Rafael Carneiro Ortiz.

O presente projeto de extensão visa desenvolver e divulgar um material educativo que integre conhecimentos fundamentais de histologia, embriologia e fisiologia da fonação, com foco nas alterações patológicas provocadas pelo Carcinoma Espinocelular (CEC) de laringe. A voz, enquanto principal instrumento de comunicação humana, é gerada por mecanismos complexos envolvendo estruturas laríngeas e controle neural fino. Contudo, alterações vocais persistentes podem indicar patologias graves, incluindo o CEC de laringe, uma das neoplasias malignas mais frequentes da região de cabeça e pescoço. A proposta visa elaborar materiais didáticos em linguagem acessível, abordando: (1) a formação embriológica e os aspectos histológicos das estruturas fonatórias; (2) os mecanismos fisiológicos da fonação; (3) as alterações causadas pelo CEC de laringe; e (4) os principais procedimentos cirúrgicos utilizados no tratamento da doença. A produção será fundamentada em bibliografia científica reconhecida e contará com a colaboração de docentes especialistas para validação do conteúdo. As ações de extensão serão realizadas em Unidades Básicas de Saúde (UBS) de Bauru-SP, com o apoio de agentes de saúde e o uso de mídias digitais para exibição do material. A campanha educativa será veiculada durante o Julho Verde de 2026, promovendo a conscientização sobre a prevenção do CEC de laringe. Serão aplicados questionários de percepção junto aos profissionais de saúde para avaliação do impacto da campanha. Espera-se que o projeto fortaleça a integração entre universidade e sociedade, promova a educação em saúde e valorize o papel da ciência básica na compreensão e prevenção de doenças complexas como o câncer de laringe.

Esse projeto tem como objetivo proporcionar aos alunos de graduação uma experiência prática e socialmente relevante em Lençóis Paulista, reforçando o papel comunitário do profissional de saúde em formação. A meta é que cada aluno participe de no mínimo duas atividades extensionistas anuais, as quais incluem: ministrar oficinas educativas e lúdicas sobre higiene e microbiologia para crianças, desenvolver materiais didáticos (cartilhas/pôsteres), realizar atividades de educação em saúde em escolas (uma por semestre) e promover a divulgação dessas ações. O resultado esperado é ampliar e consolidar a inserção social do futuro profissional da saúde, estimulando sua responsabilidade cívica e promovendo a saúde e o conhecimento na comunidade.

Este projeto ambicioso tem como objetivo central fortalecer o processo de ensino-aprendizagem da disciplina de Ciências para estudantes e professores dos 8 anos das escolas públicas municipais de Ensino Fundamental de Bauru. Para atingir essa meta, alunos dos Cursos de Graduação (Medicina, Odontologia e Fonoaudiologia) e Pós-Graduação (Odontologia e Fonoaudiologia) da USP/Bauru serão mobilizados para preparar recursos e materiais didáticos, bem como elaborar roteiros de aulas práticas que complementarão as atividades teóricas em sala de aula, sempre com ênfase na microscopia e no ensino de seu uso como ferramenta. Além da atuação direta nas escolas, o projeto prevê a realização de diversas visitas ao campus da USP de Bauru para atividades didáticas e visitas a laboratórios, com a finalidade de despertar o interesse dos estudantes pelo ambiente universitário e enriquecer a formação prática. Uma parte crucial da iniciativa é a capacitação dos professores de Ciências, aos quais será fornecida cópia de todo o material didático elaborado pelos alunos de graduação, juntamente com treinamento teórico-prático completo. Este treinamento visa garantir a continuidade e a manutenção das atividades mesmo após o término do projeto, promovendo uma modificação duradoura nas práticas educacionais e buscando uma educação de melhor qualidade. Dessa forma, o projeto espera iniciar um processo de fortalecimento do ensino das ciências nas escolas públicas, contribuindo para reduzir as desigualdades na qualidade do aprendizado e, fundamentalmente, estimular os estudantes a se engajarem no conhecimento e ingressarem no ensino superior.

