Claudia Madalena Cabrera Mori.

A fim de acompanhar a tendência internacional, o Brasil se alinha na questão ética e na qualificação do profissional que trabalha com animais de laboratório. Neste sentido, este curso tem o objetivo de difundir e atualizar conceitos na área para capacitação de profissionais, tendo como público-alvo usuários que pretendam trabalhar ou continuar suas atividades em biotérios de produção, manutenção e experimentação. Em função da longa experiência na área, diferentes unidades da Universidade de São Paulo se uniram para elaborar a presente proposta, coordenada pelas Professoras Patrícia Gama (Instituto de Ciências Biomédicas USP) e Cláudia Madalena Cabrera Mori (Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia USP). Ambas já organizaram e ministraram cursos de treinamento em formato a distância e presencial, utilizando ambiente virtual, programas, e espaços construídos e localizados na Universidade de São Paulo. Neste aspecto, os cursos de Uso de Animais em Experimentação em formato EAD- ICB USP, de Especialização em Produção e Sanidade Animal em Biotério ? FMVZ USP e Animais de Laboratório (disciplina da graduação da FMVZ USP) são ministrados em diferentes contextos, porém têm o objetivo de formar e atualizar alunos e profissionais na gestão da criação e manutenção de diferentes modelos animais em biotérios, bem como, no seu uso ético em protocolos de pesquisa. Em conjunto, esses cursos já formaram centenas de alunos, em sua maioria da própria Universidade de São Paulo.

Contemplado no Edital 01/2020-2021 CAEG (Consórcios Acadêmicos para a Excelência do Ensino de Graduação).
A disciplina objetiva levar estudantes de diferentes cursos da USP à compreensão de que problemas complexos requerem soluções complexas e, por conseguinte, inter- e multidisciplinares. No caso, os problemas complexos a serem trabalhados por equipes multiáreas de estudantes estão relacionados aos Objetivos para o Desenvolvimento Sustentável (ODS) da ONU. A disciplina será online, optativa-livre e oferecida no período noturno a estudantes da USP de qualquer curso, daí a pertinência de ficar sediada na Pró-Reitoria de Graduação.
O produto final do trabalho das equipes é o desenvolvimento de módulos interativos digitais produzidos com o aplicativo H5P para a plataforma Wordpress que estejam interligados entre si numa estratégia de "escape game" e deverão necessariamente conter discussões sobre "fake news" relacionadas ao ODS (sua linguagem, aparente embasamento intelectual/científico etc), bem como apresentar iniciativas desenvolvidas na USP e percursos formativos em nível de graduação que podem contribuir para a consecução dos ODS.
Aos estudantes, portanto, caberá um segundo objetivo educacional, de análise crítica e curadoria de informações para seleção de sites que sejam incorporados aos módulos do "escape game" que será composto ao final. Dessa forma, ao longo dos anos, à plataforma gerada devem ir se agregando módulos relacionados aos demais ODS, constituindo um rico produto que, esperamos, seja disponibilizado nos sites da USP como material de apoio a professores do Ensino Médio, bem como de suporte ao programa "A USP e as Profissões" na divulgação da Universidade para potenciais candidatos a estudantes.

A análise de mutações em modelos murinos pode revelar novas funções para genes conhecidos, identificar genes subjacentes a doenças humanas ortólogas ? nas quais o gene causal ainda não foi identificado-, além de proporcionar a investigação de novos fenótipos biomedicamente relevantes. A mutação espontânea tremor (tr), autossômica recessiva, foi identificada na colônia de camundongos Swiss no Biotério do Departamento de Patologia da FMVZ/USP. Os mutantes apresentaram como principais características fenotípicas tremores, ataxia e convulsões audiogênicas. A mutação foi transferida para a linhagem congênica C57BL/6 por retrocruzamentos (N10), e realizou-se o mapeamento genético com marcadores microssatélites indicando que a mesma encontra-se no cromossomo 14, na região entre 33,21 e 38,21 cM. O gene Egr3, um dos fatores de transcrição da família zinc-finger, envolvidos na inervação e formação do fuso mitótico, foi identificado como possível candidato da mutação. O camundongo mutante recessivo cruza pernas (crup), assim denominado devido à posição dos membros posteriores quando o animal é suspenso pela cauda, originou-se da mutagênese química induzida por ENU. Inicialmente essa mutação foi mapeada por microssatélites no cromossomo 11 e, posteriormente, foi realizado o sequenciamento do exoma, resultando em diversos genes candidatos já confirmados pelo método de Sanger. Foram encontradas mutações exclusivas do crup nos genes Taf15, Car4, Slfn 1 e 9, Apoh e Heatr6. Após análise na literatura da função dos possíveis genes mutados, identificou-se como principal candidato o Taf15, que atua principalmente sobre neurônios motores no sistema nervoso central. Resultados preliminares demonstraram que os mutantes crup e tr apresentaram déficit motor e alterações sensoriais que podem estar associadas a doenças neurodegenerativas. O presente projeto tem como objetivos caracterizar o fenótipo dos camundongos mutantes crup e tr por meio da análise do comportamento, da avaliação da neurogênese e da expressão gênica. Os testes comportamentais serão realizados por observação direta dos animais ordenados por parâmetro avaliado, na seguinte sequência: 1) atividade geral e sistema sensorial, 2) testes psicomotores, 3) avaliação do sistema nervoso central e autônomo. Também será avaliada a coordenação motora na trave elevada, a memória espacial no labirinto em T, a ansiedade no labirinto em cruz elevada e o comportamento tipo depressivo pelos testes de suspensão pela cauda e nado forçado. Além disso, será realizada a avaliação funcional para verificar possíveis alterações na neurogênese, em especial no hipocampo, dos camundongos mutantes pelo teste de proliferação celular in vivo com BrdU (5-bromo-2?-deoxiuridina) e expressão da proteína neuronal nuclear (NeuN), bem com determinar a expressão de RNA mensageiro para os genes Taf15 e Egr3 no SNC. Também será realizado o sequenciamento do gene candidato Egr3, visando sua confirmação com responsável pela mutação tr.

