Rubens Paes de Arruda.

Uma das chaves para a elevação do rendimento dos sistemas de produção pecuária é o incremento da eficiência reprodutiva, a qual pode ser alcançada, dentre alguns fatores, pela redução da idade de entrada dos animais em reprodução. Para isso, um ambiente adequado é crucial para o desenvolvimento sexual e expressão máxima do potencial genético dos animais. Sabe-se que animais submetidos ao estresse calórico tornam-se mais susceptíveis a alterações em suas funções fisiológicas, o que pode impactar negativamente no seu desenvolvimento e início da atividade reprodutiva. Em ambiente tropical, os sistemas de Integração Lavoura-Pecuária-Floresta (iLPF), ricos em áreas sombreadas, têm se mostrado eficientes para incrementar a ambiência e o desempenho de bovinos. Neste sentido, o presente projeto terá como objetivo avaliar as características endócrinas, fisiológicas e reprodutivas, inclusive a puberdade, de tourinhos das raças Nelore (Bos indicus) e Canchim (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus) mantidos a pasto em diferentes condições microclimáticas em ambiente tropical, quando o sistema de Integração Lavoura-Pecuária-Floresta é adotado como estratégia de manejo para produção de touros jovens. O estudo será desenvolvido por uma equipe multidisciplinar que conta com integrantes da Universidade de São Paulo, da Embrapa Pecuária Sudeste, da Universidade Federal Fluminense e da Universidade de Évora, Portugal..

A puberdade é um período em que ocorrem diversos processos e modificaçõesno organismo que vão culminar com a manifestação da competência reprodutiva. Aseleção de touros para a precocidade sexual é um objetivo tanto de produtores como depesquisadores, uma vez que permitiria a antecipação na introdução de animais de maiormérito genético no manejo reprodutivo, aumentando a vida útil dos reprodutores e oquantitativo de seus descendentes, além de reduzir o intervalo de gerações. Aantecipação da entrada à puberdade talvez possa ser modificada durante odesenvolvimento fetal, pois há evidências epidemiológicas e experimentais indicandoque fatores ambientais podem atuar no início do desenvolvimento para moldar asrelações entre a regulação do estado de energia e a reprodução, quando adulto. Esseconceito é chamado de programação fetal, termo que se refere a qualquer estímulo oulesão durante períodos críticos da gestação que modulam o desenvolvimento fetal epromovem efeitos a longo prazo sobre o desempenho da progênie. Diante disso, oobjetivo da pesquisa é avaliar os efeitos do desmame antecipado (150 dias) econvencional (240 dias) sobre as características reprodutivas da progênie subsequentede machos da raça Nelore, gerada por fêmeas primíparas ou multíparas.

Durante o processo de criopreservação o espermatozoide passa por diversas mudanças físico-químicas, podendo ocasionar variados graus de lesões. Determinar o momento do processo de congelação pelo qual o espermatozoide está mais suscetível às injurias seria importante passo para evolução do processo de congelação e, como isso, a fertilização. O objetivo deste experimento será avaliar os efeitos do supercooling e da nucleação sobre movimento espermático por intermédio da análise da motilidade espermática pelo sistema computadorizado (CASA), a integridade da membrana plasmática, acrossomal, potencial mitocondrial, estrutura de cromatina e citoesqueleto por meio de microscopia de epifluorescência de espermatozoides equino. Para desenvolvimento do experimento, o sêmen será envasado em palhetas de 0,5mL com concentrações de 50 e 100x106 espermatozoides/palheta e submetidos à duas diferentes curvas de congelação utilizando

duas máquinas TK®3000 (TK Equipamentos para Congelação), sendo uma máquina programada para uma ?curva rápida? (-0,25°C/min de 22°C até 5°C, com período de 30 minutos para estabilização, -35°C/min de 5°C até -80°C e, -10°C/min de -80°C até -120°C) e a outra para uma ?curva lenta? (-0,25°C/min de 22°C até 5°C, com período de 30 minutos para estabilização, -15°C/min de 5°C até -80°C e, -10°C/min de -80°C até -120°C). As avaliações espermáticas serão realizadas no sêmen nos seguintes momentos: T1 = in natura diluído, T2 = 5°C, T3 = -55°C e T4 = pós-descongelação. Para realização do experimento serão utilizados 6 garanhões com 5 repetições. Os dados obtidos dos procedimentos experimentais serão analisados com auxílio do software Statistical Analysis System for Windows SAS®, versão 9.3.

