André Furugen Cesar de Andrade.

No cenário mundial, o Brasil é o quarto maior produtor e exportador de carne suína, de forma que seu desempenho nos últimos 35 anos pode ser considerado significativo comparado com a média mundial. Tal fato pode ser atribuído a uma produção baseada em um contínuo incremento tecnológico, que por meio de biotecnologias, permitiram o melhoramento genético (Viana et al., 2020), com o uso de genética avançada de forma a garantir o avanço na produção. Uma das técnicas que garantem esse sucesso, é a Inseminação Artificial (IA) a qual consiste na deposição do sêmen no trato genital feminino, sendo de extrema importância o uso de doses inseminantes de alta qualidade, que sejam obtidas através de métodos adequados e que garantam a viabilidade da dose. O reprodutor suíno é um animal de alto potencial genético, na qual seu uso é otimizado, visto que um reprodutor é capaz de fornecer doses de sêmen para um grande número de fêmeas, portanto o manejo adequado do ejaculado é essencial para garantir o sucesso da inseminação. Como forma de garantir o padrão de qualidade das doses, alguns estudos retrataram as características seminais desejáveis para realização da inseminação (CBRA, 2013), sendo que as principais características avaliadas no ejaculado incluem volume, motilidade espermática, vigor, concentração e número de espermatozoides normais. No entanto, faltam estudos e dados atualizados referentes a estes padrões espermáticos, de modo a considerar a idade e raça desses animais. Dessa forma, o projeto tem como objetivo atualizar os dados das características do ejaculado de cachaços, como motilidade, concentração e morfologia, através da criação de manuais técnicos que permitam a divulgação desses dados para o ambiente externo à universidade, proporcionando a produtores e colaboradores de granjas os dados atualizados, além de permitir que graduandos em Medicina Veterinária sejam protagonistas nesta interação entre pesquisa e campo.

Proporcionar ao aluno condições de realização de práticas na área de reprodução de suínos embasados em conhecimentos atualizados na área.

Proporcionar ao médico veterinário condições de realização de práticas na área de reprodução de suínos embasados em conhecimentos atualizados na área

A suinocultura apresentou grandes evoluções nos últimos 35 anos. Num cenário em que os recentes estudos científicos que trouxeram uma maior versatilidade e baixos teores de gordura à carne suína, o Brasil surge como um dos principais produtores e exportadores deste produto - se mantendo em 4o lugar no ranking internacional e produzindo 4,70 milhões de toneladas de carne em 2021 - e tende a apresentar grandes evoluções, graças a sua entrada recente em mercados com alta demanda como o da Ásia. De acordo com a Associação Brasileira de Criadores de Suínos (ABCS), toda a cadeia produtiva da suinocultura, da fazenda ao consumidor, houve uma movimentação de US $58,8 bilhões de 2016 até 2021. Nesses números, pode-se contar que mais de 1,2 milhão de pessoas vivem diretamente da suinocultura no Brasil (O Presente Rural, 2022). O emprego de novas tecnologias - bem como a aplicação de novas práticas de bem-estar, nutrição de precisão, genética avançada e manejo profissional - possibilitou um aumento da produção de carne através do uso de um número menor de matrizes. Dentre estas inovações, uma das mais importantes se trata da inseminação artificial, que é uma das biotecnologias da reprodução mais empregada na suinocultura para aumentar os índices reprodutivos - isso é possível pelo aperfeiçoamento das técnicas de inseminação, que é realizada pela deposição do sêmen refrigerado no trato genital feminino. O sucesso da inseminação artificial não só é dependente da habilidade de técnica do aplicador, mas também do momento em que é realizada durante o ciclo reprodutivo da porca, sendo necessário conhecer a fundo o ciclo estral e suas variações hormonais, realizar a correta detecção de cio, assim como se certificar da qualidade do sêmen utilizado. Dessa forma, o projeto busca dar oportunidade para que graduandos em Medicina Veterinária desenvolvam a habilidade em todas as etapas que fazem parte da técnica de inseminação artificial. Além disso, a outra meta é proporcionar uma maior divulgação deste método, especialmente aos estudantes da graduação, proporcionando uma maior proximidade com a espécie animal que será trabalhada, e, também, um maior conhecimento e ensino técnico sobre a prática deste método.

