Suely Vilela.

Adquirir infraestrutura de equipamentos tais como aparelhos de ar condicionado, no breaks, computadores, entre outros, para a manutenção dos equipamentos de pesquisa do laboratório permitindo assim, o desenvolvimento de projetos de pesquisa e formação de recursos humanos.

Edital de Apoio a Propostas Estratégicas para Infraestrutura de Pesquisa da USP visando o financiamento da manutenção corretiva de dois equipamentos da Central multiusuário Pusesin, que são utilizados para o desenvolvimento de metodologias de projetos de pesquisa da FCFRP, outras unidades da usp e empresas privadas.

Bioprospectar compostos de baixa massa molecular com atividade antitumoral em serpentes do gênero Bothrops, isolando-os e caracterizando-os funcional e estruturalmente, visando à descoberta de moléculas candidatas à geração de novas drogas com potencial aplicação terapêutica no tratamento de diferentes tipos de câncer.

Isolar e caracterizar funcional e estruturalmente compostos de baixa massa molecular de peçonhas de serpentes do gênero Bothrops moojeni e avaliar a atividade antitumoral em leucêmias, e o seu mecanismo de ação.

Isolar e caracterizar funcional e estruturalmente compostos de baixo peso molecular com atividade antitumoral da peçonha da serpente B. jararacussu

A central multiusuário está sediada na Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto da USP, no laboratório de toxinologia, sob minha responsabilidade, e é a instalação de apoio à pesquisa que congrega equipamentos e que oferece serviços aos usuários executados por técnicos especialistas/ou pelo próprio usuário após treinamento, com o objetivo de otimizar o uso desses equipamentos.

Bioprospectar compostos de baixa massa molecular em peçonhas de serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus e avaliar a sua atividade antitumoral. Isolar e caracterizar funcional e estruturalmente esses compostos

Aquisição de Sistema de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, Shimadzu Prominence e acessórios.
Valor do equipamento - US$ 46.160,10 - Provisão para Importação US$ 6.924,01. 
Processo FAPESP 2018/23389-4. 
Natureza: Pesquisa.

Chamada: Universal 01/2016 - Valor: R$ 80.000,00Processo: 401093/2016-6

A sepse, ou infecção generalizada, é uma síndrome caracterizada por um conjunto de manifestações graves em todo o organismo, causada por infecção, por agentes patogênicos, como bactérias (gram-positivas ou gram-negativas) e fungos. Dentre os principais componentes bacterianos responsáveis por desencadear o processo inflamatório na sepse, podemos citar o lipopolissacarídeo (LPS), responsável pelo reconhecimento e ativação de leucócitos e, consequentemente, induzindo a expressão de citocinas pró inflamatórias como TNF-± e IL-1² e dando início ao processo inflamatório (COHEN, 2002). A crotoxina (CTX) é o principal componente presente na peçonha de serpentes do gênero Crotalus, sendo uma fosfolipase A2 (PLA2) (SAMPAIO et al., 2010). Estudos recentes evidenciaram que a CTX apresenta uma importante atividade imunomodulatória e anti-inflamatória observada em modelos animais de edema de pata e migração leucocitária (SAMPAIO et al., 2010). Considerando que não existem ainda trabalhos científicos que avaliem a resposta da crotoxina frente a qualquer patologia induzida por LPS, o nosso objetivo será de avaliar o comportamento da crotoxina na na resolução processo inflamatório em modelo de endotoxemia. O choque séptico será induzido pela administração de LPS em camundongos, onde serão avaliados diferentes doses e tempos de administração da crotoxina com o objetivo de avaliar a resolução do processo inflamatório. Para isso, serão avaliados parâmetros hematológicos, a partir do sangue desses animais, como contagem de leucócitos, parâmetros de coagulação (tempo de protrombina e tempo de tromboplastina parcialmente ativada) e dosagem de citocinas pró inflamatórias. Levando em consideração o uso de agentes imunomodulatórios como estratégia terapêutica para a sepse, a possível aplicação da crotoxina como agente farmacolóigico poderá auxiliar a resolução inflamatória na patologia da sepse.

