Margaret de Castro.

Projeto: readequação e modernização da infraestrutura física dos laboratórios de pesquisa em medicina celular, molecular e nuclear do HCFMRP-USP

Adequação da infraestrutura do sistema elétrico e do sistema de segurança da informação dos laboratórios multidisciplinares de pesquisa clínica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-USP (RELAB-HCRPUSP).

Rastreamento genômico e alvos terapêuticos nas raras doenças das adrenais: medicina personalizada para o sistema de único de saúde.

Análise de uma única célula permite compreender as influências do microambiente e da heterogeneidade tumoral. Assim, o objetivo é mapear a diversidade celular e os perfis de expressão gênica em uma única célula, em 10 amostras de tumores hipofisários não funcionantes, e comparar com estratificação prognóstica e com os desfechos clínicos.

Objetivo Geral: elaborar um diagnóstico e propor um plano customizado para qualificar a avaliação do estudante em cada ciclo ou etapa da formação nos vários cursos de graduação participantes, a partir das necessidades de cada curso, e que contemple a avaliação abrangente de habilidades e competências, atitudes e comportamentos, garantindo feedback regular aos aprendizes e docentes. projeto é proposto por um consórcio de três instituições públicas, localizadas em dois estados (duas em São Paulo e uma em Minas Gerais) da região Sudeste do Brasil, e já existe parceria entre as instituições. Serão envolvidos 16 cursos na área da saúde, que formam cerca de 800 profissionais de saúde por ano.

O objetivo final de nossa proposta era construir uma massa crítica de líderes e docentes em diferentes instituições, que pudessem fazer contribuições consistentes para melhorar a avaliação dos alunos e, eventualmente, mudar o atual paradigma de avaliação.

Durante minha gestão na diretoria da FMRP-USP, tínhamos o objetivo de criar uma instância, dentro da FMRP-USP, que pudesse induzir, coordenar e implementar ações de desenvolvimento docente, visando a qualificação dos professores da faculdade e de preceptores ligados aoHospital das Clínicas da FMRP-USP para o exercício de suas funções de educadores.

O estudo de associação genômica ampla (do inglês, Genome-wide Association Studies, GWAS) compara a variação de milhares de polimorfismos de nucleotídeos únicos entre grupos de pessoas com características fenotípicas ou doenças em comum, e controles. Este projeto propôs realizar estudo de GWAS, com o objetivo de identificar regiões de risco para tumores hipofisários, bem como possíveis novos mecanismos moleculares.

As novas plataformas de sequenciamento em escala genomica, ou ainda, de última geração (NGS-Next-generation sequencing) apresentam vantagens e diversas aplicações, dependendo da hipótese formulada: para a análise do genoma podemos utilizar sequenciamento de novo, Target-seq ou análise de exoma; para a análise epigenômica - genes respondendo a sinais ambientais - podemos utilizar imunoprecipitação de Cromatina (ChIP) e análise de metilação; além da análisedo perfil de expressão gênica do transcriptoma inteiro. Portanto, este projeto objetiva utilizar a tecnologia de NGS para um melhor entendimento do processo de tumorigenese endócrina avaliando alterações na totalidade de genes expressos, nos processos epigenéticos e no estudo de transcriptomas em amostras de tumores de hipófise.

Descrição: Expansão com adequação da Infraestrutura da Unidade de Pesquisa Clínica Multidisciplinar do Hospital das Clínicas da FMRP-USP. Situação: Em andamento; Natureza: Desenvolvimento. Coordenador: Margaret de Castro .

Projeto: readequação e modernização da infraestrutura física dos laboratórios de pesquisa em medicina celular, molecular e nuclear do HCFMRP-USP criando melhores condições institucionais para avanços na pesquisa clínica.

Neste projeto temático busca-se o estudo de disfunção sutil do eixo HHA na Síndrome de Cushing e do eixo Do GH/IGF1 na acromegalia. Adicionalmente, pelo estudo da expressão Gênica Diferencial em Tumores hipofisários busca-se identificar genes hiper- ou hipoexpressos, em tumores hipofisários não secretores e em tumores secretores de ACTH e GH em relação ao tecido hipofisário normal, com a finalidade de selecionar genes candidatos envolvidos no processo da tumorigênese hipofisária.

Avaliar alterações gênicas como perda de atividade dos genes de supressão tumoral e/ou ganho de atividades de proto-oncogenes, freqüentemente relacionados a outros tipos de tumores, nos tumores corticotróficos.

Os processos inflamatórios e infecciosos agudos induzem uma resposta do hospedeiro denominada resposta de fase-aguda que inclui a ativação do sistema imune, a ativação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HHA), o desenvolvimento de febre e alterações do comportamento alimentar e de ingestão de líquidos. O sistema imune, sujeito ao controle neural e endócrino, exerce, por sua vez, efeito recíproco no sistema neuroendócrino-adrenal. As respostas do organismo ao estresse são reguladas, em nível central, por neurônios do hipotálamo (núcleos paraventriculares) e do tronco cerebral (locus ceruleus), responsáveis pela secreção do hormônio liberador da corticotropina (CRH) e norepinefrina (NE) e pela regulação da atividade periférica do eixo HHA e do sistema nervoso simpático (SNS). O sistema imunológico ativado durante a reação inflamatória, libera citocinas, que estimulam o sistema de adaptação ao estresse ativando o eixo HHA diretamente, por estímulo da secreção de CRH, ACTH e cortisol e indiretamente, por ativação do SNS noradrenérgico central. Os glicocorticóides (GC), produtos finais do eixo HHA, são mediadores cruciais da interação entre o sistema imune e endócrino e atuam como importantes imunomoduladores.