O sêmen bovino apresenta diversas moléculas ainda não descritas. Dentre elas estão os microRNAs, reconhecidos como fundamentais para a fecundação e desenvolvimento embrionário inicial. Entretanto, existem poucos estudos relacionando o perfil dos miRNAs seminais e a fertilidade em bovinos. Dessa forma, este estudo pretende investigar os miRNAs presentes em espermatozoides e relacioná-los com o desenvolvimento embrionário in vitro e in vivo, e com os índices de fertilidade a campo. Três experimentos serão executados. O primeiro experimento avaliará a qualidade espermática e o perfil de miRNAs espermáticos de partidas de sêmen comerciais. Para isso, serão utilizadas três partidas de sêmen de seis touros (n=18) com diferentes taxas de fertilidade previamente comprovadas por estudos a campo. Cada partida será avaliada quanto às características da cinética espermática, integridade das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial e perfil de miRNAs dos espermatozoides. No segundo experimento as mesmas partidas serão utilizadas para a produção in vitro (PIV) e in vivo de embriões. Os dados obtidos (taxa de blastocisto e perfil de miRNAs dos embriões) serão comparados entre os grupos de alta e baixa fertilidade estabelecidos no experimento 1. Além disso, o perfil de miRNAs será comparado entre os embriões produzidos in vitro e in vivo. No terceiro experimento serão criopreservados três ejaculados de seis touros (n=18) de fertilidade desconhecida e investigado o perfil de miRNAs espermáticos e a taxa de blastocisto na PIV. Os dados dos diferentes experimentos serão submetidos à análise de variância e teste de Tukey com nível de significância de 5%. Espera-se encontrar miRNAs associados com a fertilidade criando novas ferramentas de análise de ejaculados bovinos.

A degeneração testicular é uma afecção de grande impacto na fertilidade touros no Brasil, sendo por consequência responsável por baixas taxas de prenhez. Dentre as várias causas da degeneração testicular pode-se destacar o estresse térmico causado por elevadas temperaturas. Poucas ferramentas para o correto diagnóstico e tratamento dessa condição estão elucidados e estabelecidos na literatura. Com esse intuito, o presente projeto visa aumentar a gama de ferramentas para um correto diagnóstico e estabelecer um possível tratamento para reestabelecer a produção espermática ideal. Para tal serão utilizados 16 touros Nelore divididos em 4 grupos: não insulado e não tratado (CON; n=4); insulado e não tratado (INS; n=4); não insulado e tratado (TRAT; n=4); e insulado e tratado (INSTRAT; n=4). A degeneração será induzida por colocação de bolsas insuladoras nos testículos por um período de 72 horas. Serão feitas análises clínico-reprodutivas e colheitas de sangue e sêmen uma vez por semana que se iniciarão 3 semanas antes da colocação das bolsas (S-3; S-2; S-1); nos dias da colocação (D0) e da retirada das bolsas (D+3); e durante 11 semanas após a retirada das bolsas (S+1 a S+11). A colheita de sêmen será feita por eletroejaculador. As colheitas de sangue serão feitas por punção da veia Jugular com tubo Vacutainer®. As amostras de plasma seminal serão obtidas por centrifugação de uma alíquota do ejaculado. As avaliações serão baseadas nas características clínicas-reprodutivas (frequência respiratória, temperatura corporal, temperatura testicular, consistência testicular, perímetro escrotal, hemodinâmica e homogeneidade do parênquima testicular por ultrassonografia); características seminais (volume, concentração espermática, motilidade, vigor, morfologia espermática, integridade das membranas plasmática e acrossomal, função mitocondrial, produção de espécies reativas de oxigênio e peroxidação lipídica); avaliação do fluxo sanguíneo testicular por ultrassonografia Doppler colorido (hemodinâmica testicular e do plexo pampiniforme e resistência vascular), termografia escrotal, análise bioquímica sérica e do plasma seminal [ureia, creatinina, GGT, AST, CK, fosfatase alcalina, BHB, colesterol, triglicérides, glicose, proteína total e proteínas de fase aguda (fibrinogênio, haptoglobina, transferrina e albumina)], testosterona e melatonina séricas. Além disso, serão aferidas temperatura e umidade ambiente local diária por um aparelho Data Logger. Para o tratamento com melatonina serão utilizados implantes auriculares em concentração e tempo a serem definidas em um pré-experimento

O presente trabalho tem como objetivo avaliar por meio de estudo retrospectivo, durante 10 estações de monta, os aspectos reprodutivos dos equídeos do Setor de Equideocultura da Prefeitura do Campus Fernando Costa da Universidade de São Paulo, localizado na cidade de Pirassununga, SP. Serão utilizadas 60 éguas, Puro Sangue Inglês, Brasileiro de Hipismo e mestiças com faixas etárias variando de 2 a 23 anos. Ainda, 13 garanhões e 2 jumentos. Para as análises estatísticas será utilizado o programa SAS (versão 9.3, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), onde probabilidades de P&#8804;0,05 e entre P>0,05 e < 0,10 indicarão diferenças significativas e tendências, respectivamente. Alguns dos aspectos reprodutivos avaliados serão a incidência de perda embrionária precoce entre 14 e 35 dias de gestação, número de aplicações da hCG ao longo vida reprodutiva das éguas desenvolvimento de folículos hemorrágicos anovulatórios, a presença de cistos endometriais, dentre outros.