O Carcinoma Epidermoide de Boca (CEB) é a neoplasia oral de maior incidência. O diagnóstico tardio e a ocorrência de metástases cervicais são desafios prognósticos cruciais que afetam significativamente a sobrevida. Cresce o interesse no papel dos neutrófilos no microambiente tumoral, que, embora antes vistos como passivos, agora se sabe que possuem uma dualidade funcional, podendo tanto promover quanto suprimir o tumor. Essa função dual não está totalmente clara no CEB, mas sabe-se que podem contribuir para processos como proliferação, metástase e evasão imune. Devido à lacuna no conhecimento e à heterogeneidade, é essencial quantificar e caracterizar essas células. Assim, este estudo propõe avaliar a associação entre a presença de neutrófilos (intratumorais e estromais) e fatores clínico-patológicos de agressividade em CEB primários, com e sem metástases, por meio da quantificação imuno-histoquímica, visando contribuir para o desenvolvimento de um melhor entendimento de seu papel.

O carcinoma epidermoide de boca (CEB) é o tumor maligno mais comum na cavidade oral, com etiologia multifatorial. Seu diagnóstico tardio frequentemente coincide com a presença de metástases linfonodais, o fator prognóstico negativo mais importante, capaz de reduzir a sobrevida em até 50. Neste cenário, a imunidade inata, especialmente as células Natural Killer (NK), é crucial. As células NK destroem células tumorais com baixo MHC classe I (hipótese da "auto-falta"). Sua ativação é mediada por receptores de membrana, como o NKp46 (ativador e associado à vigilância imune) e o CD57 (marcador de diferenciação terminal e maior citotoxicidade). A redução do NKp46 tem sido ligada à progressão metastática. Este estudo visa investigar a relação entre as células NK (via perfis de NKp46 e CD57) e a progressão metastática do CEB, correlacionando a imunomarcação com variáveis clínico-patológicas.

O CEB é um dos cânceres mais comuns da cavidade oral, com alta taxa de mortalidade global, permanecendo em torno de 50 nas últimas décadas, principalmente devido ao diagnóstico tardio e à progressão agressiva da doença, que inclui fatores como a presença de metástases linfonodais e a limitada efetividade das terapias convencionais. Tais fatores refletem, em grande parte, à heterogeneidade celular que compõem o parênquima tumoral e seus mecanismos de crosstalk com o seu estroma, classificado como microambiente tumoral (MT), representando um desafio crucial no diagnóstico e prognóstico do câncer. A identificação de biomarcadores prognósticos precisos e confiáveis é crucial para o melhor manejo clínico do CEB, provendo estratificação de risco dos pacientes, o planejamento terapêutico individualizado e o monitoramento da resposta ao tratamento. Nesse contexto, a bioinformática se apresenta como uma ferramenta poderosa para a descoberta e validação de biomarcadores prognósticos no CEB. Por meio da análise de grandes conjuntos de dados moleculares, como expressão gênica, metilação do DNA, microRNAs e proteínas, é possível identificar padrões moleculares associados à progressão da doença, à sobrevida do paciente e à resposta ao tratamento. Com base nessas informações, buscamos ao final utilizar a bioinformática para desenvolver modelos prognósticos que integram diferentes biomarcadores para prever fatores significantes como o risco de progressão da doença e a sobrevida do paciente com CEB.

O CEB é o câncer mais comum na mucosa oral, com alta taxa de mortalidade e prognóstico ruim devido a diagnósticos tardios e resistência a tratamentos. A heterogeneidade tumoral, especialmente em virtude da presença de células tronco tumorais (CSCs), contribui para a progressão e recorrência do CEB. As CSCs são difíceis de identificar por métodos de diagnóstico padrão, exigindo marcadores moleculares específicos. Sugere-se ainda que o brotamento tumoral (BT), um aglomerado de células tumorais isoladas na margem de invasão do tumor, associado a maior incidência de metástases linfonodais e pior prognóstico no CEB pode estar relacionado à CSCs. Estudos recentes sugerem sua inclusão em sistemas de classificação histopatológica como biomarcador prognóstico. Este projeto visa elucidar o papel do BT nos fatores clínico-patológicos do CEB, investigar seu potencial como biomarcador precoce de metástases linfonodais e fornecer subsídios para o desenvolvimento de estratégias de tratamento mais eficazes e personalizadas. A pesquisa busca preencher lacunas no conhecimento sobre o comportamento do BT no CEB e destaca a importância da padronização na avaliação do BT para melhorar a precisão do diagnóstico e prognóstico.

