal e microscopia eletrônica de transmissão, avaliaremos se é possível realizar a análise quantitativa das imagens e, se sim, padronizaremos a metodologia a ser utilizada. Para a realização de análises quantitativas comparativas utilizaremos os testes estatísticos adequados às características das variáveis.

Questiona-se um possível papel deletério da endometriose sobre a qualidade oocitária (QO). Como os
oócitos humanos são extremamente raros e a sua utilização em estudos invasivos, que impossibilitam a utilização dos mesmos nos procedimentos de reprodução assistida, geralmente não é exequível, a identificação de biomarcadores não invasivos, passíveis de predição da qualidade oocitária, é bastante desejável. Neste contexto, as células do cumulus (CCs) podem ser utilizadas como biomarcadores indiretos de QO. Desta forma, a análise do
perfil de expressão gênica em CCs poderá trazer valiosas informações sobre vias desreguladas envolvidas na etiopatogênese da infertilidade relacionada à endometriose, cujo entendimento, favorecerá a investigação do seu papel no prognóstico gestacional e o delineamento de estudos de intervenção terapêutica. Objetivos: Determinar o conjunto de RNAs mensageiros expressos (perfil de transcritos) em CCs de mulheres inférteis sem e com endometriose (estadios I/II e estadios III/IV, com e sem endometrioma) submetidas à estimulação ovariana controlada para ICSI por sequenciamento de nova geração e comparar o perfil dos transcritos entre os grupos propostos. A partir da identificação dos genes diferencialmente expressos, iremos identificar as vias onde estes genes alterados estão envolvidos e correlacionar com a doença e com a infertilidade, realizando a validação dos genes mais promissores por PCR-RT. Metodologia: Serão analisadas no estudo CCs de 4 grupos de pacientes; sendo 1 grupo controle, 1 grupo com endometriose I/II, 1 com endometriose III/IV (sem endometrioma) e 1 com endometriose III/IV (com endometrioma). Todas as pacientes serão submetidas à EOC para a realização de ICSI. Imediatamente após a captação oocitária, as CCs serão isoladas e armazenadas para o sequenciamento de nova geração (RNA-Seq), além disso, serão realizadas análises de expressão de genes alvos selecionados após a análise de bioinformática por PCR em tempo real.

Aproximadamente, 30% das mulheres com endometriose apresentam dificuldades para engravidar, sendo que mesmo nos estadios iniciais da doença (I e II - mínima e leve) existe uma diminuição da taxa de fecundidade mensal comparado a mulheres inférteis sem endometriose. Fluido folicular (FF) de mulheres inférteis com endometriose leve compromete oócitos bovinos quando adicionado ao meio de maturação in vitro (MIV), e qualidade oocitária é preponderante para um desenvolvimento embrionário adequado. N-acetil-cisteína (NAC) e L-carnitina (LC) são antioxidantes e previnem os danos meióticos oocitários induzidos por FF de mulheres com endometriose leve ao meio de MIV. Porém, a LC é superior a NAC, revertendo completando esses danos. A LC é responsável pelo transporte de ácidos graxos durante a β-oxidação mitocondrial (via de produção de ATP). Ácido docosahexaenóico (DHA) e eicosapentaenóico (EPA) são ácidos graxos da família ômega 3 envolvidos na β-oxidação. Desta forma, propomos comparar o impacto da suplementação de DHA, EPA e LC ao meio de MIV de oócitos bovinos suplementado com FF de mulheres inférteis com e sem endometriose [divididas por estadio: endometriose inicial (I/II) e avançada (III/IV)] sobre a qualidade oocitária avaliada por organização do fuso meiótico e alinhamento cromossômico através de microscopia confocal. Está sendo realizado um estudo experimental utilizando modelo bovino. FF está sendo colhido de pacientes inférteis com e sem endometriose (fator tubário e/ou masculino ? controle) submetidas à ICSI. COCs serão submetidos a MIV divididos em 10 grupos: sem FF(semFF), com FF de EI/II ou EIII/IV ou controle (CFF); CFF+LC, CFF+LC+DHA/EPA;EI/II+LC, EI/II+LC+DHA/EPA; EIII/IV+LC e EIII/IV+LC +DHA/EPA. Então, os oócitos serão fixados e marcados com fluoróforos para avaliação de fuso meiótico e cromossomos por microscopia confocal ou submetidos a FIV para posterior análise do desenvolvimento embrionário e o fragmentação do DNA por TUNEL nos blastocistos eclodidos.

A criopreservação de oócitos é considerada uma abordagem importante, tanto como estratégia de tentativa de preservação da fertilidade feminina, como nos tratamentos de reprodução assistida. Embora recentemente tenha havido um avanço consistente na eficácia da criopreservação de oócitos humanos, com taxas de nascidos vivos similar a de oócitos frescos com o uso da vitrificação, a segurança da técnica ainda é incerta e os métodos são dispendiosos em termos de custo dos meios de vitrificação e devitrificação, predominantemente importados e comercializados na forma de kits. Além disto, apesar de dados sugerirem a associação entre alterações epigenéticas e as tecnologias de reprodução assistida, especialmente desordens de imprinting genômico, que podem levar a alterações de crescimento e desenvolvimento, não temos dados investigando se a vitrificação de oócitos favorece estas desordens. Hipotetizamos que novas formulações de meios crioprotetores, contendo biomoléculas que participam da estrutura e funcionalidade celular, em particular da função mitocondrial e da dinâmica do sistema de membranas da célula, poderiam melhorar a criotolerância e segurança da vitrificação de oócitos.

