Rodrigo Cardoso de Oliveira.

Edital 024/2004 (Violência Acidentes e Trauma)
A terapia de perdas ósseas quase sempre implica na utilização de osso autógeno (retirado do próprio paciente, geralmente a crista ilíaca), resultando em maior morbidade e período de convalescença, susceptibilidade a infecções no sítio doador e ainda reabsorção progressiva e constante. Isto implica não apenas em desconforto e risco para o paciente como também onera significativamente o sistema de saúde em função do maior período de internação e tratamento. Além do que, em casos de defeitos ósseos extensos, existe a dificuldade de se conseguir, no sítio doador, tecido ósseo em quantidade e qualidade necessária. O desenvolvimento de substitutos para o enxerto ósseo autógeno potencialmente oferece os benefícios dos enxertos ósseos sem os riscos da remoção de osso autógeno da área doadora. A associação dos substitutos ósseos a fatores de crescimento ósseo aumenta significativamente o potencial de reparação da área do defeito. Estes fatores de crescimento ósseo, denominados de proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs), atuam estimulando a diferenciação de células mesenquimais indiferenciadas em osteoblastos. Como conseqüência, a quantidade de células osteoprogenitoras aumenta, resultando em reparação mais rápida da lesão. Estes fatores estão presentes na matriz óssea desmineralizada, como demonstrado classicamente por Urist em 1965. Sabe-se também que o processamento adequado de tecidos de outros animais resulta em materiais biocompatíveis e seguros para uso humano. A tecnologia para produção de materiais para preenchimento do defeito ósseo resultará em benefícios para toda a população brasileira, indistintamente, mas em especial àqueles que dependem do sistema público de saúde e não têm recursos para procurar tratamento de ponta. A necessidade de um segundo sítio cirúrgico para obtenção de osso autóge

O Programa de Educação pelo Trabalho para a Saúde (PET-Saúde) é uma proposta do Ministério da Saúde (Departamento de Gestão da Educação em Saúde - DEGES) que, neste último edital (2018), contemplou como política indutora do trabalho em equipe a prática interprofissional e a integração ensino-serviço-comunidade, partindo-se da Educação Interprofissional (EIP) para a implementação dos projetos político-pedagógicos dos cursos na área da saúde.
A prática integrada passa a ser uma política que visa qualificar os profissionais e aprimorar a formação de estudantes de graduação da área da saúde de modo interdisciplinar em consonância às necessidades do Sistema Único de Saúde (SUS).

Variantes da natureza da resposta imune e inflamatória, envolvendo diferenças em sua intensidade, duração, assim como a participação de diferentes tipos celulares e a polarização da resposta imune, atualmente nos permitem considerar que em sua interação com o tecido ósseo a resposta imune inflamatória pode se mostrar tanto destrutiva ou construtiva. Enquanto tal natureza destrutiva é relativamente bem caracterizada devido aos numerosos estudos com foco em inflamações crônicas osteolíticas, estudos com foco específico no papel construtivo da inflamção em situações como o reparo tecidual são mais recentes e menos numerosos. No contexto da inflamação destrutiva, citocinas pro-inflamatórias e associadas a respostas do tipo Th1 e Th17 se mostram associadas à progressão de lesões osteolíticas, como lesões periapicais e periodontais. Por outro lado, nosso grupo descreveu o papel protetor exercido por Tregs (células T regulatórias) no desenvolvimento de lesões periodontais e periapicais, e que resulta em uma drástica mudança no microambiente inflamatório. Entretanto, resultados preliminares demonstram que a migração e ação das Tregs não se mostra isolada, estando outros tipos celulares potencialmente envolvidos no estabelecimento e manutenção do microambiente inflamatório construtivo e pró-reparador. De fato, lesões periapicais inativas também se caracterizam pela atividade imunoregulatória e potencialmente reparativa de células tronco mesenquimais (MSCs), assim como pela predominância de macrófagos M2. Dessa forma, o papel regulatório das Tregs pode ser mediado ou amplificado pelas MSCs ou M2, que por sua vez também podem atuar de forma independente ou inter-relacionada. Neste contexto, é importante destacar que lesões inativas são caracterizadas pela maior expressão de marcadores de reparo tecidual, demonstrando que mesmo em processos inflamatórios crônicos, variações no padrão de resposta podem mediar (ainda que parcialmente) o reparo tecidual, sendo esta uma das evidencias da possível natureza construtiva de determinados processos inflamatórios. De fato, M2 e MSCs são considerados dois tipos celulares determinantes de sucesso do processo de reparo tecidual, assim como estudos sugerem sua participação na determinação do sucesso clínico da implantação de biomateriais, como o Ti. Contudo, apesar de tais suposições, nenhum estudo confirmou o papel imunoregulatório e reparativo de M2 e MSCs no processo de reparo (associado ou não a biomateriais) de forma direta por meio de experimentos causa-e-efeito; assim como no contexto de lesões inflamatórias crônicas de caráter destrutivo. Dessa forma, apresentamos como objetivo geral do presente projeto o estudo de determinantes da natureza construtiva ou destrutiva de microambientes inflamatórios associados ao tecido ósseo, com foco específico em na migração e função de MSCs e M2, sua possível regulação por Tregs; e em como biomateriais podem influenciar o curso da resposta deflagrada por sua implantação determinando o sucesso ou insucesso de sua aplicação. Adicionalmente, propomos análises exploratórias como foco em perfis genéticos com potenciais inflamatório e reparador opostos para a possível identificação de novos mecanismos imunoregulatórios que possam contribuir para a determinação da natureza construtiva/destrutiva de microambientes inflamatórios. Para tanto, realizaremos experimentos in vivo com animais geneticamente modificados, assim experimentos com foco na inibição ou indução (farmacológica) de determinados fatores, e experimentos in vitro, que em conjunto permitirão o estabelecimento de relação causa-e-efeito entre a migração, polarização e ação de subtipos celulares específicos, elucidando seu papel nos mecanismos imunoregulatórios que determinam a natureza construtiva ou destrutiva de microambientes inflamatórios associados ao tecido ósseo, com potencial aplicação para clínica.

