Marília Afonso Rabelo Buzalaf.

CNPq Edital Saúde Bucal
Proc. 402200/2008-0 
R$ 41.600,84

Auxílio CNPq Edital Saúde Bucal (Proc. 403427/2004-5)
Recursos: R$ 16.200,00
Vigência: 01/12/2005 a 01/02/2007 


A consolidação da estratégia de fluoretação das águas de abastecimento público como importante medida de Saúde Pública, na prevenção da cárie dentária e o fato de que, o flúor é um elemento químico presente em diversos produtos, além da água de abastecimento, reforça a necessidade de um controle rigoroso, por parte dos profissionais envolvidos com saúde pública, da concentração de flúor na água de abastecimento público. Os resultados dos estudos anteriormente realizados no município, a singularidade do sistema de abastecimento público de Bauru, justificam a necessidade de se implantar o heterocontrole da água de abastecimento público no município de Bauru, SP.. O objetivo deste projeto é o de implantar o heterocontrole da fluoretação da água de abastecimento público no município de Bauru, para que desta forma se consiga chegar à manutenção permanente do teor adequado de flúor na água. Para tanto, será realizada a coleta de uma amostra de água uma vez por mês, durante todo o ano, em 60 pontos distribuídos pelos 19 setores de abastecimento do município, em uma data estabelecida por sorteiro. Os dados coletados serão analisados utilizando-se de freqüências relativas e absolutas, que serão representadas e descritas por meio de tabelas e gráficos

Estudos moleculares (genômica, proteômica) vêm sendo adicionados ao método tradicional de taxonomia com o intuito de fornecer dados mais robustos, auxiliando no processo de delimitação, caracterização e identificação de espécies. Além disso, aliado a outras ferramentas como resposta bioquímica oxidativa, podem servir como biomarcadores de danos ambientais promovidos por toxicantes, como mercúrio. Dessa forma, o objetivo dessa proposta é gerar dados primários sobre a biodiversidade, por meio do mapeamento do genoma e proteoma de grupos endêmicos da Amazônia Brasileira de insetos da ordem Odonata (libélulas ou jacintas) e peixes, melhor elucidando a caracterização molecular taxonômica, assim como mapear possíveis biomarcadores para compreender os efeitos da exposição mercurial que possam ser utilizados no biomonitoramento desse dano ambiental em regiões remotas da Amazônia. Para isso, serão investigadas oito comunidades no Tapajós, área que sofre com as consequências do garimpo ilegal. Será amostrada uma comunidade de libélulas, assim como peixes que normalmente são consumidos pelos moradores e de grande impacto na economia local. Cinco comunidades de uma área de referência no Rio Acará também serão investigadas. Após acesso à região e identificação macroscópica e registro fotográfico dos espécimes, algumas serão fixadas e destinadas a coleções na UFPA, enquanto outras serão imediatamente congeladas para análise dos níveis de mercúrio, análises da bioquímica oxidativa, genômica e proteômica. Outras amostras serão imediatamente preparadas para leituras biofotônicas, ainda em campo, com o objetivo de validar uma técnica de diagnóstico que identifique nos organismos, sejam eles vertebrados ou invertebrados, a presença de níveis elevados de mercúrio. Ao final das investigações, esperamos contribuir com a caracterização molecular das espécies usando técnicas da taxonomia integrativa e propiciar a criação de um painel de biomonitoramento que oriente o acompanhamento ambiental.

