Vitor Marcel Faça.

O proteôma é um sistema multidimensional e altamente dinâmico, no qual cada proteína apresenta várias propriedades interconectadas, que conjuntamente representam o fenótipo de uma célula ou organismo. A medida precisa destas propriedades é algo particularmente desafiador devido a diversidade e dinâmica das proteínas. Com os avanços em espectrometria de massas voltada ao estudo de proteômas, várias medidas de abundância, localização celular, síntese/degradação, modificações pós-traducionais, etc, começam a ser analisadas de maneira integrada, permitindo uma melhor compreensão de processos fisiológicos e celulares. Especificamente, a localização subcelular de proteínas e o seu tráfico entre subcompartimentos representam fatores fundamentais para a correta função das mesmas, pois a localização aberrante de proteínas contribui para a patogênese de diversas doenças humanas, entre elas o câncer. Em várias situações, esta localização aberrante está associada a presença de modificações pós-traducionais e/ou de interações proteína-proteína não comuns. Portanto, o estudo proteômico multidimensional é uma ferramenta importante para a compreensão de mecanismos patogênicos. Neste contexto, o presente projeto objetiva avaliar quantitativamente alterações na localização de proteínas, bem como as potenciais modificações pós-traducionais responsáveis por estas alterações, associadas ao processo de metástase do câncer. Para tal, serão utilizados modelos de indução da transição epitélio-mesenquimal (EMT) em linhagens de adenocarcinoma já estabelecidos em nosso grupo para representar a progressão e metástase do câncer. As alterações multidimensionais do proteôma serão avaliadas pela combinação de métodos de fracionamento subcelular e proteômica dirigida, a fim de gerar perfis de correlação proteica (PCPs), possibilitando uma análise quantitativa, temporal e, consequentemente, de processos de transporte e translocação entre subcompartimentos celulares. A inibição funcional ou knockout/knockdown de proteínas-alvo permitirá validar o papel da alteração de localização subcelular na regulação de processos biológicos importantes para a EMT. Este projeto promove, portanto, além do desenvolvimento de métodos proteômicos multidimensionais modernos para análise de mecanismos celulares complexos, a verificação e estudo de processos potencialmente relevantes para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para detectar e prevenir a metástase do câncer.

O projeto do Centro de Terapia Celular (CTC) tem como foco a realização de pesquisas avançadas, básicas e aplicadas com células-tronco (CT). O CTC congrega 9 pesquisadores principais (Pls) com reconhecida liderança nesta área no Brasil, a equipe se complementa com a participação de 20 pesquisadores associados e 10 colaboradores estrangeiros. A atual proposta continua e expande a experiência adquirida pelo grupo no projeto CEPID em vigor, tanto no aspecto científico: como nos aspectos de disseminação do conhecimento e de transferência tecnológica para a sociedade, como pode ser verificado no sítio: http://ctc.fmrp.usp.br. O projeto científico compreende um ambicioso programa de pesquisa multidisciplinar que objetiva estudar aspectos moleculares, celulares e biológicos das CT normais e patológicas e avaliar, criticamente e o seu papel terapêutico. Os estudos serão conduzidos com CT pluripotentes (CT Embrionária e CT de pluripotência induzida) e CT somáticas (CT Hematopoética, CT Mesenquimal e CP Endotelial). No território das CTE pretendemos a geração de linhagens: brasileiras que possam ser expandidas e usadas em protocolos pré-clínicos e clínicos, bem como contribuir para o, entendimento dos mecanismos da pluripotência. Serão geradas iPSCs derivadas de doentes com Disceratose Congênita: Anemia de Fanconi, Hemofilia A e Doença de Parkinson com o objetivo de entender mecanismos envolvidos na patologia. Na manutenção da pluripotência e no processo de diferenciação celular. No CT Hematopoéticas serão derivadas de CTEs e de iPSCs e estabelecidas linhagens celulares tanto de CT normais como leucêmicas para os estudos dos mecanismos envolvidos no controle da hematopoese normal e neoplásica. Modelos animais transgênicos de leucemia promielocítica aguda serão gerados e usados para estudos básicos e pré-clínicos. No CT do Câncer serão estudadas tendo como foco os mecanismos de trans1o Epitélio-Mesenquimal e Endotélio-Mesenquimal (EMT e EndMT) . Estes mecanismos também serão estudados no contex to d2 reprogramação celular e na geração de CT. Na arena clínica serão realizados ensaios clínicos usando CT mesenquimais no tratamento do diabetes insulino-dependente dos tipos 1 e 2, da Anemia Aplástica grave adquirida refratária, na prevenção da Doença do Enxerto contra o Hospedeiro (DECH) aguda e crônica e da falha de enxertia no transplante alogênico haploidêntico. Por fim, serão desenvolvidos processos de produção de CT em grande escala em condições GMP para permitir o seu uso.

A metástase é responsável pela maioria das mortes causadas por câncer. Assim, os métodos mais efetivos para melhoria dos índices de morbidade e mortalidade por câncer são a detecção precoce, prevenção e tratamento da metástase. Utilizando-se do fenômeno de transição epitelial-mesenquimal (EMT) como modelo, que é ativado durante a progressão e metástase de inúmeras formas de cânceres do tipo epitelial, é proposto o estudo dos complexos mecanismos moleculares modulados ao nível de proteínas e em suas modificações pós-traducionais, utilizando-se diversas abordagens proteômicas modernas e de bioinformática. Neste projeto, serão identificados proteínas ou painéis de proteína com real valor para extensa validação clínica quanto ao potencial de serem utilizados como alvos para o desenvolvimento biotecnológico de novas terapias e/ou métodos de diagnóstico do câncer metastático.

Produção de anticorpos monoclonais com novo potencial imunoterapêutico para o controle do câncer metastático de origem epitelial.