O processo embriológico do desenvolvimento craniofacial compreende inúmeras atividades, ocorrendo de maneira controlada e simultânea, no qual falhas ou alterações podem levar a anomalias congênitas. Dentre essas, a fissura labial com ou sem fissura palatina não-sindrômica (FLPNS) unilateral representa a anomalia congênita mais comum da face, apresentando diferentes taxas de prevalência nas diferentes etnias. Nesses casos, no contexto do protocolo de reabilitação, preconiza-se o enxerto ósseo alveolar secundário idealmente realizado entre dos 9 aos 15 anos de idade para estabelecimento funcional e estético. No entanto, a estabilização da maxila por meio da reconstituição do rebordo alveolar completa e funcional permanece como um grande desafio frente ao alto número de insucesso no enxerto ósseo. O processo de reparo ósseo após enxerto é sucedido pela formação de hematoma, seguido da ativação da inflamação, regulada por meio de interleucinas (IL), como as IL -1 e -6. Tais moléculas atuam preferencialmente no recrutamento de células inflamatórias e na angiogênese. Além destes, ocorre a produção de proteínas ósseas, incluído desde proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) até osteoprotegerinas (OPG) na fase osteogênica. Ao final, a fase de remodelação óssea é regulada pela produção de diversas metaloproteinases de matriz (MMPs) e citocinas inflamatórias, caracterizando um ciclo altamente especializado na promoção do reparo ósseo, com consequente osseointegração do osso autógeno enxertado na área da fissura. Avanços recentes com a conclusão do projeto do genoma humano, tornaram indiscutível a importância dos genes no contexto etiológico de inúmeras condições, em muitas delas cada gene com um efeito no background conjunto a outros genes. Dentre as várias possibilidades que podem ser detectados estão incluídas as alterações específicas com variações genéticas localizadas em sítios de restrição de endonucleases, polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs, do inglês single nucleotide polymorphisms), inserções ou por fim, deleções de fragmentos maiores. Neste contexto, evidencias fortes demonstram que alguns SNPs podem influenciar no processo de reparo ósseo, atuando diretamente na regulação imune, bem como no recrutamento celular, produção da matriz e remodelação óssea. Baseado nisso, o objetivo deste trabalho é investigar os polimorfismos encontrados em interleucinas inflamatórias (IL-1, IL-1R e IL6), proteínas osteogênicas (BMP-6) e MMPs (MMPs -1, -8 e -13) que possam estar envolvidos na falha do processo de osseointegração de pacientes com FLPNS unilateral submetidos ao EOAS. O mapeamento do perfil genético de sujeitos com FLP unilateral submetidos ao EOAS que apresentam falha do processo de osseointegração (caracterizado clinicamente como insucesso) pode auxiliar os clínicos na definição da melhor conduta terapêutica fundamentada nesse perfil genético.