A obesidade, o Diabetes Mellitus Gestacional (DMG) e os hormônios da gravidez podem ter efeitos sinérgicos nos tecidos periodontais. Embora existam achados epidemiológicos que associem esses desfechos, essa associação é incerta e pode ser mal interpretada devido a uma variedade de fatores de confusão. Além disso, os mecanismos fisiopatológicos relacionados à associação entre obesidade ou DMG com a gengivite ou periodontite, respectivamente, devem ser melhor investigados. Os objetivos da presente proposta são divididos em dois eixos: 1) Avaliar as proteínas e metabólitos salivares associados à periodontite e Diabetes Mellitus Gestacional em mulheres durante o 3 trimestre da gravidez; 2) Avaliar proteínas salivares associadas à gengivite e obesidade em mulheres durante o 3 trimestre da gravidez. No eixo 1, as gestantes serão divididas em: com DMG e periodontite (DMG-P); com DMG mas sem periodontite (DMG-SP); sem DMG mas com periodontite (N-P); e sem DMG e sem periodontite (N-SP). Amostras de saliva não-estimulada serão coletadas e submetidas à análise proteômica por Espectrometria de Massas (nLC-ESI-MS/MS) e metabolômica por Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear operando em uma frequência de prótons de 500 MHz. No eixo 2, as gestantes serão divididas em: com obesidade e excessivo Sangramento Gengival (SG) (G1 = IMC e 30 kg/m2; SG > 50); com obesidade, mas sem gengivite (G2 = IMC e 30 kg/m2; SG < 10); com IMC normal, mas com excessivo SG (G3 = IMC 18,5-24,99 kg/m2; SG > 50); com IMC normal e sem gengivite (G4 = IMC 18,5-24,99 kg/m2; SG < 10). Amostras de saliva não-estimulada serão coletadas e submetidas à análise proteômica por Espectrometria de Massas (nLC-ESI-MS/MS). A diferença na expressão proteica entre os grupos será expressa como p < 0,05 para as proteínas subrreguladas, e 1-p > 0,95 para as proteínas superreguladas. Na análise metabolômica, será realizada análise multivariada por meio de Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA) e PLS-DA ortogonal (O-PLS-DA). Os Variable Importance in Projection (VIP) scores serão usados para análise multivariada dos metabólitos. Após a normalização dos dados, a análise univariada será realizada por meio de ANOVA e a correlação de Pearson será aplicada entre os níveis dos metabólitos e os parâmetros clínicos. Considerando a variação da sensibilidade e especificidade para diferentes valores de corte dos desfechos estudados, a curva ROC será empregada para identificar o potencial de determinados metabólitos atuarem como biomarcadores. O nível de significância de 5 será adotado. A relevância deste trabalho se baseia no aspecto inovador, considerando tanto os métodos de análise adotados, quanto o potencial dos resultados, os quais poderão resultar em ações destinadas a manutenção da saúde nessa população.

Nesta proposta, objetiva-se a troca do EMU concedido na Chamada Multiusuários FAPESP de 2009, um Espectrômetro de Massas Xevo G2 QTof (Processo 2009/53852-9), com upgrade para o novo modelo Xevo G3 QTof. Nosso equipamento atual foi instalado em 2010 e desde então vem atendendo a inúmeros usuários de diversas áreas do Brasil e do exterior. No entanto, apresenta um desgaste considerável, pois tem operado continuamente há 13 anos. Seu detector necessita de substituição imediata. Em adição, a Waters lançou recentemente um modelo novo, o Xevo G3 QTof. Quando novos lançamentos são feitos, paralisa-se a fabricação de componentes dos modelos anteriores, de forma que em curto espaço de tempo não haverá mais reposição de peças do modelo atual. Assim, a Waters receberá o equipamento Xevo G2 QTof como parte do pagamento (45) do Xevo G3 QTof, que é um Espectrômetro de Massas Híbrido com fonte de ionização do tipo NanoEletrospray (ESI) e dois analisadores de massa, sendo um deles quadrupolar e outro Time-of-flight (TOF). O equipamento está acoplado a sistema de cromatografia líquida de ultra performance (UPLC), que permite separações cromatográficas de alta resolução, devido ao pequeno diâmetro interno das suas colunas. Após a separação, o UPLC realiza a injeção das amostras no espectrômetro de massas. Uma importante característica diferencial do equipamento solicitado é o sistema de ionização (nanoelectrospray), que permite a injeção de nanolitros de amostra, aumentando a sensibilidade e as chances de identificação do analito. O Xevo G3 QTof combina óptica de íons StepWaveTM XS, XS Collision Cell e tecnologia QuanTof para robustez, sensibilidade e seletividade superiores, juntamente com alta faixa dinâmica, precisão de massa e velocidade de análise, resultando em informações qualitativas e quantitativas da mais alta qualidade. Esta configuração faz com que o equipamento tenha ampla utilização em diversos campos, como física, química, medicina, farmácia, odontologia, geologia, ciências nucleares, ciências de materiais, arqueologia, indústria petrolífera, ciências forenses e ambientais, já que seu alto poder de resolução permite a identificação tanto de pequenas moléculas quanto de proteínas intactas. Focado na caracterização, o Xevo G3 QTof incorpora a óptica de íons StepWaveTM XS para transmissão eficiente de espécies lábeis e de baixo m/z, aumentando a cobertura do composto e a fidelidade analítica sem comprometer a análise de biomoléculas de alta massa. É uma ferramenta analítica para caracterização detalhada e quantificação precisa de uma ampla gama de moléculas além de ser bastante versátil e poder ser utilizado por diferentes profissionais da área de proteômica e metabolômica, bem como por pesquisadores de outras áreas, o que é ideal para a presente proposta de caráter multiusuários. Frente à escassez de equipamentos com configuração adequada para a análise proteômica e metabolômica, bem como ao alto índice de manutenção dos mesmos por serem altamente sensíveis, o upgrade aqui proposto é estratégico. Assim, esta proposta foca na resolutividade de diversos projetos de pesquisa atuais envolvendo tanto análise proteômica, como metabolômica. O equipamento solicitado será instalado na região administrativa 7 do Estado de São Paulo (Bauru) e, com base em parcerias prévias para o uso do equipamento atualmente disponível, poderá atender a projetos associados das Regiões Administrativas de Araçatuba, Barretos, Marília, São José do Rio Preto e Região Administrativa e Metropolitana de Sorocaba (Botucatu), onde inexistem espectrômetros de massa de quaisquer configurações, além de outros interessados que obedeçam às condições do plano de Gestão de Uso apresentado.

