Gil Benard.

A modulação da resposta imune em várias situações clínicas
persiste como um dos objetivos mais desafiadores da imunologia. Sabe-se
que as citocinas são fundamentais para esta regulação, tendo sido já
classicamente estudadas. Após se ligarem a seus receptores específicos
na superfície das células alvo, uma de suas principais vias de sinalização
é o sistema JAKs/STATs. As JAKs são compostas por uma família de
quatro proteínas, JAK 1, 2 ,3 e TyK2. Já as STATs, são compostas por
uma família de proteínas denominadas STAT 1, 2, 3, 4, 5a, 5b e 6. A
sinalização intracelular via JAK-STAT se inicia quando uma citocina ligase
ao seu receptor, ativando por transfosforilação as tirosinas quinases
citoplasmáticas (JAKs) que têm como alvo os fatores ativadores de
transcrição de sinal e transdutores de ativação (STATs), os quais após a
fosoforilação se dimerizam e migram para o núcleo aonde serão
responsáveis pela ativação de genes de citocinas específicos. Entretanto,
não há estudos detalhados da cinética de expressão intracelular das
STATs, sua correlação com o padrão de secreção de citocinas e de seus
receptores após ativação in vitro. Sendo assim, propõe-se estudar, por
citometria de fluxo, a cinética da expressão das proteínas STAT-1, -3, -4,
-5, e -6 fosforiladas em linfócito ativados in vitro por mitógenos e
antígenos, correlacionando com as citocinas secretadas
concomitantemente e seus respectivos receptores, uma vez que tem sido
descrito alterações no perfil dessa sinalização em diferentes situações
clínicas, seja diminuindo ou exacerbando a resposta inflamatória,
levando a doenças autoinflamatórias ou deficiências na resposta imune a
patógenos. Uma vez compreendida a cinética de expressão das respectivas STATs, nosso objetivo seguinte será entender melhor a
participação destas proteinas na regulação da resposta imune em modelo
de doença infecciosa estudando pacientes com hanseníase na sua forma
polar, tuberculóide e lepromatosa. Com estes result

Nas últimas três décadas a incidência de infecções fúngicas
invasivas cresceu consideravelmente. Trichosporon spp começa a ganhar
evidência, principalmente em pacientes oncohematológicos com cateter
venoso central. Recentes análises da taxonomia do gênero Trichosporon
através de biologia molecular descrevem 37 espécies, sete delas
responsáveis por infecções em humanos: Trichosporon asahii,
Trichosporon asteroides, Trichosporon cutaneum, Trichosporon inkin,
Trichosporon mucoides, Trichosporon ovoides e Trichosporon loubieri. A
mortalidade de infecções invasivas por Trichosporon spp pode chegar a
100% em casos de neutropenia persistente. A análise dos casos de
infecção invasiva por Trichosporon spp, com identificação das espécies
por espectrometria de massa MALDI-TOF ainda não foi realizado no
Brasil, e servirá como base para a aplicação de tal tecnologia na rotina de
identificação de fungos da Divisão de Laboratório Central do HC-FMUSP.
A aplicação da tecnologia MALDI-TOF no estudo do fenômeno de
resistência aos antifúngicos é incipiente e o grupo francês do ?Laboratoire
de Parasitologie-Mycologie et INSERM/UPMC UMR S 945? do Centro
Hospitalar Pitié-Salpêtrière é pioneiro. A comparação entre as
concentrações inibitórias mínimas dos antifúngicos e as concentrações
mínimas de antifúngicos que produzem alteração do perfil de
espectrometria para os isolados de Trichosporon será realizada em
parceria ao grupo francês e é inédito na literatura.

