Ana Claudia Latronico Xavier.

Avanços no diagnóstico etiológico da puberdade precoce central

As doenças que comprometem o crescimento e o desenvolvimento puberal humano apresentam uma forte influência genética, incluindo modelos de herança Mendeliana clássica e formas oligogênicas e poligênicas. Recentemente, novas ferramentas genéticas foram desenvolvidas permitindo uma investigação simultânea de diversos genes e até mesmo do genoma completo em doenças com base genética. Desta forma, o objetivo principal do projeto atual é desenvolver e aplicar novas tecnologias de genética molecular na investigação dos distúrbios de crescimento e puberdade. O projeto encontra-se organizado em 2 módulos, totalizando 8 subprojetos. As seguintes anormalidades do desenvolvimento humano serão estudadas: hipopituitarismo, baixa estatura associada a baixo peso e/ou altura para idade gestacional, baixa estatura idiopática puberdade precoce central, hipogonadismo hipo e hipergonadotrófico. Todas estas condições apresentam evidências claras de forte componente hereditário com genes ainda não conhecidos. O uso dessas novas tecnologias permitirá um avanço importante no diagnóstico, acompanhamento, aconselhamento genético e tratamento dos pacientes afetados. A Unidade de Endocrinologia do Desenvolvimento da Disciplina de Endocrinologia do Hospital das Clinicas da FMUSP é há muitos anos um centro de referencia para estas condições. Casuísticas bem estabelecidas já estão organizadas para cada uma das condições a serem estudadas permitindo o início imediato do projeto. Como estratégia de pesquisa, além da abordagem clássica baseada no sequenciamento tradicional de genes candidatos, pretendemos adicionar novas ferramentas, como a metodologia de array para a pesquisa de deleções ou duplicações submicroscópicas em todo o genoma, seguida de sequenciamento de nova geração (regiões alvos e/ou sequenciamento exomico) em casos selecionados (famílias onde a herança mendeliana é claramente observada ou casos de consanguinidade). Após análise dos dados, novos genes candidatos identificados na primeira fase do estudo serão investigados na casuística completa. Desta forma, pretendemos estabelecer novas metodologias visando o diagnóstico genético-molecular, identificar novos genes e vias fisiológicas envolvidas na etiopatogenia das doenças estudadas e formar pesquisadores treinados nestas novas plataformas. O projeto proposto tem caráter inovador, além de avançar o conhecimento das doenças monogênicas e da caracterização da relação genótipo-fenótipo. (AU)

A pubarca precoce é caracterizada pelo aparecimento de pêlos pubianos antes dos 8 anos nas meninas e 9 anos nos meninos. Ela é dita idiopática quando outras causas orgânicas como tumores virilizantes ou hiperplasia adrenal congênita são excluídas. No entanto, esse grupo de pacientes não é homogêneo, pode se manifestar ou não com aumento dos precursores androgênicos, deidroepiandrosterona (DHEA) e sulfato de deidroepiandrosterona(DHEAS), e/ou evoluir na idade adulta com a síndrome de ovários policísticos e complicações metabólicas como obesidade, resistência insulínica, diabetes e dislipidemia. Recentemente uma nova tecnologia denominada metabolômica está sendo amplamente utilizada na pesquisa médica com o objetivo de investigar a fisiopatologia das doenças e ainda caracterizar biomarcadores indicadores de prognóstico e de resposta terapêutica. A metabolômica consiste na análise qualitativa e quantitativa de todas as pequenas moléculas, resultantes do metabolismo celular, presente em determinada amostra de fluido biológico ou tecido. O presente estudo objetiva caracterizar nos pacientes com pubarca precoce idiopática o aumento de espécimes androgênicas e/ou seus metabólitos ainda não detectadas por metodologias convencionais de dosagem hormonal, utilizando estratégia de metabolômica. Adicionalmente, pretende avaliar se o perfil dos metabólitos esteróides é capaz de se correlacionar com maior frequencia de complicações metabólicas. A casuística desse subprojeto consta de 30 crianças avaliadas no Hospital das Clínicas da FMUSP: Grupo 1 - com pubarca precoce idiopática e todos os andrógenos normais; Grupo 2 ? com pubarca precoce idiopática e valores de DHEA e DHEAS aumentados; Grupo 3 ? controles normais. Todas as crianças terão uma amostra de soro e urina coletadas. As amostras de sangue e a alíquota de urina serão encaminhadas para o Laboratório Fleury, onde serão analisadas. As amostras serão submetidas a análises por cromatografia líquida de ultra perfomance (UPLC)