Bolsa FAPESP Processo 2016/04079-9
Vigência: 01/04/2016 a 31/03/2019

O interesse pela elucidação das características químicas e funcionais de toxinas obtidas a partir de peçonhas animais não é devido somente à sua relevância no envenenamento, mas também ao seu potencial terapêutico e aplicação biotecnológica. Com o advento das técnicas "ômicas", como o transcriptômica e proteômica, foi possível não só a caracterização dessas toxinas, mas também a identificação de novos componentes de interesse biotecnológico. Entretanto, apesar da diversidade de ações fisiológicas e do potencial farmacológico apresentado pelas toxinas animais, há uma discrepância entre o número de toxinas caracterizadas e a disponibilidade de proteínas que vêm a se tornar efetivamente um medicamento. Isso se deve principalmente às limitações na obtenção de toxinas em quantidades suficientes para uma caracterização estrutural e funcional detalhada das mesmas. Desta forma, a expressão heteróloga de proteínas consiste em uma alternativa para a obtenção de moléculas para o estudo das suas características funcionais e estruturais. Diante da grande aplicabilidade das técnicas ômicas e da expressão heteróloga, o presente trabalho tem como objetivo a realização do transcriptoma da serpente Bothrops moojeni e a expressão heteróloga em sistema de Pichia pastoris de toxinas com alto potencial biotecnológico e terapêutico, dentre elas as serinoproteases. Para tanto, serão empregadas técnicas de sequenciamento de nova geração para obtenção do transcriptoma da glândula da peçonha da serpente B. moojeni. Os dados gerados serão, então, avaliados para o levantamento geral da composição de transcritos da glândula da peçonha. Após a avaliação aprofundada dos componentes da peçonha e da glândula, as toxinas que apresentarem maior impacto científico, como proteases, dentre elas serinoproteases, serão selecionadas para expressão em sistema heterólogo de P. pastoris utilizando a tecnologia do DNA recombinante. Assim, esse projeto visa não apenas a compreensão da glândula de peçonha e de seus componentes por completo, mas também a aplicação dos produtos obtidos pelas técnicas ômicas por meio da sua expressão em sistema de heterólogo. 

Bolsa FAPESP - Processo 2015/26609-7
Vigência: 01/03/2016 a 31/08/2018

As flavoenzimas L-aminoácido oxidases (LAAOs) e as fosfolipases isoladas de peçonhas de serpentes possuem um amplo espectro de atividades biológicas e farmacológicas. O objetivo do presente estudo é caracterizar e elucidar a ação imunomoduladora e os efeitos transcricionais e epigenéticos que a LAAO isolada de Bothrops moojeni e a fofolipase BthTX-I isolada de Bothrops jararacussu produzem em células NK (natural killer) cultivadas in vitro. As células NK constituem uma linhagem de linfócitos efetores cruciais para o sistema imune inato dos seres humanos, onde estão diretamente envolvidas na tumorinogênese, infecções microbianas e interação celular com células dendríticas, macrófagos, células T e células endoteliais, e ainda desenvolvem importante papel modulador, podendo limitar ou exacerbar a resposta imune. As células NK produzem, dentre outras, as citocinas FN-c, IFN-± e IFN-², TNF-± e IL-6 que estão envolvidas no recrutamento e ativação de outras células imunes efetoras, portanto inicialmente, a caracterização fenotípica conjuntamente à quantificação das citocinas avaliarão a função efetora de células NK em culturas celulares tratadas com LAAO de B. moojeni e BthTX-I de B. jararacussu. Ainda, a análise epigenômica global das células NK e a análise epigenética das regiões promotoras juntamente com a análise genômica e transcricional dos genes TNF, IL6 e IFNG auxiliará e fornecerá pistas referentes ao status, o padrão e o comportamento genético e do ambiente celular imunológico envolvidos. Dessa forma, a avaliação do padrão de resposta das células NK quando em contato com as toxinas LAAO e BthTX-I, pode contribuir na elucidação dos mecanismos de ação imunológica envolvidos e ainda auxiliar a compreensão da atividade biológica dessas enzimas.