O método de preservação ideal para o uso do sêmen de cachaços em inseminação artificial (IA) seria o criopreservado; no entanto, não é aplicado na suinocultura, pois resultados semelhantes em comparação ao sêmen refrigerado a 17C não são alcançados quanto a taxa de prenhez e o número de leitões nascidos por parto. No entanto, a criopreservação é o método mais eficiente para preservação a longo prazo de espermatozoides de mamíferos, entretanto, procedimentos de congelamento/descongelamento prejudicam fortemente a função espermática em espermatozoides de cachaços. Nosso grupo de pesquisa otimizou a criopreservação de sêmen suíno, melhorando os fatores críticos na alteração da função espermática, estabilizando a membrana com o sacarídeo trealose e diminuindo a produção de espécies reativas ao oxigênio e nitrogênio (ROS/RNS) com melatonina que antagoniza as duas vias. Além de melhorar as condições do processo de congelamento, é necessário um conhecimento mais profundo de quão intensa é a resposta da imunidade inata gerada pelos espermatozoides no trato genital feminino. Após a IA, o número de espermatozoides no trato genital da porca diminui para 5-10 em poucas horas, chegando a até 50 de eliminação devido ao refluxo do diluidor de sêmen. Outra causa importante dessa rápida diminuição dos espermatozoides é a interação com os neutrófilos polimorfonucleares (PMN) que migram diretamente para o endométrio após a IA e em 2 horas seu número atinge o mesmo número de espermatozoides. Essa resposta fisiológica de limpeza do trato genital em preparação para a recepção dos embriões pode ser exacerbada pela IA com sêmen criopreservado em diversas situações como; espermatozoides com dano estrutural, com sinais semelhantes a apoptose, espermatozoide morto ou aos produtos associados ao diluidor de congelação. Os PMN em contato com os espermatozoides induzem fortemente a liberação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs), geradas pela extrusão de fibras de DNA no meio extracelular, resultando em aggNETs, que aprisionaram eficientemente numerosos espermatozoides, neutralizando assim sua progressão independente. Além disso, os NETs liberados são glicólise e ROS dependentes, o que pode então ser reduzido com o uso de antioxidantes. Assim, nossa hipótese é que o uso do meio otimizado para criopreservar espermatozoides atenuará a superativação da resposta da imunidade inata, o que se traduzirá na manutenção de um maior número de espermatozoides com função preservada pós-processo de IA, o que aumentará o número de leitões nascidos usando sêmen congelado/descongelado. Portanto, o objetivo é caracterizar a ativação do processo NET induzida por espermatozoides criopreservados e seu impacto na função espermática; e o uso de inibidores ou antioxidantes de NETs como estratégia para melhorar os resultados reprodutivos durante a IA. Esta pesquisa, por meio de um modelo in vitro, ex vivo e in vivo, avaliará o uso de espermatozoides criopreservados pré-tratados com substâncias antioxidantes e sacarídeos estabilizadores de membrana que podem reduzir a extrusão de NETs e modificar a resposta imune inata em nível endometrial. Além disso, a modulação do processo de NETosis com a adição de inibidores de NETs ou antioxidantes no meio de inseminação intrauterina pode ser crucial para aumentar o número de espermatozoides com funcionalidade intacta que pode melhorar a taxa de leitões nascidos vivos com IA com sêmen criopreservado. Isso permitiria a modificação dos meios utilizados para a inseminação intrauterina nas diferentes espécies de animais domésticos, reduzindo o número de espermatozoides a serem utilizados durante esse procedimento, o que reduziria custos, principalmente quando se utiliza sêmen sexado.

A criopreservação de gametas e embriões trouxe grandes avanços para a pesquisa e aplicação comercial de biotécnicas voltadas à Reprodução Animal. Entretanto, um dos problemas atrelados ao processo é o estresse oxidativo. Neste contexto, o uso de antioxidantes, dentre eles a astaxantina, podem mitigar os danos celulares gerados pelas espécies reativas de oxigênio. Apesar do potente poder antioxidante da astaxantina há poucos estudos voltados para o uso deste composto na criopreservação de sêmen e embriões bovinos. Portanto, os objetivos na presente proposta são avaliar a suplementação de astaxantina em meios diluidores comerciais de criopreservação de sêmen, à base de gema de ovo (Exp. 1) e lipossomas (Exp. 2), bem como em meios comerciais de criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro, tanto pela técnica de congelação lenta (Exp. 3) como de vitrificação (Exp. 4). Nos Experimentos 1 e 2 serão utilizados seis touros da raça Nelore, os quais terão sete ejaculados (por animal) colhidos por eletroejaculação com intervalos semanais. Serão realizadas as análises físicas e morfológicas do sêmen para a diluição em meio contendo gema de ovo (Exp. 1) ou lipossomas (Exp. 2), conforme os seguintes tratamentos: G-AST: com adição de astaxantina; G-DMSO: com adição de DMSO (controle de toxicidade) e G-CONT: sem adição de astaxantina ou DMSO (controle negativo). O sêmen será envasado e as palhetas congeladas e, após a descongelação, serão realizadas as análises de cinética espermática computadorizada, integridade de membranas plasmática e acrossomal, potencial da membrana mitocondrial e estresse oxidativo. Nos Experimentos 3 e 4, oócitos provenientes de ovários de abatedouro serão submetidos à produção de embriões in vitro e serão criopreservados pela técnica de congelação lenta (Exp. 3) ou vitrificação (Exp. 4), sendo distribuídos entre os mesmos tratamentos descritos para os Exp. 1 e 2. Imediatamente após a descongelação/ reaquecimento, os embriões serão avaliados quanto à taxa de reexpansão e de eclosão, à quantificação de células totais e apoptóticas, ao perfil bioquímico, e à expressão de genes relacionados às vias de estresse oxidativo e apoptose. Espera-se que o uso de astaxantina diretamente nos meios de criopreservação resulte em menor estresse oxidativo, melhorando a qualidade espermática e embrionária.

