Sérgio Akira Uyemura.

No decorrer dos anos, o SINPOSPq vem ganhando prestígio e credibilidade no meio científico ao abordar temas interdisciplinares e multifocais na tentativa de alcançar diversos públicos alvos. O objetivo do evento é estimular o intercâmbio intelectual entre pesquisadores estrangeiros e o público científico nacional, enfocando as áreas das ciências farmacêuticas. As quatro edições anteriores do SINPOSPq apresentaram sempre um número crescente de participantes, sendo que o evento apresentou o recorde de inscrições na edição anterior (4a edição) bem como o número de trabalhos apresentados, e essa tendência só tem aumentado com o decorrer das edições. Em 2008 foram 266 inscritos e 129 trabalhos apresentados. Em 2010 foram 352 inscritos e 214 trabalhos apresentados. Ao contrário dos dois últimos anos, em 2012 aumentar-se-á a quantidade de palestrantes de 17 para 23, os quais apresentarão, entre outros assuntos, importantes inovações no campo tecnológico, que poderão ter aplicação direta no contexto científico do país. Vários tópicos serão discutidos, incluindo: futuro da terapia gênica, sistemas de liberação de fármacos, enzimas de interesse industrial, efeito imunomodulatório de probióticos, tecnologias cosméticas e farmacêuticas, toxicologia: modelagem farmacocinética e farmacodinâmica, produtos naturais, farmácia clínica e terapêutica, o futuro do pós graduando: mercado de trabalho, tendências em métodos analíticos, desenvolvimento de vacinas, química medicinal, iniciação à docência superior, segurança microbiológica em alimentos, redação de artigos científicos, entre outros. Tal oportunidade de abordar esta diversidade de temas importantes terá, sem dúvidas, impacto nas atividades de pesquisa e nos Programas de Pós-Graduação da área

A Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - USP (FCFRP-USP) com a co-promoção da Associação dos Farmacêuticos de Ribeirão Preto (AFARP) teve a satisfação de organizar o 4th Congress of Pharmaceutical Sciences - CIFARP 2003, que se realizou com êxito de 29 de junho a 02 de julho de 2003, em Ribeirão Preto, SP. Participaram do referido evento, conferencistas nacionais e internacionais, bem como com cerca de 1.000 congressistas vindos de todo o Brasil e do exterior. O CIFARP2003 foi realizado no Centro de Convenções Ribeirão Preto, e foi importante para que o evento atingisse os seus objetivos, pois o amplo Centro de Convenções mostrou-se um local adequado, oferecendo espaço e conforto para os congressistas e conferencistas. Havia duas salas com capacidade para 500 pessoas/cada com tradução simultânea, que permitiram um efetivo aproveitamento das atividades por todos os participantes, independentemente da nacionalidade. Além disso, outras quatro salas com capacidade para 120 pessoas/cada e uma daquelas com capacidade para 500 pessoas podiam ser convertidas em uma sala ampla com capacidade de até 1.200 pessoas, o que ocorreu durante a cerimônia de abertura que contou com os participantes e convidados. Apoios institucionais são de grande importância para eventos científicos e para a realização do CIFARP2003, o apoio institucional da Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo, do Conselho de Desenvolvimento Tecnológico e Cientifico (CNPq) e da Coordenadoria de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), proporcionaram uma maior penetração do evento junto aos pesquisadores, estudantes de graduação e pós-graduação, além de profissionais farmacêuticos, importantes públicos-alvo deste congresso. Este evento internacional, que contempla as diversas áreas de abrangência das Ciências Farmacêuticas, vem tomando grandes dimensões, e tornando-se um evento referência no país devido à sua multidisciplinaridade, qualidade científica e organiza

A Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - USP (FCFRP-USP) com a co-promoção da Associação dos Farmacêuticos de Ribeirão Preto (AFARP) teve a satisfação de organizar o 4th Congress of Pharmaceutical Sciences - CIFARP 2003, que se realizou com êxito de 29 de junho a 02 de julho de 2003, em Ribeirão Preto, SP. Participaram do referido evento, conferencistas nacionais e internacionais, bem como com cerca de 1.000 congressistas vindos de todo o Brasil e do exterior. O CIFARP2003 foi realizado no Centro de Convenções Ribeirão Preto, e foi importante para que o evento atingisse os seus objetivos, pois o amplo Centro de Convenções mostrou-se um local adequado, oferecendo espaço e conforto para os congressistas e conferencistas. Havia duas salas com capacidade para 500 pessoas/cada com tradução simultânea, que permitiram um efetivo aproveitamento das atividades por todos os participantes, independentemente da nacionalidade. Além disso, outras quatro salas com capacidade para 120 pessoas/cada e uma daquelas com capacidade para 500 pessoas podiam ser convertidas em uma sala ampla com capacidade de até 1.200 pessoas, o que ocorreu durante a cerimônia de abertura que contou com os participantes e convidados.Apoios institucionais são de grande importância para eventos científicos e para a realização do CIFARP2003, o apoio institucional da Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo, do Conselho de Desenvolvimento Tecnológico e Cientifico (CNPq) e da Coordenadoria de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), proporcionaram uma maior penetração do evento junto aos pesquisadores, estudantes de graduação e pós-graduação, além de profissionais farmacêuticos, importantes públicos-alvo deste congresso.Este evento internacional, que contempla as diversas áreas de abrangência das Ciências Farmacêuticas, vem tomando grandes dimensões, e tornando-se um evento referência no país devido à sua multidisciplinaridade, qualidade científica e organiza

A Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - USP (FCFRP-USP) com a co-promoção da Associação dos Farmacêuticos de Ribeirão Preto (AFARP) teve a satisfação de organizar o 4th Congress of Pharmaceutical Sciences - CIFARP 2003, que se realizou com êxito de 29 de junho a 02 de julho de 2003, em Ribeirão Preto, SP. Participaram do referido evento, conferencistas nacionais e internacionais, bem como com cerca de 1.000 congressistas vindos de todo o Brasil e do exterior. O CIFARP2003 foi realizado no Centro de Convenções Ribeirão Preto, e foi importante para que o evento atingisse os seus objetivos, pois o amplo Centro de Convenções mostrou-se um local adequado, oferecendo espaço e conforto para os congressistas e conferencistas. Havia duas salas com capacidade para 500 pessoas/cada com tradução simultânea, que permitiram um efetivo aproveitamento das atividades por todos os participantes, independentemente da nacionalidade. Além disso, outras quatro salas com capacidade para 120 pessoas/cada e uma daquelas com capacidade para 500 pessoas podiam ser convertidas em uma sala ampla com capacidade de até 1.200 pessoas, o que ocorreu durante a cerimônia de abertura que contou com os participantes e convidados.Apoios institucionais são de grande importância para eventos científicos e para a realização do CIFARP2003, o apoio institucional da Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo, do Conselho de Desenvolvimento Tecnológico e Cientifico (CNPq) e da Coordenadoria de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), proporcionaram uma maior penetração do evento junto aos pesquisadores, estudantes de graduação e pós-graduação, além de profissionais farmacêuticos, importantes públicos-alvo deste congresso.Este evento internacional, que contempla as diversas áreas de abrangência das Ciências Farmacêuticas, vem tomando grandes dimensões, e tornando-se um evento referência no país devido à sua multidisciplinaridade, qualidade científica e organiza

A Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - USP (FCFRP-USP) com a co-promoção da Associação dos Farmacêuticos de Ribeirão Preto (AFARP) teve a satisfação de organizar o 4th Congress of Pharmaceutical Sciences - CIFARP 2003, que se realizou com êxito de 29 de junho a 02 de julho de 2003, em Ribeirão Preto, SP. Participaram do referido evento, conferencistas nacionais e internacionais, bem como com cerca de 1.000 congressistas vindos de todo o Brasil e do exterior. O CIFARP2003 foi realizado no Centro de Convenções Ribeirão Preto, e foi importante para que o evento atingisse os seus objetivos, pois o amplo Centro de Convenções mostrou-se um local adequado, oferecendo espaço e conforto para os congressistas e conferencistas. Havia duas salas com capacidade para 500 pessoas/cada com tradução simultânea, que permitiram um efetivo aproveitamento das atividades por todos os participantes, independentemente da nacionalidade. Além disso, outras quatro salas com capacidade para 120 pessoas/cada e uma daquelas com capacidade para 500 pessoas podiam ser convertidas em uma sala ampla com capacidade de até 1.200 pessoas, o que ocorreu durante a cerimônia de abertura que contou com os participantes e convidados.Apoios institucionais são de grande importância para eventos científicos e para a realização do CIFARP2003, o apoio institucional da Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo, do Conselho de Desenvolvimento Tecnológico e Cientifico (CNPq) e da Coordenadoria de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), proporcionaram uma maior penetração do evento junto aos pesquisadores, estudantes de graduação e pós-graduação, além de profissionais farmacêuticos, importantes públicos-alvo deste congresso.Este evento internacional, que contempla as diversas áreas de abrangência das Ciências Farmacêuticas, vem tomando grandes dimensões, e tornando-se um evento referência no país devido à sua multidisciplinaridade, qualidade científica e organiza

A Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - USP (FCFRP-USP) com a co-promoção da Associação dos Farmacêuticos de Ribeirão Preto (AFARP) teve a satisfação de organizar o 4th Congress of Pharmaceutical Sciences - CIFARP 2003, que se realizou com êxito de 29 de junho a 02 de julho de 2003, em Ribeirão Preto, SP. Participaram do referido evento, conferencistas nacionais e internacionais, bem como com cerca de 1.000 congressistas vindos de todo o Brasil e do exterior. O CIFARP2003 foi realizado no Centro de Convenções Ribeirão Preto, e foi importante para que o evento atingisse os seus objetivos, pois o amplo Centro de Convenções mostrou-se um local adequado, oferecendo espaço e conforto para os congressistas e conferencistas. Havia duas salas com capacidade para 500 pessoas/cada com tradução simultânea, que permitiram um efetivo aproveitamento das atividades por todos os participantes, independentemente da nacionalidade. Além disso, outras quatro salas com capacidade para 120 pessoas/cada e uma daquelas com capacidade para 500 pessoas podiam ser convertidas em uma sala ampla com capacidade de até 1.200 pessoas, o que ocorreu durante a cerimônia de abertura que contou com os participantes e convidados.Apoios institucionais são de grande importância para eventos científicos e para a realização do CIFARP2003, o apoio institucional da Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo, do Conselho de Desenvolvimento Tecnológico e Cientifico (CNPq) e da Coordenadoria de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), proporcionaram uma maior penetração do evento junto aos pesquisadores, estudantes de graduação e pós-graduação, além de profissionais farmacêuticos, importantes públicos-alvo deste congresso.Este evento internacional, que contempla as diversas áreas de abrangência das Ciências Farmacêuticas, vem tomando grandes dimensões, e tornando-se um evento referência no país devido à sua multidisciplinaridade, qualidade científica e organiza

A presente proposta está em consonância com o histórico da FCFRP-USP no emprego de recursos da RTI para a adequação de infraestrutura laboratorial (física ou instrumental) de laboratórios multiusuários, laboratórios com projetos temáticos, auxílios individuais da FAPESP. A proposta vai atender um número elevado de pesquisadores coordenadores de projetos de pesquisa e seus alunos vinculados, bem como atender à sugestão da FAPESP de emprego da RTI em projetos específicos que solicitaram auxílio adicional para conserto de equipamentos. Assim, propõe-se o seguinte plano anual de aplicação dos referidos recursos: 1. Reformas e adequações de laboratórios de pesquisa e multiusuárias, 2. Tratamento de resíduos químicos classe I. (AU)

A presente proposta está em consonância com o histórico da FCFRP-USP no emprego de recursos da RTI para a adequação de infraestrutura laboratorial (física ou instrumental) de laboratórios multiusuários, laboratórios com projetos temáticos, auxílios individuais da FAPESP. A proposta vai atender um número elevado de pesquisadores coordenadores de projetos de pesquisa e seus alunos vinculados, bem como atender à sugestão da FAPESP de emprego da RTI em projetos específicos que solicitaram auxílio adicional para conserto de equipamentos. Assim, propõe-se o seguinte plano anual de aplicação dos referidos recursos: 1. Conserto e manutenção de equipamentos de pesquisa, 2. Reformas e adequações de laboratórios de pesquisa e multiusuárias, 3. Tratamento de resíduos químicos classe I (AU)

Confidencial

O Aspergillus fumigatus é um fungo saprofítico, que tem sido encontrado em todas as regiões no mundo. Acredita-se que o nicho ecológico natural é o solo, onde ele sobrevive e cresce em vegetais em decomposição. Nos últimos anos, o fungo A. fumigatus deixou de ser apenas um fungo saprofítico de menor importância, para se tornar um dos principais agentes patogênicos oportunistas em pacientes imunossuprimidos.Nos últimos 30 anos, o laboratório de bioenergética e biologia molecular tem estudado o metabolismo energético mitocondrial do fungo saprofítico A. fumigatus. Desde o último projeto intitulado "Estudos bioenergéticos e moleculares de um transportador mitocondrial de NAD+/NADH de Aspergillus fumigatus" temos focado nossos estudos para o entendimento da regulação do conteúdo mitocondrial de NAD+/NADH, o qual tem sido atribuído como uma forma de resistência destes microrganismos em condições hostis. Recentemente, através de análise de bioinformática, na sequência do genoma de A. fumigatus foi possível encontrar uma sequência putativa do gene da nicotinamida nucleotídeo transidrogenase. Esta enzima está presente na membrana plasmática da maioria dos procariotos e na membrana mitocondrial interna dos eucariotos, incluindo humanos. Em mamíferos e microrganismos esta enzima catalisa a transferência direta do íon hidreto entre o NADH e NAD(P)H, sendo que este último cofator tem extrema importância na defesa antioxidante. Muito pouco é conhecido sobre sua exata função em A. fumigatus. Assim, o objetivo deste projeto é clonar, sequenciar e obter um nocaute do gene putativo da nicotinamida nucleotídeo transidrogenase de A. fumigatus