Bolsa FAPESP Processo 2015/26901-0
Vigência: 01/04/2016 a 31/12/2016

Aquisição de Plataforma de Eletroforese Capilar para Ácidos Nucleicos e Proteínas - Labchip GXII Touch 24 electrophoresis - PerkinElmer. Valor do equipamento - US$ 109.500,00 - Provisão para Importação US$ 16.425,00 - Reserva Técnica - R$ 59.130,00.
Processo FApesp 2014/20212-5

As peçonhas de serpentes são constituídas por diversos componentes tóxicos, em sua maioria de caráter proteico, incluindo metaloproteases e fosfolipases A2 (PLA2s). Estas toxinas apresentam vários efeitos biológicos, entre eles, ações pró-inflamatórias e sobre outros processos imunológicos. Epigenética refere-se aos mecanismos que controlam a expressão gênica, sem modificar a sequência de DNA dos organismos. Uma vez que a expressão gênica pode ser modulada por padrões de metilação do DNA que sofrem influência de fatores externos como a dieta, medicamentos e toxinas, é possível que tais alterações epigenéticas estejam relacionadas à ativação ou silenciamento de determinados genes do sistema imune. Dessa forma, no presente projeto iremos trabalhar com duas enzimas previamente caracterizadas da peçonha de Bothrops atrox, uma metaloprotease da classe P-I (Batroxase) e uma fosfolipase A2 ácida (BatroxPLA2), que apresentaram efeitos imunomoduladores, como o aumento da produção de diferentes citocinas e mediadores lipídicos. Nosso objetivo será avaliar se estes efeitos acontecem sob controle de alterações epigenéticas nos genes relacionados à resposta imune, incluindo mecanismos de ativação e silenciamento gênico. Os resultados obtidos neste trabalho trarão avanços científicos para a melhor compreensão dos efeitos ainda não explorados de toxinas animais sobre processos epigenéticos que culminem em alterações no perfil proteico de células tratadas com estas moléculas, possibilitando a determinação de como estas mudanças estariam relacionadas à resposta imunológica induzida após acidentes ofídicos.

Bolsa PNPD/CAPES

Vigência: Dez/2015 a Jun/2020

Aquisição de Sistema automático de sequenciamento de proteínas e peptídeos,modelo PPSQ-33A e acessórios. Valor do equipamento - US$ 110.000,00 - Provisão de importação - US$ 16.500,00. Reserva Técnica R$ 88.000,00.Proc. FAPESP 2014/20212-5

As L-aminoácido oxidases isoladas e caracterizadas de peçonhas de serpentes (SV-LAAOs) apresentam inúmeros efeitos biológicos e farmacológicos, como indução de apoptose celular, citotoxicidade, hemorragia, hemólise, edema, atividades bactericida e antiparasitária. A CR-LAAO é uma L-aminoácido oxidase isolada da peçonha da serpente Calloselasma rhodostoma, que foi isolada e caracterizada por Ponnudurai et al. (1994). Existem vários estudos com esta proteína em relação ao aspecto estrutural e parte de sua funcionalidade. No entanto, estudos sobre os efeitos genotóxicos que essa proteína pode causar ao organismo humano, ainda não foram descritos. Para elucidar os mecanismos de ação dessa toxina sobre a instabilidade genômica será empregado o ensaio do cometa que detecta quebras de fita simples e dupla do DNA, além de sítios álcali lábeis. Os resultados obtidos poderão colaborar na elucidação dos mecanismos de ação da CR-LAAO e sua possível aplicação na área biomédica.