Os mecanismos epigenéticos que regem a capacidade do gameta feminino (o oócito) de se tornar totipotente estão no centro de muitas questões não respondidas na biologia. A melhor compreensão desses fenômenos básicos oferece uma oportunidade única para desenvolver novas biotecnologias com benefícios de amplo alcance para humanos e animais. Este projeto temático reúne renomados especialistas do Canadá e do Brasil que atuam em diversos campos científicos que vão do nível subcelular ao nível do organismo, e que, juntos, buscam responder à questão: Quais são os sinais epigenéticos fornecidos pelo ambiente folicular que permitem a produção de um oócito capaz de derivar todas as células de um organismo, incluindo sua perpetuação por meio da produção de gametas para a próxima geração? Por meio do uso modelos experimentais únicos, com abordagens retrospectivas, e ferramentas de bioinformática de última geração para analisar os componentes epigenéticos a nível molecular e celular esta proposta almeja (1) identificar os principais constituintes moleculares envolvidos nas interações oócito-folículo, (2) intervir na retomada meiótica in vitro para simular a foliculogênese in vivo e (3) examinar modelos alternativos para desvendar mecanismos essenciais da totipotência. Trata-se de uma proposta única, coesa e com integração de especialidades complementares, que oferece uma oportunidade singular para lançar mais luz sobre os mecanismos epigenéticos fundamentais que controlam a aquisição da totipotência pelo oócito. Como relevância prática, no longo prazo humanos e animais se beneficiarão diretamente com o aprimoramento e o advento de novas biotécnicas de reprodução assistida auxiliando a restauração da fertilidade de casais inférteis, acelerando a disseminação de genótipos superiores em espécies domésticas, e restaurando espécies selvagens em vias de extinção.

Objectives
Implement an electronic management system for the procedures performed in a pig farm.

Phases

1) Conception of management software - status: in progress
2) Choice of the animals and stalls identification model - status: finished
3) Durability testing of gilts, sows and stalls identifications - status: in progress.
4) Identification of all ISRL stalls - status: finished
5) Tests to verify the functioning of the system - status: finished.
6) Identification of all animals in the ISRL - status: waiting for data to be sent from the farm.
7) Place the animals' identifications in the respective stalls - status - perform after finalizing item 6.
8) Monitor the movement of animals within the ISRL system for two months and identify possible errors in the management software - status: finalize items 6 and 7.
9) Train ISRL employees to use the Smart Barn management system - status: perform after finalizing items 6, 7, and 8.
10) Integrate the EIS (Electrical Impedance Spectroscopy) reproductive event identification tool into the Smart Barn system - status: perform after finalizing items 6, 7, 8, and 9.
11) Start of the EIS data collection step weekly - status: perform after finalizing items 6, 7, 8, 9, and 10.

Prediction of ovulation in weaned sows could facilitate improved fertility when using a single fixed time insemination using lower numbers of fertile sperm. The objectives of this study were to test the use of EIS to predict ovulation. The study was performed at the Imported Swine Research Lab at the University of Illinois in Dec 2020. Sows (n=12) were assigned to treatment (PG600, n=6 or Control, n=6) at weaning. On day of weaning (D 0) sows were moved from farrowing into alternating treatment stalls in a breeding row and maintained separated from boar contact > 3m. Sows received fenceline boar exposure for 2 min once daily at 0800 h on days 1-6. Sows from PG600 group were snared and received a 5 mL PG600 injection using an 18 g needle on day of weaning. All sows were snared and received 500 IU hCG (Chorulon, in 2 mL) at 80 h after weaning in 2 mL. EIS was performed at 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 104 h, 112 h, 120 h, and 128 h after weaning. Ultrasound was performed at 80 h and 96 h then every 8 h (104 h, 112 h, 120 h, and 128 h) to determine follicle ovulation time. All sows ovulated between 120 h ? 128 h interval.

The aim of this work will be to evaluate how supplementing freezing media with reduced glutathione (GSH) or BHT affects in-vitro sperm fertility and its impact when a single insemination is performed at different intervals before ovulation. Experiment 1- In total 5 healthy boars from the Landrace x Largewhite, 2-3 years age will be used in this study. Ejaculates will be collected and pooled. Thus, there will be, at least, five replicates per treatment. The treatments will be: 1) cryopreserved semen without antioxidants (Control), 2) cryopreserved semen with 1 mM BHT and 3) cryopreserved semen with 2mM GSH. All semen evaluation will be performed at 30, and 240 min after thawing. The analysis will consist of CASA, sperm membrane integrity, membrane fluidity, lipid peroxidation and superoxide anion production. In Experiment 2- Gilts will be induced into estrus with PG600 and then estrus synchronized by feeding 15 mg×gilt×d of Matrix for 14 d as a top-dress on a standard sow gestation diet. Gilts will be treated with 200µg Tripitorelin (OvuGel) 130 hours of the last Matrix feeding to synchronize ovulation. Gilts (n=20/treatment) will be inseminated at 20 or 30 hours after OvuGel with a single fixed time artificial insemination with 2 x 109 cryopreserved sperm without antioxidants (Control), cryopreserved semen with 1 mM BHT and cryopreserved semen with 2mM GSH. Gilts will be slaughtered between days 28 and 34 of gestation and reproductive tracts collected. The tracts will be identified and processed for pregnancy status, number of normal fetuses, number of degenerative fetuses, number of corpora lutea (CL).