Após a deposição do sêmen no trato reprodutivo ocorre um processo inflamatório que causa uma reação sistêmica chamada de resposta de fase aguda, caracterizada pela produção de proteínas de fase aguda. Além disso, o perfil metabólico e hormonal do animal influencia suas funções reprodutivas de modo que o estudo dos mesmos pode auxiliar na avaliação de rebanhos com diferentes índices produtivos e reprodutivos. A qualidade do sêmen utilizado na IATF é um dos pontos que interfere na fertilização. A hemodinâmica uterina é alterada de acordo com os eventos que ocorrem no organismo animal. Dessa forma, para este estudo, foram delineados 3 experimentos. O experimento 1 tem como objetivo estudar os componentes do sangue para comparar o perfil sanguíneo entre vacas que foram inseminadas ou não e verificar as alterações que ocorrem na hemodinâmica uterina de acordo com a concentração dos componentes sanguíneos. O experimento 2 foi desenvolvido com o objetivo de estudar os efeitos do sêmen de diferentes qualidades sobre os componentes do sangue e sobre a hemodinâmica uterina, e ainda a relação entre a concentração dos componentes sanguíneos e a hemodinâmica uterina. O experimento 3 tem o objetivo de comparar o perfil sanguíneo entre animais que emprenharam e que ficaram vazios e verificar as alterações que ocorrem na hemodinâmica uterina de acordo com o resultado da IATF. Serão utilizadas as mesmas amostras do experimento 2, no entanto, será realizado um estudo retrospectivo e os grupos experimentais serão divididos de acordo com o resultado da IATF (prenhe X vazia).

Estudos demonstram que uma das principais limitações para o uso do sêmen congelado equino é a alta variabilidade entre garanhões com relação a capacidade espermática em sobreviver à criopreservação. A ubiquitina é uma molécula que está envolvida em uma via de degradação de proteínas danificadas, ou com erros de síntese. Este processo ocorre na passagem do espermatozoide pelo epidídimo e está relacionado com a infertilidade no macho. Por outro lado, a coenzima Q-10 (CoQ-10), é um cofator na cadeia de transporte de elétrons na mitocôndria, essencial para a produção de energia em forma de ATP e pode ser uma alternativa para melhorar a qualidade do sêmen criopreservado equino. Levando em consideração citações acima, delineou-se dois experimentos. Em ambos serão utilizados 4 garanhões com alta resistência a congelabilidade (AC) e 4 com baixa resistência a congelabilidade (BC). Cada animal será submetido a 5 colheitas de sêmen seguidas de congelações. Experimento 1: analisará a quantidade de ubiquitina em garanhões com alta e baixa congelabilidade pela técnica de sperm-ubiquitin tag immunoassay (SUTI) e correlacionará com outros parâmetros do sêmen como características de motilidade espermática (CASA), integridades de membrana plasmática, acrossomal e potencial de membrana mitocondrial (através das sondas fluorescentes iodeto de propídeo, Hoechst 33342, JC-1 e FITC-PSA), alterações no citoesqueleto (phalloidin-FITC) e morfologia espermática (DIC). Experimento 2: o sêmen será criopreservado com a adição da CoQ-10 a 50µM enquanto a amostra controle será criopreservada somente com Botucrio®. As partidas de sêmen serão analisadas quanto às mesmas características do experimento 1, excluindo-se a técnica de SUTI e adicionando-se a função mitocondrial (DAB e sonda fluorescente Mito Traker Red®).