Bolsa FAPESP - Processo 2015/00847-9
Vigência 01/03/2015 a 28/02/2017

A coagulação intravascular disseminada (CIVD) é uma síndrome caracterizada por distúrbios da hemostasia, onde sua etiologia pode estar associada a diferentes patologias inflamatórias como a sepse. A estratégia terapêutica envolve o uso de agentes inibidores da coagulação, assim como agentes anti-inflamatórios/imunossupressores capazes de inibir o processo desencadeador das alterações de coagulação. A peçonha da serpente Crotalus durissus terrificus é conhecida por apresentar um caráter imunomodulador, sendo este atribuído ao principal componente presente na peçonha: a crotoxina (CTX). Estudos têm mostrado que essa neurotoxina, composta por uma subunidade fosfolipase A2 básica cataliticamente ativa e uma subunidade cataliticamente inativa ácida (crotapotina), é responsável por induzir um comportamento anti-inflamatório/imunossupressor em modelos experimentais in vivo e in vitro. Considerando esses dados, o objetivo do presente projeto consiste em avaliar o potencial imunomodulador da CTX na síndrome de CIVD em modelo de endotoxemia. O presente estudo também tem como objetivo estudar o possível mecanismo de ação desta toxina, avaliando o envolvimento de (I) mediadores lipídicos e (II) do eixo neuroimune na ação anti-inflamatória induzida pela CTX. A CIVD será induzida em camundongos pela administração de lipopolissacarídeo (LPS). A CTX será administrada em diferentes tempos e doses, previamente e/ou posteriormente à administração do LPS, onde a resposta será avaliada pela análise dos parâmetros hemostáticos, hematológicos e inflamatórios. Para entender o mecanismo de ação da CTX, o envolvimento do eixo neuroimune será avaliado pela: (A) participação do sistema nervoso autônomo através das vias de transmissão colinérgica e adrenérgica; (B) e pela ativação do eixo neuroendócrino hipotálamo-pituitária-adrenal (HPA) pela participação de corticosterona. O envolvimento de mediadores lipídicos será avaliada pela capacidade da CTX em induzir a produção de eicosanóides e identificar o mecanismo de ação destes lipídeos na resolução da CIVD. Em resumo, o presente projeto visa avaliar e entender o mecanismo da CTX na resolução da CIVD, sendo os dados gerados a partir desse estudo de grande importância para o melhor entendimento do mecanismo de ação dessa neurotoxina, além de uma possível aplicação terapêutica em distúrbios de origem inflamatória. 

Bolsa FAPESP 2015/06290-6
Vigência: 01/06/2015 a 31/01/2019

BOLSA PRODUTIVIDADE CNPq 1 B - Processo n. 304754/2014-5
Valor Bolsa R$ 67.200,00
Taxa de Bancada: R$52.800,00
Início: 02/2015 - Término 01/2019

As L-aminoácido oxidases isoladas e caracterizadas de peçonhas de serpentes (SV-LAAOs) tornaram-se importantes candidatas para modelos no desenvolvimento de novos fármacos e ferramentas biológicas. Estudos têm demonstrado que as SV-LAAOs, isoladas de diferentes gêneros de serpentes, são capazes de promover alterações no metabolismo de células cancerosas, como a indução de apoptose pela ativação de diferentes vias desse processo. Esse efeito farmacológico pode ser explicado, parcialmente, pela geração do peróxido de hidrogênio formado durante o ciclo catalítico das LAAOs. No entanto, dados relacionados aos possíveis efeitos genotóxicos e mutagênicos que essas proteínas de peçonhas podem causar às células humanas são muito escassos. O principal objetivo desse projeto é a identificação do perigo genômico que as LAAOs de Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO), Bothrops jararaca (BjarLAAO-I) e Crotalus durissus terrificus possam oferecer às células humanas. Para isso, será investigada a capacidade dessas enzimas de causarem danos genotóxicos e mutagênicos em células humanas HepG2 e PBMC, utilizando ensaios in vitro que quantificam os danos gerados no DNA e nos cromossomos dessas células (ensaios do cometa e do micronúcleo). Além disso, vamos avaliar se o tratamento com diferentes concentrações das SV-LAAOs é capaz de induzir a ativação das vias de reparo do DNA, detectando a expressão de genes envolvidos nesse mecanismo. Esses dados serão muito importantes para o direcionamento de nossas pesquisas em busca do desenvolvimento de novos fármacos antitumorais mais eficazes ou mesmo coadjuvantes no tratamento de diferentes tipos de câncer.

