Gilberto De Nucci.

O endotélio é um órgão capaz de regular tônus vascular através da liberação de agentes relaxantes tais como óxido nítrico, prostaciclina etc. ou contráteis endotelinas, angiotensina etc. O conceito fisiológico atual propõe que tal regulação também pode ocorrer através da liberação de catecolaminas de origem exclusivamente neural. Nosso grupo demonstrou em tecidos isolados de répteis que o endotélio constitui uma fonte de catecolaminas, visto que a contração da aorta induzida por estimulação por campo elétrico é abolida por antagonistas adrenérgicos e pela remoção do endotélio. Imunohistoquímica identificou a presença da enzima tirosina hidroxilase no endotélio de tecido humano e de serpentes. Conforme descrito no projeto, o papel fisiológico e fisiopatológicos das catecolaminas endotelias em humanos será avaliado através de uma abordagem farmacológica in vitro, utilizando artérias e veias humanas, e uma abordagem farmacológica in vivo, através de ensaios clínicos. Também tem como objetivo embasar as observações obtidas nos ensaios farmacológicos in vitro e in vivo com um substrato morfológico, através da identificação e possível quantificação da via metabólica de catecolaminas através de imuno-histoquímica e através de ensaio de hibridização in situ por RNA (do inglês, RNA-ISH, RNA in situ hybridization) com a tecnologia RNA Scope®. Espera-se que o conjunto das informações obtidas demonstrará a relevância fisiológica e fisiopatológica das catecolaminas endoteliais em humanos e dimensionará sua importância em relação ao controle adrenérgico neural. Será investigado também se o endotélio tem capacidade de sintetizar e liberar outras aminas vasoativas, como a serotonina e a histamina.

Os corpos cavernosos de humano e de outros mamíferos relaxam à estimulação elétrica, sendo este relaxamento sensível à ação dos bloqueadores dos canais de sódio, como a tetrodotoxina (TTX). Cobras e lagartos caracterizam-se por possuírem um pênis intromitente, simétrico e bilateral, também conhecido como hemipenis. Diferentemente do que ocorre nos mamíferos, a estimulação elétrica do hemipenis isolado da serpente Crotalus durissus terrificus causa relaxamento, porém este efeito é insensível a ação da TTX, indicando a presença de um novo canal acoplado à musculatura lisa. Tendo isto em vista, o objetivo do presente projeto é realizar um estudo completo do canal, uma vez que o conhecimento aprofundado do mesmo poderá oferecer uma nova visão de outros alvos terapêuticos para o tratamento da disfunção erétil e outras doenças. Este estudo será realizado através das seguintes etapas:*Clonagem deste canal de sódio e expressão em Xenopus oocytes para a realização dos estudos eletrofisiológicos;*Estudos farmacológicos in vitro utilizando ensaios funcionais e quantificação de [3H]-noradrenalina e [3H]-acetilcolina em hemipenis isolado de Crotalus durissus terrificus;*Análise morfológica para avaliar a localização deste canal através da imuno-histoquímica acoplada à microscopia de transmissão;*Triagem de novas toxinas isoladas de Conus striatus e Conus sp como potenciais substâncias inibidoras deste novo canal de sódio.

Os sinais nervosos gerados nos mecanismos de ereção peniana influenciam o balanço entre fatores contráteis e relaxantes, os quais controlam o tonus do músculo liso trabecular, determinando o estado funcional do pênis. As diferentes etapas envolvidas na neurotransmissão, propagação do impulso e transdução intracelular dos sinais nervosos encontram-se alteradas em diferentes tipos de disfunção erétil. No rato, a castração causa um deficit da resposta erétil através da estimulação central e periférica, assim como queda da concentração da óxido nítrico sintase no corpo cavernoso (Burnett et al, 1995; Chamness et al, 1995; Van hatalo et al, 1996; Gonzales-Cadavid et al, 2000). Também foi observado indução de apoptose no tecido peniano do rato após castração (Shabsigh et al, 1998). Entretanto não foi observado alterações da expressão proteica da óxido nítrico sintase neural assim como de sua atividade em tecido cavernoso de coelho após a castração (Traish et al, 1999). Assim sendo, uma generalização sobre o controle feito pelos andrógenos na fisiologia da ereção peniana é complexo. Em humanos, os resultados referentes a castração e função erétil são ainda menos claros daqueles obtidos em animais (Palese et al., 2003). A castração cirúrgica ou química é utilizada com frequência como terapia adjuvante no tratamento do carcinoma de próstata. Redução da síntese de dihidrotestosterona, através do inibidor de 5-alfa reductase (finasterida), também é utilizado no tratamento da hiperplasia benigna da próstata. Ambas terapias costumam apresentar como importante efeito colateral disfunção erétil. O objetivo deste trabalho é estabelecer o modelo de disfunção erétil por castração cirúrgica ou química em camundongos, verificando possíveis diferenças causadas por este modelo e sua sensibilidade aos inibidores de fosfodiesterase V.