A transferência de embriões (TE) é uma biotecnologia amplamente utilizada na produção de equinos no Brasil, e a égua receptora exerce um papel fundamental nos resultados finais nos programas de reprodução. Alguns tratamentos têm sido preconizados tanto com objetivo de exercer ação luteotrófica, melhorando a função luteal, e com isto aumentar os níveis sistêmicos de progesterona, como o uso de drogas anti-inflamatórias, que evitam a perda da função luteal causada pela liberação de prostaglandina em processos inflamatórios prévios ou por manipulação na passagem transcervical do embrião no momento da TE. O objetivo deste estudo será investigar os efeitos do anti-inflamatório inibidor seletivo COX 2 (meloxicam) associado ao uso luteotrófico da hCG na gestação, características de corpo lúteo, fertilidade e desenvolvimento embrionário em éguas receptoras. Para isto, 60 éguas receptoras alojadas em central de reprodução serão aleatoriamente divididas em 4 grupos de 15 animais, de acordo com os seguintes tratamentos: aplicação de 5ml solução fisiológica no dia da ovulação (controle); aplicação de 2500 UI hCG no dia da ovulação; aplicação de 2500 UI hCG no dia da ovulação associado a 0,6 mg/kg de meloxicam; aplicação de 2500 UI hCG no momento da transferência do embrião associado a 0,6 mg/kg meloxicam. para as éguas gestantes.

A reprodução equina tem buscado cada vez mais maximizar a utilização do sêmen através de novas técnicas de criopreservação e inseminação artificial. Entre essas técnicas encontra-se a inseminação artificial na junção útero-tubária (IAJUT), na qual o número de espermatozoides pôde ser reduzido a um vigésimo quando comparado ao número utilizado na inseminação artificial no corpo uterino, que utiliza uma dose inseminante de 500x106 espermatozóides móveis. Por outro lado, com relação às biotécnicas aplicadas ao sêmen equino, notamos que é possível se obter taxas de prenhez satisfatórias com espermatozoide sexado de garanhão in natura e armazenado líquido refrigerado. No entanto, as taxas de prenhez alcançadas após inseminação com espermatozoide sexado congelado-descongelado vem sendo baixas. Para aplicação comercial da tecnologia, fertilidade satisfatória deve ser alcançável com espermatozoides sexados congelados. Com o propósito de maximizar a utilização do sêmen sexado, o objetivo deste trabalho é de avaliar os resultados da utilização de inseminação artificial com desvio de pipeta na junção útero-tubária com adição da pentoxifilina ao sêmen sexado criopreservado, em relação à inseminação artificial convencional.

O período pós-parto na égua é caracterizado pelo processo rápido de involução uterina e retorno da atividade ovariana (cio do potro), resultando em um estro fértil na maioria das éguas. No entanto, os processos de desenvolvimento e seleção folicular durante este período não são completamente conhecidos nos cavalos. Foi objetivo deste trabalho estudar as características do crescimento folicular e a perfusão vascular no ovário durante o período pós-parto em éguas que demonstraram comportamento estral e apresentaram ovulação precoce (<10 dias) ou tardia (&#8805; 10 dias). Dez éguas foram escaneadas diariamente desde o primeiro dia pós-parto (Dia 1) até o dia da primeira ovulação pós-parto (Dia 0). Os animais foram divididos nos grupos de ovulação precoce (n = 3) e tardia (n = 7) (intervalo médio entre parto e ovulação: 8,0 ± 0,0 e 14,7 ± 1,2 dias, respectivamente). Para exames de ultrassom, utilizou-se um instrumento Duplex B-mode e Color Doppler com uma sonda linear multi-frequência. Os dados foram analisados quanto aos principais efeitos do grupo, dia e sua interação.

A degeneração testicular pode levar à subfertilidade, infertilidade ou esterilidade do carneiro acometido. A principal causa desta enfermidade é o aumento da temperatura testicular pela disfunção na termorregulação testicular. Embora o tratamento consista na retirada do agente causador, o prognóstico dependerá do tempo de exposição ao agente agressor e do grau da lesão; desta forma, agentes que estimulam a renovação do epitélio seminífero podem contribuir para a reversão do quadro. A suplementação com vitamina A (vit. A), vitamina E (vit. E), selênio (Se) e zinco (Zn), auxilia na renovação do epitélio seminífero e na diminuição da concentração de espécies reativas de oxigênio, assim, pode ser utilizada no tratamento da degeneração testicular; por outro lado a utilização de laserterapia (LT) de baixa intensidade, que estimula a mitose celular, também poderia servir como auxiliar na reversão do quadro de degeneração testicular. O presente projeto tem o objetivo de preconizar um tratamento para a degeneração testicular em carneiros utilizando a suplementação vitamínica e mineral ou a laserterapia. Serão utilizados 24 carneiros divididos em 6 grupos de tratamentos: 1) controle: não degenerado e não tratado, 2) não degenerado e suplementado com vit. A, vit. E, Se e Zn, 3) não degenerado e submetido à LT de baixa intensidade, 4) degenerado e não tratado, 5) degenerado e suplementado com vit. A, vit. E, Se e Zn, 6) degenerado e submetido à LT de baixa intensidade. Durante o período experimental serão realizadas avaliações semanais, incluindo: exame andrológico, avaliação de temperatura testicular e retal, avaliação ultrassonográfica do parênquima (em modo-B) e vascularização testicular (em modo Doppler), mensuração da testosterona e cortisol.

