Paulo Sergio Rodrigues Coelho.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença fúngica sistêmica endêmica na América Latina, causada por espécies fúngicas do género Paracoccidioides spp.. Embora esta doença seja considerada uma das principais micoses sistêmicas da América Latina, pouco se sabe sobre a patogênese deste fungo. Pga1-(Predicted GPI anchored protein one) é uma proteína de matriz de parede celular encontrada em muitos fungos. Em P. brasiliensis, a proteína Pga1 é considerada um importante componente da parede celular e tem sido associada à resposta imune do hospedeiro. No entanto, o papel preciso de Pga1 na biologia e patogênese da PCM ainda não foi completamente elucidado. Portanto, o presente projeto de pesquisa tem como objetivo compreender o papel de Pga1 na biologia e patogênese da PCM. Para atingir o objetivo geral, foram definidos três objetivos secundários. O primeiro objetivo é construir linhagens mutantes de Pga1 para entender o papel dessa proteína na biologia do fungo. Para isso, será utilizada a tecnologia de RNA antisse (ATMT) e a transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens. Em seguida, serão realizadas análises de crescimento e transição dimórfica através de análises de curvas de crescimento e microscopias de luz e fluorescência para determinar o papel de Pga1 nesses processos. O segundo objetivo é investigar o papel de Pga1 na parede celular do fungo, avaliando sua estrutura e modulação na presença ou ausência de Pga1. Para isso, serão realizados testes de sensibilidade a estressores e antifúngicos para determinar o papel de Pga1 na manutenção da parede celular. Além disso, serão utilizadas microscopias confocal e eletrônica para avaliar a estrutura da parede celular na presença ou ausência de Pga1. O terceiro objetivo é avaliar o papel de Pga1 na virulência do fungo através de um teste de virulência utilizando um modelo de infecção em murinos. Neste modelo, será avaliada a contagem de unidades formadoras de colônias (CFU), histologia e a sobrevida após infecção. Também será avaliada a capacidade de fagocitose de macrófagos, utilizando-se as linhagens mutantes e selvagem. Os resultados dessas análises serão cruciais para entender o papel de Pga1 na biologia e patogênese da PCM, o que pode levar ao desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas e diagnósticas.

A paracoccidioidiodomicose, cujo agente é o fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, representa uma importante infecção endêmica no Brasil e América Latina. O recente sequenciamento de seu transcriptoma e genoma e o desenvolvimento de ferramentas de genética molecular abrem perspectivas de estudos funcionais em escala global para a o entendimento se sua patogenicidade. Resultados preliminares de bioinformática a partir da análise do transcriptoma permitiram a identificação de 15 proteinas-GPI (glicosilfosfatidilinositol) com homólogas no fungo patogênico Histoplasma capsulatum, muitas delas de função desconhecida. As proteinas-GPI constituem a principal classe de proteinas de parede em ascomicetos e podem ter um importante papel na patogenicidade (aderência ao tecido hospedeiro por ex.). Pretendemos clonar clonar todas os genes codificadores de proteina-GPI de P. brasiliensis pelo sistema Gateway e avaliar por real-time PCR o nível de expressão destes genes na fase patogênica leveduriforme. O projeto pretende portanto contribuir para o desenvolvimento de reagentes úteis na prevenção e tratamento desta importante micose.