Maria da Gloria Sousa Stafocker.

A elaboração deste projeto surgiu naturalmente após a conclusão Projeto Temático 2016/08730-6 intitulado: Patogenicidade fúngica: Efeito do tabagismo, resposta imune e a modulação vacinal na paracoccidioidomicose e na histoplasmose. Aspectos importantes relacionados a fisiopatologia e controle das doenças fúngicas sistêmicas foram respondidos, entretanto novos questionamentos direcionados ao diagnóstico, imunidade inata e adaptativa e alternativas no tratamento/prevenção das infecções fúngicas foram identificados. De uma forma geral, estima-se que mais de mais de 150 milhões de casos graves de infecções fúngicas ocorrem em todo o mundo, resultando em aproximadamente 1,7 milhão de mortes por ano (Kainz et al., 2020). Estes números são subestimados considerando as doenças fúngicas sistêmicas no Brasil, onde não existe notificação compulsória. É essencial destacar que o tratamento com antifúngicos por tempo prolongado (comum entre as doenças fúngicas endêmicas) e o uso profilático de drogas antifúngicas em pacientes de alto risco (imunocomprometidos e transplantados) tem promovido o surgimento de fungos multirresistentes. As infecções fúngicas, apesar de silenciosas, já são uma ameaça global que está se tornando cada vez mais grave (Kainz et al., 2020). O Brasil ainda é marcado pela grave e profunda distorção econômica, social e educacional. Fatores logísticos e tecnológicos influenciam desde o acesso a um diagnóstico/acompanhamento laboratorial mais preciso até ao tratamento com antifúngicos mais eficazes. Associada estas distorções, a falta de implementação de sistema de notificação das doenças fúngicas tem impacto direto nas políticas públicas de controle destas doenças (Costa et al., 2019). Este projeto tem como foco o aprofundamento no estudo de questões envolvendo doenças fúngicas relevantes no Brasil: aspergilose, paracoccidioidomicose, histoplasmose, esporotricose e ptiríase versicolor. Propõem-se executar quatro linhas principais interligadas em questões que vão do diagnóstico ao tratamento, passando pela imunopatogenia.

Os fungos causam doenças que afetam mais de um bilhão de pessoas no mundo, resultando em cerca de 1,5 milhões de óbitos anuais. No entanto, as doenças fúngicas continuam sendo um tema negligenciado pelas autoridades de saúde pública, apesar de a maioria das mortes por fungo ser evitável. Entre os fungos de importância clínica, destaca-se o gênero Malassezia, que representa cerca de 80 das espécies fúngicas da pele humana. Trata-se do comensal fúngico mais prevalente do tegumento cutâneo, especialmente em áreas ricas em lipídios, e sua desregulação está associada a diversas dermatoses inflamatórias. Além disso, estudos recentes indicam o envolvimento de Malassezia em condições sistêmicas, como doenças inflamatórias intestinais e até patologias neurológicas, ampliando o interesse científico e clínico pelo gênero. A identificação morfológica convencional não é capaz de discriminar as espécies de Malassezia spp e o sequenciamento de DNA é uma técnica cara e pouco adaptada a laboratórios clínicos. A espectrometria de massas por ionização/dessorção a laser auxiliada por matriz tempo-de-voo (EM MALDI - TOF) é uma metodologia rápida e acurada para identificar microrganismos, incluindo os fungos filamentosos e leveduras de importância clínica. Entretanto, há poucos estudos sobre a identificação das espécies de Malassezia spp através da metodologia de MALDI - TOF, tendo resultados controversos dependendo da metodologia utilizada e equipamento. Desta forma, este trabalho tem os objetivos de padronizar a identificação das espécies de Malassezia utilizando a plataforma Biotyper (Bruker) e construir um banco de dados in house que possibilite a caracterização das espécies e após validado poderá ser disponibilizado para comunidade médica e científica.

A pele abriga uma grande variedade de populações microbianas, que, em conjunto com seus elementos estruturais, metabólitos e moléculas produzidas, compõem o microbioma. O gênero Malassezia representa cerca de 80 das espécies fúngicas cutâneas, sendo o comensal fúngico mais prevalente. Embora seja um comensal, Malassezia já foi associada a algumas doenças cutâneas, como a pitiríase versicolor (PV), uma infecção fúngica superficial, caracterizada pelo crescimento fúngico excessivo na pele, sendo geralmente assintomática. Um processo bioquímico de interesse, nessa levedura, é a produção de derivados do indol, quando o triptofano é a única fonte de nitrogênio. Esses indóis demonstraram ser potentes ligantes do receptor de hidrocarboneto de aril (AhR), um fator de transcrição citosólico que é ativado após ligação com diferentes ligantes. Os efeitos da sinalização do AhR estão relacionados, em sua maioria, a doenças inflamatórias da pele, além de também participar da homeostase e da modulação da resposta imune. Até o momento, os trabalhos que avaliaram o papel dos indóis de Malassezia se limitaram ao efeito de alguns desses metabólitos em células isoladas, enquanto o mecanismo que envolve o reconhecimento e a mediação da resposta imune, após interação com o AhR e em quais vias esse receptor utiliza, permanece inexplicado. Assim, propomos avaliar a resposta de macrófagos de pacientes com PV após a interação com indóis derivados de Malassezia e a participação do AhR no reconhecimento desse fungo, além de identificar o padrão da resposta imune. Acreditamos que o entendimento dessas vias poderá contribuir para melhores manejos terapêuticos nessa patogenia.