A Equideocultura no Brasil vem crescendo a cada dia. Segundo a Confederação Nacional de Agricultura (CNA), em pesquisa realizada no ano de 2011, o efetivo de equinos no Brasil conta com 5,5 milhões de cabeças. O Brasil é o segundo país que mais utiliza sêmen refrigerado transportado (PAPA et al. 2005), perdendo apenas para os Estados Unidos. (CANISSO et al., 2008). Um dos fatores que pode aumentar a vulnerabilidade dos espermatozoides durante o armazenamento do sêmen é a produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) que induz danos na membrana plasmática contribuindo para perda da motilidade e/ou capacidade fertilizante (AURICH, 2005). Sendo assim, o presente estudo visa testar a adição de mioinositol, ácido transferúlico e melatonina no diluidor utilizado no processo de refrigeração, visando diminuição da produção de espécies reativas de oxigênio e consequente estresse oxidativo, com o objetivo de melhorar a motilidade e a integridade das membranas dos espermatozoides, com consequente incremento da qualidade do sêmen refrigerado, permitindo assim, que sua ampla utilização se torne cada vez mais eficiente e atinja resultados esperados tanto pelo proprietário quanto pelo médico veterinário.

Os objetivos deste trabalho são estudar os efeitos do uso de diluidor de sêmen contendo pentoxifilina sobre as características espermáticas, processo de limpeza e hemodinâmica uterina e a taxa de prenhez, tanto quanto da inseminação com sêmen de diferentes qualidades sobre a hemodinâmica uterina e a taxa de prenhez. Amostras de sêmen serão avaliadas pela associação das sondas fluorescentes: PI, FITC-PSA e JC-1 e agrupadas de acordo com o percentual de células com integridade de membrana plasmática, integridade de acrossomo e função mitocondrial (PIAIC): sêmen de alta (40 a 60% espermatozoides PIAIC) e baixa (10 a 30% espermatozoides PIAIC) qualidade. Vinte e quatro éguas serão distribuídas em seis grupos experimentais. Três grupos serão realizados em um primeiro ciclo: Grupo C (controle): não inseminado (n=8), Grupo D: infusão intrauterina somente de diluidor sem pentoxifilina (n=8) e Grupo DP: deposição de diluidor com pentoxifilina (n=8). Três grupos em um segundo ciclo (mesmas éguas): Grupo SS: sêmen de alta qualidade + diluidor sem pentoxifilina (n=8), Grupo SP: sêmen de alta qualidade + diluidor com pentoxifilina (n=8) e Grupo B: sêmen de baixa qualidade sem pentoxifilina (n=8). A hemodinâmica uterina será avaliada por ultrassonografia Doppler nos modos color e espectral. As avaliações ultrassonográficas serão realizadas em sete períodos pré-determinados: imediatamente antes da indução da ovulação (folículo e35 mm) (T-30), imediatamente antes da IA (T0), 2 (T2), 6 (T6), 12 (T12), 24 (T24) e 48 horas (T48) após IA. Doze horas após a IA será realizada a citologia endometrial. O diagnóstico de gestação será realizado 14 dias após IA. Para a análise estatística será utilizado o programa SAS versão 9.2

O puerpério é caracterizado como o período compreendido entre o parto e o retorno às funções reprodutivas normais, favoráveis ao início e manutenção de uma nova gestação. Durante este período, o útero sofre involução e os ovários mudam de um estado relativamente quiescente para um estado ativo. Sendo assim, segundo a literatura, a maioria das éguas em programas reprodutivos são éguas pós-parto, porém, apenas uma pequena parcela (<20%) das pesquisas destinadas à reprodução equina utiliza éguas nesta fase, o que demonstra a extrema importância de estudos sobre os eventos que ocorrem durante o puerpério na espécie equina, visto que, em comparação com outras fêmeas domésticas, as éguas são as únicas que possuem um curto intervalo entre o parto e a ovulação, permitindo-as iniciarem e manterem outra gestação dentro de 6 a 20 dias após o parto, favorecendo um intervalo entre partos de 12 meses, considerando uma gestação com 11 meses de duração. Além disso, até o presente momento, poucas informações foram encontradas na literatura a respeito dos eventos vasculares que ocorrem na espécie equina durante o período pós-parto. Assim, o presente experimento tem por objetivo avaliar a dinâmica ovariana e as características uterinas em éguas pós-parto, assim como os eventos vasculares ocorridos durante este período, utilizando a ultrassonografia Doppler. Para isso, serão utilizados 10 animais, realizando avaliações diárias desde o primeiro dia pós-parto até 16 dias após a primeira ovulação. As características examinadas ao longo deste período serão a tensão, morfoecogenicidade e vascularização do útero, assim como a presença, características e quantidade de fluido intrauterino, presença de cistos endometriais e demais alterações; o diâmetro, área e vascularização dos maiores folículos durante a fase de desenvolvimento folicular; vascularização do pedículo ovariano; vascularização mesometrial; o diâmetro, área e vascularização do corpo lúteo após a ovulação.