A cepa Wistar Audiogenic Rat (WAR) encontra-se na sua geração 55 de seleção genética, mas o risco potencial de se extinguir com o passar dos anos é iminente. Recentemente, o Laboratório de Neurofisiologia e Neuroetologia Experimental (LNNE), Departamento de Fisiologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-USP, obteve aprovação da Assessoria Jurídica da USP, trâmite feito junto à Agência de Inovação USP, para doação da cepa WAR para o The Rat Resource and Research Center (RRRC), nos Estados Unidos, um dos maiores repositórios internacionais de cepas de ratos, responsável pelo armazenamento e distribuição de embriões desses modelos à comunidade biomédica internacional. Assim, a criopreservação de embriões pode ser uma estratégia para preservação da cepa WAR para estudos futuros e disponibilidade internacional da transferência da cepa de um laboratório para outro. Dentre as técnicas de criopreservação disponíveis para oócitos e embriões, a vitrificação é a metodologia mais efetiva No entanto, por se tratar de uma linhagem de ratos específica, selecionada e mantida por um laboratório que se dedica à pesquisa básica em epilepsia e comorbidades psiquiátricas, não se conhece muito sobre as características reprodutivas básicas da cepa WAR, as quais são essenciais para suportar a futura vitrificação e disponibilização dos embriões. Objetivos. Determinar o perfil reprodutivo e embrionário da cepa WAR em comparação com Wistar por meio de avaliações do acasalamento pareado acessando o número de fêmeas prenhes por acasalamento, número de filhotes ao nascimento e ganho de peso dos filhotes até o desmame. Determinar o número de embriões por fêmea prenha em cada uma das linhagens, bem como quantificar o número total de células por embrião. Finalmente avaliar a performance reprodutiva das duas cepas acessando parâmetros como perdas pré- e pós-implantação e viabilidade fetal.

Introdução: A endometriose é um distúrbio ginecológico dependente de estrogênio, que afeta 6-10% das mulheres em idade reprodutiva, caracteriza-se por implante e crescimento de tecido endometrial (glândulas e/ou estroma) fora da cavidade uterina e apresenta forte associação com infertilidade feminina. Os mecanismos etiopatogênicos responsáveis tanto pela redução da fertilidade natural, como pelos piores resultados dos procedimentos de reprodução assistida em portadoras desta doença permanecem pouco elucidados, sendo questionado um possível papel deletério da endometriose sobre a esteroidogênese ovariana, foliculogênese e qualidade oocitária. Como os oócitos humanos são extremamente raros e a sua utilização em estudos invasivos, que impossibilitam a utilização dos mesmos nos procedimentos de reprodução assistida, geralmente não é exequível, a identificação de biomarcadores não invasivos, passíveis de predição da qualidade oocitária, é bastante desejável. Neste contexto, as células do Cumulus oophorus podem ser utilizadas como biomarcadores indiretos de qualidade oocitária e resultados de fertilização in vitro. Os microRNAs, que desempenham papel crucial na regulação pós-transcricional de genes-alvo, parecem estar envolvidos na regulação esteroidogênese ovariana, foliculogênese e maturação oocitária. Hipotetizamos que a desregulação na expressão de microRNAs envolvidos na regulação destes processos possa mediar a infertilidade observada em portadoras desta doença, o que motivou a realização do presente estudo. Até o presente, não dispomos de estudos analisando se alterações nos microRNAs está presente em mulheres com infertilidade relacionada à endometriose.
Objetivos: Fazer um screening por TaqMan Array micro RNA cards em células do Cumulus oophorus (COCs) de mulheres inférteis com endometriose pélvica (inicial: estágios I/II e avançada: estágios III/IV) e controles (fatores masculino e/ou tubário de infertilidade). Comparar o perfil de expressão gênica em CCs de mulheres inférteis com endometriose pélvica (inicial: estágios I/II e avançada: estágios III/IV) e controles (fatores masculino e/ou tubário de infertilidade) submetidas à estimulação ovariana controlada para ICSI.