Bolsa FAPESP - Processo 2015/00740-0
Vigência: 01/05/2015 a 31/01/2019

As peçonhas animais constituem uma rica fonte de substâncias farmacologicamente ativas. Essas moléculas, denominadas toxinas, atuam de forma isolada ou sinérgica, podendo se ligar a diferentes receptores celulares e/ou interferir em vias metabólicas fundamentais para a viabilidade celular, causando danos locais, sistêmicos e até fatais na presa ou vítima. A exploração dos mecanismos de ação das toxinas tem se mostrado relevante, não só por fornecer a base molecular envolvida no mecanismo de toxicidade dessas moléculas, como também por possibilitar a aplicação de toxinas no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Além disso, toxinas animais são valiosas ferramentas na elucidação de diversas vias e processos metabólicos envolvidos em diversos sistemas fisiológicos. Dentro desse contexto, a presente proposta visa, por meio da aplicação de abordagens modernas de caracterização estrutural e funcional, contribuir para o mapeamento de novos componentes de diferentes peçonhas de serpentes, bem como o estudo de inibidores plasmáticos desses animais. Explorando peçonhas de diferentes serpentes, nossos estudos focarão na caracterização de moléculas (proteínas ou peptídeos) que apresentarem ação sobre a hemostasia, apoptose celular, estabilidade genômica e processos inflamatórios, ou efeito imunomodulatório, neuroprotetor, antiparasitário e antitumoral. A aplicação de ensaios biológicos bem estabelecidos, associada ao uso de ferramentas de biologia molecular e de caracterização bioquímica, biofísica e estrutural, será utilizada para a realização dos estudos de correlação de estrutura e função, visando não somente elucidar o mecanismo de toxicidade de novos componentes das peçonhas estudadas, como também possibilitar a exploração do potencial terapêutico das toxinas no desenvolvimento e produção de novos fármacos.Processo número: 2011/23236-4Valor: R$ 1.872.725,30 - US$ 1.340.079,79Início: 01/02/2014 - 31/01/2019

As peçonhas de serpentes representam combinações únicas de enzimas, peptídeos e proteínas não-enzimáticas especializadas em agir no sistema vital da presa ou vítima. As ações dessas proteínas presentes na peçonha induzem um amplo espectro de efeitos desde distúrbios da coagulação, hemorragias, necrose e uma reação inflamatória a qual, entre outras características, envolve extravasamento de plasma. A composição do fluido no local da lesão é influenciada pelos acontecimentos patológicos e inflamatórios que ocorrem nos tecidos afetados, tais como a liberação de componentes citosólicos secundários aos danos celulares, a degradação de proteínas da matriz celular e extracelular por proteases presentes nos exsudados e geração de diversos mediadores inflamatórios. Por sua vez, a composição do exsudato inflamatório também pode influenciar os eventos reparadores e regenerativos que ocorrem nos tecidos, demostrando variações na composição dos exsudados no local da ferida. Tendo em vista a grande diversidade de ações fisiológicas dessas toxinas, há atualmente um grande interesse biotecnológico e farmacológico nesses produtos naturais buscando alternativas mais efetivas para o tratamento das vítimas de acidentes ofídicos como o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Sendo assim, o atual projeto tem o objetivo de investigar o papel de toxinas isoladas de peçonhas de serpentes na resposta inflamatória por meio de metodologias para avaliação de recrutamento celular, contagem de células no exsudato peritoneal, extravasamento protéico, determinação de citocinas, leucotrienos e prostaglandinas, ativação do sistema complemento (por meio de metodologias para a investigação do mecanismo de ação das toxinas sobre as vias de ativação e sobre componentes específicos do sistema complemento) e a identificação de biomarcadores relacionados ao processo inflamatório através de técnicas proteômicas. Para os experimentos serão utilizados toxinas isoladas da peçonha de serpente Bothrops alternatus. Os resultados obtidos neste trabalho trarão informações valiosas para a compreensão do mecanismo de ação destas toxinas nos processos inflamatórios induzidos após envenenamento botrópico, bem como instrumentos científicos para o desenvolvimento de novos fármacos com ação direcionada. 