Apesar de poder ser facilmente prevenida, a cárie dentária é a doença crônica mais prevalente em todo o mundo. No projeto temático associado à presente proposta (FAPESP 2019/26070-1), propusemos um conceito totalmente novo para a prevenção da cárie dentária, por meio da engenharia de película adquirida do esmalte (PAE). A modificação do perfil proteico deste integumento, pela incorporação de proteínas ácido-resistentes, como é o caso da cistatina derivada da cana-de-açúcar (CaneCPI-5), interfere na colonização inicial do biofilme dentário, reduzindo as contagens de estreptococos mutans e lactobacilos, bem como a desmineralização do esmalte. Recentemente, nosso grupo de pesquisa fez a clonagem e produção heteróloga (E. coli) de várias cistatinas derivadas das folhas de uma planta chilena chamada maqui (Aristotelia chinensis). Uma delas, chamada Maqui-3, apresentou alto rendimento (~ 110 mg/L), 15 vczes maior que o da CaneCPI-5, tornando-a atrativa para aplicações comerciais. Experimentos prévios do nosso grupo, empregando procedimentos de engenharia de película adquirida e protocolos de erosão dentária inicial, revelaram que o efeito protetor da Maqui-3 foi maior que o da CaneCPI-5 (dados não publicados). Entretanto, o potencial anticárie da Maqui-3 nunca foi avaliado, o que será o objetivo do presente estudo. Pretendemos avaliar o efeito da Maqui-3: 1) na espessura e propriedades viscoelásticas da PAE, utilizando a QCM-D (microbalança de cristal de quartzo com monitoramento de dissipação); 2) no perfil (contagem de unidades formadoras de colônias) e viabilidade (resazurina) de biofilme microcosmo, bem como na desmineralização do esmalte (microrradiografia transversal - TMR); 3) nas alterações dos microrganismos colonizadores iniciais do biofilme, por meio de análises metagenômicas.

