María Sol Brassesco Annichini.

As Crônicas da Pequena Aurora é um projeto de cultura e extensão desenvolvido no Laboratório de Biologia Celular e Oncogenética do Departamento de Biologia da Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto USP que aborda temas associados à biologia do câncer, através de uma história em quadrinhos. Esta ferramenta de divulgação tem caráter acessível e inclusivo para comunidades externas, utilizando linguagem simples e elementos não verbais para sanar dúvidas corriqueiras sobre o câncer, seu tratamento e outras particularidades associadas.

O tratamento de tumores ósseos, infecção e traumatismos frequentemente cria defeitos ósseos que necessitam preenchimento para evitar fraturas e promover a remodelação óssea. Devido às limitações do autoenxerto, vários substitutos ósseos estão sendo desenvolvidos com características diferentes. O cimento poroso à base de PMMA, desenvolvido previamente (auxílio FAPESP nº 2012/18965-0), apresenta características mecânicas semelhantes ao osso esponjoso, é biocompatível e atóxico. Além disso, em estudos em animais de experimentação, apresentou altas taxas de osteointegrção e invasão óssea. Com o intuito de potencializar estas características biológicas, é proposto, neste estudo, a combinação deste cimento com diferentes formas e concentrações de estrôncio que é reconhecidamente um estimulador da osteogênese.Nanopartículas de fosfatos e carbonatos de estrôncio com estequiometria variada que possibilitem a liberação controlada de estrôncio serão sintetizadas e combinadas ao cimento poroso. Na caracterização química serão avaliadas a composição e estrutura cristalina das partículas, tal como o perfil de eliminação do estrôncio. Na caracterização física será avaliada a morfologia, densidade, tempo de cura, temperatura máxima durante a cura, características mecânicas e estruturais. Nas avaliações in vitro serão realizados ensaios de citotoxicicade e aptoptose e determinadas alterações genéticas relacionadas com osteoindução e inibição de osteoclastos. Nas avaliações in vitro será estudada a osteointegrção e invasão óssea do cimento poroso implantado em defeitos criados em ossos de coelhos por histologia, munohistoquímica, micro-CT e ensaios mecânicos de arrancamento.Esperamos desenvolver um cimento ósseo à base de PMMA e estrôncio, poroso, com macroporos interconectados, atóxico e biocompatível que possa ser modelado intraoperatoriamente e que elimine os íons de estrôncio de forma controlada. Além disso, esperamos que esta eliminação de estrôncio potencialize a capacidade de osteointegração e de invasão óssea

Osteossarcoma (OS) é o tumor ósseo pediátrico mais comum encontrado principalmente nas metáfises dos ossos longos. O tratamento atual consiste na remoção cirúrgica e quimioterapia multimodal neoadjuvante e adjuvante. Cerca de um terço dos pacientes é acometido por recorrência pós-cirúrgica e metástases nos pulmões e ossos distantes. Apenas 20% dos pacientes com metástases sobrevivem após 5 anos. Sendo assim, é essencial a elucidação das vias moleculares envolvidas nos processos invasivos e metastáticos desse tipo de tumor. Estudos recentes apontam o fator de transcrição HOXD10 como um inibidor geral da invasão celular. Como membro da família dos genes HOX, também é considerado um importante regulador celular, envolvido principalmente no desenvolvimento embrionário, na manutenção da pluripotência celular e, na promoção da diferenciação celular de forma controlada em organismos multicelulares. A desregulação de vários genes HOX vem sendo associada ao desenvolvimento e progressão tumoral e parece atuar de forma tecido específica. Estudos sugerem que a maioria dos genes HOX encontrados com expressão aumentada em um câncer em determinada região do corpo, normalmente é expresso durante o desenvolvimento daquele local. Curiosamente, genes dos clusters HOXA e HOXD são responsáveis pelo desenvolvimento do tecido ósseo de forma normal e alterações no gene HOXD10, especificamente, já mostraram resultar em defeitos nos membros posteriores de camundongos. Assim, apesar de ser majoritariamente descrito como pouco expresso no câncer, estudos preliminares do nosso grupo mostraram que este gene é pouquíssimo expresso no tecido ósseo maduro e encontra-se em altos níveis em amostras de OS pré-quimioterápicas. Resultados semelhantes já foram relatados em carcinoma de cabeça e pescoço e sarcoma de Ewing. Nestes estudos HOXD10 foi associado a promoção de migração e proliferação, porém ainda pouco se sabe dos mecanismos moleculares por trás destes efeitos. Dessa forma, o projeto em questão visa estudar o perfil de expressão do HOXD10 em amostras de OS primários e de metástases, bem como avaliar os efeitos in vitro e in vivo da modulação deste gene (silenciamento por CRISPR e aumento por vetor lentiviral) sob diferentes aspectos da invasão e proliferação além de elucidar as vias pelas quais este gene desempenha seu papel nesta neoplasia por técnicas de expressão gênica diferencial em larga escala e posterior validação.