O diabetes mellitus (DM1) é uma desordem metabólica caracterizada por uma hiperglicemia crônica. Período longo de hiperglicemia desencadeia eventos celulares e moleculares que aumenta sistemicamente os níveis de citocinas inflamatórias levando ao atraso ou reduzindo a capacidade de reparo ósseo. A fibrina é um biopolímero natural que atua como uma matriz temporária para apoiar o processo de reparo e tem sido amplamente utilizada na odontologia para o tratamento de defeitos ósseos, porém, mudanças na sua propriedade podem influenciar no comportamento celular. O objetivo do trabalho é avaliar o processo de reparo ósseo alveolar com novo biopolímero de fibrina heterologo (BHF) no processo de reparo alveolar de ratos diabéticos. A diabetes foi induzida em 48 ratos Wistar pela dosagem única de 52mg/kg de massa corporal de estreptozotocina. Os ratos com glicemia de jejum acima de 200mg/dL teve o incisivo superior direito extraídos e preenchidos conforme o grupo de tratamento: DM1/Coag (n=24), coágulo sanguíneo e DM1/BFH (n=24), Biopolímero de Fibrina Heteróloga. Após o período experimental de 7, 14, 28, 42 dias (n=06 por grupo e período experimental) os animais foram eutanasiados e as maxilas removidas e fixadas em formol a 10 em tampão fosfato por 48h. Subsequentemente, as amostras serão escaneadas pelo microtomógrafo modelo 1176 (Skyscan, Bélgica). Os softwares NRecon, Dataviewer, CT-Analyzer e CT-Vol serão utilizados para obter o volume total do alvéolo e do osso neoformado. Após o processamento histológico, nos cortes teciduais corados pela Hematoxilina e Eosina serão determinados morfometricamente do percentual de tecido ósseo e tecido mole presente dentro do alvéolo remanescente. Nos cortes imunomarcados contra proteínas envolvidas na angiogenese (VEGF), formação óssea (Rux2, OCN, OPN) e de remodelação óssea (TRAP, RANKL e OPG) serão determinados o número de células marcadas por mm2. Os resultados obtidos serão submetidos a análise estatística para verificação de diferenças quanto ao processo de reparo alveolar com o uso da fibrina versus o coágulo sanguíneo.

O carcinoma epidermóide de boca (CEB) é uma das neoplasias mais comuns da região de cabeça e pescoço e resulta em alta morbidade e mortalidade anualmente. É importante ressaltar que o pior prognóstico no CEB é a presença de metástase nos linfonodos cervicais. A metástase em carcinomas está relacionada à transição epitelial-mesenquimal (EMT), processo no qual as células perdem características epiteliais e expressam características mesenquimais, como a expressão do fator de transcrição Twist, atuando também como oncogene, e promovendo a EMT em diversos tipos de câncer, por meio da supressão de proteínas de adesão, principalmente da E-caderina. Além disso, o processo metastático está associado à presença de células-tronco de câncer (CSC), uma subpopulação tumoral que apresenta maior taxa de migração e potencial metastático em comparação com as demais células tumorais. Estudos recentes sugerem que a hipóxia, bem como, o fator indutor de hipóxia (HIF-1) tem o potencial de modular a atividade das principais vias de ativação da EMT, regulando os níveis de expressão e atividade dos principais repressores transcricionais. Portanto, o objetivo deste estudo é avaliar a imunopositividade para os biomarcadores de hipóxia e EMT, HIF-1α e Twist respectivamente, em blocos parafinados de CEB, com intuito de caracterizar um perfil de expressão desses marcadores, associado às características clinico-patológicas e dados de sobrevida dos pacientes, acredita-se ser capaz de predizer quais destes devem ser seguidos com maior atenção e/ou submetidos a terapias adjuvantes.

O carcinoma epidermóide oral (CEO) é uma neoplasia extremamente agressiva, associada com elevada taxa de mortalidade. Apesar dos avanços em relação ao tratamento do CEO, poucos benefícios foram alcançados em relação ao prognóstico e muitos pacientes desenvolvem recorrência e resistência à terapia. Evidências recentes mostram que o CEO apresenta uma população de células raras, denominadas células-tronco de câncer (CTC), as quais estão presentes em diferentes estados fenotípico, sendo responsáveis por sustentar o crescimento tumoral bem como participar nos mecanismos de progressão, metástase e resistência ao tratamento. Desta maneira, terapias que atuem especificamente nas CTC são necessárias para o sucesso do tratamento. Neste contexto, a imunoterapia adotiva com as células Natural Killer (NK) tem demonstrado ser uma potente ferramenta terapêutica em diferentes neoplasias malignas, uma vez que estudos recentes têm mostrado que as mesmas atacam preferencialmente as CTC em relação às demais células que compõem a neoplasia. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar o potencial das células NK em eliminar as subpopulações de CTC no CEO identificadas pelo fenótipo CD44high/ESAhigh, CD44high/ESAlow e amebóide, bem como os mecanismos celulares e moleculares envolvidos no reconhecimento e eliminação das CTC pelas células NK. Para realização deste projeto, linhagens celulares derivadas de CEO bem como suas respectivas subpopulações de CTC (CD44high/ESAlow, CD44high/ESAhigh e células ameboides) serão co-cultivadas com células NK isoladas a partir de sangue periférico de doadores saudáveis e posteriormente serão realizados ensaios celulares e moleculares in vitro, incluindo citotoxicidade, degranualção, formação de colônias e esferas, citometria de fluxo, apoptose, expressão gênica e ELISA para avaliar como as células NK atacam as CTC.