A angiogênese e a osteogênese são processos interligados durante o desenvolvimento do esqueleto. Células endoteliais e ósseas secretam vários mediadores que auxiliam na comunicação entre essas células para estabelecer a homeostase óssea adequada. O leucotrieno B4 (LTB4) é um fator de degradação óssea, secretado na artrite em condições inflamatórias por vários tipos de células, incluindo as células ósseas tais como, osteoblastos e osteoclastos. Embora a maior parte do conhecimento baseia-se na atividade de reabsorção óssea mediada por leucotrieno, o mecanismo de ação do LTB4 a partir de osteoblastos para conduzir a osteoclastogênese é desconhecido, especialmente a contribuição de células endoteliais. As células endoteliais expressam o receptor de LTB4 (BLT1), e a sua ligação aumenta a angiogênese mediada pelo Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF). VEGF é um fator secretado também conhecido por induzir a diferenciação de osteoblastos e a expressão do ligante do receptor do ativador do fator nuclear kappa B (RANKL), além de induzir diretamente a osteoclastogênese. Nossa hipótese é que VEGF endotelial pode ser um alvo para os LTB4 derivados das células ósseas para aumentar osteoclastogênese na condição de artrite reumatóide. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar o envolvimento do LTB4 na interligação entre as células endoteliais e células ósseas dependentes de VEGF durante esqueletogênese. Para isso, células endoteliais vasculares ósseas primárias serão tratadas com LTB4 e a expressão de VEGF será avaliada. Em seguida, o efeito direto ou indireto (dependente de osteoblastos) de VEGF secretado na osteoclastogênese será determinado. A contribuição de osteoblastos e osteoclastos como fonte de LTB4 para induzir a superexpressão de VEGF será também avaliada por meio de co-cultura. Os resultados de experimentos in vitro serão adicionalmente validados in vivo, usando um modelo animal de artrite. Após tratar os camundongos com artrite com o antagonista do receptor BLT1, os níveis de VEGF no vaso sanguíneo ósseo, os níveis do marcador de reabsorção óssea CTX e níveis de VEGF no soro serão quantificados. Estudando o novo papel do LTB4 na interligação entre células endoteliais e ósseas mediadas por VEGF poderá trazer novas perspectivas de alvos terapêuticos para a perda óssea em condições de artrite. 
FAPESP: Proc. 2016/08890-3

Apesar de vantagens como alta resistência e biocompatibilidade, a cimentação da zircônia ainda é crítica. O presente trabalho avaliará a influência da infiltração de nanotubos de TiO2 na biocompatibilidade e na resistência de união de um cimento resinoso a uma zircônia. Nanotubos de TiO2 serão produzidos por síntese alcalina e caracterizados através de análises de difração de raio X, microscopia eletrônica de varredura e microscopia eletrônica de transmissão. Em seguida, serão misturados com álcool absoluto (50% em peso) e aplicados sobre discos de zircônia pré-sinterizada (IPS e.max Zircad). As cerâmicas serão sinterizadas e as superfícies serão caracterizadas através de microscopia confocal a laser e microscopia eletrônica de varredura (MEV). A biocompatibilidade será avaliada através de cultura de células, viabilidade celular, MTT, Cristal Violeta e MEV. As cerâmicas serão dividas em três grupos (n = 10): 1) com a aplicação de nanotubos; 2) sem a aplicação de nanotubos; 3) com a aplicação de nanotubos e adesivo Single Bond Universal. Discos de cimento resinoso dual (RelyX Ultimate) também serão avaliados (n = 10). Para a resistência de união quatro grupos serão avaliados (n = 10): 1) controle - sem aplicação de nanotubos de TiO2; 2) com aplicação de nanotubos de TiO2; 3) sem aplicação de nanotubos de TiO2 e asperização com jato de Al2O3 100¼m; 4) com aplicação de nanotubos de TiO2 e asperização com jato de Al2O3 100¼m. Após a sinterização um sistema adesivo será aplicado (Single Bond Universal) e quatro cilindros de cimento resinoso (RelyX Ultimate) com diâmetro de 1,40 mm e 1 mm de altura serão confeccionados sobre cada disco e fotoativados por 20 s. Os espécimes serão submetidos ao teste de microcisalhamento e as superfícies serão analisadas em estereomicroscópio para avaliar o tipo de falha envolvida. Os dados serão analisados através de ANOVA a um critério e Tukey (± = 5%).