O tratamento do câncer infantil tem evoluído de maneira significativa nas últimas décadas. Entretanto, as taxas de cura obtidas para determinados subtipos histológicos, como por exemplo, tumores cerebrais malignos de alto grau, subtipos agressivos de leucemias e principalmente os sarcomas estão aquém do desejado. O tumor de Ewing e o osteossarcoma representam os tumores ósseos malignos mais frequentes, correspondendo com 5-7% dos cânceres que acometem crianças. Ambos os tipos de tumor são considerados inicialmente curáveis, mas apresentam uma grande propensão à recaídas e metástase, devido à inerente quimiorresistência e à capacidade invasiva das células. Recentemente, as quinases ROCK têm sido apontadas como fatores importantes na fisiopatologia e progressão de diferentes tumores devido ao seu papel no processo de migração celular. De fato, diferentes estudos sugerem que o bloqueio de elementos envolvidos no controle da migração celular podem diminuir a capacidade oportunista das células tumorais de invadir e metastizar em órgãos distantes, um passo considerado critico na intervenção alvo-dirigida. Dessa forma, no presente projeto propõe-se avaliar a expressão dos genes ROCK1 e ROCK2 e microRNAs associados em amostras de pacientes pediátricos acometidos com osteossarcoma e sarcoma de Ewing e verificar os efeitos in vitro da inibição das quinases ROCK em linhagens celulares desses tumores ósseos, enfatizando nos processos de proliferação, migração e invasão. Pretende-se ainda avaliar a influência da inibição das ROCK nas linhagens celulares em relação à resistência e sensibilização aos tratamentos atualmente disponíveis para cada tipo tumoral. Paralelamente serão conduzidos experimentos in vivo em camundongos imunodeprimidos que permitam estudar o potencial terapêutico da inibição das quinases alvo em relação a disseminação tumoral. FAPESP proc. n 2014/03877-3

Introdução: Cimentos porosos absorvíveis ou não são uma alternativa em desenvolvimento no tratamento de grandes falhas ósseas. Sua produção pela mistura com os agentes efervescentes bicarbonato de sódio e ácido cítrico já foi estudada do ponto de vista físico, mas não se tem informações sobre o efeito do citrato liberado durante a reação formadora de bolhas de gás, sobre uma possível formação de outros reagentes tóxicos ou sobre a osteointegração in vivo. Os cimentos à base de poliuretana de mamona são reabsorvíveis e parecem bons candidatos à serem testados na forma porosa. Objetivo: Avaliar a formação de elementos tóxicos durante a produção dos cimentos porosos à base de polimetilmetacrilato (PMMA) ou poliuretana de mamona com os elementos efervescentes. Avaliar o efeito sobre a hemostasia do citrato produzido durante a reação entre os elementos efervescentes. Avaliar a capacidade de osteointegração destes cimentos. Materiais e métodos: Três tipos de cimento poroso serão produzidos pela mistura com elementos efervescentes e comparados entre si e com um controle: cimento de PMMA, poliuretana de mamona da marca Poliquil e da marca Bioósteo. Serão usados como modelos de experimentação as amostras de cimento para as avaliações laboratoriais, coelhos para avaliações de curto prazo (1 semana) e carneiros para avaliações de longo prazo (3 e 6 meses). Serão analisados: os componentes químicos após a reação, a toxicidade aguda in vitro em culturas de células, o efeito do citrato sobre a hemostasia em coelhos submetidos à implantação dos cimentos, a reação inflamatória provocada pelo cimento em coelhos (agudo) e carneiros (crônico), a toxicidade sistêmica crônica em órgãos de carneiros 6 meses após implantação e a osteointegração em falhas grandes criadas em carneiros em condições de sopio de carga.A avaliação da osteointegração será por histologia, histomorfometria e microtomografia computadorizada. 
Proc. FAPESP 2012/18965-0