O Aspergillus fumigatus é um fungo saprofítico, que tem sido encontrado em todas as regiões no mundo. Acredita-se que o nicho ecológico natural é o solo, onde o mesmo sobrevive e cresce em vegetais em decomposição. Nos últimos anos, o fungo A. fumigatus deixou de ser apenas um fungo saprofítico de menor importância, para se tornar um dos principais agentes patogênicos oportunistas em pacientes imunossuprimidos. Durante a infecção por microrganismos, as células do hospedeiro liberam vesículas de membranas (dentre elas os exossomos). Os exossomos, são compostos por diferentes biomoléculas, incluindo proteínas, carboidratos, lipídeos e são ricos em ácidos nucléicos como DNA, RNA, RNAs não-codificantes e microRNA. O papel dos exossomos não está completamente elucidado, mas evidências tem sugerido que os mesmos participem como um mediador da comunicação/sinalização intercelular. Muito pouco é conhecido sobre a modulação da função mitocondrial das células do hospedeiro durante a infecção pelo A. fumigatus. Recentemente, tem sido descrito uma regulação mitocondrial por miRNAs exossomal. Neste sentido, o presente projeto propõe-se a estudar o papel dos exossomos isolados de macrófagos expostos aos conídios de A. fumigatus, o conteúdo de miRNAs presentes e a influência desses miRNAs sobre a função mitocondrial nas células pulmonares in vitro.

Resumo em Português	Os gliomas malignos adultos são tumores cerebrais heterogêneos caracterizados por recorrência e progressão com padrões variáveis. Embora alguns progressos tenham sido observados nos últimos anos, os gliomas ainda apresentam uma classificação de doença sub-ótima que pode afetar o manejo do paciente e dificultar o tratamento correto. Mutação nos genes IDH, o fenótipo hipermetilador G-CIMP e a co-deleção dos braços cromossômicos 1p/19q são fatores moleculares associados a subtipos de gliomas e que melhoram sua classificação. Notavelmente, evidências crescentes sugerem que a metilação aberrante do DNA desempenha um papel importante no desenvolvimento e/ou progressão dos gliomas. Nos glioblastomas, acredita-se que o estado de diferenciação celular afeta as propriedades das células tumorais e que a existência de células-tronco tumorais está associada a progressão tumoral e resistência terapêutica. Pretendemos realizar uma análise epigenômica abrangente e integrada para definir as regiões genômicas regulatórias associadas ao "stemness" nos gliomas e ao fenótipo hipermetilador ocasionados pela mutação nos genes IDH1/2 em gliomas e em outros tipos tumorais. Nossos achados podem fornecer: 1) elucidação dos mecanismos de tumorigênese e progressão tumoral; 2) mecanismos potenciais relacionados à metilação do DNA e à desregulação do metabolismo em tumores com mutação em IDH1/2; e 3) potencial aplicação dos resultados, como a identificação de biomarcadores que prevêem progressão e resistência a medicamentos, novos alvos para o desenvolvimento de fármacos, o refinamento da classificação tumoral molecular existente permitindo uma melhor estratificação para tratamento personalizado. Finalmente, esta proposta estabelecerá a área inovadora da epigenômica do câncer na FCFRP, que permitirá uma importante colaboração e contribuirá para expandir as ações de pesquisa no FCFRP.

O Aspergillus fumigatus é um fungo saprofítico, que tem sido encontrado em todas as regiões no mundo. Acredita-se que o nicho ecológico natural é o solo, onde o mesmo sobrevive e cresce em vegetais em decomposição. Nos últimos anos, o fungo A. fumigatus deixou de ser apenas um fungo saprofítico de menor importância, para se tornar um dos principais agentes patogênicos oportunista em pacientes imunossuprimidos. Nos últimos 18 anos, nosso laboratório tem investigado o papel dos diferentes componentes mitocondriais na bioenergética e biologia desse fungo. Neste sentido, o projeto estudará a função da menor subunidade do Complexo Tim23, a proteína Mgr2, cujo ortólogo (Romo1) tem função na modulação de espécies reativas de oxigênio em mamíferos. Ao mesmo tempo, implantará no laboratório a utilização da ferramenta de edição gênica CRISP/Cas9. O knockout de genes em A. fumigatus está estabelecido no laboratório através da disrupção genica usando a estratégia baseada em PCR e recombinação in vivo em leveduras, mas não é um processo trivial. A proposta é obter um mutante que expresse Cas9 (uma vez que está descrito que esse gene não é tóxico para Aspergillus) e transformá-lo apenas com o plasmídeo com gene alvo. Isso criará uma facilidade de obter mutantes com genes silenciados.