Dados recentes apontam que a desmineralização óssea pode promover a consolidação de enxertos e a proliferação e diferenciação celular, mas os mecanismos biológicos envolvidos nesse processo precisam ser esclarecidos. Serão investigados, em calvária de ratos, os efeitos da desmineralização óssea sobre: 1) o reparo de enxertos ósseos em bloco cujas superfícies de contato serão desmineralizadas da mesma forma; 2) o comportamento de osteoblastos humanos cultivados sobre superfícies ósseas desmineralizadas da mesma forma quanto: a) à morfologia e a área de cobertura da superfície pelas células à microscopia eletrônica de varredura (MEV); b) à atividade sintética celular pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) quanto à expressão de metaloproteinases (MMP-2, MMP-9), osteopontina (OPN), sialoproteína óssea (BSP), gene da anquilose progressiva (ANKH), fosfatase alcalina, colágeno tipo I e Runx-2; c) a capacidade de deposição de cálcio pelas células através de método colorimétrico. As superfícies desmineralizadas serão caracterizadas: quanto à composição, através de espectroscopia de energia dispersiva (EDS); quanto à expressão de proteínas ósseas morfogenéticas (BMP's) por microscopia confocal e quanto à rugosidade superficial, por perfilometria. Dados quantitativos colhidos da microscopia óptica convencional, µCT, MEV, RT-PCR e colorimetria serão comparados pelo teste ANOVA e pós-teste de Tukey e os dados relacionados à análise da superfície óssea serão comparados pelo teste t de Student, ambos com nível de significância de 95 %.

O presente estudo será dividido em duas etapas distintas. A primeira etapa tem por objetivo avaliar o efeito da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) sobre grupos específicos de microrganismos provenientes de lesão de cárie em dentina. Amostras de dentina infectada serão coletadas de dez crianças com idades entre 7 e 11 anos. As amostras serão utilizadas como inóculo para o crescimento de biofilmes sobre blocos de dentina bovina por 72 h. Em seguida, os biofilmes serão tratados pela associação de curcumina e um LED azul (420 nm) ou de azul de metileno e um LED vermelho (630 nm). A viabilidade de grupos de microrganismos específicos será determinada pelas contagens de unidades formadoras de colônia de microrganismos totais viáveis (Agar Soja Triptona Sangue), estreptococos totais (Agar Mitis Salivarius), estreptococos do grupo mutans (Agar Mitis Salivarius com bacitracina a 0,2%) e lactobacilos (Agar Rogosa com ácido acético glacial a 0,13%). O método de espectrofotometria enzimática será utilizado para avaliar a concentração de L-lactato em meio de cultura. A quantificação de microrganismos totais, estreptococos totais, lactobacilos totais, Prevotella spp., Bifidobacterium spp., Streptococcus mutans, Streptococcus intermedius, Lactobacillus acidophilus, Veillonella spp., Propionibacterium spp. e Actinomyces naeslundii serão realizadas pela técnica de PCR em tempo real. A segunda etapa do estudo avaliará o efeito de protocolos distintos de aPDT sobre a viabilidade de microrganismos localizados em diferentes profundidades de biofilme. Para tanto, biofilmes intactos, submetidos ou não à aPDT, serão corados pela mistura de brometo de etídio e diacetato de fluoresceína e analisados pelo método de microscopia confocal de varredura. A análise estatística será conduzida de acordo com a normalidade e homogeneidade dos dados. Valores de P<0,05 serão considerados significativos.

O objetivo do projeto será avaliar a citotoxicidade do verniz de tetrafluoreto de titânio (TiF4) comparado ao fluoreto de sódio (NaF), independentemente da concentração de fluoreto e tempo de tratamento, pela análise da viabilidade, morfologia e tipo de morte celular (apoptose e necrose). NIH3T3 serão cultivados em DMEM suplementado com soro fetal bovino 10%, a 37o C, em atmosfera úmida, a 5% CO2. As células serão tratadas com DMEM contendo verniz de TiF4 ou NaF (F a 0,95%, 1,9% e 2,45%) em microplacas de 24 poços. Após 6, 12 e 24 h, as células serão submetidas ao teste de viabilidade (n=6, MTT) e análise morfológica (n=3, imagens HE). Adicionalmente, sinais celulares envolvidos na apoptose serão avaliados (n=3): padrões de apoptose mediados pela mitocôndria ou pelo receptor da morte. As células serão coradas com Hoechst 342 e iodeto para diferenciação entre necrose e apoptose, assim como serão examinadas pelo método do TUNEL, usando microscopia de fluorescência e confocal, respectivamente. A atividade das caspases-3, -8 e -9 serão avaliadas pelo leitor de ELISA a partir de uso de kits de ensaio. O RNAm será isolado e o DNAc para citocromo c, proteínas Bax, Bad (pró-apoptóticas), Bcl-2 (anti-apoptótica), PARP (polimerase poli(Ribose-ADP)), VDAC (canal iônico dependente de voltagem) e Fas-L (ligante ao receptor da morte) obtido por transcrição reversa será amplificado por PCR quantitativo (qPCR). Por fim, a expressão de citocromo c, das proteínas Bax, Bad, Bcl-2, PARP, VDAC e Fas-L será detectada por Western Blot. Os dados serão estatisticamente analisados considerando um nível de significância de 5%.