Apesar da grande quantidade de trabalhos na área, a criopreservação do sêmen suíno ainda pode ser considerada um grande desafio para a ciência, no que diz respeito a qualidade do sêmen congelado, independente da sua qualidade pré-criopreservação ou do protocolo de criopreservação utilizado. Algumas proteínas tem sido descritas como marcadores biológicos do potencial de congelabilidade do sêmen suíno. Entretanto, a grande diversidade dos componentes seminais nos leva a crer que não somente as proteínas, mas também os lipídios, íons e outros componentes podem atuar no aumento ou diminuição do potencial de congelabilidade dos espermatozoides suínos. Conjuntamente, o holding time (período de incubação dos espermatozoides em próprio plasma seminal prévio a criopreservação) tem sido utilizado a fim de melhorar os resultados do sêmen congelado de suíno. Este período permite um maior contato com o plasma seminal, sendo reportado por produzir uma maior tolerância a baixas temperaturas. Isso nos leva a postular se a utilização ou não de holding time altera a interação das moléculas do plasma seminal com os espermatozoides, e consecutivamente a congelabilidade destes. Portanto, serão realizados três experimentos a fim de compreender a fundo a influência do holding time sobre o aumento da criotolerância dos espermatozoides suínos. O primeiro experimento tem por objetivo determinar o tempo ideal de holding time nos protocolos de criopreservação do sêmen suíno. O segundo experimento visa estudar se existe diferença entre animais (bom ou mal congelador) e o uso de holding time. Por fim, o terceiro experimento procurará elucidar, através de análise metabolômica, qual (ais) a (s) molécula (s) seminal (ais) colabora (m) para a maior criotolerância dos espermatozoides suínos.

A suplementação com óleos vegetais como fonte de ácidos graxos insaturados não prejudica o desempenho produtivo e pode influenciar positivamente a qualidade do leite. A produção leiteira teve períodos de intenso desenvolvimento no mundo, principalmente com o advento da inseminação artificial e a implantação dos programas de melhoramento genético das raças especializadas, que procuravam aumentar a produção maximizando o pico de produção de leite e minimizando o intervalo entre partos. Desde então, se procura fornecer alimentos de qualidade e rever os níveis dos nutrientes fornecidos aos animais para diminuir a perda de peso no início de lactação, quando o consumo não atende o requerimento do animal e este entra em balanço energético negativo, principalmente devido à produção ascendente. Uma das características do leite bovino é a grande proporção de ácidos graxos saturados, sendo o leite um alimento rico em diversos nutrientes, e frequentemente relacionado às doenças cardiovasculares (DCV) em humanos, pela sua proporção de ácidos graxos saturados e pelo teor de colesterol, o que tem levado alguns profissionais da área médica sugerir a retirada do leite ou fornecimento de leite desnatado para pessoas com predisposição à DCV. No entanto alguns trabalhos têm mostrado que a utilização de diferentes fontes de lipídeos na dieta de vacas em lactação pode alterar o perfil de ácidos graxos no leite. Em trabalhos realizados no Brasil, a suplementação de dietas de vacas leiteiras com óleos vegetais e grãos de oleaginosas ricos em ácidos graxos (AG), tem se mostrado eficiente para promover mudanças positivas no perfil de AG da gordura do leite, tornando-a mais adequada e saudável para o consumo humano. Dentre os fatores que exercem influência na produção e reprodução, a nutrição tem um papel reconhecidamente importante por afetar diretamente aspectos da fisiologia e desempenho reprodutivo na fêmea bovina. As principais famílias de ácidos graxos poli-insaturados (AGPs) que afetam a fertilidade são principalmente ômega-3 e ômega-6. A causa da associação observada entre suplementação com lipídeos e maiores concentrações circulantes de hormônios esteroides relatada por diversos autores ainda não está bem definida. A suplementação com lipídeo tem efeitos benéficos no folículo, oócito, embrião e no útero em vacas leiteiras. O mecanismo pelo qual a gordura dietética ou lipídeo proporciona a melhora na produção e qualidade oocitária e embrionária parece estar relacionada com a atenuação do balanço energético negativo e com a depressão na síntese de prostaglandinas uterinas. No entanto o ácido graxo específico ou o grupo de ácidos graxos que causam essa melhora ainda não são totalmente conhecidos. Pensando na importância da atividade leiteira para o Brasil e no leite com sua relevância na dieta para saúde humana, o presente trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos da inclusão de óleo de linhaça como fonte de w3 e óleo de soja como fonte de w6 nos parâmetros produtivos e reprodutivos de vacas leiteiras, assim como verificar se o leite com aumentos nas concentrações de ácidos graxos insaturados apresentam benefícios em parâmetros relacionados à saúde e reprodução em humanos, utilizando suínos como modelo experimental.

A manipulação da reprogramação celular é uma ferramenta importante para o entendimento da biologia celular de células pluripotentes e para o estudo de diferentes doenças teciduais ou genéticas, possibilitando a investigação dos eventos moleculares responsáveis pela competência celular à toti- e pluripotência. A presente proposta objetiva consolidar a tecnologia de produção de células reprogramadas pluripotentes e células germinativas in vitro em espécies de animais domésticos de interesse comercial ou biomédico (em especial bovinos e suínos), com ênfase tanto no aspecto técnico, com a disseminação de protocolos e material biológico para novos estudos e colaborações, como no aspecto científico, através da investigação dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na reprogramação celular. São propostas 3 metas: 1) A padronização do protocolos reproduzíveis e seguros de geração de iPS animais, 2) A geração de gametas, células germinativas e embriões a partir de células cultivadas in vitro, e 3) A investigação dos mecanismos transcricionais e epigenéticos de reprogramação celular. Cada uma das metas está composta por atividades descritas específicas. É esperada com a realização desta proposta a consolidação da pesquisa nacional na temática reprogramação nuclear e epigenética, assim como a inserção internacional a partir de colaborações e publicações científicas de alto impacto, resultando na formação de um grupo de pesquisa multidisciplinar, competitivo e colaborativo nacionalmente e internacionalmente.