A proposta tem por objetivo o desenvolvimento do EMU microrradiografia transversal (TMR) digital tridimensional, para análise do conteúdo mineral de tecidos dentários, podendo ser utilizado também para análise de fragmentos de tecidos ósseos e biomateriais. A TMR é considerada o padrão ouro para a análise de lesões de cárie produzidas in vitro ou in situ, uma vez que os valores de conteúdo mineral para os tecidos dentários já estão estabelecidos e, a partir deles, é possível calcular o quanto o tecido perdeu ou ganhou em termos minerais. A FOB possui o único equipamento de TMR disponível na América Latina, que vem sendo amplamente utilizado por pesquisadores de todo o continente sul-americano. Entretanto, o equipamento requer a utilização de placas de vidro para revelação, as quais são de difícil aquisição e, com o advento dos equipamentos digitais, o equipamento caiará em desuso em curto espaço de tempo, daí a necessidade de aquisição de um equipamento digital. O equipamento a ser construído, além de digital será tridimensional, possuindo uma mesa com capacidade rotativa nos eixos X/Y/Z/teta, capaz de fotografar as amostras de tecidos dentários de todos os lados/superfícies, além de ser conectado a um software que processa as imagens em um formato 3D de altíssima qualidade e faz uma reconstrução tomográfica tridimensional do perfil mineral dos tecidos dentários. O novo equipamento a ser desenvolvido será o primeiro instrumento a unir as vantagens da TMR digital (TMRD) (alta precisão e reprodutibilidade para quantificação da perda mineral, profundidade da lesão cariosa, espessura e grau de mineralização da camada superficial; escaneamento automático do step wedge de alumínio; rápido e de fácil utilização; análise 2D de várias secções dentárias ao mesmo tempo - embora nesse caso seriam as secções de 100 m de espessura) com aquelas do microtomógrafo computadorizado (CT) (análise 3D de espécimes com 3 mm de espessura; análise não destrutiva, tornando possíveis experimentos longitudinais), e se constituirá no novo padrão ouro para análise de lesões cariosas in vitro e in situ. Destaque-se que a TMRD-3D apresenta várias vantagens sobre o CT para a análise de lesões cariosas, pois: 1) o CT não tem uma boa resolução para a região superficial dos espécimes; 2) o escaneamento com a TMRD-3D é muito mais rápido e 3) o software acoplado à TMRD-3D é desenhado para fornecer dados do perfil mineral das lesões de cárie de forma bem mais direcionada. Serão feitas análises com mais precisão, reprodutibilidade, facilidade e rapidez em comparação àquelas realizadas com equipamentos hoje disponíveis no mercado. Além disso, a possibilidade de se determinarem a profundidade e a de volume mineral das lesões iniciais de cárie previamente ao início dos experimentos, bem como de se realizarem avaliações longitudinais, aumentará a competitividade científica internacional das publicações geradas com a utilização do equipamento, bem como a demanda de sua utilização em parcerias com a indústria, trazendo impactos altamente positivos para a pesquisa na área de Cariologia no estado de São Paulo, permitindo um rápido avanço do conhecimento, bem como publicações em periódicos com fatores de impacto mais altos, as quais serão mais citadas. Além disto, seremos a única Instituição do mundo, inicialmente, a possuir o equipamento, que se tornará o novo padrão ouro para análise de lesões cariosas, o que nos colocará na vanguarda da Cariologia a nível mundial. Uma vez que o desenvolvimento do equipamento TMRD-3D será feito conjuntamente entre a Inspektor Research Systems e a FOB, a empresa, que já possui os direitos de propriedade intelectual sobre o TMRD, compromete-se a dividir os direitos de propriedade intelectual sobre a nova tecnologia com a USP.

A presença da película adquirida do esmalte (PAE) é um dos fatores protetores contra o desgaste dentário erosivo (DDE) e a cárie dentária. Dentre as proteínas da película adquirida com potencial para se ligar ao esmalte e propriedades ácido-resistentes, identificamos recentemente a cistatina, a hemoglobina (Hb) e a estaterina. A modificação do perfil proteico da película adquirida pela incorporação de proteínas pode interferir na colonização bacteriana inicial do biofilme, alterando sua estrutura. Portanto esta modificação é promissora não apenas para o controle do DDE, mas também para o controle da cárie dentária, o que tem sido pouco estudado. Assim, na presente proposta, focada na &quot;engenharia de película adquirida&quot;, pretendemos avaliar o impacto da modificação deste integumento com proteínas que se ligam ao esmalte e que apresentam propriedades ácido-resistentes (cistatina, hemoglobina, estaterina e combinação das mesmas) no perfil proteômico da PAE formada in vivo, bem como no seu potencial protetor contra desafios erosivos extrínsecos e intrínsecos. Será ainda avaliada a combinação destas proteínas com outros ativos como o trimetafosfato (TMP) e o EGCG, os quais possam potencializar a sua ligação à PAE, bem como serão explorados os possíveis mecanismos envolvidos neste potencial protetor. Considerando-se que a formação do biofilme dentário se dá pela ligação de adesinas da superfície de bactérias a receptores complementares das proteínas da PAE, a modificação na composição proteica deste integumento devido ao enriquecimento com proteínas ácido-resistentes terá um impacto na colonização microbiana inicial do esmalte dentário, alterando toda a sua estrutura, o que também será avaliado na presente proposta, utilizando um modelo de biofilme de microcosmos. Por fim, serão avaliados diferentes veículos de utilização destas proteínas, a fim de que seja elaborado um produto que possa ser testado clinicamente para o controle da cárie e do DDE. Estas etapas são cruciais para que possa ser desenvolvido um produto, baseado em uma destas proteínas ou na combinação das mesmas, que venha a ser utilizado em ampla escala como uma nova abordagem para o controle do DDE e da cárie dentária, com base em procedimentos de &quot;engenharia de película adquirida&quot;.