O emprego terapêutico de plantas medicinais para prevenção e manutenção da saúde vem crescendo diariamente, e este aumento pode estar relacionado devido a crenças existentes de que um produto natural não proporciona malefícios. Entretanto, para o uso adequado das plantas medicinais é vital o conhecimento de seus componentes ativos e de suas potencialidades tóxicas e terapêuticas. Algumas aplicações na medicina popular, para as folhas de Qualea grandiflora, são referentes a doenças de origem inflamatória. Algumas moléculas envolvidas em processos inflamatórios, tanto na destruição tecidual como no processo de reparo, são as chamadas metaloproteinases de matriz (MMPs). Dessa maneira o propósito deste estudo é caracterizar quimicamente os componentes presentes no extrato hidroalcoólico de folhas de Q. grandiflora e avaliar a influência desse extrato em fibroblastos e pré-osteoblastos, com foco na atividade e regulação das MMPs e seus inibidores (também chamados de TIMP). Será realizada a caracterização do extrato de Q. grandiflora por meio do processo de triagem cromatográfica que consistirá na coleta das folhas sadias, secagem e pulverização, percolação em etanol 70%, partição em solventes. A caracterização do extrato será realizada por meio da identificação dos compostos nele presentes por HPLC-PAD-MS; além disto, será realizada a quantificação de marcadores químicos selecionados por HPLC-PAD. Para os testes de citotoxicidade os fibroblastos e pré-osteoblastos serão cultivados em meio de cultura com diferentes concentrações (extrato bruto; 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000) do extrato de folhas de Q. grandiflora. Decorrido os períodos de 24, 48, 72 e 96 horas após o tratamento com as diferentes concentrações do extrato, será mensurada a viabilidade celular por meio dos testes de redução do MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazólio) e incorporção do cristal violeta. Uma parte das amostras coletadas será utilizada para a análise das MMP-2 e 9, que será realizada por meio da zimografia, e a expressão da proteína TIMP-2 será feita pelo método de Western Blot. Realizaremos o RT-PCR para quantificar os transcritos (RNAm) das MMPs-2 e 9 e TIMP-2. Os valores serão analisados pelo método ANOVA, complementado pelo teste de Tukey e análise de Kruskal-Wallis complementada pelo teste de Dunn, quando obedecerem à distribuição normal e não-normal, respectivamente. O nível de significância adotado será o de 5% (p<0,05).

Fluoride (F) is commonly used in dentistry for the prevention of caries. F balance within the body is modulated by its intake, uptake and removal, and the kidneys are particularly vulnerable to F toxicity. Just as F excretion depends on renal function, so renal function can, in turn, be affected by F. The nephrotoxic effects of F involve, among other factors, impairment of the function of cells, tubular lesions, coagulation necrosis of the proximal tubules and diuresis. Studies recently conducted by our research group have shown that some features of F metabolism differ in two strains of mice, A/J and 129P3/J. Furthermore, F causes extensive changes in the renal proteome of these two strains. Significantly, Na+/H+ exchange regulatory cofactor NHE-RF3 (PDZK1) expression was reduced in the kidneys of F-treated 129P3/J mice. This effect could influence ion reabsorption, which is consistent with results showing a lower volume of excreted urine in the 129P3/J strain. In addition, exposure to low F levels increased the expression of serine/threonine-protein phosphatase PP1, which mediates functional regulation of many proteins, including ion channels and transporters. Direct effects of F on transport proteins, including Na+/K+-ATPase, CFTR and calcium transporters, have also been described; however, our knowledge of the effects of F on ion transport in kidney epithelial cells is incomplete, largely due to the complexity and diversity of the physiological interactions involved. In this project we propose to build on our recent studies by performing a proteomic analysis of the effects of F on membrane proteins expressed in the Madin-Darby canine kidney (MDCK) cell line. Additionally, we will study the effects of F on the physiology and cell biology of the same cell line. Our overall aim is to investigate the effects of exposure of renal epithelial cells to F at a range of concentrations similar to those likely to occur in the nephron during fluorosis.

Descrição: Chamada MCTI/CNPq/CT-SAÚDE/CTBIOTECNOLOGIA/MS/SCTIE/DECIT/DECIS - Nº 47/2013 - Novas Terapias Portadoras de Futuro.

O ?USP Recicla? foi lançado para a comunidade universitária em agosto de 1994, após troca de idéias e planejamento, a respeito da preservação ambiental, no âmbito acadêmico e comunitário, e sobre questões relacionadas aos resíduos sólidos gerados pela comunidade, numa estreita conexão entre os processos naturais de degradação ambiental e os modos sociais de uso dos recursos naturais. Seguindo as orientações sobre a questão dos resíduos gerados, no ano de 2003, a Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB) inaugurou o seu primeiro Laboratório de Resíduos Químicos (LRQ), o qual serviu para recuperação e tratamento de resíduos proveniente da mesma e do Hospital de Reabilitação de Anomalias Craniofaciais (HRAC ou Centrinho). Devido a um aumento significativo na demanda desses materiais, tornou-se necessário a construção de um novo laboratório, cujas obras foram recentemente concluídas. Nesse sentido, o campus de Bauru tem procurado encontrar soluções, além das citadas anteriormente, para os resíduos gerados/produzidos dentro da unidade, bem como educar/conscientizar os sevidores docentes, não docentes e alunos sobre o consumo, desperdício e cidadania. Nosso projeto envolve três subprojetos desenvolvidos por diferentes equipes com o mesmo objetivo geral: educar a população interna do campus e tratar os resíduos gerados. No primeiro subprojeto será realizado um levantamento qualitativo e quantitativo sobre os resíduos gerados no campus, em paralelo com a conscientização dos entrevistados. No segundo subprojeto será feita uma proposta para aprimorar a técnica de impregnação salina em peças anatômicas inicialmente pré-fixadas em formol, visando a substituição do formol a longo prazo. No terceiro subprojeto, é apresentada uma proposta para o tratamento e descarte adequado do formol utilizado no campus.