A importância da colonização bacteriana precoce sobre a susceptibilidade do hospedeiro às doenças entéricas, sistêmicas e respiratórias tem levado ao crescimento da necessidade de estudos envolvendo a colonização bacteriana neonatal, associada à utilização de técnicas mais acuradas para caracterizar a microbiota do hospedeiro. O uso profilático dos antimicrobianos são frequentes na produção animal para a terapia de infecções entéricas ou respiratórias de origem bacteriana, contudo, pouco se conhece a respeito do impacto da administração destes sobre a microbiota fecal em leitões recém-nascidos e os reflexos no desempenho em fases subsequentes. Assim, o presente estudo tem como objetivo avaliar o uso profilático de ceftiofur longa ação em neonatos sobre a comunidade microbiana fecal e os reflexos no desempenho de leitões na fase de creche. As leitegadas de 12 fêmeas serão divididas em dois grupos, ceftiofur (CEF, n = 72) e grupo controle (CTR, n = 72). Os leitões dos grupos antibiótico receberão a droga por via intramuscular, no primeiro dia de vida e o grupo controle receberá pela mesma via uma dose de solução salina tamponada. Para cada grupo experimental será avaliada a ocorrência de infecções (entéricas, respiratórias ou de caráter sistêmico) durante a lactação e pós-desmame, o peso, ganho de peso diário, o consumo de ração, conversão alimentar e escore fecal. Será avaliada também a quantidade total de bactérias nas fezes através da citometria de fluxo e a variabilidade da microbiota fecal por meio da técnica sequenciamento de nova geração. Os dados de desempenho dos animais serão submetidos à análise de variância, empregando-se o programa SAS (2011). As hipóteses testadas serão consideradas significativas quando P < 0,05.

O plasma seminal é um componente ambíguo do ejaculado suíno, possuindo componentes que podem gerar reações diversas, desde benéficas, minimizando o estresse oxidativo, até prejudiciais induzindo a capacitação espermática precoce. Nesse contexto, o presente trabalho visa verificar o efeito da ausência de plasma seminal nas doses inseminantes de suínos preservadas a 17°C por 72 horas. Para tanto, serão realizados três experimentos nos quais serão testados os diferentes tratamentos, a saber: não centrifugado (NC), centrifugado e com o plasma seminal retirado pós-centrifugação (CS) e centrifugado ressuspendido (CR). Serão avaliadas as consequências da retirada do plasma seminal sob a motilidade e viabilidade espermática, sob as alterações correlacionadas a capacitação espermática e também sob a fertilidade. Para os experimentos in vitro, as análises serão realizadas por sistema computadorizado de análise seminal (CASA) e citometria de fluxo a cada 24 horas. As taxas de fertilidade e prenhez serão avaliadas através de coleta de embriões cinco dias após a inseminação artificial em tempo fixo das fêmeas suínas. Os dados serão submetidos à análise de variância (PROC GLM), empregando-se o programa SAS (1998). As variáveis continuas serão comparadas pelo teste de Tukey, já a taxa de fertilidade e a taxa de parto serão analisadas pelo teste não-paramétrico de frequência Qui-Quadrado, ambos analisados ao nível de 5% de significância.

O presente projeto pretende verificar se adição do antioxidante resveratrol gera modificações positivas em parâmetros celulares relacionados à qualidade do sêmen suíno refrigerado à 15-17°C (experimento 1), além disso, será verificado se o resveratrol melhora os índices de fertilidade na inseminação artificial intra-uterina (IAIU) (experimento 2). Experimento 1: serão realizadas seis coletas de sêmen de seis cachaços (n=36). Realizadas as análises iniciais do sêmen (in natura), este será diluído (meio BTS) e adicionado o resveratrol. Será realizado os seguintes tratamentos: Controle (CON) BTS sem resveratrol T1 (BTS + RVT 0,1 mM), T2 (BTS + RVT 1,0 mM) e T3 (BTS + RVT 10 mM). Os tratamentos serão acondicionados sob refrigeração e avaliados as características da motilidade, integridade das membranas plasmática e acrossomal, fluidez de membrana plasmática (capacitação) e peroxidação das membranas e do citoplasma espermático, nos intervalos de 0, 24, 48 e 72 horas. As análises do sêmen consistirão na avaliação computadorizada das características da motilidade (CASA) e para os demais parâmetros será utilizado a análise por citometria de fluxo. Experimento 2: o teste de fertilidade será realizado em 30 marrãs comparando os tratamentos Controle (CON) (n=15) e Resveratrol (RESV) (n=15) utilizando a concentração de resveratrol que apresentar melhores resultados nas avaliações do experimento 1. Estas fêmeas serão submetidas a um protocolo hormonal para a realização das IAIUs em tempo fixo. Após 5 dias de inseminadas, as fêmeas serão encaminhadas ao abatedouro, onde serão eutanasiadas e retido o útero e ovário para coleta e contagem dos embriões. Os dados serão submetidos à análise de variância (PROC GLM), empregando-se o programa SAS (1998). As variáveis continuas serão comparadas pelo teste de Tukey, já a taxa de fertilidade e a taxa de parto serão analisadas pelo teste não-paramétrico de frequência Qui-Quadrado, ambos analisados ao nível de 5% de significância.

