José Roberto Kfoury Júnior.

Nowadays immunotherapy is a popular therapy approach for cancer patients. Although recent progress in cancer immunotherapy has had a significant clinical outcome, not all patients successfully respond to this therapy. Hence, understanding the molecular mechanisms of cancer immunotherapy and anti-tumor immune escape is essential in order to develop more efficient therapies. It is demonstrated that indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (IDO1) is involved in various diseases, including inflammatory diseases, cancer, diabetes, and mental disorders. IDO1 is the first rate-limiting step of the kynurenine pathway. The depletion of tryptophan and accumulation of kynurenine in the tumor microenvironment by IDO1 has been explained to cause T cell deactivation, apoptosis, and the induction of immunosuppressive programming. The aim of this project is to evaluate the role of IDO in the molecular mechanisms involved in cancer immunosuppression with a focus on tumor-associated macrophages and T lymphocytes that are critical role players in the immune response to cancer and try to shed light on the role of the IDO1 on the immunosuppression of the breast tumor microenvironment.

Atualmente, a imunoterapia é uma abordagem terapêutica popular para pacientes com câncer. Embora o progresso recente na imunoterapia do câncer tenha tido um resultado clínico significativo, nem todos os pacientes respondem com sucesso a essa terapia. Assim, a compreensão dos mecanismos moleculares da imunoterapia do câncer e do escape imune antitumoral é essencial para desenvolver terapias mais eficientes. Está demonstrado que a indoleamina-2,3-dioxigenase 1 (IDO1) está envolvida em várias doenças, incluindo doenças inflamatórias, câncer, diabetes e transtornos mentais. IDO1 é o primeiro passo e limitante da via da quinurenina. A depleção de triptofano e o acúmulo de quinurenina no microambiente tumoral por IDO1 foram explicados por causar desativação de células T, apoptose e indução de programação imunossupressora. Neste projeto, vamos nos concentrar em macrófagos associados a tumores e linfócitos T que são atores críticos na resposta imune ao câncer e tentar revelar partes desconhecidas do fenômeno de escape imune antitumoral no câncer de mama e sua relação com o IDO1 enzima.

A técnica de reprodutores substitutos permite geração de gametas alógenos pelo transplante de células germinativas indiferenciadas de um doador para as gônadas de uma espécie hospedeira distinta. Esta técnica pode ser aplicada na conservação de espécies ameaçadas de extinção ou na produção de espécies comerciais que demandam muito tempo e esforço para produção. Contudo sua eficiência ainda é restrita, com baixas taxas de gametas derivados do animal doador. Acredita-se que um processo de rejeição, não só em adultos, mas também em embriões, possa ser responsável por essa baixa eficiência. A imunossupressão no organismo hospedeiro, muito utilizada em transplantes de órgãos ou tecidos em humanos, poderia ser
uma forma de aumentar a eficiência dessa técnica. Dessa forma, este projeto visa avaliar o efeito da utilização de drogas imunossupressoras sobre a eficiência dos transplantes de células germinativas usando duas espécies de salmonídeos como modelo. Para tanto será verificado inicialmente as alterações sobre mecanismos de resposta na imunidade e gametogênese bem como os efeitos da imunossupressão sobre a colonização, proliferação e diferenciação das células germinativas transplantadas , pelas técnicas de histologia, histopatologia e RT-PCR. .

A enzima indoleamina 2,3 dioxigenase - IDO desempenha um importante papel na regulação do sistema imunológico, impedindo o estabelecimento de uma resposta imunológica no microambiente em que é expressa. Quando ativada, é responsável por catabolizar o aminoácido triptofano, privando células em proliferação deste componente e gerando metabólitos que as induzem a apoptose. Hormônios esteroides da reprodução, como o estrógeno e a progesterona, são capazes de alterar as funções imunológicas nas células, podendo levar à alteração na expressão da IDO, contudo, os mecanismos responsáveis por este efeito, ainda não são claros. Sabe-se que diversas células tumorais e leucócitos adjacentes à região do tumor podem expressar IDO e são sensíveis à ação desses hormônios. Os carcinomas mamários são os mais comuns nos cães, tendo grande expressão de IDO. Em face destas informações, este projeto busca investigar a influência do estrógeno e da progesterona na expressão da IDO em cultura de células provenientes do carcinoma mamário de cadelas, buscando identificar possíveis mecanismos envolvidos. Para isso, utilizar-se-ão culturas de células primárias de carcinoma mamário de cadelas que serão tratadas com os referidos hormônios e seus respectivos antagonistas de receptor (tamoxifeno - estrógeno e mifepristone - progesterona). A expressão da enzima será analisada pela citometria de fluxo, quantificada pela técnica de western blotting, e o mRNA será mensurado pela técnica de Real Time PCR. Dessa forma, espera-se, além da confirmação da ação desses hormônios, indicativos de possíveis vias envolvidas nesse processo, o que permitiria a modulação da expressão da IDO favorecendo o desenvolvimento de protocolos terapêuticos em condições fisiológicas ou patológicas que necessitem da resposta de células imunológicas.