O Brasil apresenta uma biodiversidade de plantas do cerrado o que facilita seu estudo por pesquisadores em diversas áreas. A aroeira (Astronium urundeuva) é uma dessas plantas que vem sendo estudada não só na medicina, como também na odontologia, com potencial poder antiinflamatório e antimicrobiano, além de favorecer o processo de reparo. Assim, esse projeto tem como objetivo principal realizar a caracterização do extrato de aroeira e avaliar a influência de diferentes concentrações do extrato aquoso de aroeira na adesão e proliferação de fibroblastos humanos (linhagem FGH), além da expressão das metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP-2 e MMP-9) in vitro. A caracterização da aroeira será feita por meio do processo de triagem cromatográfica e pelo método HPLC analítico - &quot;Fingerprint&quot;. Serão plaqueadas 3x103 células-poço em 10 placas de 24 poços. O meio de cultivo será substituído por meio de cultura de Eagle modificado por Dullbecco complementado por 10% soro fetal bovino (SFB) em diferentes concentrações do extrato hidroalcoólico de aroeira (extrato puro; 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000). Cada placa será analisada em um tempo experimental que será de 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a adição do meio condicionado. Após cada período experimental, o meio de cultura contendo o extrato de aroeira aquoso será removido, as células serão lavadas com PBS-A e divididas para realização das diferentes análises. As amostras coletadas serão avaliadas quanto a viabilidade celular por meio dos testes de atividade mitocondrial das células sendo realizado pelo método da redução do MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazólio), captação do vermelho neutro, coloração das células pelo método do cristal violeta. Será feita a análise das proteínas MMP-2 e 9 pelo método de Western Blot, bem como sua atividade por meio da zimografia. Os transcritos das MMP-2 e 9 serão quantificados pelo Real Time PCR. Os valores serão analisados pelo método ANOVA, complementado pelo teste

O flúor é um elemento presente no cotidiano de quase toda população brasileira, sendo usado na água de abastecimento (Brasil) e também como terapêutico para osteoporose (comumente na Europa). Em alguns casos, promove o estimulo a formação óssea, aumentando o volume e densidade de osso em alguns pacientes com osteoporose. Além disso, diversos estudos têm apontado o desequilíbrio no remodelamento ósseo (maior atividade osteoclástica) como fator de risco para fraturas osteoporóticas devido ao aumento de perda óssea e a deterioração da sua microarquitetura, onde este processo cíclico de constante remodelamento ósseo desequilibrado é refletido em diversos marcadores bioquímicos. Neste sentido, a análise desses marcadores bioquímicos frente a estímulos exógenos (consumo de fluoreto) pode auxiliar na compreensão de como esses elementos são capazes de influenciar no processo de mineralização. O monitoramento das alterações metabólicas (nível celular e molecular) também pode fornecer pistas sobre a resistência de certos indivíduos ao tratamento e sobre a eficácia terapêutica, norteando assim alvos mais específicos para o tratamento. Porém, restam ainda algumas dúvidas quanto à eficiência do flúor na redução de risco de fraturas. O mecanismo preciso pelo qual o flúor influencia a formação e mineralização óssea não está totalmente esclarecido, assim como em quais espécies e concentrações tem efeito patológico. Para investigar quais são os marcadores bioquímicos suscetíveis ao tratamento com o flúor, serão utilizados osteoblastos oriundos de C3H/HeJ e C57BL/6J, duas espécies de camundongos com maior e menor densidade óssea, respectivamente. Através de uma abordagem in vitro, será verificado qual papel do flúor no comportamento de osteoblastos (índice de morte celular e nível de diferenciação dos osteoblastos) e a modulação de elementos responsáveis pela degradação da matriz extracelular. Proc. n° 2010/02025-2

Entre as várias terapêuticas propostas para o tratamento da osteoporose, a administração de altas doses de fluoreto é uma alternativa que ainda apresenta controvérsia na literatura. O fluoreto se destaca por influenciar na atividade dos osteoblastos, os quais são responsáveis por mediar a síntese do osso. No entanto, o mecanismo de ação do fluoreto em células do tecido ósseo (osteoblastos, osteócitos e osteoclastos) ainda não foi bem esclarecido. Deste modo, este trabalho visa avaliar a reparação óssea alveolar de ratos sob o efeito do fluoreto administrado na água de beber. Neste trabalho serão utilizados 4 grupos com camundongos das linhagens C57BL/6J (total de 56) e C3H/HeJ (total de 56) de 45 dias de vida, os quais receberão água deionizada e água com 50 ppm de fluoreto. Serão feitos os procedimentos cirúrgicos extraindo o incisivo superior direito e posteriormente os animais serão eutanasiados 7, 14, 21 e 28 dias. Imediatamente após a eutanásia será feita uma punção cardíaca para obtenção do plasma sanguíneo para análise de fluoreto e obtenção da peça com alvéolo dental direito. Serão feitas análises microscópicas (coloração em Hematoxilina Eosina), Imunohistoquímica (ligante do ativador do receptor do fator kappa B nuclear: RANKL e osteoprotegerina: OPG) e de proteínas referentes ao reparo ósseo (metaloproteinases de matriz 2 e 9: MMP-2 e 9) por meio da técnica de Zimografia. As análises estatísticas serão feitas através do teste estatístico one-way ANOVA complementado pelo teste de Tukey, teste de Kruskal-Wallis complementado pelo teste de Dunn e serão pelo o teste &quot;t&quot;, de acordo com sua indicação (p<0,05). Proc. n° 2011/01425-0