Estudos de potenciais alvos terapêuticos e vias biológicas envolvidas no Meduloblastoma. O Meduloblastoma é um câncer do sistema nervoso central, altamente invasivo, de origem embrionária, localizado no cerebelo. É o tumor sólido mais frequente em crianças e, segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), é classificado como um tumor de grau IV. Atualmente, o tratamento para este tipo de neoplasia consiste em cirurgia, quimioterapia e, dependendo da idade do paciente, radioterapia. Apesar de a sobrevida ser alta (mais de 50%) o tratamento utilizado pode acarretar efeitos adversos a médio e longo prazo. Portanto, estudos que permitam detectar novos alvos terapêuticos são fundamentais para melhorar o tratamento em pacientes, principalmente nos menores de três anos, e diminuir os efeitos adversos causados pelo tratamento desta doença.A proposta deste projeto é estudar potenciais alvos terapêuticos envolvidos com a agressividade do Meduloblastoma, utilizando linhagens celulares e amostras provenientes de pacientes diagnosticados no Hospital das Cínicas de Ribeirão Preto (USP), aplicando drogas específicas e técnicas de inibição da expressão gênica. Além disso, estudos de expressão gênica e a avaliação de diferentes parâmetros celulares como viabilidade, apoptose, ciclo celular e capacidade clonogênica serão realizados para complementar a pesquisa. Justificativa: Apesar de ser eficiente, o tratamento atual para meduloblastoma resulta agressivo, podendo deixar sequelas a longo prazo. Já existem relatos de déficit no sistema endócrino, no sistema nervoso e no crescimento, incluindo defeitos neurocognitivos, endócrinopatologias, esterilidade e alto risco de desenvolvimento de gliomas secundários de alto grau. Varias modalidades terapêuticas baseadas em genes individuais ou em vias biológicas responsáveis pelo desenvolvimento do MB estão atualmente sendo testadas, no entanto, os resultados não têm cumprido com as expectativas. Desta forma, a procura por tratamentos direcionados a novos alvos que potencializem as terapias atuais é imperativa. Neste contexto, a análise dos efeitos da inibição de fatores que possam contribuir para o aumento da instabilidade genômica (como os genes da família das PLKs), o de vias de sinalização envolvidas nos processos de proliferação, invasão e quimio-resistência das células malignas (como a via de hipóxia, NFkB e LASP1) como está sendo proposto neste trabalho, poderá contribuir para o desenvolvimento de terapias alternativas para o meduloblastoma e para um maior entendimento da biologia deste tumor. FAPESP proc 2011/11287-3

Auxílio regular FAPESP (Proc.: 2010/15717-0)
O projeto tem como objetivo geral investigar alterações cromossômicas numéricas e estruturais mediante técnicas de citogenética convencional e a subseqüente validação por FISH (Hibridação in situ Fluorescente) em amostras de diferentes neoplasias da infância provenientes do Laboratório de Pediatria do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo

Auxlio FAPESP- Programa Jovem Pesquisador proc.: 2010/50635-4.
O estudo pretende estudar os efeitos in vitro da inibição da via do NF-κB pelo DHMEQ (isoladamente ou em combinação com os tratamentos atualmente utilizados: radiação e TMZ) na quimioresistência, invasão e proliferação em linhagens celulares pediátricas e adultas de GBM, assim como em células tronco CD133+ isoladas das mesmas. Paralelamente, pretende-se implementar modelos in vivo em camundongos imunodeprimidos que permitam avaliar os efeitos dessa droga, assim como facilitar a pesquisa de futuros alvos terapêuticos.