Descrição: Nas duas últimas décadas, diversos grupos de excelência em biologia/genética molecular e celular se desenvolveram na Universidade de São Paulo. Apesar de bem sucedidos, uma análise mais detalhada revela que suas ações científicas poderiam ser ampliadas e otimizadas. Com este enfoque, estamos propondo a constituição do Núcleo de Estudos e Terapia Celular e Molecular (NETCEM), voltado à agregação de grupos com competência estabelecida nas áreas celular e/ou molecular, pertencentes à Faculdade de Medicina (FM-USP), Instituto de Química (IQ-USP), Instituto de Ciências Biomédicas (ICB-USP), Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ-USP), e Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina (HC-FMUSP). Nossa proposta direciona-se à integração entre as ciências básica e clínica, com claro enfoque translacional. As estruturas de apoio a este núcleo compreendem os laboratórios de pesquisa dos 23 investigadores principais, o prédio em fase final de construção do Núcleo de Terapia Celular e Molecular (NUCEL), a Unidade de Terapia Celular e Engenharia de Tecidos (UTCET) do HC-FMUSP, o Centro de Estudos Pré-Clínicos (CEPC) da FMVZ-USP e o Centro de Bioterismo da FMUSP (CB-FMUSP). A possibilidade atual de integrar informações advindas da caracterização de modelos animais geneticamente manipulados, estudos envolvendo a tecnologia de células tronco (CT), resultados gerados por sequenciamento de DNA em larga escala e caracterização de fenótipos clínicos, laboratoriais e de imagem proporcionam, hoje, um ambiente ímpar de caracterização e entendimento progressivo da patogênese de doenças humanas. Nos próximos anos, a estratégia de sequenciamento de DNA em larga escala, incluindo análises de exoma ou genoma completos, deverá desempenhar um papel crucial nesse processo. Nesse contexto, tal abordagem receberá atenção especial no NETCEM. Com a esperada compreensão gradual das vias moleculares que regem a diferenciação de CTs, antecipamos também o surgimento de novas alter

Descrição: Dentro da perspectiva Institucional, estabelecida pela Diretoria da FMUSP, pela Comissão de Pesquisa e pelos Laboratórios de Investigação Médica (LIMs), foi criado o Programa Rede de Equipamentos Multiusuários (PREMiUM) com o objetivo de estimular a pesquisa e inovação do Sistema FMUSP/HC e a formação de redes internas de expertise clínico, científico e técnico. Pretende-se, com esta realidade, tornar acessíveis diversos núcleos de equipamentos com tecnologia de ponta para diversos tipos de Pesquisa Experimental e Clínica. Para cumprir esses objetivos, é necessário que o Sistema HC-FMUSP recupere sua capacidade de análises genéticas, hoje centrada no estudo individual de genes, de modo a ingressar no que se denomina análises em high-throughput ou sequenciamento em larga escala. O projeto foi estruturado compondo uma verdadeira rede interna de expertises clínicos - centrados em perguntas que visem a compreensão das relações sinérgicas entre genes na gênese de doenças complexas (câncer de ovário, mama, bexiga e testículos, infertilidade, mitocondriopatias, cardiomiopatias, transtornos do humor e do crescimento) - e expertise técnico - centrado na operacionalização das plataformas de última geração, criação de bancos de dados e desenvolvimento de softwares de análise customizados. A rede interna contempla grupos de diversos departamentos e divisões clínicas, com objetivos convergentes na utilização da plataforma de sequenciamento em larga escala, incluindo: - Câncer e infertilidade masculina: transcriptoma e micro-RNAs testiculares. - Diagnóstico precoce do câncer de ovário e de endométrio por marcadores moleculares. - Determinação de mutações somáticas e germinativas em pacientes jovens com câncer de mama. - Análise de genótipo de suscetibilidade ao desenvolvimento do câncer de bexiga. - Mitocondriopatias e miopatias metabólicas e inflamatórias - Identificações de alterações genéticas em miocardiopatias e estudo de transcriptoma em cardiopatias congênita.

