Camila Squarzoni Dale.

A proteólise limitada de certas proteínas leva à liberação de peptídeos opióides endógenos. As hemorfinas, derivadas da hemoglobina, pertencem a este grupo e têm várias atividades biológicas, como efeitos sobre a aprendizagem espacial e hipotensão transitória. Além disso, vários relatos apontam que os peptídeos derivados da hemoglobina como hemorfinas e hemopressinas têm um efeito antinociceptivo, pela atividade de modulação de receptores acoplados a proteínas G (GPCRs). Recentemente foi caracterizado um novo fragmento bioativo da hemoglobina que se liga à thimet-oligopeptidase (E.C. 3.4.24.15; EP24.15), denominado peptídeo AGH (AGHLDDLPGASAL). Dados preliminares apontaram que o AGH inibiu respostas de hipernocicepção periféricas mediada preferencialmente por receptores opióides do tipo µ (MOR). O presente projeto tem por objetivo a caracterização do efeito antinociceptivo do AGH em modelos de sensibilidade dolorosa, bem como seu possível efeito anti-inflamatório. Além disso, é objetivo deste trabalho identificar o possível envolvimento de receptores canabióides, endocanabinóides e opióides endógenos envolvidos no efeito antinociceptivo do AGH. Ainda, avaliar se este peptídeo é capaz de desenvolver o fenômeno de tolerância, dependência física e ansiedade.

A neuropatia periférica causada por diabetes mellitus é uma das complicações mais comuns do diabetes atingindo cerca de 50% dos pacientes portadores da doença. Um dos sintomas mais proeminentes desta neuropatia é o desenvolvimento da dor que envolve as extremidades e ocorre como uma resposta exagerada tanto para estímulos nocivos (hiperalgesia) quanto para estímulos leves ou não dolorosos (alodínia). Os mecanismos celulares envolvidos nesta patologia envolvem múltiplos fatores, sendo ainda pouco compreendidos. O tratamento da dor neuropática associada à neuropatia diabética é inadequado e insatisfatório. Uma das opções terapêuticas que vem ganhando aceitação clínica é o uso de compostos moduladores de receptores canabinóides. Dados obtidos por nosso grupo demonstram que a hemopressina, um agonista inverso de receptores CB1, inibe a resposta nociceptiva de ratos em modelo de dor neuropática. Este projeto visa identificar o potencial terapêutico do tratamento com hemopressina sobre a dor neuropática em modelo de diabetes induzida por esptreptozotocina em camundongos. Para tanto será verificado o efeito da hemopressina sobre a sensibilidade dolorosa dos animais em modelos in vivo de avaliação da sensibilidade dolorosa. Para compreensão dos mecanismos envolvidos na inibição da dor serão avaliados parâmetros histológicos e bioquímicos de regeneração neuronal. A ativação de células da glia bem como a expressão de receptores CB1 será realizada em ensaios in vitro de imuno-histoquimica, imunobloting e ELISA em slice, os quais sinalizarão o grau de síntese protéica, bem como os possíveis receptores envolvidos, fornecendo dados dos efeitos locais e de circuitos à distância do efeito da hemopressina. Os dados obtidos permitirão a elucidação da eficácia de um peptídeo agindo diretamente em receptores CB1, proporcionando ferramentas adicionais para a compreensão da modulação do sistema endocanabinóide, bem como o descobrimento de novas estratégias terapêuticas eficazes no tratamento de patologias envolvendo receptores canabinóides.

A dor neuropática é considerada uma patologia, pois a percepção dolorosa é desproporcionalmente exagerada, podendo ser evocada por estímulos inócuos ou ser gerada espontaneamente, perdendo o caráter de alerta da dor fisiológica. Além de ter a gênese ligada a lesões óbvias do Sistema Nervoso (SN), a dor neuropática é o sintoma principal de algumas síndromes complexas e virtualmente ausentes de lesão no tecido nervoso, que por esta razão vêm sendo agrupadas sob a denominação de Dor Disfuncional. A Fibromialgia e a Síndrome Dolorosa Regional Complexa-tipo I (SDCR-I) são duas integrantes deste grupo com considerável prevalência na população. Enquanto o conhecimento sobre a dor neuropática avançou nos últimos anos, a ausência de modelos para o estudo da dor disfuncional dificultou o crescimento proporcional no entendimento de seus mecanismos. Similarmente à dor neuropática de diversas origens, as síndromes dolorosas complexas não possuem tratamento específico sendo geralmente tratadas com a mesma classe de drogas utilizadas para outros tipos de dor crônica. Da mesma forma, grande parcela da população acometida por estas síndromes apresentam-se refratárias à terapêutica farmacológica. Uma alternativa que vem ganhando atenção nos últimos anos é a estimulação elétrica do córtex motor (ECM). Esta abordagem tem obtido resultados animadores no tratamento da dor neuropática em pacientes refratários a outros tipos de tratamentos. Embora os mecanismos envolvidos na analgesia induzida pela ECM sejam ainda pouco conhecidos, seu efeito provavelmente está vinculado à modulação da plasticidade sináptica em estruturas neurais que compõem o sistema nociceptivo. Importantes elementos dos fenômenos neuroplásticos que vêm sendo extensivamente estudados são os fatores tróficos da família das neurotrofinas, dentre as quais se destaca BDNF (brain-derived neurotrophic factor). A atividade desta neurotrofina, através de seu receptor (TrkB), desencadeia diversas cascatas de sinalização que culminam com efeitos rápidos através da modulação de canais iônicos, e com efeitos tardios através da ativação de fatores de transcrição como, por exemplo, CREB. O potencial terapêutico das neurotrofinas levou a descoberta recente de novos integrantes desta família de fatores tróficos, destacando-se MANF (mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor) e CDNF (cerebral dopamine neurotrophic factor) por sua distribuição aparentemente restrita ao SNC e seu papel na proteção e restauração de neurônios dopaminérgicos após lesão. Devido à importância dos neurônios dopaminérgicos presentes na circuitaria associada ao córtex motor, bem como à sua presença em estruturas envolvidas com o processamento dos aspectos afetivos da dor, este trabalho tem por objetivo estudar a influência da estimulação elétrica do córtex motor sobre a expressão destas neurotrofinas em estruturas do sistema nociceptivo, bem como seu provável efeito neuroplástico em modelos animais de fibromialgia e SDCR-I. Para isso, o modelo experimental de fibromialgia será induzido pela administração sub-crônica de reserpina e o modelo de SDCR-I através da indução prolongada de isquemia seguida de reperfusão da pata posterior de ratos. A estimulação elétrica do córtex motor será transdural. Os níveis das proteínas (BDNF, MANF, CDNF, CREB e TrkB) serão determinados por western blott e a expressão gênica de canais iônicos será determinada por real-time PCR nas seguintes estruturas: Tálamo, Substância Cinzenta Periaquedutal, Córtex Cingulado Anterior e Medula Espinhal. Dessa forma, procuramos entender o papel de alguns fatores neurotróficos e sua sinalização celular sobre os mecanismos envolvidos no efeito analgésico de ECM.