Edismauro Garcia Freitas Filho.

BCO - Treinamento Técnico V

Processo FAPESP (Bolsa de estágio em pesquisa no exterior) - 2022/08177-6. LAP (LC3 associated phagocytosis) conduz a integração entre a fagocitose de partículas imuno-estimulatórias com a modulação da expressão gênica e a polarização funcional dos macrófagos. Embora diversos constituintes da cascata de LAP tenham sido reportados, os mecanismos subjacentes à fina organização da montagem dos complexos de LAP e de seus componentes moduladores permanecem pouco compreendidos. Portanto, esse estudo objetiva determinar como os novos componentes de LAP, que foram recentemente identificados durante o meu projeto de pós-doutorado, regulam essa via. Inicialmente, hipotetizando que o tráfego endosomal pode atuar como um eixo central no direcionamento/organização das proteínas da cascata de LAP para os fagossomos, nós observamos pela primeira vez um papel positivo e específico para a RAB5c GTPase durante LAP. Ainda, nós também estabelecemos o perfil do interatoma de RUBCN, um componente crítico de LAP. Os candidatos selecionados estão envolvidos em diversos processos imunes e ainda associados à fagocitose de macrófagos e às etapas iniciais e finais da biogênese do fagossomo. Nossos achados poderão revelar novos alvos farmacológicos capazes de induzir ou bloquear LAP e ajudar a elucidar como e por que LAP diverge da macroautofagia e outros eventos CASM, fornecendo uma importante ferramenta para a investigação da resposta imune em patologias que LAP participa.

Processo FAPESP: 2019/26040-5. Compreender os mecanismos moleculares de indução e da cascata de sinalização de LAP, e como essa via diverge da macroautofagia, é fundamental para caracterizar os efeitos autônomos do fagossomo na regulação das respostas imunes, assim como identificar novos alvos terapêuticos. Portanto, este estudo tem como objetivo geral identificar e caracterizar funcionalmente novos componentes moleculares da cascata de transdução de sinal induzida por LAP,

Processo FAPESP: 2018/26510-9. Nossos resultados mostraram que a RACK1 é reguladora crítica da secreção regulada de mediadores inflamatórios, do rearranjo do citoesqueleto de actina e na mobilização de cálcio em mastócitos. No presente projeto nos propusemos a avaliar se a RACK1 tem influência no arranjo de outros componentes do citoesqueleto, como nos filamentos intermediários e nos microtúbulos, que também estão envolvidos em alguns passos da secreção celular.

Processo FAPESP: 2018/25559-4. A autofagia é fundamental para a homeostasia celular frente a situações de estresse e por isso é considerada um alvo promissor no desenvolvimento de fármacos para diversas patologias; porém o envolvimento da maquinaria autofágica em diferentes processos celulares torna esse objetivo complexo. Fagocitose associada a LC3 (LAP) é o processo de recrutamento de componentes da via autofágica diretamente para o fagossomo, o qual regula a maturação fagolisossomal e a sinalização subsequente de forma cargo-específica. Por exemplo, LAP é fundamental para a secreção de citocinas anti-inflamatórias por macrófagos em resposta a fagocitose de células apoptóticas (eferocitose). Defeitos em LAP, e não em autofagia canônica, alteram a eliminação de células mortas por macrófagos, induzindo o desenvolvimento de uma síndrome autoimune semelhante a lúpus em camundongos idosos. Essa função anti-inflamatória de LAP é também evidente em tumores sólidos, onde a fagocitose de células tumorais mortas por macrófagos do microambiente promove imunossupressão e sustenta o crescimento tumoral. Na ausência de LAP, macrófagos tumorais expressam genes pró-inflamatórios e engatilham a ativação do sensor citosólico STING e produção de interferon do tipo I, culminando na ativação de linfócitos T e na eliminação de tumores sólidos. Essas evidências sugerem que LAP possa integrar a eferocitose e sinais do microambiente na regulação da expressão gênica e polarização funcional dos macrófagos em direção a um perfil anti-inflamatório e de proteção e reparo tecidual, podendo exercer um papel fundamental em diversas patologias inflamatórias e no balanço entre resistência e tolerância frente ao processo infeccioso. Nesse contexto, esta proposta de pesquisa pretende elucidar os mecanismos envolvidos no controle da polarização de macrófagos por LAP durante o processo de eferocitose e revelar a função de novos componentes da cascata de sinalização de LAP.