O câncer é uma doença multifatorial que envolve vários eventos mutagênicos que conferem à célula a imortalidade e transformação, com capacidade de invasão dos tecidos adjacentes e evasão do sistema imunológico. As células neoplásicas apresentam diversos mecanismos para escape da imunovigilância, e possibilidades de intervenções imunológicas têm sido propostas para inibir ou até mesmo destruí-las. Contudo, o conhecimento sobre evasão tumoral da resposta imune continua sem muitas respostas, se tornando alvo de estudos recentes. As células Natural Killer (NK) são conhecidas desde a década de 1970 por sua capacidade de destruir células tumorais e infectadas por vírus sem sensibilização prévia, por meio do sistema imune inato. Para essa função, as células NK contam com a participação de citocinas como a Interleucina - 15 (IL-15), interleucina ? 12 (IL-12) e Interferon-ᵞ (IFN-ᵞ), que são importantes tanto para o desenvolvimento e maturação das células NK como para os efeitos antitumorais parcialmente atribuídos à estimulação da atividade dessas células. Embora as células tumorais tenham desenvolvido vários mecanismos para escapar da ação das células NK, os conceitos modernos na área de imunologia do câncer associado ao progresso metodológico impulsionam o estudo da imunoterapia com células NK, motivando assim futuros projetos de pesquisa. Neste projeto, será avaliado o perfil imunológico dos pacientes com câncer sólido, buscando especificamente elucidar o papel das células NK e citocinas relacionadas frente à doença, o que pode influenciar na decisão sobre tratamento e predição do desfecho clínico. Para este fim, a frequência de células NK CD56+/CD16-/ CD3- , bem como seu estado de ativação (NKp46) e inibição (CD158b), bem como citocinas relacionadas (IFN-ᵞ, TGF-β, IL-12 e IL-15) serão quantificadas por citometria de fluxo ou pelo método de ELISA. Os resultados laboratoriais serão posteriormente relacionados com dados clinico-patológicos (grau de diferenciação tumoral, classificação pTNM e sobrevida), podendo revelar algum impacto terapêutico ou mesmo prognóstico.

O câncer de laringe é o 12o tumor mais frequente no mundo e tem uma incidência estimada em 3,4 novos casos por ano, a cada 100 mil habitantes no Brasil. Cerca de 90 são carcinomas epidermóides e associam-se a elevada morbidade e mortalidade. Assim como para outros tumores, o Sistema TNM é o mais utilizado para prever mortalidade no câncer de laringe, além de auxiliar no processo de escolha das estratégias terapêuticas. Sabe-se que tumores com estádio T avançado (T3/T4), por romperem barreiras naturais anatômicas, possuem maior risco de disseminação metastática linfonodal, o que impacta nas decisões terapêuticas e, especialmente, na redução da sobrevida dos pacientes. Contudo, muitos pacientes com tumores avançados de laringe parecem ser incapazes de gerar metástase linfonodal, apesar de anatomicamente atingirem as vias de disseminação linfática. Alguns estudos mais recentes apontam as células tronco tumorais e a transição epitélio-mesenquimal como possíveis responsáveis pela disseminação tumoral e resistência aos tratamentos anti-neoplásicos. Nosso estudo visa a investigar se a presença de células tronco tumorais e em transição epitélio-mesenquimal, está associada a um fenótipo tumoral mais agressivo, em termos de disseminação metastática linfonodal, o que poderia auxiliar na predição prognóstica e planejamento terapêutico para os pacientes. Para este fim, amostras de tumores primários e de metástases linfondais serão avaliadas por imunohistoquímica, juntamente com informações clínicas e histopatológicas. Ao final, pretende-se porpor um modelo de predição de risco de metástases linfonodais para tumores de laringe.