O presente projeto pretende determinar se a técnica de criopreservação gera modificações semelhantes à capacitação e também verificar se a adição/manutenção de plasma seminal ao sêmen suíno antes da congelação ou após a descongelação diminui estes efeitos. Serão realizadas colheitas de sêmen de 12 cachaços. Realizadas as análises iniciais do sêmen (in natura) este será diluído para posterior centrifugação. Após a centrifugação, os sedimentos obtidos serão divididos em dois tratamantos, a saber: Controle (CON) ? suspendidos apenas com diluidor para congelação e (PAC) ? suspendido com diluidor para congelação acrescido de 10 % de plasma seminal (v/v). O sêmen diluído será envasado em palhetas de 0,5 mL e então submetidos à congelação. Por partida, serão descongeladas dez palhetas do grupo PAC e dez do grupo CON. Nestes dois grupos (CON e PAC) serão então adicionados 45 mL do diluidor Prolimax® a fim de se obter o volume inseminante de 50 mL em uma concentração de 60x106sptz/mL. Desta mesma partida, outras dez palhetas do grupo CON serão descongeladas e diluídas com diluidor Prolimax®, contendo 10 % de plasma seminal (v/v) dando origem ao terceiro tratamento, grupo PDC. Após a adição dos tratamentos as amostras permanecerão em banho-Maria a temperatura de 37°C até o final das análises (120 minutos). Os grupos experimentais serão avaliados nos períodos 0 e 120 minutos. As análises do sêmen consistirão na análise computadorizada dos parâmetros da motilidade (CASA), e das análises por citometria de fluxo da integridade das membranas plasmática e acrossomal, do estado de capacitação, do aumento da fosforilação do aminoácido tirosina e da peroxidação lipídica das membranas. Será também realizado o teste de fertilidade em 75 marrãs comparando os tratamentos CON (n=25), PAC (n=25) e PDC (n=25). Os dados serão submetidos à análise de variância (PROC GLM), empregando-se o programa SAS (1998). As médias serão comparadas pelo teste de Tukey. Já as variáveis taxa de fertilidade e

É notório, na suinocultura atual, o elevado nível de produtividade propiciado pela oferta no mercado de animais híbridos, de alta precocidade no desempenho. Estes são mais exigentes, pois, ao expressarem características de alto desempenho produtivo e reprodutivo, necessitam de um aporte nutricional que se inter-relacione adequadamente com as diferentes fases do desenvolvimento, conferindo uma condição corporal e metabólica adequada. Na inter-relação nutrição e reprodução de fêmeas suínas, poucos estudos referem-se ao emprego de aminoácidos sintéticos nas dietas de marrãs pós-púberes e primíparas nas fases de gestação e lactação. A glutamina (Gln) é um aminoácido não essencial, mas em situações de estresse e catabolismo intenso torna-se ?essencial?, uma vez que participa ativamente no metabolismo protéico. O objetivo do presente estudo é avaliar a utilização da glutamina (1%) na dieta de marrãs na fase pós-púbere, estendendo-se a gestação e lactação subsequentes, e na dieta de leitões nas fases de creche e crescimento e terminação. Serão avaliados parâmetros produtivos incluindo-se a evolução do peso e espessura de toucinho no primeiro e terceiro ciclos estrais, bem como no terço final da gestação e lactação. Os dados do tamanho da leitegada, intervalo desmame-estro, peso dos leitões ao nascimento, 7, 14 e 21 dias de idade dos leitões com os ganhos em peso correspondentes também serão avaliados. O estudo avaliará a viabilidade embrionária no 5º dia da 1ª e 2ª gestação, taxa de ovulação, mortalidade embrionária e fetal ao 70º dia da 1ª e 2ª gestação, bem como da análise do ovário, placenta e morfometria uterina. As averiguações do estado metabólico e hormonal serão mensuradas por meio de parâmetros sanguíneos, bem como os níveis de glutamina no plasma, além das avaliações dos níveis do aminoácido presentes no leite. No período de creche, crescimento e terminação, 128 leitões serão avaliados quanto ao desempenho, acompanhado da análise histológica do intestino, frequên