O flúor (F), na forma de fluoreto de sódio (NaF), é um elemento presente no cotidiano de quase a totalidade da população brasileira, sendo usado na água de abastecimento (Brasil), em produtos para uso caseiro e profissional visando a prevenção da cárie dentária (diversos países) e também na terapia da osteoporose (comumente na Europa). Assim sendo, é importante o entendimento do efeito do flúor tanto na prevenção das lesões dentárias quanto no reparo ósseo. Para o uso tópico na cavidade bucal, sais fluoretados cuja eficácia seja maior que o NaF deverão ser testados quanto à citotoxicidade de fibroblastos anteriormente a estudos clínicos, pensando em possíveis efeitos colaterais à mucosa bucal. Da mesma forma, diferentes agentes fluoretados deverão ser testados quanto à viabilidade de células pré-osteoblasticas, antes do uso terapêutico in vivo no tratamento da osteoporose, condição comumente encontrada na população mais idosa. Portanto, este trabalho será dividido em duas fases, sendo cada uma executada por um aluno de Iniciação científica. A 1ª etapa testará o efeito do TiF4 adicionado ao meio de cultura, em diferentes concentrações e pH, na viabilidade e morfologia de fibroblastos NIH3T3 em comparação ao NaF e ao meio de cultura sem agente fluoretado. Para tal, fibroblastos da linhagem NIH3T3 serão cultivados em meio DMEM. As células serão mantidas no meio de cultura durante 48h, a 37ºC e à atmosfera de CO2 5%. Na seqüência, as células serão divididas em 9 grupos de acordo com as seguintes condições do meio de cultura: a) controle: meio de cultura (pH 8,5); b) meio de cultura com NaF (2,45% F, pH 4,5); c) meio de cultura com NaF tamponado (2,45% F, pH 8,5); d) meio de cultura com NaF tamponado (1,225% F, pH 8,5); e) meio de cultura com NaF tamponado (0,6125% F, pH 8,5); f) meio de cultura com TiF4 (2,45% F, pH 1,2); g) meio de cultura com TiF4 tamponado (2,45% F, pH 4,5); h) meio de cultura com TiF4 tamponado (1,225% F, pH 4,5); e i) meio de cultura com TiF4 tamponado (0,6125% F, pH 4,5). Os ensaios de citotoxicidade levarão em conta a viabilidade celular que será analisada pela redução do MTT e a captação do vermelho neutro após 3, 6, 12, 24 e 48h. A avaliação da morfologia será realizada pela microscopia de luz, devendo ser descrita a morfologia geral das células, integridade da membrana, descolamento e lise celular. Na 2ª etapa, será avaliado, comparativamente, o comportamento de pré-osteoblastos tratados com diferentes doses e compostos de flúor. Células da linhagem MC3T3 (ATCC) serão incubadas com diferentes concentrações (5 µM, 10 µM, 100 µM e 1 mM) de fluoreto de sódio (NaF) e fluoreto de alumínio (AlF2), a 37oC, nos tempos de 24, 48, 72 e 96 horas. As células serão avaliadas quanto à viabilidade celular (redução do MTT e captação do Vermelho Neutro) e atividades de enzimas (fosfatase ácida total, fosfatase lisossomal e proteína tirosina fosfatase). Os dados serão tabulados e submetidos à análise estatística (p<0,05).

O osso é um tecido conjuntivo especializado, mineralizado que apresenta um processo de remodelação (reabsorção e síntese) constante. O processo de mineralização, síntese do tecido ósseo é marcado inicialmente (ou mesmo precedido) pela liberação das chamadas vesículas de matriz, responsáveis pela maturação dos cristais de hidroxiapatita. Sabe-se que o flúor (na forma de fluoreto) causa alterações químicas e celulares no tecido ósseo, a depender da dosagem e do tempo de exposição a esse elemento. Diversos trabalhos já demonstraram que alterações clínicas importantes, como a osteoporose, osteopetrose e esclerose óssea, podem ser influenciadas pelo fluoreto. Alguns protocolos preconizam o uso do fluoreto como terapêutico (ou em conjunto com outras drogas) para osteoporose. Em face disso, buscamos avaliar o efeito do fluoreto na diferenciação de osteoblastos e síntese/liberação de vesículas de matriz extracelular (VM). Utilizaremos células pré-osteoblásticas derivadas de 2 linhagens de camundongos com densidades ósseas distintas e conhecidas, C3H/HeJ (alta densidade) e C57BL/6J (baixa densidade), submetidas a tratamento com diferentes concentrações de NaF (10-3, 10-4, 10-5 e 0 M) por 24, 48, 72, 96 e 120h. Decorridos os tempos experimentais, realizaremos ensaios comprobatórios da diferenciação osteoblástica e mineralização. Por meio de ultracentrifugação, isolaremos as VM que serão comparadas com as vesículas isoladas do grupo controle (0M de NaF) quanto ao conteúdo protéico (Ensaio de Bradford e expressão protéica por Western Blotting para Fosfatase alcalina; Anexina; Osterix; Runx-2 e BSP) e alteração da expressão gênica de anexina V, osterix, colágeno tipo I, Lrp-5, osteocalcina,, sialoproteína óssea e runx2. Os dados serão expressos como média ± desvio padrão e serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Tukey para as comparações individuais e os testes de Kruskal-Wallis para múltipla comparação (p<0,05). Proc. n° 2010/18934-1