quelite actínica é caracterizada por alterações do epitélio, colágeno e fibras elásticas&#10;que potencialmente se desenvolvem em carcinoma epidermóide de lábio. Este tipo de&#10;carcinoma é um dos cânceres mais comuns da região de cabeça e pescoço, sendo o&#10;pior prognóstico a presença de metástase nos gânglios linfáticos cervicais. Evidências&#10;crescentes sugerem que as metástases podem surgir de uma pequena população de&#10;células-tronco, conhecidas como células tronco de câncer. Além disso, essas células&#10;têm altas taxas de auto-renovação sendo capazes de reconstituir a heterogeneidade&#10;celular e foram apontados como responsáveis pela quimiorresistência em diferentes&#10;tipos de cânceres. A identificação de possíveis biomarcadores de células tronco de&#10;câncer poderia aprimorar o prognóstico e conduzir o tratamento. Neste estudo,&#10;investigamos a expressão e distribuição dos marcadores CD44 e ALDH1 na queilite&#10;actínica e em lesões primárias de carcinoma epidermóide de lábios. Em QA, as células&#10;epiteliais foram predominantemente negativas para ALDH1 (75% dos casos) e&#10;totalmente positivas para CD44. Nos casos de CEL, 94,4% dos casos foram&#10;imunopositivos para ALDH1 e todos os casos foram positivos para CD44.&#10;Comparando-se a expressão dos marcadores de CSC em QA e CEL, observou-se&#10;uma quantidade maior e estatisticamente significativa (P<0,001) de células ALDH1+&#10;em CEL em relação à QA. Por outro lado, a relação para proteína CD44 foi inversa,&#10;sendo que foi observada uma quantidade maior e estatisticamente significativa de&#10;células CD44+ em QA em relação ao CEL (P<0,001). Em conjunto, esses achados&#10;sugerem que a alta expressão de ALDH1 em CEL como marcador de progressão&#10;tumoral.

O carcinoma epidermóide de boca (CEB) é uma das neoplasias mais comuns da região de cabeça e pescoço e resulta em alta morbidade e mortalidade anualmente, estando o pior prognóstico relacionado à presença de metástase em linfonodos cervicais. O processo de metástase tem sido associado a uma subpopulação de células tumorais, chamadas células-tronco de câncer (CSC, do inglês Cancer Stem Cells), que consistem em uma pequena população de células com propriedades de células-tronco. Sabe-se, ainda, que há uma ligação entre as CSC e o processo de transição epitélio-mesenquimal (EMT, do inglês epithelial-mesenchymal transition), que explica a maior capacidade de migração e potencial metastático comparado com as demais células tumorais. Além disso, quando as células tumorais se desprendem do local primário do tumor e entram na circulação periférica são chamadas de células tumorais circulantes (CTCs, do inglês circulating tumor cells), capazes de se depositarem em linfonodos e outros órgãos, onde podem proliferar e originar eventuais tumores metastáticos. Atualmente, acredita-se que as CSC capazes de migrar e colonizar locais distantes tenham o fenótipo amebóide e possam estar ou não em EMT. Nesse contexto, o objetivo deste estudo é quantificar e caracterizar as células com fenótipo amebóide em CEB, tanto em tecido tumoral parafinado primário e linfonodos metastáticos correspondentes, quanto em amostras de sangue periférico de pacientes com estágio avançado da doença, buscando-se avaliar a associação das propriedades biológicas relacionadas ao fenótipo tronco tumoral e amebóide, com o comportamento invasivo e metastático do CEB. Para esse fim, a expressão de marcadores amebóides será avaliada, por meio de imunofluorescência em amostras teciduais parafinadas, sendo os dados posteriormente relacionados com parâmetros clinicopatológicos. As CTCs no sangue periférico de pacientes com CEB avançado serão paralelamente isoladas, quantificadas e caracterizadas, por meio de imunofluorescência e qPCR, em relação ao seu fenótipo de CSC e amebóide. Acredita-se que, ao final do projeto, o estudo das CSC possa ser capaz de fornecer informações de valor prognóstico, assim como a identificação das CSC amebóides no tumor primário, no sangue periférico e nos linfonodos metastáticos possa ser futuramente utilizada como preditor de risco de metástases e eficácia terapêutica no controle do CEB.