A serotonina (5-HT) é neurohormônio de efeitos complexos em humanos e demais animais. Sua ação modula o apetite, peristaltismo, sono, aprendizado, memória, humor, crescimento, envelhecimento, reprodução, entre tantos outros eventos. Novas evidências têm sugerido que a origem da expressão de serotonina (5-HT; epitelial ou neural) é um fator determinante para o estabelecimento da doença inflamatória intestinal. Embora a 5-HT tenha sido sugerida como promotora dos tumores de cólon, dados recentes tem demonstrado que a redução de seus níveis colônicos promove a formação de lesões preneoplásicas no cólon, enquanto que a elevação endógena de seus níveis reduz tais eventos. Aqui devemos considerar que a inflamação colônica é um dos principais eventos promovendo o processo carcinogênico neste tecido. Portanto, faz-se necessário investigar como a sinalização da 5-HT, a partir de suas diferentes origens, modula a carcinogênese de cólon. Esta hipótese será explorada em experimentos mecanísticos envolvendo a exposição ou não de camundongos a um agente carcinogênico em conjunto com tratamentos farmacológicos. A isto será somado à estratégia de camundongos "knockouts" tanto para a síntese epitelial de 5-HT, quanto para aquela neural. Métodos de biologia molecular serão empregados para determinar a ocorrência de dano gênico, bem como ativação ou silenciamento de mecanismos de reparo da lesão. Estudos específicos de mutação em sequencias gênicas explorarão os efeitos das diferentes condições experimentais tanto em lesões iniciais quanto em tumores de cólon. Então, estas múltiplas facetas moleculares lesão ligadas às alterações teciduais da carcinogênese de cólon através de estudos histopatológicos. Desta forma, bases mecanísticas sólidas serão estabelecidas sobre a regulação do sistema serotoninérgico na carcinogênese colônica. Nossos futuros resultados irão revelar potenciais mecanismos e alvos terapêuticos para a "luta" contra o câncer de cólon.

Estudar os diferentes mecanismos de entrada de NADH e sua regulação em mitocondrias de Aspergillus fumigatus

PROGRAMA CAPES/ MES CUBA DOCENTES

Processo: 2012.1.25456.1.0 Edital: 2011/2012 Valor: R$ 1.400.000,00.

O nosso laboratório caracterizou previamente a cadeia respiratória do fungo A. fumigatus. Nós demonstramos, que além da via do citocromo c, este organismo possui vias alternativas, com a presença de uma oxidase e NADH desidrogenase alternativa e uma proteína desacopladora. Estes componentes têm sido associados com a via energética e com a defesa antioxidante das células, a qual representa um importante fator para a sobrevivência em macrófagos durante a invasão do fungo no hospedeiro. Existem inúmeras evidências da presença de UCP em microrganismos como em Candida parasiplosis, Acanthamoeba castelani e Aspergillus sp. Entretanto, até o momento nenhuma seqüência codificadora desta proteína tinha sido descrita nesses microrganismos. Resultados prévios em nosso laboratório utilizando primers degenerados, desenhados a partir de múltiplos alinhamentos de seqüências de aminoácidos de UCPs, nós clonamos uma seqüência que apresenta três assinaturas moleculares atribuídas as UCPs. Entretanto, a exata função desta proteína não está bem estabelecida nestes microrganismos.
	Além disso, os nossos trabalhos sugerem a presença de um transportador de nicotinamina dinucleotídeos, que é também responsável pela entrada desse composto sintetizado no citosol para a matriz mitocondrial. Através da bioinformática encontramos uma seqüência no genoma de A. fumigatus, que possui 32% de identidade com o gene ndt1p de S. cerevisiae.
	Desta forma, os objetivos deste projeto é induzir o silenciamento gênico da UCP-like e suas conseqüências para as células, bem como clonar, seqüenciar e expressar em E. coli o gene que codifica o transportador de nicotina dinucleotídeos (ndt1) de A. fumigatus, a fim de obter a proteína recombinante para ser reconstituída em proteolipossomos, e caracterizar a bioquímica desta enzima e sua importância para estes microrganismos.