O Objetivo do presente trabalho é avaliar a influência do fluoreto nos processos de síntese e remodelamento ósseo. Neste estudo serão utilizados 4 grupos com ratos Wistar de 80 dias (n=120), os quais receberão água de beber contendo 5, 15 e 50 ppm de flúor e água deionizada (controle) durante todo experimento. Esses animais terão o incisivo superior direito extraído. Os animais serão mortos 0 hora, 7, 14, 21, 30 e 60 dias após a extração e coletado material para análise de proteínas referentes ao reparo ósseo (BMP-2 e 7, MMP-2 e 9, TRAP, colágeno, osteonectina e sialoproteína óssea), por Zimografia, Western Blot e Proteômica, além de quantificação dos transcritos por RT-PCR. Após a preparação das proteínas dos tecidos reacionais dos ratos, as mesmas serão submetidas à eletroforese bidimensional. Os géis dos grupos controle e tratados serão escaneados utilizando-se o ImageScanner e analisados com o software ImageMaster Platinum. Em adição, o efeito do flúor na atividade das proteínas fosfatases das células ósseas e tecidos adjacentes e a determinação das proteínas fosforiladas em resíduos de tirosina serão realizados através de Western Blotting. Serão investigados os RNAm para MMP-2 e 9, RANK e OPG, pelo real time RT-PCR. A análise paramétrica será realizada utilizando análise de variância (teste de Tukey se p<0,05).

A terapia com laser em baixa intensidade tem sido utilizada para aceleração da cicatrização de feridas, porém muito dos seus mecanismos de ação não estão totalmente esclarecidos, o que reflete a divergência de resultados na literatura. A influência positiva do laser em osteoblastos seria de grande utilidade no campo da regeneração óssea. A descoberta sobre quais proteínas teriam seus perfis alterados e expressão modificada sob a ação do laser, poderia contribuir sobremaneira para o entendimento dos seus mecanismos de ação na remodelação óssea. Diante desses fatos, o objetivo do presente projeto será avaliar o comportamento de osteoblastos humanos submetidos a diferentes intensidades de fototerapia com laser. Serão plaqueadas 103 (viabilidade celular) e 5x103 (atividade enzimática e blots) células da linhagem hFOB 1.19 em placas de 96 poços, as quais serão irradiadas com laser vermelho (660nm) e infravermelho (780nm) nas doses de 3 e 5 J/cm². Os meios condicionados e osteoblastos serão coletados e avaliados quanto à viabilidade celular (contagem de células, redução do MTT e captação do Vermelho Neutro) e atividade de enzimas (fosfatase ácida total (FAT), fosfatase lisossomal (FAL) e proteína tirosina fosfatase (PTP)). A síntese de alguns transcritos e proteínas (metaloproteinases de matriz (MMPs 2 e 9), ligante do ativador do receptor do fator kappa B nuclear (RANKL) e osteoprotegerina (OPG)) será avaliada por meio de zimografia, RT-PCR e proteômica. Após a preparação das proteínas dos osteoblastos humanos, as mesmas serão submetidas à eletroforese bidimensional e zimografia. Os géis dos grupos controle e tratados serão escaneados utilizando-se o ImageScanner e analisados com o software ImageMaster Platinum. Os spots de interesse serão excisados e analisados por espectrometria de massa (MALDI-TOF) para identificação das proteínas. O RT-PCR será realizado para quantificação dos transcritos de MMP-2 e 9, RANKL e OPG. As análises estatísticas serão feitas através dos te

A compreensão do mecanismo molecular do reparo ósseo e a influência de alguns fatores sobre esse reparo podem ajudar no tratamento de fraturas e defeitos ósseos. O flúor é um elemento presente no cotidiano de quase toda população brasileira, sendo usado na água de abastecimento (Brasil) e também como terapêutico para osteoporose (comumente na Europa). Assim sendo é importante a compreensão da influência do flúor no reparo fisiológico do tecido ósseo. Neste estudo serão utilizados 4 grupos com ratos Wistar de 80 dias (n=200), os quais receberão água de beber contendo 5, 15 e 50 ppm de flúor e água deionizada (controle) durante todo experimento. Esses animais terão o incisivo superior direito extraído. Os animais serão mortos 0 hora, 7, 14, 21 e 30 dias após a extração e coletado material para análise microscópica (coloração de Hematoxilina Eosina e imunistoquímica), de flúor e proteínas referentes ao reparo ósseo (BMPs, MMPs, TRAP, RANK, RANKL e OPG), por zimografia, western blot e proteômica. Será feita análise de flúor nos tecidos reacionais com o eletrodo, após difusão facilitada por hexamethyldisiloxano. Após a preparação das proteínas dos tecidos reacionais dos ratos, as mesmas serão submetidos à eletroforese bidimensional. Os géis dos grupos controle e tratados serão escaneados utilizando-se o ImageScanner e analisados com o software ImageMaster Platinum. Os spots de interesse serão então excisados e analisados por espectrometria de massa (MALDI-TOF) para identificação das proteínas. Em adição, o efeito do flúor na atividade das proteínas fosfatases das células ósseas e tecidos adjacentes e a determinação das proteínas fosforiladas em resíduos de tirosina serão realizados através de Western Blotting. A análise paramétrica será realizada utilizando análise de variância (teste de Tukey se p<0,05). &#10;FAPESP: Proc.2006/06430-3