Há pouco mais de uma década surgiram os primeiros estudos indicando que os mecanismos de recorrência tumoral e metástase, assim como a falha do tratamento de câncer, se devem à subpopulação de células-tronco presente nos tumores. As células-tronco de câncer (CSCs, do inglês cancer stem cells) são a fonte de muitas células tumorais presentes em tumores malignos, como exemplo, o carcinoma epidermóide de boca (CEB), o qual é uma das neoplasias malignas mais comuns da região da cabeça e do pescoço. Além disso, as CSCs podem ter suas capacidades de invasão e migração aumentadas por meio de um processo biológico chamado transição epitélio-mesenquimal (EMT, do inglês epitelial-mesenchymal transition), no qual as células epiteliais adquirem um fenótipo mesenquimal. Pesquisadores evidenciaram que as CSCs de OSCC podem sofrer EMT ao mesmo tempo que retêm suas características de células-tronco. Neste contexto, o objetivo deste estudo é induzir a tumorigênese em camundongos imunodeficientes a partir da inoculação das subpopulações de CSCs CD44highESAhigh (células-tronco de câncer com fenótipo epitelial) e CD44highESAlow (célula-tronco de câncer em EMT), presentes na linhagem SCC9 ou CA1 de CEB e isoladas por meio de citometria de fluxo (BD FACSAria? Fusion). Os tumores induzidos, assim como as metástases linfonodais eventualmente formadas, serão caracterizados microscopicamente em relação às características histopatológicas, bem como avaliados por imuno-histoquímica quanto à expressão de diferentes marcadores relacionados com os fenótipos de CSCs, EMT e macrófagos presentes no microambiente tumoral.

O carcinoma epidermóide de boca (CEB) é uma das neoplasias malignas mais comuns da região da cabeça e do pescoço, e o fator prognóstico com impacto mais significante nessa doença é a presença de metástase em linfonodos cervicais. Ainda não se conhece o mecanismo exato pelo qual as células tumorais se desprendem do tumor primário, invadem e colonizam tecidos distantes (metástase); entretanto, evidências recentes mostram que células-tronco de câncer (CSCs, do inglês cancer stem cells) podem estar envolvidas nos processos de migração e invasão por meio da ativação do fenômeno de transição epitélio-mesenquimal (EMT, do inglês epitelial-mesenchymal transition) nas células tumorais. Sabe-se, que o processo de EMT pode ser influenciado por componentes celulares e solúveis presentes no microambiente tumoral e que, dentre as células infiltrantes, os macrófagos representam a principal população leucocitária recrutada, sendo detectado em maior número em diferentes neoplasias. Ademais, a sinalização mediada por TGF-&#946; tem sido descrita como essencial para a manutenção das propriedades, diferenciação e função das CSCs, bem como reguladora do estado de EMT em células tumorais. Nesse contexto, o objetivo deste estudo é determinar a relação funcional entre macrófagos, CSC e fenômeno de EMT em relação à capacidade invasiva das diferentes subpopulações de CSC (em EMT ou não). Para este fim, subpopulações de CSCs presentes em linhagens de células tumorais humanas de CEB (SCC-9 ou CA1) serão inoculadas em camundongos imunodeficientes e o tumor primário formado, bem como linfonodos drenantes, serão avaliados por meio de citometria de fluxo em relação aos níveis de expressão de marcadores relacionados com o fenótipo de CSC (CD44) e de EMT (ESA), bem como com a polarização de macrófagos associados ao tumor (TAM, do inglês tumor-associated macrophages) para os fenótipos M1 (CD11b+F4/80+CD80+CD206-) ou M2 (CD11b+F4/80+CD80-CD206+). Além disso, também será realizada a caracterização de TAMs isolados de amostras frescas de CEB utilizando-se os marcadores CD14 (macrófagos), CD80 (M1) e CD206 (M2). Os níveis de expressão de CD44 e ESA também serão utilizados para separação celular por meio de citometria de fluxo, e as frações CD44highESAhigh (CSC não em EMT) e CD44highESAlow (CSC em EMT) serão utilizadas em ensaios de co-cultivo indireto com macrófagos e ensaios de invasão. O papel de TGF-&#946;1 será posteriormente avaliado nos ensaios in vitro por meio de adição de TGF-&#946;1 recombinante ou do bloqueio da sua via.