Laboratório Multiusuário de Sequenciamento de DNA: Estudos moleculares de novos alvos quimioterapêuticos em microrganismos e utilização da metagenômica para o isolamento e identificação de novos produtos microbianos antibioticos.

No âmbito do INCT_if, o Programa Fármacos, Medicamentos e Insumos para Diagnósticos propõe-se a: 1) atuar em atividades de pesquisa, desenvolvimento e transferência de tecnologia para contribuir em inovação nas empresas que operam em insumos para a saúde, com ênfase a fármacos, medicamentos e insumos para diagnósticos;2) atuar em atividades de formação de recursos humanos de alto nível para ampliar a base científica e tecnológica nacional na cadeia inovativa e produtiva farmacêutica; e 3) atuar em atividades de difusão do conhecimento e de tecnologias para a melhoria das condições de vida da população brasileira, promovendo a universalização do acesso ao diagnóstico e aos medicamentos. Para tanto, o inct_if deve induzir o desenvolvimento, internalização e difusão de práticas científicas e tecnológicas capazes de superar as fragilidades e lacunas da cadeia inovativa e produtiva farmacêutica, propondo mecanismos operacionais capazes de viabilizar a transformação de resultados científicos promissores em resultados econômicos efetivos, com impactos sociais..

O nosso laboratório caracterizou previamente a cadeia respiratória do A. fumigatus. Nós demonstramos, que além da via do citocromo c, este organismo possui vias alternativas, envolvendo uma oxidase e NADH desidrogenase alternativa e uma proteína desacopladora. Estas vias tem sido associadas com a via energética e com a defesa antioxidante das células, a qual representa um importante fator para a sobrevivência em macrófagos durante a invasão do fungo no hospedeiro. Existem inúmeras evidencias da presença de UCP em microrganismos como em Candida parasiplosis, Acanthamoeba castelani and Aspergillus sp. Entretanto, até o momento nenhuma seqüência de DNA foi descrita nesses microrganismos. Resultados preliminares em nosso laboratório utilizando primers degenerados, desenhados a partir de múltiplos alinhamentos de seqüências de aminoácidos de UCPs, nós conseguimos uma sequencia que apresenta três assinaturas moleculares atribuídas as UCPs. O objetivo deste projeto é clonar, seqüenciar e expressar em E. coli a seqüência da UCP-like. Além disso, obter a proteína recombinante para ser reconstituída em proteolipossomos, a fim de caracterizar bioquímica está enzima.

A identificação dos genes envolvidos na proteção contra o estresse oxidativo no Aspergillus fumigatus pode gerar importantes informações para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na resistência e no crescimento do patógeno. Ainda, o estudo de uma possível relação entre a expressão do gene da oxidase alternativa e os genes das enzimas antioxidantes clássicas presentes na mitocôndria em situações de estresse oxidativo, pode elucidar uma correlação entre esses mecanismos de resistência. Espera-se que a identificação dos genes envolvidos na proteção conidial e na germinação promova um melhor entendimento da tolerância do fungo ao estresse oxidativo. A avaliação das expressões diferenciais dos genes durante uma situação de estresse em diferentes fases do desenvolvimento fúngico pode levar a um melhor entendimento da biologia celular como um todo. Ela também pode permitir inferências sobre a importância de determinado gene na adaptação fúngica ao microambiente hospedeiro. A escolha de microarray de DNA para a identificação de genes e análise de suas expressões se justifica pela capacidade desta técnica em promover uma gama de resultados que permite uma visão global da resposta celular do fungo submetido à diversas situações, neste caso a do estresse oxidativo. Estes resultados podem permitir a aplicação de avaliações bioquímicas mais específicas para o entendimento da ação da oxidase alternativa na mitocôndria, bem como de sua relação com as outras enzimas antioxidantes mitocondriais, que até o presente momento, constituem o foco das pesquisas de nosso grupo.