O subprojeto"Hiperplasia Adrenal Congênita (HAC) e as Alterações do Equilíbrio Hidrossalino" tem como objetivo o estudo da interação desses sistemas, tanto em modelos animais como em modelos humanos, em que há interrupção da atividade do SRAA pela deficiência da secreção de aldosterona. Para tanto, utilizaremos a adrenalectomia como modelo experimental para estudo da expressão e localização dos mRNAs dos diferentes subtipos de receptores de CRH na hipófise, no NPV e em tecidos periféricos, e do receptor V1b da vasopressina na hipófise. Ainda, em humanos, estudaremos aspectos moleculares e funcionais nas duas formas mais freqüentes de HAC. Avaliaremos o papel do ANP, antagonista do SRAA, e sua interação com a atividade de renina plasmática (ARP) na hiperplasia adrenal congênita por deficiência de 21-hidroxilase (D21OH). Um outro objetivo deste projeto será delinear o perfil do complexo gênico 21-OH em famílias da região nordeste do Estado de São Paulo, com pelo menos um membro portador de HAC por deficiência da 21-OH, determinando as freqüências de haplótipos com deleções, conversões, duplicações gênicas e de mutações de ponto, no gene CYP21. Finalmente, buscar-se-á uma correlação entre genótipo, fenótipo e perfil hormonal dos indivíduos afetados. Adicionalmente, o nosso grupo de pesquisa tem estudado pacientes com HAC por deficiência de 11- OH e demonstramos uma alta prevalência da mutação Q356X no gene CYP11B1, em pacientes brasileiros de origem africana. Um outro objetivo deste projeto será a caracterização de indivíduos heterozigotos para a mutação Q356X e a correlação com estudo hormonal funcional.

Os glicocorticóides (GC) exercem seus efeitos através da ligação a receptores citosólicos específicos pertencentes à superfamília de receptores nucleares. Existe uma considerável variabilidade entre os indivíduos em relação à sensibilidade aos GC. A resistência tecido-específica aos GC tem sido observada em linfócitos de pacientes com asma resistente aos GC, artrite reumatóide e osteoartrite. Os mecanismos moleculares ainda não estão estabelecidos. Há uma variação a sensibilidade aos GC em indivíduos normais. Não está definido se a sensibilidade em um determinado tecido-alvo reflete na sensibilidade em outros órgãos. Utilizamos diferentes métodos, o teste de supressão do eixo HPA com dexametasona, o estudo de proliferação de linfócitos in vitro, e o ensaio de ligação do receptor de GC estimulado com concavalina-A para avaliarmos a sensibilidade dos tecidos-alvo aos GC em uma população de indivíduos brasileiros normais, com o intuito de diagnosticar subgrupos que apresentem sensibilidade alterada aos GC. Polimorfismos no gene do RG têm sido descritos e têm sido relacionados a variações na sensibilidade aos glicocorticóides, tanto em indivíduos normais como em associação com doenças, como hipertensão, obesidade e doenças psiquiátricas. O presente estudo propôs investigar a prevalência de polimorfismos no gene do RG, através de PCR e seqüenciamento automático deste gene, em indivíduos da população brasileira, desde que o estudo populacional do gene do RG não existe no Brasil.

Nos mamíferos, a regulação do volume e da osmolalidade plasmática envolvem a participação de osmoreceptores/sódio receptores, bem como de volume ou presso-receptores que recebem informações das alterações da homeostase hidrosssalina, as quais são integradas em áreas específicas do SNC. O Projeto 1 Controle neuroendócrino do equilíbrio hidrossalino estará subdividido em vários subprojetos, sendo que o projeto 3 Regulação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HHA) e "Regulação da expressão dos receptores do hormônio liberador da corticotrofina (CRH-r1, CRH -R2a e CRH -R2b) e da vasopressina (V1b) após diferentes períodos de adrenalectomia" está sob coordenação da pesquisadora.

Avaliação de mutações no proto-oncogene RET em famílias que apresentam, pelo menos, um indivíduo portador de NEM tipo 2 A. Adicionalmente, compararemos o padrão de resposta da calcitonina aos testes de provocação e as eficácias diagnósticas do teste genético e do bioquímico com a finalidade de identificar os indivíduos portadores de mutações e, portanto, candidatos à tiroidectomia precoce, com o intuito de indicar uma terapêutica adequada, visando melhorar a sobrevida dos mesmos.

Muito pouco é conhecido sobre o mecanismo de interação do receptor do glicocorticóide humano (GR) com os elementos negativos responsivos aos glicocorticóides (nGREs) ou com outros fatores de transcrição que regulam negativamente a expressão do gene da proopiomelanocortina (POMC). Na Doença de Cushing, a alça da retroalimentação negativa do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal está rompida e a secreção de ACTH é resistente aos g!icocorticóides circulantes. Portanto, um possível mecanismo para explicar a resistência aos efeitos dos glicocorticóides, na Doença de Cushing, seria um defeito estrutural no receptor intracelular do glicocorticóide. O presente projeto propôs o estudo da estrutura, função e expressão das isoformas alfa e beta do gene do GR, em tumores hipofisários produtores de ACTH, com o intuito de entender melhor os mecanismos de resistência aos glicocorticóides e conseqüentemente, a patogênese da Doença de Cushing.