O Biotério visa a produção de 300 leitões ao ano

Variadas taxas de concepção podem ser obtidas de acordo com o&#10;sêmen utilizado, evidenciando uma importante variabilidade individual do&#10;reprodutor com relação à fertilidade a campo. Além disso, o vasto tamanho dos&#10;rebanhos reprodutivos, associado ao intenso e crescente uso dos protocolos de&#10;IATF no Brasil, tem estimulado, cada vez mais, a prática do descongelamento&#10;simultâneo de diversas palhetas de sêmen em um mesmo descongelador.&#10;Entretanto, sob essas condições, o banho-maria do descongelador poderia&#10;atuar como ambiente de incubação para o sêmen, o que poderia influenciar a&#10;viabilidade do espermatozoide. Assim, o presente estudo teve por objetivos: 1)&#10;determinar o efeito da sequência de inseminação, após descongelamento&#10;simultâneo de diversas palhetas de sêmen, na taxa de concepção e na&#10;qualidade seminal; 2) investigar a fertilidade in vivo, bem como diversas&#10;características espermáticas in vitro, do sêmen de diferentes reprodutores&#10;utilizados no mesmo programa de IATF; 3) identificar, dentre as diversas&#10;características avaliadas laboratorialmente, o grupo de características&#10;espermáticas consideradas importantes na predição da taxa de concepção do&#10;programa de IATF. Para tal, o presente experimento foi realizado em duas&#10;etapas. A primeira etapa consistiu em um estudo a campo delineado para&#10;determinar a taxa de concepção após IATF de fêmeas multíparas pós-parto da&#10;raça Nelore (n=944), utilizando sêmen de três partidas de cada um dos três&#10;touros da raça Angus (n=9). A segunda etapa consistiu em um estudo&#10;laboratorial delineado para investigar diversas características espermáticas das&#10;doses de sêmen utilizadas no respectivo programa de IATF, utilizando as&#10;mesmas condições de descongelamento do estudo a campo. As seguintes&#10;análises laboratoriais foram realizadas: análise computadorizada do movimento&#10;espermático, teste hipo-osmótico, teste de termo-resistência, morfologia&#10;espermática, integridade de membranas plasmática e acrossomal, estabilidad

O óxido nítrico (NO) é sintetizado in vivo durante a conversão da L-arginina em L-citrulina por reações oxidativas catalisadas pela enzima óxido nítrico sintase (NOS). Existem quatro isoformas da NOS sendo três constitutivas dependentes de cálcio - NOS neuronal (nNOS), NOS endotelial (eNOS) e NOS mitocondrial (mtNOS) - e uma induzível (iNOS) cálcio independente. A localização e função de algumas isoformas da NOS têm sido descritas em espermatozóides de várias espécies animais, como bovinos, roedores, humanos, estando presentes no acrossoma e na cauda dos espermatozóides bovinos e humanos atuando na motilidade, hiperatividade, capacitação e reação acrossômica. Salienta-se que até onde foi possível pesquisar não foi encontrado relatos da identificação e localização das diversas isoformas de NOS no espermatozóide eqüino pós-ejaculação, nem da função do óxido nítrico na fisiologia da célula espermática eqüina. Diante do exposto o presente projeto visa, por meio de cinco experimentos, ajudar a elucidar a função desta espécie reativa de oxigênio na capacitação e na integridade das funções do espermatozóide eqüino, utilizando como ferramenta de análise as técnicas de citometria de fluxo e da análise computadorizada da motilidade espermática (CASA).

Os objetivos deste trabalho são verificar a taxa de fertilidade e resposta inflamatória uterina em bovinos após inseminação artificial (IA) com sêmen avaliado pela associação de sondas fluorescentes para determinar simultaneamente integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial dos espermatozóides e avaliar os métodos para estimar a resposta inflamatória uterina. Serão realizados 3 experimentos. O experimento 1 será realizado para estudar a hemodinâmica uterina em bovinos após a IA por ultrassonografia Doppler colorida, para isso 10 vacas serão sincronizadas (estro e ovulação) e divididas em 2 grupos: Grupo não inseminado (controle, n=5) e Grupo submetido a IA (n=5). No experimento 2 serão comparadas as técnicas de avaliação da resposta inflamatória uterina em bovinos por infusão de solução salina (IU) e por swab com escova ginecológica (SE), considerando quantidade e qualidade da amostra e seus efeitos sobre o ambiente uterino por ultrassonografia Doppler colorida e biopsia endometrial como controles, serão utilizadas 10 vacas divididas em 2 grupos: Grupo submetido ao SE (n=5) e Grupo submetido a IU (n=5). Para o experimento 3 serão utilizadas 360 vacas submetidas a um protocolo para a IA em tempo fixo, divididas em três grupos de acordo com o percentual de células apresentando integridade de membrana plasmática, integridade de acrossomo e função mitocondrial (PIAIC), avaliado por sondas fluorescentes (PI, FITC-PSA e JC-1): 10 a 20% (n=120), 30 a 40% (n=120) e 50 a 60% de espermatozóides PIAIC/palheta (n=120). As fêmeas ainda terão a resposta inflamatória uterina após IA monitorada. Será realizado diagnóstico de gestação 30 dias após a IA.

O selênio exerce função marcante na qualidade do sêmen, atuando no desenvolvimento da peça intermediária, no desenvolvimento das células de Sertoli, e, como componente das selenoproteínas, principalmente a glutationa peroxidase. Dentre as glutationas peroxidase, a fosfolipídio hidroperoxido glutationa peroxidase, é considerada responsável pela proteção das membranas testiculares contra os danos oxidativos. O espermatozóide possui um sistema intracelular de defesa antioxidante contra as espécies reativas de oxigênio (EROS), que consiste, principalmente, de enzimas como: superóxido dismutase (SDO), catalase, glutationa peroxidase (GPx) e a redutase, bem como, antioxidante não enzimáticos como: ácido ascórbico (vitamina C) e &#945;?tocoferol (vitamina E). O selênio é utilizado comumente nas dietas animais como selenito de sódio ou na forma orgânica como selenometionina. As fontes orgânicas têm revelado biodisponibilidade diferenciada em comparação às inorgânicas, sendo importantes para aumentar o aproveitamento pelos animais e diminuir o impacto ambiental. Assim, o presente projeto pretende determinar os efeitos do selênio orgânico nas características seminais no sêmen in natura e nos tempos 0 h, 24 h, 48 h e 72 h após a diluição.