Há muito tempo se conhece a os benefícios do uso do sêmen congelado na reprodução dos animais domésticos. Recentemente tem aumentado o interesse na espécie equina. Entretanto a maior dificuldade da difusão dessa técnica é a reduzida fertilidade do sêmen congelado comparado com o sêmen fresco/refrigerado. Sendo assim é proposto um experimento para buscar entender melhor as subpopulações dos espermatozoides criopreservado e estimular sua longevidade in vitro visando o aumento da fertilidade in vivo. O objetivo é promover aumento da longevidade do espermatozoide criopreservado por meio de adição de compostos de efeitos protetores e estimulantes celulares. Para isso serão usados 4 garanhões e colhidos 6 ejaculados de cada um, em regime de 2 vezes por semana. O sêmen será congelado e após descongelação será dividido em 4 alíquotas e adicionadas substâncias estimulantes. As amostras serão analisadas nos tempos 0,3 e 6h pós-descongelação utilizando um sistema de análise computadorizada das características de motilidade espermática (CASA).

Variadas taxas de concepção podem ser obtidas de acordo com o sêmen utilizado, evidenciando uma importante variabilidade individual do reprodutor com relação à fertilidade a campo. Além disso, o vasto tamanho dos rebanhos reprodutivos, associado ao intenso e crescente uso dos protocolos de IATF no Brasil, tem estimulado, cada vez mais, a prática do descongelamento simultâneo de diversas palhetas de sêmen em um mesmo descongelador. Entretanto, sob essas condições, o banho-maria do descongelador poderia atuar como ambiente de incubação para o sêmen, o que poderia influenciar a viabilidade do espermatozoide. Assim, o presente estudo teve por objetivos: 1) determinar o efeito da sequência de inseminação, após descongelamento simultâneo de diversas palhetas de sêmen, na taxa de concepção e na qualidade seminal; 2) investigar a fertilidade in vivo, bem como diversas características espermáticas in vitro, do sêmen de diferentes reprodutores utilizados no mesmo programa de IATF; 3) identificar, dentre as diversas características avaliadas laboratorialmente, o grupo de características espermáticas consideradas importantes na predição da taxa de concepção do programa de IATF. Para tal, o presente experimento foi realizado em duas etapas. A primeira etapa consistiu em um estudo a campo delineado para determinar a taxa de concepção após IATF de fêmeas multíparas pós-parto da raça Nelore (n=944), utilizando sêmen de três partidas de cada um dos três touros da raça Angus (n=9). A segunda etapa consistiu em um estudo laboratorial delineado para investigar diversas características espermáticas das doses de sêmen utilizadas no respectivo programa de IATF, utilizando as mesmas condições de descongelamento do estudo a campo. As seguintes análises laboratoriais foram realizadas: análise computadorizada do movimento espermático, teste hiposmótico, teste de termo-resistência, morfologia espermática, integridade de membranas plasmática e acrossomal, estabilidade.

A transferência de embrião (TE) se tornou uma importante ferramenta em vários programas de melhoramento de equinos por todo o mundo, permitindo a obtenção de gestações de animais que, por uma série de razões, não poderiam se tornar gestantes. A égua provê um número limitado de embriões por ano, uma vez que não responde satisfatoriamente à superovulação e por sua natureza estacional e monovulatória. A seleção e manejo da receptora de embrião consistem no ponto crítico do programa de TE, determinado em grande parte serus resultados. Com o intuito de melhorar o status progesterônico de receptoras de embrião visando melhora nas taxas de prenhez, alguns grupos tem pesquisado a aplicação de drogas como anti-prostaglandínicos, progesterona, a hCG e análogos do GnRH como a buserelina. O objetivo do presente estudo será avaliar os efeitos da aplicação da hCG durante diferentes momentos do ciclo estral e a aplicação da progesterona injetável no dia 0 pós ovulação sobre as características uterinas (tônus e morfoecogenicidade) e cervicais (tônus), níveis plasmáticos de progesterona e estrógeno durante o diestro e fluxo sanguíneo uterino e ovariano. Os dados serão submetidos à análise de variância (PROCGLM), empregando-se o programa SAS (1999). As hipóteses testadas serão consideradas significativas quando P<0,05.