As infecções fúngicas se tornaram um importante problema de
saúde publica nas ultimas décadas devido ao aumento significativo de
pacientes imunodeprimidos. Dentre essas infecções destaca-se a
dermatofitose que é infecção superficial capaz de produzir lesões em
tecidos queratinizados, como pele, pêlo e unhas. Dentre os agentes
etiológicos o mais isolado é o Trichophyton rubrum. Pouco se conhece
sobre a imunopatogênese desta micose. Sabe-se que as células do
sistema imune inato detectam patógenos através dos receptores de
reconhecimento padrão (PRRs). Dentre esses receptores destacam-se os
receptores do tipo Toll-Like (TLRs) e os receptores de lectinas do tipo C
(CLRs) os quais podem reconhecer o microorganismo e sinalizar para
iniciar uma resposta imune-protetora durante uma infecção.
Recentemente descobriu-se um novo tipo de células T helper chamadas
de Th17 que são caracterizadas por secretar IL-17, que é essencial para
montar uma resposta imune contra alguns patógenos. Já foi
demonstrado que alguns CLRs como por exemplo o receptor de manose
e/ou TLRs são capazes de regular o balanço entre Th1 e Th17, em parte
pela liberação de citocinas secretadas pelas células Th17. Propomos
analisar o envolvimento dos TLR 2 e TLR4 e do receptor de manose no
reconhecimento do T. rubrum, bem como a participação desses
receptores na indução de uma resposta Th1-Th17 em células humanas
do sistema imune provenientes de doadores sadios e portadores de
dermatofitose. Paralelemente, também será estabelecido o modelo
experimental de dermatofitose com T. rubrum em camundongos BALB/c
para analisar os tipos celulares envolvidos na resposta inflamatória in
situ desses animais. Com isso, espera-se delinear os mecanismos envolvidos na ativação e supressão da resposta imune inata/adaptativa
em pacientes e no modelo experimental de dermatofitose.

A paracoccidioidomicose (PCM) é micose profunda causada pelo
fungo Paracoccidioides brasiliensis, endêmica no Brasil e outros países
da América latina. A resposta do hospedeiro a esse fungo é mediada
principalmente pela imunidade celular, observando-se uma
imunossupressão predominantemente antígeno-específica; e nos
pacientes com as forma mais graves, também inespecífica. O principal
antígeno extraído do fungo é a gp43, porém existem componentes
glicolipídicos na superfície do fungo que podem apresentar estruturas
únicas, não vistas em células de mamíferos. Alguns desses compostos
possuem grande capacidade antigênica, ou em outros casos, são capazes
de causar efeitos imunossupressores. Diferentes glicolipídios podem
ativar receptores Toll-like, com importantes papéis na resposta imune, ou
ainda ativar células NK-T, importantes células reguladoras, e com isso,
modular a resposta imunológica. Do extrato do P. brasiliensis, observouse
que determinados glicolipídios são capazes de inibir proliferação,
demonstrando seu papel imunomodulador em animais, porém em
humanos seu efeito nunca foi estudado. Por isso, o objetivo desse
trabalho é avaliar o efeito de duas frações do extrato de glicolipídios sobre
a imunidade inata e adaptativa de pacientes sadios com ou sem histórico
prévio de PCM. Para tal, avaliaremos os efeitos de cada fração sobre a
capacidade de apresentação de antígenos, a expressão de moléculas coestimulatórias,
a expressão de receptores Toll-like em células dendríticas
e monócitos, assim como a resposta de ativação e proliferação de células
T co-cultivadas com células APC e a expansão de células
NK-T.

A hanseníase é uma infecção granulomatosa crônica de nervos e pele
causada pelo Mycobacterium leprae, que se manifesta por um quadro polimorfo,
pode apresentar surto de agudização e gerar incapacidades quando diagnosticada
nas formas avançadas. Com o objetivo de esclarecer melhor o papel de algumas
citocinas de padrão Th1 e Th2 na imunopatogenia da hanseníase, será importante
estudarmos proteínas envolvidas na tradução e transcrição dessas citocinas
(STATs). Além do importante papel desempenhado pelas citocinas na regulação
da resposta imune, é importante salientar as várias moléculas presentes na
superfície da célula apresentadora de antígeno interagindo com correceptores da
célula T, podendo favorecer ou inibir a ativação celular.O grupo de moléculas coestimulatórias
CD28, CTLA4, ICOS e PD-1 expressas preferencialmente em
células T com seus respectivos ligantes ICOSL, PDL-1 e PDL-2, CD80 ou CD86
nas células apresentadoras de antígeno, acarreta um potente sinal coestimulatório
para ativação de células T que resulta na indução de produção de várias citocinas,
entre elas IL-2, IL-10, TNF e IFN-gama, e na expressão do CD25 dando início à
ativação do ciclo celular. Outro mecanismo que provavelmente pode estar
envolvido na imunomodulação celular de pacientes com hanseníase é a morte
celular por apoptose de linfócitos, que estão bem determinados como a morte
induzida por ativação celular e a morte por deprivação de citocinas onde a
proliferação per se origina células apoptóticas. Tendo em vista que a hanseníase é
um dos exemplos mais ilustrativos da complexidade da interação hospedeiroparasita,
será importante a avaliação do papel destes fatores na resposta imune in situ, por meio de estudo imunohostoquímico de biópsias de lesões de pacientes, e
por meio da avaliação in vitro de células dos pacientes estimuladas com antígeno
de M. leprae, comparativamente aos indivíduos expostos, porém sem doença.