A motilidade espermática depende do consumo de energia. Em algumas espécies, a mitocôndria espermática tem um importante papel na produção de energia para o batimento flagelar. A irradiação com Laser de baixa intensidade aumenta a produção de energia funcionando como uma ferramenta de biomodulação. O objetivo deste estudo foi analisar o efeito da irradiação contínua de 650 nm de comprimento de onda de Laser Diodo, com dose de 6 J/cm2 por 120s, na motilidade, integridade das membranas plasmática e acrossomal e no potencial de membrana mitocondrial em espermatozóides in natura e criopreservados.

O sexo dos mamíferos pode ser predeterminado pela técnica de citometria de fluxo, separando-se o espermatozóide contendo o cromossomo X do Y baseado na diferença de DNA. Esta técnica foi descoberta por Larry A. Johnson em 1989 e hoje vem sendo utilizada regularmente em programas de inseminação artificial. O uso do sêmen sexado pode beneficiar a produção animal, proporcionando o melhoramento genético em um período mais curto comparado ao uso do sêmen convencional. No entanto, esta técnica pode causar alterações na integridade celular e, com isso, interferir nos resultados de fertilidade. Este experimento será realizado com o intuito de avaliar as possíveis alterações morfo-fucionais das células espermáticas submetidas ao processo de sexagem (sorting). Para isso, serão utilizados seis touros, sendo três taurinos e três zebuínos. Serão obtidos quatro ejaculados de cada animal (n = 24). Cada ejaculado será subdividido em cinco alíquotas (5 grupos), sendo que duas serão para a produção do sêmen convencional, uma com o diluidor Sexing e outra com o diluidor Lagoa, o restante será utilizado para a produção do sêmen sexado nos tempos T0 (0 hora), T1 (2 horas após), T2 (4 horas após) para avaliar se existe alterações de membranas durante o tempo e durante a sexagem. Os cinco grupos serão submetidos às análises computadorizadas da motilidade espermática (CASA); análises das membranas plasmática, acrossomal e mitocôndriaL (PI/FITC-PSA/JC-1), realizadas por citômetria de fluxo; análises da cromatina; produção de ROS (C11-BODIPY581/591); hiperativação e capacitação espermática (fosforilação da tirosina).

Nas éguas cíclicas, a luteólise ocorre por volta do dia 14 após ovulação, pela ação da prostaglandina F2&#945; (PGF2&#945;). Entretanto, nas éguas prenhes, a luteólise deve ser evitada para que a gestação possa ter continuidade. Neste contexto, é notória a importância da presença intrauterina de um embrião móvel, secretor de prostaglandina E2 (PGE2) e inibidor de altas concentrações de PGF2&#945; sérica periférica e intraluminal. As prostaglandinas são transportadas do tecido produtor aos tecidos e células-alvo por proteínas transportadoras de prostaglandinas (PGT). É possível que existam substâncias embrionárias que interfiram na produção de PGF2&#945; endometrial ou mesmo que inibam a presença de PGTs nas células endometriais, evitando, assim, a luteólise. Dessa forma, este experimento tem como objetivos investigar a relação entre o meio condicionado por embriões eqüinos de 14 dias de idade (i.e., contendo macro e micromoléculas) e as concentrações de PGT e secreções de PGF2&#945; e PGE2 pelo endométrio de éguas em diestro. Como hipóteses têm-se que: (1) o meio condicionado por embrião provoca a diminuição das concentrações de PGT e (2) das secreções de PGF2&#945; e PGE2 no endométrio eqüino em diestro. Amostras de endométrio de éguas em diestro (14 dias após ovulação) serão coletadas por biopsia endometrial e cultivadas em duplicatas nos tratamentos: moléculas embrionárias >10 kDa, moléculas embrionárias < 10 kDa e meio de cultura M199. As concentrações de PGF2&#945; e PGE2 do meio de cultura serão avaliadas por radioimunoensaio e a PGT endometrial, por Western Blotting.

Durante as etapas de congelação de sêmen, o espermatozóide sofre alterações que se assemelham às ocorridas nas células capacitadas o que levou alguns autores a pensarem que a criopreservação promove a capacitação do espermatozóide. Esta, por sua vez, é citada como um dos fatores de redução da longevidade do espermatozóide criopreservado. Assim, o presente trabalho foi desenvolvido para determinar e comparar o efeito de três diferentes diluidores (um a base de gema de ovo e dois a base de lecitina de soja) nas alterações intracelulares semelhantes a da capacitação e na produção de espécies reativas de oxigênio, após o processo de congelação espermática. Para isso, serão realizadas seis colheitas de dez touros. O sêmen in natura será analisado e congelado em três diferentes diluidores (dois à base de lecitina de soja e um à base de gema de ovo). Após a descongelação, as amostras serão analisadas quanto a motilidade computadorizada (CASA), alterações morfológicas (DIC), integridade de membranas plasmática e acrossomal (citometria de fluxo), potencial de membrana mitocondrial (citometria de fluxo), estado de capacitação (citometria de fluxo) e peroxidação lipídica (citometria de fluxo).