Segundo dados do IBGE (2002-2003), no Brasil 40,6% da população com 20 anos ou mais de idade estão acima do peso. E, dentro deste grupo, 10,5 milhões são obesos. A obesidade afeta 8,9% dos homens adultos e 13,1% das mulheres adultas do País. E mais: os obesos representam cerca de 20% do total de homens e um terço do total de mulheres com excesso de peso. Uma porcentagem cada vez maior dessa população passará por alguma técnica anestésica, seja para realização de algum tratamento cirúrgico da obesidade mórbida ou qualquer outro tipo de procedimento que necessite somente de uma sedação. Para tanto, existe a necessidade de desenvolvimento de técnicas anestésicas específicas para essa população especial. Técnicas que permitam, não só, uma boa estabilidade hemodinâmica no intra-operatório, mas também que promovam uma recuperação rápida e segura desse tipo de paciente. É dentro desse contexto, que a técnica de anestesia geral venosa total com a infusão alvo-controlada de propofol associada ao remifentanil é uma das mais promissoras. O modelo farmacocinético de Marsh é específico para o propofol. Esse é o modelo mais utilizado na anestesia clínica quando o objetivo é realizar uma anestesia venosa total com infusão alvo-controlada desse fármaco. Porém, esse modelo foi desenvolvido tendo como base uma população não-obesa. Tendo em vista esses aspectos apresentados, do ponto de vista clínico, seria interessante o desenvolvimento de um modelo farmacocinético de propofol específico para a população obesa mórbida.

O NO tem papel fundamental no relaxamento dos corpo cavernoso através da terminações nervosas NANC. Venenos de escorpiões exercem vários efeitos sobre tecidos excitáveis, inclusive induzindo a liberação do NO. 0 NO e outros vasodilatadores que atuam por liberação de NO (nitroglicerina, nitroprussiato de sódio, S-nitroso-acetilpenicilamina e linsidomina) estimulam a guanilato ciclase solúvel, levando ao aumento dos níveis de GMPc. 0 efeito relaxante da estimulação elétrica pode ser aumentado pela inibição seletiva da GMPc fosfodiesterase. Vários trabalhos recentes têm revelado a estrutura tridimensional e a importância de diversos resíduos de amino ácidos em várias toxinas de escorpião que afetam canais de Sódio. Em adição aos trabalhos com TSV, nosso grupo tem trabalhado com os venenos de Androctonus australis e Buthotus judaicus. A semelhança do TSV, estes venenos causam relaxamento dependente de NO do corpo cavernoso de coelhos (RbCC). 0 inibidor não seletivo da NO sintase L-NAME, mas não o enantiomero inativo D-NAME, reduz de forma significativa o relaxamento induzido pelo veneno. Recentemente, purificamos fracionamos veneno de T. serrulatus em 11 diferentes frações. A análise dos aminoácidos da extremidade amino terminal revelou 100% de homologia com a toxina IV-5. 0 antagonista do receptor de adrenalina do tipo ?1 atenelol, não inibiu o efeito relaxante induzido pela toxina IV-5

investigar a presença, expressão e modulação da nitrosilação de resíduos protéicos de tirosina, com o intuito de avaliar outras ações do NO independentes da ativação da guanilato ciclase solúvel; II) estudar detalhadamente a modulação farmacológica dos sistemas de liberação de óxido nítrico do endotélio e neural, comparando-os quanto a padrão de liberação, ativação de sistemas de transdução distintos, utilizando para tal o corpo cavernoso de coelho; III) investigar o potencial terapêutico dos anti-inflamatórios não esteroidais providos de grupos funcionais doadores de NO, tais como nitroflurbiprofeno, nitroketoprofeno e nitro-aspirina, no seu potencial como protetores de lesões renais e cardíacas. Devido ao fato da toxicologia pré-clínica do nitroflurbiprofeno estar terminada, realizar a fase I deste composto em nossa Unidade de Farmacologia Clínica, com caracterização inclusive de metabólitos do mesmo; IV) investigar o potencial terapêutico dos inibidores de enzima conversora de angiotensina providos de grupos funcionais doadores de NO, tipo nitro-enalapril, no seu potencial como protetor de lesões cardíacas, lesões renais tipo síndrome nefrótica, assim como em sua habilidade de inibir a enzima conversora in vitro e in vivo.

O presente projeto visa investigar o efeito da inibição da síntese de óxido nítrico, efetuada de maneira crônica, em modelos de inflamação aguda e crônica, assim como procurar avaliar suas repercussões hemodinâmicas. Ambos os laboratórios já vem trabalhando conjuntamente há aproximadamente 3 anos, sendo que esta colaboração resultou na publicação de 2 trabalhos em revistas internacionais (American Journal of Physiology e Hypertension), assim como vários resumos em congressos internacionais e nacionais.