O sistema dos fatores de crescimento semelhantes à insulina (IGF) desempenha papel relevante na tumorigênese. Hiperexpressão do gene IGF1R tem sido demonstrada em diversos tumores, sugerindo que a expressão deste receptor represente um pré-requisito fundamental para transformação celular. Recentemente, demonstramos hiperexpressão de IGF1R em 66,6% e 20% dos tumores pediátricos e de adultos, respectivamente. Silenciamento de IGF1R por RNA de interferência (RNAi) tem sido descrito em cânceres de pulmão, cólon e fígado. Este mecanismo foi capaz de diminuir as taxas de proliferação celular e induzir apoptose, além de tornar as células tumorais mais sensíveis a agentes quimioterápicos No trabalho atual induziremos o silenciamento do gene IGF1R utilizando RNAi em linhagens de células de tumores adrenocorticais humanos. Duas linhagens celulares distintas (NCI H295 e T7) serão cultivadas e submetidas ao tratamento com RNAi específico para IGF-1R. A expressão gênica e protéica do IGF-1R será determinada por meio das técnicas de PCR em tempo real e Western Blot. Os efeitos do silenciamento de in vitro serão avaliados por ensaios de proliferação celular e análise de atividade de caspases. Além disso, avaliaremos a expressão dos microRNA 145 e microRNA100 em 50 tumores adrenocorticais diagnosticados em adultos e crianças utilizando-se a técnica de PCR em tempo real. A inibição da expressão do gene IGF1R representa um alvo potencial e de grande interesse na obtenção de novas e eficazes opções terapêuticas dos tumores adrenocorticais humanos.

Introdução: Uma alta freqüência de carcinomas adrenocorticais na infância tem sido relatada nas regiões sul e sudeste do Brasil, com a presença de uma única mutação germinativa do gene supressor tumoral TP53 (R337H) sendo evidenciada em 80-97% dos casos. Outros fatores implicados na tumorigênese adrenocortical incluem a hiperexpressão das vias IGF2 e Wnt. Os microRNAs, fragmentos de RNA que não codificam proteínas, são capazes de controlar a transcrição gênica exercendo um papel importante no crescimento e proliferação celular. O papel dos microRNA na tumorigênese adrenal ainda não está totalmente elucidado. Objetivos: Avaliar diferenças no perfil de expressão de microRNAs entre tumores do córtex da supra-renal da população adulta e pediátrica, incluindo sua capacidade de produção hormonal. Comparar esta expressão entre as amostras caracterizadas pela presença da mutação germinativa R337H do supressor tumoral p53, hiperexpressão da via Wnt e da via do IGF2/IGF1R. Além disso, comparar a expressão de microRNAs entre o tecido tumoral e o soro de pacientes com tumores adrenocorticais antes e após o tratamento cirúrgico e no momento da recidiva. Pacientes: Cinquenta pacientes não relacionados, adultos e crianças, serão estudados. Todos os pacientes terão avaliação hormonal completa e amostras tumorais serão coletadas durante procedimento cirúrgico habitual para exérese tumoral. Métodos: O perfil de expressão de microRNAs será determinado utilizando-se produto comercial específico TaqMan MicroRNA assay (Applied Biosystems, Forster City, CA, USA). A determinação quantitativa de microRNA, utilizando aparelho de RT-PCR, será realizada individualmente quando indicado. Perspectivas: O nosso estudo visa o melhor entendimento das vias já conhecidas, além de identificar novas vias moleculares implicadas na tumorigênese adrenocortical pediátrica e adulta. A identificação destes biomarcadores poderá contribuir no diagnóstico e prognóstico dos carcinomas adrenocorticais e apontar pa