Neste projeto será avaliado o comportamento de osteoblastos humanos tratados com diferentes doses de flúor. Células da linhagem hFOB 1.19 serão incubadas com diferentes concentrações (5 µM, 10 µM, 100 µM e 1 mM) de fluoreto de sódio (NaF), a 37oC, nos tempos de 24, 48, 72, 96 e 120 horas. As células serão coletadas ao final dos respectivos períodos experimentais e serão avaliadas quanto à viabilidade celular (contagem de células, redução do MTT e captação do Vermelho Neutro), atividade de enzimas: fosfatase ácida total (FAT), fosfatase lisossomal (FAL) e proteína tirosina fosfatase (PTP) e síntese de alguns transcritos e proteínas: metaloproteinases de matriz (MMPs 2 e 9), ativador do receptor do fator kappa B nuclear (RANK) e osteoprotegerina (OPG), por meio de zimografia, RT-PCR e proteômica. Após a preparação das proteínas dos osteoblastos humanos, as mesmas serão submetidas à eletroforese bidimensional e zimografia. Os géis dos grupos controle e tratados serão escaneados utilizando-se o ImageScanner e analisados com o software ImageMaster Platinum. Os spots de interesse serão excisados e analisados por espectrometria de massa (MALDI-TOF) para identificação das proteínas. O RT-PCR será realizado para quantificação dos transcritos de MMP-2 e 9, RANK e OPG. A análise paramétrica será realizada utilizando análise de variância (teste de Tukey se p<0,05).

O aprendizado de disciplinas de ciências básicas, no curso de graduação em Odontologia e Fonoaudiologia, é necessário e cada vez mais exigido para a formação de um profissional atento aos avanços tecnológicos na área da saúde. No entanto é preciso conhecer as expectativas dos alunos bem como sua impressão sobre essas informações básicas, uma vez que isso vai influenciá-los decisivamente no aprendizado dessa disciplina. O objetivo deste trabalho é avaliar a percepção dos alunos do primeiro ano do curso de Odontologia e Fonoaudiologia da Faculdade de Odontologia de Bauru-USP, no ano de 2009, em relação à importância da disciplina de bioquímica na sua formação e atuação profissional, assim como foi feito no ano letivo de 2007 e 2008 consolidando as informações com um maior número de entrevistados. Serão propostos dois questionários compostos de questões de múltipla escolha e questões abertas sobre a disciplina de bioquímica, avaliando sua aplicabilidade e importância no cotidiano do profissional, além de uma pergunta aberta para possíveis sugestões e críticas. Os alunos responderam às questões, de forma voluntária, sem a necessidade de se identificarem, para que não sofram inibição ou mesmo receio de qualquer comentário sobre respostas individuais. As respostas serão avaliadas e os dados tabulados de forma a revelar a percepção dos alunos de graduação (turmas do primeiro ano de Odontologia e Fonoaudiologia), sobre a disciplina de bioquímica. Os resultados obtidos serão analisados por estatística descritiva, por meio da confecção de tabelas e gráficos.

O enxerto ósseo autógeno têm sido o material de escolha para a terapia de perdas ósseas. Inconvenientes como necessidade de um outro procedimento cirúrgico para obtenção do enxerto, longo período de convalescença, susceptibilidade à infecções, e risco de reabsorções ósseas progressivas e constantes, limitada qualidade e quantidade do material impõem a necessidade de alternativas capazes de proporcionar a reparação de defeitos ósseos, inclusive os extensos. O osso autógeno produzido ex vivo (bioengenharia óssea, aliando células osteoprogenitoras e fatores de crescimento sobre carreadores biocompatíveis e osteocondutores) representam uma alternativa concreta e aplicável ao enxerto autógeno sem as restrições dos materiais exclusivamente osteocondutores. Fosfatos de Cálcio e HA são reconhecidamente bons substratos para células osteoprogenitoras, porém podem ter reabsorção lenta. Matrizes de colágeno polianiônico produzidas por hidrólise da cadeia lateral de asparaginas e glutaminas resultam em um potencial carreador de células que não promove resposta inflamatória acentuada quando implantada abaixo do periósteo do crânio de ratos, mineralizando in vivo de maneira similar ao processo fisiológico. A associação de células osteoprogenitoras a estes materiais pode resultar em enxertos autógenos promissores para a terapia de perdas ósseas. A adição de fatores de crescimento aumentando a proliferação (fator de crescimento derivado de plaquetas, PDGF, predominante no plasma rico em plaquetas) e diferenciação celular poderá viabilizar a terapia celular desta classe de injúria. A fim de investigar o potencial terapêutico e as bases moleculares e celulares que regem a interação entre células e matrizes tridimensionais pretendemos avaliar a capacidade osteogênica de células osteoprogenitoras obtidas do periósteo associadas ao pericárdio bovino hidrolizado por 24 e 48 horas e de blocos porosos de fosfato de cálcio (beta-TCP e hidroxiapatita). O periósteo será obtido da calvária