O Aspergillus fumigatus é um fungo saprofítico, amplamente distribuído no mundo. A principal forma de infecção ocorre através da inalação de conídios do fungo, com predominância de infecções no trato respiratório, principalmente em pacientes imunocomprometidos.
Muito pouco é conhecido sobre a nestes microrganismos. Estudos da respiração mitocondrial de A. fumigatus realizados em nosso laboratório, sugerem a presença de vias alternativas como a oxidase alternativa e a NADH desidrogenase alternativa (TUDELLA et al., 2004). Estas vias alternativas podem estar envolvidas na adaptação destes organismos em ambientes instáveis como estresse ao frio, estresse oxidativo e condições anaeróbias, os quais influenciam na expressão ou atividade destes componentes alternativos (AMORA et al., 2000; CALEGARIO et al., 2003). 
A NADH desidrogenase alternativa de A. fumigatus, é semelhante àquelas descritas em plantas, fungos, eubactérias e arqueobactérias. Sabe-se que sua atividade encontra-se estimulada durante a fase de crescimento da célula, porém seu papel fisiológico ainda é pouco conhecido (WACKWITZ et al., 1999). 
	A possível resistência de inúmeros fungos a drogas que atuam sobre as mitocôndrias, tem sido atribuída à presença de uma oxidase alternativa que previne a autoxidação da ubiquinona reduzida e a subseqüente formação de espécies reativas de oxigênio. O gene que codifica uma oxidase alternativa mitocondrial foi clonada e seqüenciada no projeto n 02/01452-5. No projeto 05/51677-4, a seqüência de cDNA do gene foi clonada em plasmídeos pET28a(+) e pYES2 e expressa em dois sistemas heterólogos, um procarioto, E. coli RosettaTM (DE3)pLysS e um eucarioto, S. cerevisiae INVSc1. Em ambos os sistemas a oxidase alternativa expressa conferiu uma respiração resistente a cianeto. Esta característica herdada provocou uma discreta diminuição na taxa de crescimento, mas uma capacidade de sobrevivência na presença de KCN. 
Desta forma, a fim de se caracterizar molecularme

Subprojeto: Identificação de proteínas diferencialmente expressas em fungos submetidos a diferentes condições de estresse.

The conidia are responsible for the reproduction, dispersal and environmental persistence of different fungal species. In pathogenic species, conidia also are the structures predominantly responsible for host infection. Following inhalation of conidia by the immunocompetent host, the innate cellular immune system (comprised of alveolar macrophages and neutrophils) is responsible for the killing of the conidia, exposing them to reactive oxygen and nitrogen species. In addition to oxidative stress, others environmental changes in the mammalian host relative to saprotrophic nice takes place such as temperature, nutrient availability, pH and osmolarity. 
The objective of the present study is to use DNA microarrays to identify genes differentially expressed during exposition to oxidative stresses. The inactivation of some of these genes will be used to confirm the importance of the genes in question for tolerance to oxidative stresses.
In this sense, gene expression analysis, using microarray to examine the expression of the multiple genes encoding alternative pathway components in response to such stresses in Aspergillus fumigatus cultures will be useful to identify novel gene responses and roles proposed for the alternative pathways, and signalling mechanisms which may play a role in mitochondrial regulation.

Este projeto visa avaliar as atividades biológicas de extratos, compostos purificados e sintéticos depositados no projeto Rede BioProspecta. Além dos três coordenadores, a equipe é formada por mais 24 pesquisadores da FCFRP-USP, que avaliaram atividade antimicrobiana, antitumoral, sobre a inflamação e sistema imune, apoptose, etc.

Nas duas últimas décadas, infecções oportunistas causadas por fungos têm sido freqüentemente diagnosticadas em pacientes imunocomprometidos, sendo uma importante causa de morbidade e mortalidade entre os pacientes hospitalizados em todo o mundo. Com o rápido aumento dos casos de AIDS, algumas micoses aumentaram dramaticamente, sendo a candidíase a principal infecção oportunista. Entretanto, novas espécies de fungos são regularmente identificadas como causa de doenças nesses pacientes, dentre esses patógenos emergentes são importantes causadores de micoses sistêmicas o fungo Aspergillus fumigatus, como a segunda espécie mais notificada em pacientes imunossuprimidos.
 Muito pouco é conhecido sobre a bioenergética e regulação dos níveis de cálcio nestes microrganismos. A possível resistência de inúmeros fungos a drogas que atuam sobre as mitocôndrias, têm sido atribuidas a presença de uma oxidase alternativa que previne a autoxidação da ubiquinona reduzida e a subseqüente formação de espécies reativas de oxigênio. O gene que codifica uma oxidase alternativa mitocondrial foi clonada e seqüenciada no projeto anterior (processo n 02/01452-5). Desta forma, o cDNA do gene da aox foi funcionalmente expresso em S. cerevisae.
Recentemente, o nosso laboratório clonou, seqüênciou e expressou em organismos heterólogos o gene de uma Ca2+-ATPase da subclasse PMR1 de A. fumigatus (SORIANI et al., 2005). A PMR1 parece contribuir de forma decisiva na manutenção das concentrações citoplasmáticas de íons cálcio e manganês em fungos. Estes íons estão envolvidos na distribuição (Ca2+) e glicosilação de proteínas (Mn2+). Nesse sentido, tem sido sugerido que o mesmo possa ser um alvo útil para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Assim, foi construído um plasmídeo para indução da RNAi através da inserção de seqüência homóloga ao gene de pmr1, em direções invertidas, com um espaçador de GFP e marcador o gene alb1. A cepa CEA 17 pyr G+ foi transformada com o plasmídeo pGlapmr