Os transplantes de células germinativas e enxertos de testículo podem ser aplicados na reprodução de espécies comerciais e na conservação de espécies ameaçadas de extinção. No entanto, a maior limitação dos transplantes está na sua limitada eficiência, devido à baixa porcentagem de hospedeiros capazes de gerar gametas derivados do doador e da rejeição de enxertos de testículo alogênicos após poucas semanas de sua implantação. O sistema imunológico dos hospedeiros pode estar envolvido na baixa de eficiência dos transplantes e na rejeição dos enxertos. Desta forma, este trabalho buscou verificar se a administração de drogas imunossupressoras como o tacrolimus e ciclosporina em emulsão poderiam ser utilizados para prolongar a viabilidade de enxertos de testículo em trutas arco-íris. Na primeira parte, experimentos in vitro com leucócitos do sangue periférico demonstraram que ambos o tacrolimus e a ciclosporina impedem a proliferação celular mesmo sob estímulo proliferativo da concanavalina. Nos ensaios in vivo, ambas as doses de tacrolimus (0,5 e 1,5 mg/kg) e a mais baixa de ciclosporina (20 mg/kg) inibiram significativamente a expressão de il2 no rim cefálico três dias após a injeção. Já a dose de 40 mg/kg de ciclosporina inibiu a expressão de il2 por até sete dias após a injeção. Na segunda parte, enxertos alogênicos de testículo foram realizados em animais tratados semanalmente com emulsões de tacrolimus. As análises histológicas (coloração H.E.) e as de RT-PCR (vasa e txdnc6) demonstraram a presença de espermatogônias na primeira semana e indicaram a presença de espermátides/espermatócitos na quinta semana, respectivamente, em alguns animais do grupo tratado com a dose de 0,5 mg/kg de tracrolimus. No grupo tratado com a dose mais alta de tacrolimus (1,5 mg/kg) e no grupo controle (sem imunossupressor), células germinativas ou marcadores destas não foram detectados. Estes resultados, portanto, fazem do tacrolimus um imunossupressor promissor para utilização em enxertos alogênicos e também em transplantes de células germinativas de truta arco-íris. A administração concomitante de um outro imunossupressor conjugado ao tacrolimus (na baixa dosagem) para inibir duas ou mais vias de ativação do sistema imunológico, conforme utilizado em transplantes de órgãos em humanos, pode ser uma alternativa para otimizar os efeitos imunossupressivos nos animais receptores.

No dia-a-dia da clínica veterinária de pequenos animais, por todo o mundo, é amplamente reconhecido que o câncer de mama é a principal neoplasia que acomete fêmeas da espécie canina, estando entre os motivos mais comuns que levam os proprietários de animais de companhia a procurarem um médico veterinário. A indoleamina- 2,3 ? dioxigenase (IDO) é uma enzima expressa por diversas células do organismo e, dentre suas muitas funções, atua principalmente na regulação do sistema imune. Esta enzima atua inibindo a proliferação de linfócitos T, através do catabolismo do aminoácido triptofano e pela produção de metabolitos que são gerados a partir desta reação, os derivados da quinurenina. Estudos recentes em seres humanos e camundongos mostraram que a IDO pode ser utilizado por diversas neoplasias como um mecanismo de evasão ao sistema imune facilitando a indução, crescimento e progressão tumoral uma vez que o sistema imunológico apresenta um importante papel na resposta imune inata contra os tumores (MUNN et al.2004, OCHSENBEIN, 2005). Baseado nestes estudos fica claro que a presença e ativação da IDO têm um papel importante no desenvolvimento de algumas neoplasias sendo um dos mecanismos responsáveis pelo qual as células tumorais podem escapar da vigilância imunológica e consequentemente se proliferarem. Devido á sua relevância neste contexto, aliado á elevada incidência de neoplasia mamária em cães e á extrema carência de informação na literatura especializada, este estudo visa caracterizar a expressão da IDO nas neoplasias mamárias malignas de cães; verificando se há correlação entre a expressão desta enzima com a indução e progressão tumoral.

A indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) é uma enzima envolvida no catabolismo do triptofano e, por limitar a oferta desse aminoácido essencial, impede a proliferação de células T alo-reativas, colaborando dessa forma para a prevenção da rejeição do concepto durante a gestação. Diversos estudos têm sido feitos em placentas humanas e murinas sobre o papel da IDO neste processo. Alterações na sua expressão e atividade são relacionadas a problemas de fertilidade em humanos e mulheres que apresentaram abortos recorrentes mostraram baixa atividade da IDO. Hormônios da reprodução também participam do processo de sobrevivência do feto alogeneico, como a progesterona que bloqueia o estímulo mitogênico da proliferação de células T, modula a produção de anticorpos, favorece a produção de IL-10, etc. e o estrógeno que pode modular a resposta Th1 ou Th2 na gestação dependendo de sua concentração. Buscando compreender se existe alguma interação da ação desses hormônios e a expressão da IDO, avaliaremos pela citometria de fluxo o comportamento da expressão da IDO e do ciclo celular nas células de embriões e da placenta de ratas e camundongos fêmeas em cultivo, frente à adição de progesterona, estradiol, interferon γ, triptofano e 1 metil-triptofano.

O presente trabalho visa estudar in vitro os efeitos da administração de uma solução de fatores hepatotróficos exógenos (glicose, aminoácidos, insulina, glucagon, triiodotironina) em hepatócitos e células estreladas de fígados de ratos normais, avaliando seu metabolismo e proliferação celular. A composição da solução utilizada nesta pesquisa tem a finalidade de simular a ação de elementos que ascendem ao fígado pela veia porta, conhecida no seu conjunto como fatores hepatotróficos. Após a eutanásia, o fígado será colhido, hepatócitos e células estreladas serão cultivados isoladamente e as culturas receberão em intervalos distintos uma solução de fatores hepatotróficos, sendo que outro grupo receberá apenas solução salina. A proliferação celular e o metabolismo serão avaliados pelas técnicas de citometria de fluxo, clearence da indocianina verde e pelo método ELISA.

A placenta é um órgão transitório que se encontra em constante estresse pela alta proliferação e diferenciação celular e intensa atividade metabólica. As proteínas do choque térmico (HSPs) são expressas constitutivamente e podem ser induzidas em situações de estresse. Participam do início da resposta imune inata principalmente junto às células T. O ambiente uterino sofre uma série de alterações, incluindo mudanças das características funcionais de células imunológicas para manter a gestação. A placenta bovina expressa a HSP 60 durante toda a gestação; contudo, está é maior no primeiro terço. Para melhor entender esse fato e uma possível relação dessa com leucócitos placentários, este projeto busca esclarecer parte dessas questões focando particularmente macrófagos e linfócitos T na placenta bovina. Para tal utilizaremos as técnicas de imunofluorescência e o teste de proliferação (CFSE), além de investigar a produção das interleucinas IL-10 e INF-gama por ELISPOT. Os resultados desse projeto ajudará a melhor compreender o processo de tolerância materno-fetal.

Produção e sanidade em ruminantes adaptados ao Meio Norte do Brasil
 
 Projeto - Edital MCT/CNPq/PADCT Programa de apoio a grupos de pesquisas vinculados a programas de pós- graduação não consolidados "Casadinho"- processo nº 620145/2004-8 valor aprovado R$ 305.080,00 . Objetiva o fortalecimento de parcerias entre grupos de pesquisa vinculados ao Programa de pós-graduação em Ciência Animal da Universidade Federal do Piauí com grupos de programas consolidados (USP e UNESP - Jaboticabal/SP) com a finalidade de propiciar melhores condições para o incremento das atividades de pesquisa, elevação do nível de qualificação do pós-graduandos, verticalização e aprofundamento das linhas de investigação mediante técnicas avançadas, consolidação de estrutura laboratorial, treinamento de técnicos especializados e aprimoramento da qualidade das publicações e o aumento da produção científica. .