Evidências recentes mostram que há uma ligação entre as células-tronco de câncer (CSC) e o processo de transição epitélio-mesenquimal (TEM), de forma que as CSC são mais migratórias e exibem maior potencial metastático comparado com as demais células tumorais. Sabe-se, ainda, que o processo de TEM é aumentado durante a hipóxia e por citocinas inflamatórias, que correspondem a influências ambientais comuns nos tumores. Nesse contexto, o objetivo deste estudo é determinar os fatores que influenciam o comportamento das CSC em TEM, assim como investigar se sua assinatura molecular pode ser utilizada para a identificação de biomarcadores que possam ser utilizados como fatores prognósticos ou para escolha do tratamento. Para este fim, diferentes marcadores relacionados com CSC (CD44, P75NGFR, BMI-1 e ALDH-1), TEM (vimentina, Snail, Axl, E/N-caderina e Twist1), macrófagos (CD68, CD163 e F4/80) e via do TGF&#946;1 serão avaliados por meio de imuno-histoquímica em tecidos de CEC primário e linfonodos metastáticos correpondentes. Os níveis de expressão de CD44 e ESA também serão avaliados por meio de citometria de fluxo em amostras teciduais frescas, sendo todos esses dados posteriormente relacionados com parâmetros clínico-patológicos. As células tumorais circulantes no sangue periférico de pacientes com CEC de boca avançado serão paralelamente isoladas, quantificadas e caracterizadas em relação ao seu fenótipo de CSC e TEM. Por fim, a relação funcional entre macrófagos associados ao tumor (MAT), CSC e fenômeno de TEM será investigada em relação à capacidade invasiva das diferentes subpopulações de CSC (em TEM ou não), isoladas por separação celular por meio de citometria de fluxo, utilizando-se ensaios de co-cultivo indireto e ensaios de invasão. O papel de citocinas liberadas pelos MAT, assim como de TGF&#946;1, será especificamente avaliado por meio de ensaios de silenciamento ou superexpressão gênica.

O carcinoma epidermóide (CEC) de boca constitui uma das neoplasias malignas mais comuns da região da cabeça e do pescoço e resulta em grande morbidade e mortalidade anualmente, sendo que o pior prognóstico nessa doença relaciona-se com a presença de metástase em linfonodos cervicais, que ocorre em 25 a 65% dos casos. Em determinado estágio da doença, as células epiteliais tumorais sofrem um processo de transição epitélio-mesenquimal (TEM), caracterizado pela mudança do fenótipo epitelial para mesenquimal que tem como causa a perda ou diminuição da expressão de marcadores de células epiteliais, e o aumento da expressão de marcadores mesenquimais, mediados por fatores de transcrição da própria célula. Portanto, a TEM favorece a invasão dos tecidos subjacentes, resultando em metástases. Pesquisas recentes apontam que apenas uma subpopulação de células do tumor, as células-tronco de câncer (CSC, do inglês cancer stem cell), seja responsável pela recorrência dos tumores e metástases, e que estão relacionadas com o processo de transição epitélio-mesenquimal em carcinomas, uma vez que as CSC possuem um índice maior de migração e potencial metastático em comparação ás células tumorais comuns. Sendo assim, o objetivo deste estudo é identificar possíveis biomarcadores de subpopulações de CSC bem como do processo de TEM em tumores primários e metástases linfonodais correspondentes, por meio de imuno-histoquímica. A partir da caracterização de um perfil de expressão desses marcadores, associado às características clinicopatológicas e dados de sobrevida dos pacientes, acredita-se ser capaz de predizer quais destes devem ser seguidos com maior atenção e/ou submetidos a terapias adjuvantes.