Bolsa CAPES
Vigência 2013-2015

As peçonhas de serpentes são misturas complexas de componentes inorgânicos e orgânicos, sendo compostas principalmente por proteínas e peptídeos. Dentre seus componentes tóxicos estão as metaloproteases, enzimas responsáveis por diversos efeitos locais e sistêmicos, como hemorragia, mionecrose, lesões de pele, inflamação e ativação do sistema complemento. Outro componente tóxico são as fosfolipases A2 (PLA2s), que atuam hidroliticamente sobre fosfolipídios de membrana e podem apresentar efeitos miotóxicos, cardiotóxicos, neurotóxicos, hemolíticos e inflamatórios. O presente projeto tem como objetivo a avaliação dos efeitos isolados e sinérgicos de duas enzimas previamente isoladas e parcialmente caracterizadas da peçonha de Bothrops atrox (uma metaloprotease da classe P-I, denominada Batroxase, e uma fosfolipase A2 ácida, denominada BaPLA2-IV) sobre o sistema complemento e o processo inflamatório. Os resultados obtidos neste trabalho trarão avanços científicos para a compreensão dos efeitos ainda pouco estudados destas classes de enzimas sobre processos inflamatórios induzidos após envenenamentos botrópicos. De acordo com estes dados, poderemos sugerir possíveis ações destas toxinas em relação a mudanças epigenéticas que culminem em alterações no perfil proteico das células estudadas, possibilitando uma possível renovação da bolsa de estudo para a determinação de como estas mudanças estariam relacionadas à resposta imunológica induzida após o acidente ofídio.

Bolsa FAPESP, Proc. nº 2012/11963-1 
Vigência: 2013-2015

O grupo de pesquisadores associado ao desenvolvimento de projetos de pesquisa vinculados ao NAP-TOXAN-USP e ao Projeto temático FAPESP ?Toxinas animais nativas e recombinantes: Análise funcional, estrutural e molecular? (Proc. n. 2011/23236-4) busca neste momento, apoio da Pró- Reitoria de pesquisa da USP para financiar a melhoria da infraestrutura dos laboratórios associados aos projetos mencionados anteriormente. Este apoio é essencial e meritório tendo em vista a contrapartida expressiva deste grupo de pesquisadores seja, em aporte financeiro para projetos de pesquisa, seja para a formação de recursos humanos ou parque de equipamentos dos laboratórios envolvidos na presente proposta. Qualquer que seja a contrapartida a ser considerada, este grupo possui contribuição expressiva e merece ser apoiado. O presente projeto visa apoiar a melhoria da infraestrutura dos laboratórios associados aos projetos anteriormente mencionados e é essencial para o sucesso dos referidos projetos. A melhoria da infraestrutura consiste em:- Ampliar 67,25 m2 no laboratório de toxinologia da FCFRP-USP, - Reformar os laboratórios de Inflamação, Imunologia das Parasitoses e Epigenética, e de imunologia,- Adquirir mobiliário (armários, bancadas e cadeiras) para os laboratórios associados;- Adquirir aparelhos de ar condicionado para os laboratórios associados; - Reparar equipamentos de uso rotineiro dos laboratórios associados e,- Adquirir computadores para alunos, docentes e equipamentos, para os referidos laboratórios. Estas melhorias são essenciais para o aperfeiçoamento da infraestrutura dos laboratórios associados ao NAP- TOXAN-USP e Projeto temático fapesp e impactarão sobremaneira nos resultados das pesquisas desenvolvidas nos referidos laboratórios.