Questões relativas à forma-função das células trofoblásticas, sinalização de prenhêz, patologias gestacionais, transferências de substâncias através da barreira placentária, hormônios placentários, fatores genéticos relativos ao desenvolvimento embrionário, caracterização do micro ambiente uterino, placentação em bovinos clonados e angiogênese placentária ainda permanecem abertas à pesquisa constituindo claros que quando evidentes, muito poderiam contribuir para o desenvolvimento deste tema. Procurando concentrar-se no desenvolvimento embrionário, sem, entretanto desconsiderar parte do seu todo, essencial ao seu desenvolvimento (membranas fetais), e, por outro lado atentando para a dinâmica embriológica desta parte do todo o NERPA se organizou como núcleo de estudos.
O grupo firma seus propósitos no binômio eficiência reprodutiva X diálogo materno fetal, expandindo seus objetivos além da caracterização macro e microscópica da placenta cotiledonária sinepitéliocorial. O entendimento da organização subcelular e molecular dos diversos tipos de tecidos e células do trofoblasto de bovinos e bufalinos tornam-se necessário, e por que não ir além, caracterizando o próprio ambiente uterino no início da gestação, assim como, incluir técnicas genômicas relacionadas à velocidade do desenvolvimento embrionário nestes animais. Naturalmente os aspectos funcionais da barreira placentária bem como sua capacidade de transferir substâncias durante a gestação serão igualmente contemplados.
Todos estes aspectos morfofuncionais servem de sustentáculo para pensamentos que permeiam novas pesquisas em apoptose e eritrofagocitose celular do trofoblasto. Estas alterações celulares, fisiológicas ou não, também participam do processo de placentação nesse grupo de animais e podem auxiliar a resposta do paradoxo que envolve a liberação ou retenção da placenta.

Micotoxinas são metabólitos produzidos por fungos que crescem naturalmente e contaminam grãos, rações e alimentos humanos. Quando ingerida podem causar níveis variáveis de toxicidade dependendo do tipo, da quantidade de toxina, da espécie, do sexo e do estado nutricional do animal. Além disso, algumas micotoxinas, particularmente a aflatoxina tem sido descrita como importante agente carcinogênico, mutagênico, teratogênico ou causador de efeitos estrogênicos. 
	A detecção e o subseqüente controle das contaminações por aflatoxinas é realizada através de testes analíticos sensíveis e específicos. Historicamente, métodos físico-químicos como a cromatografia líquida de alta performance (HPLC), cromatografia de camada delgada (TLC) e cromatografia gasosa (GC) são os tradicionalmente utilizados para estas determinações.
	Apesar destes métodos oferecerem alto nível de reprodutibilidade, estes são onerosos, lentos, necessitam de pessoal especializado, pois utilizam-se na manipulação, reagentes químicos cancerígenos. As técnicas de ensaios imunológicos têm mostrado resultados de alta especificidade, sensibilidade, não apresentam riscos a saúde do manipulador, requerem passos simples e rápidos para o diagnóstico. Além disso, possibilitam que um número muito maior de testes com custo menor sejam realizados, levando conseqüentemente a um melhor controle de qualidade de grãos, alimentos e rações.
	Neste projeto será realizada a padronização de um kit ELISA por competição direta para detecção de aflatoxina B1, utilizando-se anticorpos monoclonais adquiridos comercialmente (FASE I) e verificar-se-á a viabilidade de produção do mesmo para comercialização. 
	O objetivo final do projeto será a padronização deste kit ELISA com anticorpos monoclonais (FASE II) produzidos no Brasil, tornando esta tecnologia acessível a um maior número de consumidores.

O gado zebu (Bos indicus) representa um dos poucos grupos animais que se consegue criar em condições extensivas e mesmo assim obter resultados zootécnicos satisfatórios. Por possuírem características rústicas, indispensáveis à sua adaptação e desenvolvimento às condições de clima e vegetação próprias dos trópicos, as raças zebuínas, como o gir, o guzerá e principalmente o nelore, compõem os pilares de todo o rebanho nacional (85%). Tal fato mostra claramente a importância econômica dessas espécies na pecuária brasileira.
Uma das enfermidades reprodutivas que mais afetam os bovinos no período pós-parto é a retenção de placenta. É uma condição patológica onde parte ou a totalidade das membranas fetais ficam retidas no útero da vaca, levando à vários prejuízos, tais como o comprometimento da vida reprodutiva da vaca (aumento do intervalo médio entre os partos, quebra na produção leiteira, etc.) e a infecções secundárias como a metríte, que podem levar o animal à morte nos casos de septicemia e toxemia, trazendo desta forma, revéses econômicos significativos.
Apesar de serem conhecidos os aspectos etiológicos, muitas vezes controversos, ligados à retenção placentária, os mecanismos envolvidos nesse quadro patológico ainda não estão suficientemente esclarecidos. Mudanças histológicas e fisiológicas no placentônio em casos de liberação normal ou de retenção de placenta precisam ser determinadas, para melhor compreensão do mecanismo do parto e da própria retenção. 
	O estudo das características e funções dos tipos celulares do trofoblasto (células gigantes, células binucleadas, etc) podem completar a lacuna na compreensão destes mecanismos, e a produção e utilização de anticorpos monoclonais específicos para estes vários tipos celulares constitui-se uma ferramenta de suma importância, uma vez que permitirá uma melhor caracterização dessas células, além de um estudo muito mais detalhado de suas funções.