O óxido nítrico (NO) é sintetizado in vivo durante a conversão da L-arginina em L-citrulina por reações oxidativas catalisadas pela ezima óxido nítrico sintase (NOS). Existem quatro isoformas da NOS sendo três constitutivas dependentes de cálcio - NOS neuronal (nNOS), NOS endoletial (eNOS) e NOS mitocondrial (mtNOS) - e uma induzível (iNOS) cálcio independente. A localização e função de algumas isoformas da NOS têm sido descritas em espermatozóides de várias espécies animais, como bovinos, roedores, humanos, estando presentes no acrossoma e na cauda dos espermatozóides bovinos e humanos atuando na motilidade, hiperatividade, capacitação e reação acrossômica. Salienta-se que até onde foi possível pesquisar não foi encontrado relatos da identificação e localização das diversas isoformas de NOS no espermatozóide equino pós-ejaculação, nem da função do óxido nítrico na fisiologia da célula espermática equina. Diante do exposto o presente projeto visa, por meio de cinco experimentos, ajudar a elucidar a função desta espécie reativa de oxigênio na capacitação e na integridade das funções do espermatozóide equino, utilizando como ferramenta de análise as técnicas de citometria de fluxo e da análise computadorizada da motilidade espermática (CASA).

O objetivo deste estudo é avaliar as alterações morfofuncionais de espermatozóides bovinos submetidos à sexagem por meio da técnica de citometria de fluxo, comparar com espermatozóides convencionais e a diferença entre as subespécies. O sêmen foi obtido de seis touros sendo três taurinos (Holandês preto e branco) e três zebuínos (Gir leiteiro), com quatro ejaculados de cada animal (n=24). Cinco tratamentos foram realizados: sêmen convencional com diluídor L (Lagoa); sêmen convencional com diluidor S (Sexing) e sêmen sexado (nos tempos zero, três e seis horas após ejaculação). Serão avaliados parâmetros de motilidade espermática por sistema computadorizado (CASA - Computer Assisted Sêmen Analysis), integridade da cromatina pela técnica SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay), alterações morfológicas por contraste de interferência diferencial (DIC) e integridade do citoesqueleto através da avaliação dos filamentos de actina. Os efeitos dos tratamentos serão avaliados por analises de variância (ANOVA) com significância de P<0,05.

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de três diluidores diferentes na criopreservação do sêmen bovino sobre a motilidade, hiperativa espermátiva, reação acrossomal, capacitação e peroxidação lipídica das membranas espermáticas. Foram realizadas seis colheitas de sêmen em intervalos quinzenais de dez touros zebuínos da raça Nelore. O sêmen in natura foi avaliado, dividido em três tratamentos: uma fração foi diluída em meio a base de gema de ovo (Botu-Bov - diluidor 1), a segunda fração diluída em meio a base de lecitina de soja (Botu-Bov - diluidor 2) e a terceira fração em meio AndroMed (diluidor 3) também a base de lecitina de soja. Logo após as amostras foram submetidas à congelação. As avaliações do sêmen após descongelação consistiram na análise computadorizada das características de motilidade e nas análises pela citometria de fluxo quanto à reação acrossomal (PI/FITC-PSA/H33342); peroxidação lipídica (PI/C11-BODIPY581/591/H33342) e capacitação espermática através da estabilidade da membranaplasmática (Merocianina 540/Yo-Pro1/H33342). As variáveis foram submetidas à análise de variância e ao teste LSD para comparação das médias, ao nível de 5% de significância. O diluidor a base de gema de ovo preservou melhor a motilidade espermática, a população de céluas com integridade de membrana plasmática e acrossomo não reagido no sêmen bovino pós-descongelação que os diluidores a base de lecitina de soja. Os espermatozóides criopreservados com o diluidor a base de gema de ovo apresentou menor sub população de células hiperativas e com membrana plasmática desestabilizada quando comparados com os diluidores a base de lecitina de soja e o diluidor a base de gema de ovo possibilitou uma diminuição da peroxidação lipídica das membranas espermáticas.