Valor: R$ 597.241,27

Peçonhas e venenos animais são constituídas por uma grande variedade de substâncias com efeitos tóxicos, que podem atuar de forma isolada ou sinérgica, causando diversos tipos de danos aos seres afetados. O interesse pelo estudo das características químicas e funcionais de toxinas isoladas destas substâncias não é somente devido à relevância no envenenamento, mas também pelo seu potencial como fonte de moléculas bioativas que podem ser utilizadas como modelo de novos fármacos para o tratamento de diversos processos patológicos. Devido à importância da coagulação sanguínea e agregação plaquetária nas doenças cardiovasculares e cerebrovasculares, proteínas provenientes de venenos e peçonhas de cobras, que podem interferir nesses processos têm recebido considerável atenção nos últimos anos. A batroxase, uma metaloproteinase isolada da peçonha da cobra Bothrops atrox (Pará), foi recentemente purificada e bioquimicamente caracterizada em nosso laboratório. A batroxase apresentou ação antitrombótica e trombolítica in vitro, por ser capaz de degradar componentes da cascata de coagulação como fibrinogênio e fibrina. Este projeto visa a investigação da atividade da batroxase sobre a hemostasia de ratos, analisando sua atividade trombolítica e antitrombótica, em comparação com drogas clinicamente relevantes como tPA e heparina, respectivamente, em dois modelos de trombose: arterial e venosa. Além disso iremos observar a influência da batroxase sobre a pressão arterial, frequência cardíaca e medidas de coagulação dos animais estudados. Com o início da caracterização funcional da batroxase, poderemos iniciar a exploração do potencial terapêutico dessa toxina animal para o futuro desenvolvimento e produção de novos fármacos.

Bolsa FAPESP processo 2012/21569-9
Vigência 2013-2017

Mionecrose é uma importante complicação resultante de envenenamentos por serpentes e, em casos graves, pode levar a sequelas, como a perda de tecido ou amputação do membro. As fosfolipases A2 constituem um dos principais componentes das peçonhas de serpentes do gênero Bothrops e têm sido estudadas principalmente devido aos diversos efeitos fisiopatológicos em que está envolvida, principalmente a miotoxicidade. É conhecido na literatura que existem diversos inibidores naturais de fosfolipases A2 e miotoxinas de origem animal. Os inibidores de fosfolipases A2 isolados e caracterizados de plasmas e/ou soros de serpentes são denominados de PLIs e tornaram-se importantes alvos de pesquisa, devido às suas possíveis aplicações biotecnológicas, na busca de novos fármacos de interesse na clínica-médica e científica. O objetivo deste projeto é realizar a caracterização bioquímica e funcional de um inibidor de fosfolipases A2 do tipo α, da serpente Bothrops alternatus em sua forma recombinante. Para tanto, será realizado: 1- Indução e purificação de um alfa inibidor recombinante, em sistema heterólogo Pichia pastoris, denominado rBaltMIP; 2- Caracterização bioquímica deste inibidor; 3- Caracterização funcional e propriedades inibitórias (atividades enzimáticas, farmacológicas e especificação de inibição de Fosfolipases e fosfolipases A2 homólogas; além de 4- Caracterização do potencial imunogênico do rBaltMIP. Desta forma, novas informações em relação ao mecanismo de ação desses inibidores poderão ser conhecidas, na tentativa de melhor entender a aplicação destes, como novo modelo terapêutico com ação antiofídica na neutralização de diferentes tipos de PLA2s, na suplementação da soroterapia convencional e também na interação molecular com PLA2s.
Bolsa CAPES
2013/2015