Processo FAPESP (Bolsa de estágio em pesquisa no exterior) - 2022/08177-6. A liberação dos mediadores pelos mastócitos depende do aumento da concentração intracelular de Ca2+ e do influxo de Ca2+ extracelular. Embora estudos prévios demonstrem o mecanismo básico envolvido na ativação dos mastócitos, a função de algumas proteínas regulatórias relacionadas com a sinalização de cálcio em mastócitos ainda permanece desconhecida. A RACK1 (receptor for activated C kinase 1) é uma proteína adaptadora requerida por diversas proteínas envolvidas na sinalização de cálcio, que também participam da ativação dos mastócitos. Estudos anteriores demonstraram que RACK1 participa na ativação dependente de Ca2+ de algumas células imunes, portanto, poderia desempenhar um papel importante na asma. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o papel funcional da RACK1 na sinalização de cálcio em mastócitos.

Processo FAPESP:2017/14645-4. A RACK1 está associada à várias proteínas de sinalização que também estão presentes na via de ativação dos mastócitos. A asma aguda é uma das reações atópicas e anafiláticas desencadeadas pela ativação dos mastócitos. Dados recentes obtidos em nosso laboratório identificaram, pela primeira vez, a RACK1 em mastócitos da linhagem RBL-2H3. A RACK1 está presente nos lipid rafts e aumentada quando os gangliosídeos derivados do GD1b foram removidos desses microdomínios. Nossos resultados sugerem que RACK1 possa estar envolvida na organização e funcionamento dos complexos de sinalização nos lipid rafts, bem como, nas vias de transdução de sinal que regulam a liberação de mediadores inflamatórios em mastócitos. Portanto, o presente estudo tem como objetivo caracterizar o papel funcional da RACK1 na ativação e migração de mastócitos, processos requeridos durante a alergia e inflamação. O papel da RACK1 em mastócitos será investigado através do uso RNA de interferência em mastócitos da linhagem RBL-2H3. O conhecimento sobre o papel de RACK1 na ativação dos mastócitos pode levar à novos alvos terapêuticos envolvidos nos processos alérgicos e inflamatórios.

Processo FAPESP: 2015/16673-0. A RACK1 pode regular vias distintas de sinalização e participar ativamente na transdução do sinal. Estudos recentes demonstram que a RACK1 participa na ativação de algumas células imunes e na regulação de respostas inflamatórias. A análise de genes relacionados com a asma identificou o gene GNB2L1, codificador da proteína RACK1, como um possível gene relacionado com a sinalização celular na asma. A RACK1 está associada à várias proteínas de sinalização que também estão presentes na via de ativação dos mastócitos. A asma aguda é uma das reações atópicas e anafiláticas desencadeadas pela ativação dos mastócitos.O presente estudo teve como objetivo caracterizar o papel funcional da RACK1 na ativação e migração de mastócitos, processos requeridos durante a alergia e inflamação.

Processo FAPESP: 2014/17671-8. Os eventos iniciais da transdução de sinal em mastócitos ocorrem em microdomínios lipídicos (lipid rafts) da membrana plasmática. Imediatamente após o intercruzamento dos FcRIs, os receptores e outros componentes do complexo de sinalização são translocados para os lipid rafts. Os gangliosídeos derivados do GD1b são componentes dos lipid rafts. O intercruzamento destes gangliosídeos pelo mAb AA4 promove uma ativação parcial dos mastócitos, semelhante às observadas pela ativação via FcRI, mas não resulta na liberação de histamina. Quando os gangliosídeos derivados do GD1b são intercruzados pelo mAb AA4, após algum tempo, ocorre a formação de agregados (caps) na superfície celular. O aumento de caps na superfície celular correlaciona-se com a inibição da liberação de histamina via Fc[RI. O presente estudo tem como objetivo caracterizar o papel dos gangliosídeos derivados do GD1b na via de sinalização de mastócitos.