Os objetivos deste trabalho são verificar a taxa de fertilidade e resposta inflamatória uterina em bovinos após inseminação artificial (IA) com sêmen avaliado pela associação de sondas fluorescentes para determinar simultaneamente integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial dos espermatozóides e avaliar os métodos para estimar a resposta inflamatória uterina. Serão realizados 3 experimentos. O experimento 1 será realizado para estudar a hemodinâmica uterina em bovinos após a IA por ultrassonografia Doppler colorida, para isso 10 vacas serão sincronizadas (estro e ovulação) e divididas em 2 grupos: Grupo não inseminado (controle, n=5) e Grupo submetido a IA (n=5). No experimento 2 serão comparadas as técnicas de avaliação da resposta inflamatória uterina em bovinos por infusão de solução salina (IU) e por swab com escova ginecológica (SE), considerando quantidade e qualidade da amostra e seus efeitos sobre o ambiente uterino por ultrassonografia Doppler colorida e biopsia endometrial como controles, serão utilizadas 10 vacas divididas em 2 grupos: Grupo submetido ao SE (n=5) e Grupo submetido a IU (n=5). Para o experimento 3 serão utilizadas 360 vacas submetidas a um protocolo para a IA em tempo fixo, divididas em três grupos de acordo com o percentual de células apresentando integridade de membrana plasmática, integridade de acrossomo e função mitocondrial (PIAIC), avaliado por sondas fluorescentes (PI, FITC-PSA e JC-1): 10 a 20% (n=120), 30 a 40% (n=120) e 50 a 60% de espermatozóides PIAIC/palheta (n=120). As fêmeas ainda terão a resposta inflamatória uterina após IA monitorada. Será realizado diagnóstico de gestação 30 dias após a IA.. &#10;Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.

O objetivo deste trabalho é comparar a resposta inflamatória uterina em éguas considerando hemodinâmica uterina e citologia endometrial após a inseminação artificial (IA) com sêmen de alta e baixa qualidade, determinada pela integridade de membrana plasmática e acrossomal e função mitocondrial dos espermatozóides por sondas fluorescentes. Amostras de sêmen serão avaliadas pela associação das sondas fluorescentes: PI, FITC-PSA e JC-1 e agrupadas de acordo com o percentual de células apresentando integridade de membrana plasmática, integridade de acrossomo e função mitocondrial (PIAIC). Doze éguas serão previamente selecionadas, descartando do experimento aquelas que tenham predisposição à endometrite, levando-se em conta o histórico reprodutivo e o exame ginecológico. As éguas serão divididas em três grupos: Grupo controle, não inseminado (n=4), Grupo inseminado com sêmen de qualidade superior (40 a 60% de espermatozóides PIAIC, n=4) e Grupo inseminado com sêmen de qualidade inferior (10 a 30% de espermatozóides PIAIC, n=4). Será realizado o acompanhamento do desenvolvimento folicular ovariano diariamente, sendo que, na presença de um folículo &#8805; 35 mm, será administrada gonadotrofina coriônica humana (hCG) para induzir a ovulação. A avaliação do ambiente uterino será realizada por ultrassonografia transretal com Doppler colorido e por swab com escova ginecologia, em seis períodos: antes da ovulação (logo após a aplicação de hCG), 4 h após a IA, 24 h após a IA, 48 h após a IA, 7 dias após a IA e 14 dias após a IA. O diagnóstico de gestação será realizado 14 e 30 dias após IA.

Serão utilizadas 10 éguas Puro Sangue Inglês, sendo 05 destinadas a coleta de 10 embriões (14 dias de idade) e 05 éguas para coleta de endométrio em diestro (14 dias após ovulação). Os embriões serão recuperados por lavados uterinos transcervicais e as amostras endometriais por biópsia uterina. Três amostras de endométrio de duas éguas cíclicas já foram coletadas e processadas para avalição em Western Blotting da presença da proteína transportadora de prostaglandina(PGT) nos seguintes momentos do ciclo estral: folículo pré-ovulatório (PV), sete dias pós-ovulação (D7) e quatorze dias após ovulação (D14). Será realizado ultrafiltragem do meio condicionado por embrião em filtro de 10 kDa, resultando em frações composta por moléculas > e < que 10 kDa. As amostras endometriais (em duplicata) receberão três tratamentos: (1)moléculas <10 kDa, (2)<10kDa e (3)meio de cultura M199. As análises das concentrações de PGF2alfa e PGE2 (radioimunoensaio) e a concentração de PGT serão realizadas após cultura endometrial por 12 horas. Para análise estatística, os resultados serão submetidos ao teste ANOVA e Tukey, considerando 5% como nível de significância. As hipóteses deste experimento são que o meio secretório embrionário provoca a diminuição das concentrações de PGT e secreções de PGF2alfa e PGE2 no endométrio equino em diestro.