Keity Souza Santos.

Modernização e implementação de equipamentos são fundamentais para gerar resultados em nossas pesquisas, para que sejam internacionalmente competitivas e possibilitem maior chance de reprodutibilidade. Além da inclusão de equipamentos com maiores resoluções e maior versatilidade, é também fundamental a aquisição de equipamentos que permitam agilizar a obtenção dos resultados. Equipamentos inovadores aliados a equipes técnicas especializadas aumentam nossa eficiência na produção científica bem como a possibilidade de contribuirmos para pesquisas de urgência e relevantes para a população, como foram os casos de nossas pesquisas de genômica do hospedeiro em relação às infecções do vírus Zika e ao SARS-CoV-2 e de desenvolvimento de testes de diagnóstico rápido durante a pandemia da COVID-19. Essa proposta inclui 5 equipamentos. 4 destes (Abby, Symphony S6, Cytation C10 e Axioscan) são altamente relevantes para compreendermos a relação entre constituição genética e efeito fenotípico por meio de utilização de várias estratégias metodológicas e 1 (SeqStudio) para caracterização de variantes genéticas específicas. Com a aquisição destes equipamentos esperamos incluir novas abordagens ou melhorar nossa capacidade de analise para dissecar os mecanismos celulares, moleculares e fisiológicos em diferentes fenótipos relacionados a doenças neuromusculares, neurodesenvolvimento, dentre outras. Por exemplo, no cenário de pesquisa atual é fundamental realizarmos análise qualitativa de organoides e processos de diferenciação em tempo real (culturas 2D e 3D), que dependem de equipamentos não existentes no CEGH-CEL ou no Instituto de Biociências. Uma outra área de pesquisa que desenvolvemos e altamente relevante para melhor saúde da população são: terapia gênica, celular, oncolitica e engenharia tecidual. Dentre estas, gostaríamos de destacar: CAR T-cell e tumores, terapias virais oncolíticas, a geração de órgãos funcionais para transplantes através de técnicas de engenharia tecidual e através da modificação genética de suínos/ xenotransplante. Estas pesquisas dependem de diversas abordagens metodológicas, como análise de tipos celulares específicos, caracterização de proliferação, migração, diferenciação celular, resposta celular a fatores ambientais dentre outros, havendo necessidade de equipamentos mais robustos e atuais para gerar dados competitivos internacionalmente. Com o objetivo de elevar a qualidade tecnológica e mantermos competitiva a pesquisa brasileira, elaboramos uma proposta de uma nova facility - Genoma Cell Facility, que será incorporada à já existente Genoma Sequencing Facility..

Buscamos inserir a proteína RBD juntamente com peptídeos promíscuos antigênicos do SARS-CoV-2 em um sistema nanoparticulado para entrega de antígeno, que seja capaz de estimular o sistema imunológico nativo elicitando uma resposta imune sistêmica e de mucosa a partir da ativação de células B e T. Jorge Kalil coordena a pesquisa e eu sou uma das coordenadoras do projeto.

O vírus emergente SARS-CoV-2 surgiu na China, com fácil propagação e letalidade significativa. Em menos de três meses de sua identificação já causou mais de 30.000 mortes em todo o mundo e com um crescente número de fatalidades. Como é um vírus novo introduzido na população humana, não há população imune; tem fácil propagação e a letalidade varia de 1 a 16% de acordo com país, faixa etária e comorbidades. Na ausência de uma vacina ou tratamento específico, a pandemia está paralisando continentes inteiros. Neste projeto, visamos utilizar a plataforma de vacinas baseadas em partículas vírus símile (vírus like particles, ou VLP) conjugando sequências peptídicas do SARS-CoV-2 aos Q²VLPs e VP1VLPs da proteína Spike utilizando-os como mecanismo de entrega de antígenos peptídicos aos componentes celulares do sistema imunológico. Vale ressaltar que este projeto foi rapidamente adaptado para o desenvolvimento de uma vacina eficaz e segura anti o SARS-CoV2 ao projeto Jovem Pesquisador, Processo número: 2019/14526-0. Devido a isso, já estamos trabalhando em selecionar os melhores antigenos para ser conjugado aos VLPs devido a enorme urgencia que este momento histórico nos exige.