O objetivo deste estudo será testar a viabilidade científica e técnica de um dentifrício inovador ultrafuncional por meio da avaliação do efeito anticárie deste dentifrício com 1100 e 5000 ppm F (NaF), pH 4,5 e EGCG (inibidor de MMP) na remineralização de lesões de cárie em dentina através de um estudo in vitro. Para tal, 144 blocos de dentina radicular bovina (4x4) e serão selecionados pela microdureza de superfície (SMH inicial) e serão divididos em 12 grupos: Grupo 1 - dentifrício placebo pH 7; Grupo 2 - dentifrício placebo pH 4,5; Grupo 3 - dentifrício placebo pH 7 com EGCG 0,61; Grupo 4 - dentifrício placebo pH 4,5 com EGCG 0,61 ; Grupo 5 - dentifrício com 1100 ppm F pH neutro sem EGCG ; Grupo 6 - dentifrício com 1100 ppm F pH neutro com EGCG 0,61; Grupo 7 - dentifrício com 1100 ppm F pH 4,5 sem EGCG; Grupo 8 - dentifrício com 1100 ppm F pH 4,5 com EGCG 0,61; Grupo 9 - dentifrício 5000 ppm F pH neutro sem EGCG; Grupo 10 - dentifrício 5000 ppm F pH neutro com EGCG 0,61; Grupo 11 - dentifrício 5000 ppm F pH 4,5 com EGCG 0,61 ;Grupo 12 - dentifrício 5000 ppm F pH 4,5 sem EGCG. As amostras serão submetidas a uma ciclagem de pH durante 7 dias e serão expostas ao dentifrício duas vezes por dia, imediatamente antes (ponto de tempo:0) e após a desmineralização (ponto de tempo: 6h) utilizando máquina de escovação, escova de dentes (Curaprox) e dentifrícios testados (2x15 s, 150 g de carga). Após os desafios, será determinada a microdureza de superfície final (SMH final), para o cálculo da porcentagem de variação de microdureza de superfície. Na sequência, os blocos serão seccionados para a realização da microdureza interna. E ainda, também será realizado um estudo de tendência do mercado por meio do estudo de focus group para avaliar a análise de viabilidade técnica do dentifrício ultrafuncional. Os dados obtidos serão submetidos à análise estatística (p<0,05)

FAPESP Proc. 08/09059-0&#10;US$ 6.210,00 + R$ 12.978,25

FAPESP Proc. 2008/03687-9&#10;R$ 64.502,19 + US$ 49,484.51

Recursos: R$ 26.787,70 + US$ 1,735.35 &#10;Agência Financiadora: FAPESP (Proc. 2009/06892-5)&#10;Vigência: 01/10/2009 a 30/09/2011

O objetivo deste trabalho será avaliar o efeito do pH, da consistência e da concentração de flúor presente em dentifrícios líquidos no controle de cárie em áreas fluoretada e não fluoretada. Para tal, o projeto será desenvolvido em 2 etapas. Na primeira etapa, participarão 360 crianças de 2 a 4 anos de idade, residentes em duas regiões, a saber: Bauru, SP (0,6-0,8 ppm F na água) e João Pessoa, PB (<0,2 ppm F na água). Em cada comunidade, os voluntários serão submetidos a exame clínico para determinação da experiência de cáries (cárie-ativos ou cárie inativos). Posteriormente, será feita uma nova alocação destes voluntários a 3 grupos, que diferirão em função do tipo de dentifrício líquido a ser utilizado durante -12 meses, a saber: G1- 550 ppm F pH 7,0, G2- 550 ppm F pH 4,5 e G3 - 1.100 ppm F pH 7,0. Em metade dos voluntários será avaliada a concentração de F no biofilme e nas unhas, 6 meses após o início da utilização dos dentifrícios. A avaliação da progressão / regressão das lesões de cárie será feita no baseline e após 12 meses, de acordo com o Nyvad et al. (2003) e também com o aparelho QLF (avaliar a o ganho ou perda de mineral). As análises de F serão realizadas com o eletrodo específico, após difusão facilitada por HMOS. Na segunda etapa, será avaliada a influência da consistência dos dentifrícios na incorporação de F no biofilme dentário. Para tal, serão preparadas 3 formulações dentifrícias, sendo uma delas a formulação original (utilizada no estudo anterior), uma mais e outra mais consistente. Através de um estudo cruzado e duplo-cego, será avaliada a incorporação de F no biofilme dentário 1 e 12 h após a escovação com os respectivos dentifrícios, em 24 crianças de 8-10 anos em Bauru-SP. Os dados serão checados em relação à normalidade e homogeneidade, para análise estatística apropriada (P<0.05).