Espécies do gênero Cryptococcus são uma das principais causas de infecções fúngicas invasivas e são responsáveis por 20 do total de infecções fúngicas causadas por fungos invasivos. Doenças criptocócicas afetam 194.000 pessoas em todo o mundo, com 147.000 mortes (75,8) anualmente. A principal apresentação clínica é a meningite criptocócica, embora a criptococose pulmonar também seja frequente, mas não tão letal. Disseminação da medula óssea e outros órgãos também é vista em pacientes imunocomprometidos. Cryptococcus neoformans foi recentemente classificado pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como um patógeno crítico, indicando que esse patógeno fúngico requer a maior atenção do sistema de saúde para a pesquisa acadêmica e industrial. A taxa de mortalidade é de 100 em pacientes com meningite criptocócica sem o tratamento, que foi reduzida para 55 em 10 semanas e > 70 em um ano com monoterapia com fluconazol. A melhor terapia combinada atualmente disponível é Anfotericina B (AMB) com flucitosina, no entanto, a taxa de mortalidade reduziu em até 20 em países desenvolvidos e até 75 em países menos privilegiados. A recaída clínica/recorrência da doença é outra questão que aumenta a alta morbidade e mortalidade associadas à Criptococose. Esta proposta de projeto é focada na heterogeneidade fenotípica/populacional em C. neoformans. Heterorresistência, persistência antifúngica, biofilme, dormência e fenótipos viáveis, mas não cultiváveis (VBNC) são os resultados da heterogeneidade populacional em C. neoformans e são universalmente exibidos por todas as cepas estudadas de C. neoformans. A heterorresistência fornece uma tolerância temporária durante o tratamento com azóis, por aneuploidia cromossômica e formação de heterocromatina. O biofilme protege a população criptocócica de vários estresses, incluindo tratamento antifúngico. Os fenótipos de dormência e VBNC permitem que C. neoformans sobreviva no hospedeiro por anos durante a latência. Por fim, as células persistentes antifúngicas (AFPC) ajudam C. neoformans a tolerar quantidades muito altas de antifungicos que, de outra forma, seriam letais. O VBNCrypto visa entender as vantagens que os fenótipos VBNC e AFPC fornecem à população de leveduras durante as interações Cryptococcus-sistema imunológico e a progressão da doença no hospedeiro.

Dermatófitos são fungos causadores de lesões benignas em tecidos queratinizados da pele, pelos e unhas. Trichophyton rubrum é a principal espécie, sendo capaz de suprimir e evadir a resposta imune do hospedeiro. Neutrófilos são as principais células efetoras do sistema imune responsáveis pelo killing destes fungos. Resultados anteriores nossos procuraram caracterizar um subgrupo específico de pacientes no espectro da interação T. rubrum-hospedeiro com quadro de dermatofitose crônica disseminada (DCD), porém sem sinais de imunodeficiência, e cujos neutrófilos apresentavam capacidade funcional diminuída em relação ao grupo controle. Biópsias de lesões de pele de pacientes com DCD mostraram ausência de neutrófilos no infiltrado celular. Os mecanismos microbicidas utilizados pelos neutrófilos na infecção por T. rubrum ainda são pouco entendidos. Ainda não se sabe quais os receptores de reconhecimento padrão (PRRs) e suas respectivas vias de sinalização intracelular estão envolvidos no reconhecimento e killing de T. rubrum. Dentro da família dos PRRs destacam-se os receptores de lectina do tipo C (CLRs) que desempenham um papel central no reconhecimento e no desenvolvimento da resposta imune a fungos, em parte através da ativação de vias de sinalização intracelulares que induzem a expressão de citocinas que podem polarizar para uma resposta protetora ou não. É nossa proposta avaliar possíveis deficiências nas vias e nos mecanismos microbicidas utilizada pelos neutrófilos dos pacientes com DCD, a participação dos receptores de lectina do tipo C na modulação da imunidade adaptativa (ex- vivo) e in situ que levariam a esta condição clínica, bem como avaliar o perfil imunogenético relacionado a genes das vias de migração dos neutrófilos e as vias de sinalização intracelular relacionadas à resposta Th17. O entendimento dessas vias celulares e metabólicas envolvidas na interação fungo-neutrófilo poderá trazer informações úteis para a seleção de novos alvos terapêuticos e para o desenvolvimento de novos fármacos para uma melhor abordagem terapêutica não somente de pacientes com DCD, visto que muitos destes pacientes apresentam resposta insuficiente (ex., recorrências) à terapia antifúngica atualmente disponível, como também para as demais infecções fúngicas invasivas e não invasivas.

Sabe-se que as lectinas do tipo C sāo importantes em algumas infecções fúngicas como em Candida albicans. O objtivo do projeto é analisar o papel da lectina do tipo C: Dectina-1 no tratado gastrointestinal de animais infectados com C. albicans.

A cromoblastomicose é uma micose subcutânea de evolução lenta, crônica, adquirida através de ferimentos com plantas ou qualquer corpo estranho que veicule os diversos agentes etiológicos, pois estes estão dispersos no meio ambiente. Com a penetração do fungo no tecido inicia-se um processo de infecção micótica com erupção de pápulas, verrugas ou nódulos que posteriormente podem ulcerar; a localização geralmente é podal, podendo acometer também membros superiores. Diversos esquemas terapêuticos já foram utilizados, mas poucos são os relatos de cura. Acredita-se que a resposta imune celular é a mais importante durante a evolução da doença, porém nenhum estudo efetivo foi publicado até o momento. Portanto tendo em vista a importância dessa micose em nosso país, esse trabalho pretende pela primeira vez investigar o comportamento da resposta imune celular com o intuito de contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos imunológicos envolvidos na progressão e cura dessa patologia..