Neste projeto, visamos analisar a diversidade genética do SARS-CoV-2 circulante e utilizar a plataforma de vacinas baseadas em partículas vírus símile (vírus like particles, ou VLP) contendo sequências do SARS-CoV-2 para obter uma vacina a ser testada em modelos animais e que estará pronta para ser levada a ensaio clínico para a imunoprofilaxia. Ademais, visamos a obtenção de anticorpos monoclonais humanos neutralizantes contra o SARS-CoV-2 para possível uso como proteção passiva a pacientes infectados pelo vírus em pacientes de alto risco.

O vírus emergente SARS-CoV-2 surgiu na China, com fácil propagação e letalidade significativa. Em menos de três meses de sua identificação já causou mais de 35.000 mortes em todo o mundo e com um crescente número de fatalidades. Como é um vírus novo introduzido na população humana, não se sabe se há população imune; tem fácil propagação e a letalidade varia de 1 a 16 de acordo com país, faixa etária e comorbidades. Na ausência de uma vacina ou tratamento específico, a pandemia está paralisando continentes inteiros. Sabe-se que a entrada de todos os coronavírus nas células hospedeiras é mediada pela glicoproteína Spike, potencial alvo terapêutico, especialmente a região do domínio de receptor da ligação. O conhecimento da resposta celular frente a este vírus ainda é pouco conhecido. Sendo assim, esse conhecimento é de relevância imediata. Neste projeto, visamos mapear os epítopos de linfócitos T e B reconhecidos por células e anticorpos de pacientes convalescentes de COVID-19, partindo da sequência completa para epítopos T e com foco no receptor da proteína Spike para linfócitos B. Esses dados poderão auxiliar no desenvolvimento de vacinas e imunoterápicos a médio prazo.

A esofagite eosinofílica (EoE) é definida como uma doença inflamatória crônica do esôfago, imunologicamente ou antigenicamente mediada, caraterizada clinicamente por sintomas de disfunção esofagiana, e histologicamente por infiltrado inflamatório eosinofílico no esôfago (e 15 eosinófilos por campo de grande aumento), que não apresente melhora após 8 semanas de tratamento com inibidor de bomba de prótons (IBP). É uma doença mediada pelo perfil imunológico TH2 em resposta a exposição a aeroalergenos e a alérgenos alimentares, principalmente o leite de vaca. A literatura tem mostrado que a dieta de exclusão empírica do leite de vaca nos pacientes com EoE, melhora o quadro clínico e o infiltrado eosinofílico do esófago. A hipótese sugerida é que o leite de vaca através de uma glicoproteína chamada esfingomielina, estimula os linfócitos T Natural Killer invariantes (iNKT) levando ao aumento da produção de citocinas do perfil TH1 e TH2, estimulando a inflamação eosinofílica no esôfago. Por tanto nosso estudo, único na literatura procura avaliar a ação da esfingomileina do leite de vaca sobre os linfócitos iNKT, em um grupo de pacientes não sensibilizados ao leite de vaca com Esofagite Eosinofílica, através de testes de linfoproliferação do sangue periférico e tecido esofagiano com diferentes tipos de leite.

O projeto proposto, que busca a identificação e caracterização de novos alérgenos virá atender uma necessidade na prática clínica. Como o diagnóstico e tratamento das alergias baseiam-se fundamentalmente na correta identificação do alérgeno a identificação e caracterização de novos alérgenos serão úteis para a otimização do diagnóstico, prognóstico e futuro tratamento dos pacientes. Com a realização deste projeto busca-se a sistematização diagnóstica clínica e laboratorial para a identificação de novos alérgenos e estudo de reatividade cruzada. Além disso, utilizar ferramentas de bioinformática para predição de estrutura das moléculas e seus epítopos, o que poderá ser útil para a produção de moléculas hipoalergênicas no futuro. Para isso ocorrer será estruturado um laboratório de pesquisa aplicada, que possa atender tanto o ambulatório de Alergia do HCFMUSP assim como outras instituições médicas e de pesquisa com interesse em estabelecer colaborações na área.