Introdução: Uma alta freqüência de carcinomas adrenocorticais na infância tem sido relatada nas regiões sul e sudeste do Brasil, com a presença de uma única mutação germinativa do gene supressor tumoral TP53 (R337H) sendo evidenciada em 80-97% dos casos. Outros fatores implicados na tumorigênese adrenocortical incluem a hiperexpressão das vias IGF2 e Wnt. Os microRNAs, fragmentos de RNA que não codificam proteínas, são capazes de controlar a transcrição gênica exercendo um papel importante no crescimento e proliferação celular. O papel dos microRNA na tumorigênese adrenal ainda não está totalmente elucidado. Objetivos: Avaliar diferenças no perfil de expressão de microRNAs entre tumores do córtex da supra-renal da população adulta e pediátrica. Comparar esta expressão entre as amostras caracterizadas pela presença da mutação germinativa R337H do supressor tumoral p53, hiperexpressão da via Wnt e da via do IGF2/IGF1R. Além disso, comparar a expressão de microRNAs entre o tecido tumoral e o soro de pacientes com tumores adrenocorticais antes e após o tratamento cirúrgico e no momento da recidiva. Pacientes: Cinquenta pacientes não relacionados, adultos e crianças, serão estudados. Todos os pacientes terão avaliação hormonal completa e amostras tumorais serão coletadas durante procedimento cirúrgico habitual para exérese tumoral. Métodos: O perfil de expressão de microRNAs será determinado utilizando-se produto comercial específico TaqMan MicroRNA assay (Applied Biosystems, Forster City, CA, USA). A determinação quantitativa de microRNA, utilizando aparelho de RT-PCR, será realizada individualmente quando indicado. Perspectivas: O nosso estudo visa o melhor entendimento das vias já conhecidas, além de identificar novas vias moleculares implicadas na tumorigênese adrenocortical pediátrica e adulta. A identificação destes biomarcadores poderá contribuir no diagnóstico e prognóstico dos carcinomas adrenocorticais e apontar para potenciais alvos terapêuticos.

O presente trabalho foi elaborado com a finalidade de se obter uma ampla e completa caracterização das bases genéticas do HHI congênito em pacientes brasileiros, especificamente: Estabelecer a freqüência das mutações nos genes KAL-1, GnRH-R, FGFR1, GPR54 e KiSS-1 , bem como identificar novas mutações e polimorfismos nesses genes; Estabelecer a correlação entre o genótipo mutante e o fenótipo observado nesses pacientes; Avaliar a participação de novos genes candidatos, NELF e ORF4, na determinação do HHI e, identificar novos loci com potencial implicação nas formas familiais de hipogonadismo hipogonadotrófico cuja etiologia não puder ter sido determinada.

Estudo da expressão do fator de crescimento IGFII e dos fatores de transcrição SF1 e DAX-1 em tumores adrenocorticais de crianças e adultos

Análise do Gene KiSS1 na puberdade normal e nos distúrbios puberais em humanos

Estudo do gene GPR54 nos distúrbios puberais centrais idiopáticos

Síndrome de hiperestímulo ovariano induzida por hCG: importância das variantes alélicas do gene do receptor do FSH

Estudo do gene do receptor do neuropeptídeo Y-Y1 (NPY-Y1R) em pacientes com hipogonadismo hipogonadotrófico e puberdade precoce dependente de gonadotrofinas idiopáticos

Estudo do gene da subunidade alfa-1 do receptor tipo A do ácido gama aminobutírico (GABRA1) e avaliação eletroencefalográfica em meninas com puberdade precoce dependente de gonadotrofinas

Presença da mutação Arg337His do supressor tuoral p53 e mapa de deleção do cromossomo 17 em crianças e adultos com tumores adrenocorticais

Diagnóstico molecular do eixo GHRH-GH-IGF-I.

Pesquisa de mutações no gene do receptor do hormônio liberador das gonadotrofinas (GnRH-R) em pacientes com hipogonadismo hipogonadotrófico idiopático sem anosmia

Avaliação do gene KAL em pacientes com hipogonadismo hipogonadotrófico: correlação genótipo-fenótipo

Pesquisa de mutações ativadoras nos genes dos receptores de gonadotrofinas em tumores gonadais do estroma e cordão sexual

Análise do gene do receptor androgênico em pacientes portadores de pseudohermafroditismo masculino por insensibilidade androgênica?. [doc.48]
Data da defesa

Diagnóstico etiológico da deficiência do hormônio de crescimento: contribuição da ressonância magnética da região hipotálamo-hipofisária, resposta hormonal hipofisária e do estudo molecular dos genes GH-1 e PROP1

Diagnóstico Molecular de Distúrbios da Diferenciação Sexual

Estudo das mutações inativadoras do gene do receptor do hormônio folículo estimulante (FSHR) na falência ovariana prematura.

Análise clínica e molecular de pacientes portadores de raquitismo dependente de vitamina D tipo II

Mutações ativadoras e inativadoras do gene do receptor do hormônio luteinizante