Processo FAPESP: 2013/12861-0. Os gangliosídeos derivados do GD1b, são componentes dos lipid rafts. O intercruzamento destes gangliosídeos pelo mAb AA4 promove uma ativação parcial dos mastócitos, semelhante às observadas pela ativação via FceRI, mas não resulta na liberação de histamina. Quando os gangliosídeos derivados do GD1b são intercruzados pelo mAb AA4, após algum tempo, ocorre a formação de agregados (caps) na superfície celular. O aumento de caps na superfície celular se correlaciona com a inibição da liberação de histamina via FceRI. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o papel dos gangliosídeos derivados do GD1b na via de sinalização de mastócitos.

O grupo de Escherichia coli verotoxigênicas (VTEC) é constituído por cepas que produzem verotoxinas, que são proteínas codificadas em fagos temperados e assim denominadas porque produzem um efeito citotóxico em células Vero. As VTECs podem produzir dois tipos de verotoxinas (VT1 e VT2), que são também conhecidas como "Shiga-like toxins" (stx1 e stx2). A espécie bovina constitui-se no reservatório mais importante de VTECs e a maioria dos surtos de infecções humanas causadas por estas bactérias deve-se ao consumo de carne bovina mal cozida, leite de vaca não pasteurizado e águas de abastecimento e recreação contaminados pelo conteúdo intestinal destes animais. O objetivo geral do projeto foi isolar e caracterizar E. coli verotoxigênicas patogênicas para humanos em alimentos de origem animal e vegetal na região sudoeste do estado de Goiás, bem como determinar a prevalência, fatores de risco e realizar a rastreabilidade epidemiológica das mesmas.

Projeto aprovado no CNPQ Número do processo: 503886/2009-2 Edital/Chamada: Edital MCT/CNPq 03/2009 - Consolidação de Novos Campi e Novas Universidades. O grupo de Escherichia coli verotoxigênicas (VTEC) é constituído por cepas que produzem verotoxinas, As VTECs podem produzir dois tipos de verotoxinas (VT1 e VT2), que são também conhecidas como "Shiga-like toxins" (stx1 e stx2). A espécie bovina constitui-se no reservatório mais importante de VTECs e a maioria dos surtos de infecções humanas causadas por estas bactérias deve-se ao consumo de carne bovina mal cozida, leite de vaca não pasteurizado e águas de abastecimento e recreação contaminados pelo conteúdo intestinal destes animais. O objetivo geral do projeto foi isolar e caracterizar E. coli verotoxigênicas patogênicas para humanos em alimentos de origem animal e vegetal na região sudoeste do estado de Goiás, bem como determinar a prevalência, fatores de risco.

Projeto resgistrado na PRPPG/UFG sob número 32478.

O objetivo deste subprojeto foi determinar a acurácia dos testes laboratoriais (uréia e creatinina) na detecção de alterações renais em cães. Determinando a sensibilidade, especificidade e valor de precisão positivo e negativo das dosagens de uréia e creatinina plasmática ou sérica em detectar alterações histológicas renais.

O objetivo deste subprojeto foi avaliar a acurácia de testes laboratoriais utilizados na detecção de lesões hepáticas em cães. Determinar a sensibilidade, especificidade e valor de precisão positivo e negativo das atividades séricas da AST, ALT, FA e as dosagens de bilirrubinas total quanto à capacidade em detectar alterações histológicas hepáticas. Foram relacionados os resultados obtidos na bioquímica sérica com as alterações histológicas do fígado dos animais.