O Aspergillus fumigatus é um fungo filamentoso e saprofítico, encontrado em todas as regiões do mundo. A principal forma de infecção ocorre através da inalação de conídios do fungo com predominância de infecções no trato respiratório, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Muito pouco é conhecido sobre a bioenergética mitocondrial do A. fumigatus. Entretanto, estudos preliminares de respiração mitocondrial realizados em nosso laboratório, sugerem a presença de uma oxidase alternativa semelhante àquelas descritas em plantas, tripanosomas, amebas e outros organismos. A função dessa oxidase no metabolismo desses organismos não está totalmente elucidada, mas tem sido sugerido que as principais funções da via alternativa estejam ligadas à diferenciação celular, termogênese e manutenção da concentração de ubiquinona suficientemente oxidada prevenindo a auto-oxidação da ubiquinona reduzida e a subseqüente formação de espécies reativas de oxigênio. No projeto anterior, nosso laboratório clonou e seqüênciou o gene da oxidase alternativa mitocondrial de Aspergillus fumigatus. A tradução da maior fase aberta de leitura resulta em um polipeptídeo deduzido de 353 aminoácidos, com pI calculado de 9,47 e peso molecular 40,8 Kda e seis regiões propostas como ligantes de metal (Fé). Além disso, a análise de hidropaticidade indicou a presença de dois domínios transmembrana, do aminoácido 147 ao 169 e do 209 ao 231. Estas características são compatíveis com a alternativa oxidase de outros fungos, sendo que a comparação da seqüência deduzida de aminoácidos apresentou homologia de 78% e 51% com A.niger e P. anserina, respectivamente. Assim, uma vez seqüenciado o gene da oxidase alternativa, o objetivo do presente projeto é a expressão em dois sistemas heterólogos (1) Em bactérias (2) Em Saccharomyces cerevisiae.

Os objetivos do projeto visam organizar as competências academico científicas existentes para criar a cadeia de inovação radical em férmacos e medicamentos no país e realizar estudos prospectivos de oportunidaddes reais em novos genéricos ou novas rotas sintéticas para genéricos conhecidos. O projeto é coordenado pelo Prof. Dr. Eliezer Jesus de Lacerda Barreiro (UFRJ) e conta com a participação de 24 IES, de 10 unidades federativas e 141 pesquisadores

O Aspergillus fumigatus é um fungo filamentoso e saprofítico, encontrado em todas as regiões do mundo. A principal forma de infecção ocorre através da inalação de conídios do fungo com predominância de infecções no trato respiratório, principalmente em pacientes imunocomprometidos.
Muito pouco é conhecido sobre a bioenergética mitocondrial do A. fumigatus. Entretanto, estudos preliminares de respiração mitocondrial realizados em nosso laboratório, sugerem a presença de uma oxidase alternativa semelhante àquelas descritas em plantas, tripanosomas, amebas e outros organismos. A função dessa oxidase no metabolismo desses organismos não está totalmente elucidada, mas tem sido sugerido que as principais funções da via alternativa estejam ligadas à diferenciação celular, termogênese e manutenção da concentração de ubiquinona suficientemente oxidada prevenindo a auto-oxidação da ubiquinona reduzida e a subseqüente formação de espécies reativas de oxigênio.
No projeto anterior, nosso laboratório clonou e seqüênciou o gene da oxidase alternativa mitocondrial de Aspergillus fumigatus. A tradução da maior fase aberta de leitura resulta em um polipeptídeo deduzido de 353 aminoácidos, com pI calculado de 9,47 e peso molecular 40,8 Kda e seis regiões propostas como ligantes de metal (Fé). Além disso, a análise de hidropaticidade indicou a presença de dois domínios transmembrana, do aminoácido 147 ao 169 e do 209 ao 231. Estas características são compatíveis com a alternativa oxidase de outros fungos, sendo que a comparação da seqüência deduzida de aminoácidos apresentou homologia de 78% e 51% com A.niger e P. anserina, respectivamente.
Assim, uma vez seqüenciado o gene da oxidase alternativa, o objetivo do presente projeto é a expressão em dois sistemas heterólogos:
 - Em bactérias para purificação da proteína e posterior produção, em coelhas, de anticorpos específicos anti-oxidase alternativa, os quais serão utilizados em Western blotting;
 - Em Saccharomyce