O projeto abrange o desenvolvimento do portal Boas Práticas em Experimentação Animal (BPEA), localizado no endereço http://www.bpeanimal.iq.usp.br, que alberga os vídeos e tutoriais referenciados sobre procedimentos experimentais em camundongos e ratos de laboratório. O conteúdo encontra-se disponível para acesso aberto via internet e é utilizado como recurso didático na disciplina Criação de Animais de Laboratório (VPT2203) do curso de Medicina Veterinária da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo.

Inúmeras linhagens de camundongos mutantes foram geradas com o intuito de fornecer modelos animais para doenças genéticas humanas, possibilitando avaliar alterações anatômicas, efeitos neuroquímicos e comportamentais da expressão do gene aberrante. Uma variedade de ensaios foram desenvolvidos para identificar e caracterizar as alterações fenotípicas desses animais. No que se refere à análise comportamental, a estratégia de fenotipagem envolve uma abrangente abordagem metodológica padronizada que avalia atividade geral, reflexos, habilidades sensoriais e funções motoras; seguidas por uma série de tarefas complementares no domínio comportamental com a finalidade específica de revelar a provável função do gene mutado. No Brasil, Massironi et al. (2006) desenvolveram um projeto com a finalidade de induzir novas mutações em camundongos utilizando o agente mutagênico químico N-Ethyl-N-Nitrosourea (ENU). Como resultado detectou-se 11 novos alelos mutantes, dos quais três mutações são novos alelos em locus onde pelo menos outro alelo mutante já havia sido descrito. A primeira mutação mapeada foi o mergulhador (Otop1mlh), localizada no cromossomo 5, sendo que os camundongos homozigotos apresentam disfunção vestibular caracterizada fenotipicamente pela incapacidade de nadar e defeitos na morfogênese das otocônias (Hurle et al., 2003). Seis dos mutantes obtidos nesse projeto (careca, equilíbrio, fraqueza, rodador, sacudidor de cabeça e sem pelo) também estão sendo mapeados e a caracterização fenotípica desses modelos tem sido objeto de estudo de diversos autores (Mori et al., 2006; Salvagni et al., 2009; Ariza, 2011; Policarpo et al., 2011, Torres et al., 2013). Além do que, uma mutação espontânea, autossômica recessiva, foi identificada na colônia de camundongos Swiss do Biotério do Departamento de Patologia da FMVZ/USP causando tremores, ataxia e convulsões. Essa mutação foi denominada de tremor (tr). Em estudos preliminares realizou-se a avaliação histopatológica do sistema nervoso central (SNC) dos mutantes tr. A técnica de histoquímica, utilizando a coloração de luxol fast blue (LFB) evidenciou deficiência de mielina principalmente nas meninges e camada molecular do cerebelo. Na caracterização genética, o primeiro rastreamento feito com marcadores microssatélites localizou a mutação tr no cromossomo 14. Porém, a maioria desses mutantes ainda necessitam de estudos mais detalhados para caracterização do fenótipo, visando à validação do modelo animal. Adicionalmente, a fenotipagem comportamental permite a compreensão dos fenômenos que envolvem alterações no sistema nervoso. Nesse sentido, o projeto apresentado busca caracterizar o fenotípo dos camundongos mutantes induzidos quimicamente por ENU (bate palmas, mergulhador e equilíbrio) e do mutante espontâneo tremor, visando à validação de novos e relevantes modelos que apresentem potencial para estudo da patogenia de doenças humanas. Posteriormente, pretende-se realizar o mapeamento genético daqueles mutantes que o gene ainda é desconhecido. A caracterização fenotípica dos camundongos mutantes abrangerá a avaliação geral do fenótipo baseando-se em uma bateria de testes comportamentais. Inicialmente, os testes serão realizados no campo aberto e ordenados por parâmetro avaliado, na seguinte sequência: 1) atividade geral dos animais e sistema sensorial: frêmito vocal, irritabilidade, reflexo auricular, aperto de cauda, reflexo corneal e resposta ao toque; 2) testes psicomotores: contorção, trem posterior, reflexo de endireitamento, tônus corporal e força de agarrar; 3) avaliação dos sistema nervoso central e autônomo: tremores, convulsões, cauda em pé, sedação, anestesia, ataxia, ptose, lacrimação, micção e defecação.