Relação entre os níveis séricos de TSH e anticorpo anti-peroxidase e os resultados de procedimentos de reprodução assistida

O câncer de mama é o tipo de câncer mais comum entre mulheres de idade reprodutiva, que constituem atualmente cerca de um quarto dos casos diagnosticados. A quimioterapia adjuvante pode comprometer a função ovariana e o futuro potencial reprodutivo dessas mulheres. Devido às crescentes taxas de sobrevida e aos efeitos tardios da quimioterapia, a preservação da função ovariana e da fertilidade são cada vez de maior importância para essa população de pacientes que será submetida à terapia adjuvante. Visto que a maioria das mulheres em idade reprodutiva deseja preservar sua função ovariana (e a fertilidade), a predição da probabilidade de falência ovariana após um tratamento oncológico específico torna-se uma informação valiosa. Entretanto, os dados disponíveis sobre a probabilidade de falência ovariana e infertilidade após o tratamento quimioterápico para o câncer de mama em mulheres na menacme são baseados em trabalhos retrospectivos, com pequena casuística e com analise de variáveis pouco específicas para determinação da extensão do dano à reserva ovariana (por exemplo, taxa de amenorreia após o tratamento). Além disso, não dispomos de dados oriundos de estudos bem delineados e com adequada casuística avaliando o impacto de cada um dos regimes quimioterápicos mais comumente usados para o tratamento do câncer de mama em mulheres na menacme. Este estudo foi desenhado para determinar o impacto dos regimes quimioterápicos comumente utilizados no tratamento do câncer de mama sobre a reserva ovariana em mulheres na menacme, além de identificar fatores de predição de comprometimento da reserva ovariana nessas pacientes. Trata-se de um estudo transversal prospectivo. Marcadores bioquímicos da função e da reserva ovarianas (estradiol, FSH, inibina B e hormônio anti-mülleriano) serão analisados antes do início da quimioterapia, durante e na conclusão do tratamento planejado. Novas dosagens serão repetidas a cada 4 meses por um mínimo de 1 ano. Utilizando esses dados, vamos também tentar desenvolver um modelo de predição para acessar o risco individual de mulheres submetidas aos regimes clássicos de quimioterapia para o câncer mama de desenvolver falência ovariana e/ou comprometimento da reserva ovariana. (USP-RP)

Conhecimento atual O custo para o tratamento da infertilidade restringe muito o acesso ao tratamento, principalmente se considerarmos que a taxas de sucesso por ciclo é de aproximadamente 35%. Há descrito na literatura médica, esquemas alternativos de indução da ovulação que levam a um menor custo, menos injeções e conseqüentemente menor desconforto, e inclusive menor risco de eventos adversos, associados à síndrome da hiperestimulação ovariana. Além disso, ao invés de se tentar melhorar o sucesso com a manipulação cada vez maior dos gametas, alguns serviços relatam excelentes resultados com a menor manipulação possível, o que reduz o custo do laboratório, de recursos humanos e pode ser considerado eticamente menos complicado, uma vez que a fecundação ocorre intra-útero e não in vitro.
Objetivos
Comparar os resultados entre a transferência transcervical de gametas e de embriões; e estimar a eficácia da indução da ovulação realizada com citrato de clomifeno e baixa dose de gonadotrofinas na fase folicular inicial e baixa dose de hCG na fase folicular tardia. 
Local de realização
Setor de reprodução humana do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia do Hospital das Clínicas da FMRP-USP.
Desenho do estudo
Estudo controlado aberto com alocação aleatória dos sujeitos
Medidas principais
Comparação dos resultados: a) eficácia: nascimentos vivos e gestações clínicas por mulher alocada; b) efeito adverso: gestação múltipla e aborto por gravidez clínica em cada grupo
Estimativa da eficácia da indução da ovulação: Número de oócitos (total e maduros) captados por mulher incluída.

Introdução: A endometriose é uma doença ginecológica prevalente, definida pela presença de tecido endometrial fora da cavidade uterina. O mecanismo pelo qual a doença influencia a fertilidade feminina permanece um mistério e não se sabe, também, qual é o melhor tratamento para essas pacientes. Sabidamente, os procedimentos de reprodução assistida são os responsáveis pela maior taxa de fertilidade.
Objetivos: Responder se a presença e/ou severidade da endometriose afetam os resultados de ciclos de reprodução assistida: nascidos vivos, gravidez clínica e aborto.
Métodos: Serão incluídos estudos que reportem dados originais a respeito dos principais resultados de reprodução assistida (gravidez clínica, aborto e nascidos vivos) em mulheres com endometriose, comparados com mulheres submetidas à reprodução assistida sem o diagnóstico prévio da doença. Estudos que comparam resultados em mulheres com estágios diferentes da doença também serão incluídos.

Introdução: Apesar dos constantes avanços das técnicas de reprodução assistida (RA), as taxas de gestação e de nascidos vivos que resultam desses procedimentos ainda permanecem baixas. Recentemente, foi descrita uma nova técnica para análise de espermatozoides sob microscopia de alta magnificação (superior a 6.000x). Dessa forma, alterações em estruturas subcelulares passaram a ser identificadas. O uso desses gametas para injeção intracitoplasmática parece aumentar a taxas de sucesso de RA. 
Objetivos: Comparar os principais resultados da injeção intracitoplasmática de espermatozoide (ICSI) com os resultados da injeção intracitoplasmática de espermatozoide morfologicamente selecionado (IMSI): nascidos vivos, gravidez clínica e aborto.
Métodos: Serão incluídos apenas ensaios clínicos randomizados, encontrados em pesquisas nos principais bancos eletrônicos de dados. Os dados serão posteriormente combinados para metanálise. Não serão impostas restrições de data ou idioma de publicação.