Claudimara Ferini Pacicco Lotfi.

O Laboratório Multiusuário do Departamento de Anatomia, o Multi-ICB3, foi inaugurado em 2001 através de financiamento FAPESP (processo 2000/05530-8) como proposta de modernização do departamento de Anatomia. Foram adquiridos equipamentos para histologia, microscopia eletrônica e de luz, biologia molecular, equipamentos analíticos, dentre outros. Desde então, o MULTI-ICB3 faz parte da rotina da pesquisa do departamento e visa disponibilizar equipamentos e serviços de qualidade para sua comunidade interna, para o ICB e demais instituições da USP e fora da USP. Essa estratégia foi absolutamente fundamental para o compartilhamento de equipamentos e recursos, o que otimizou sobremaneira os recursos públicos, ajudando a impulsionar a pesquisa de qualidade no Departamento de Anatomia (DA). Atualmente, o DA é composto por 19 docentes RDIDP, que são pesquisadores renomados e líderes em diversas áreas da pesquisa biomédica, e 6 funcionários técnicos, 3 exclusivos do Multi-ICB3. Devido a crescente demanda por parte de startups de base tecnológica para a condução de suas pesquisas, entendemos como prioritário e estratégico uma renovação e modernização de parte do nosso parque de equipamentos. É uma área estratégica para os pesquisadores do ICB e da USP, e temos condição de ampliação na oferta e melhoramento do que já temos expertise na área de histologia, para o preparo de amostras para microscopia eletrônica, bem como para análise molecular. Portanto, a modernização das nossas instalações e aquisição de novos equipamentos é fundamental para mantermos uma infraestrutura de qualidade para nossas pesquisas e serviços para o departamento de Anatomia, o ICB, USP e demais instituições públicas.

The extracellular matrix (ECM) differs greatly across organs owing to complex variations required for specific organ structure and function. ECM modulates cell behavior and regulates cell-cell interactions in physiological mechanisms, processes largely dependent on modulation of cell signaling pathways. Disruptions of these mechanisms may lead to disease. In the current project we propose to decode ECM composition, its interactions with different cellular components, and signaling pathways in homeostatic and pathological conditions of three organs that share individual cells with biological resemblance, namely brain, adrenal gland, and kidney. Our aims include: 1) to decode the ECM composition in health and disease by proteomic analysis, 2) to study the crosstalk between the ECM and the cellular components, concerning signaling pathways, by single-cell transcriptomic approach, 3) to address the impact of the ECM changes in experimental 2D, 3D and animal models, and 4) to identify novel therapeutic possibilities targeting ECM components and altered signaling pathways, by building a 3D organotypic model in a microfluidic platform for drug screening and generating strategic, novel omics data. We expect to identify (dis)similarities between human and experimental animal ECM composition to refine the validity of laboratory animal models to address human diseases. We also expect to determine key ECM components that impact on cellular phenotype and signaling pathways in health and disease. The use of 3D organotypic models including the unraveled ECM characteristics is expected to closely mimic human organs and reduce the number of animal experiments in pre-clinical trials.

O desenvolvimento da adrenal tem seu inicio na formação bilateralmente do primórdio adrenogonadal (AGP) marcada pela expressão do fator esteroidogênico 1 (SF-1). Células SF-1 positivas irão formar o primórdio adrenal (AP) que originará a adrenal fetal. A adrenal fetal que se expande rapidamente devido ao crescimento da zona fetal (ZFe) seguida do aparecimento da zona definitiva (ZDe), que dará origem à adrenal adulta. Em humanos, após o nascimento, a ZFe sofre apoptose e diferenciação progressiva para formar as zonas glomerulosa e fasciculada entre 2-4 anos de idade, enquanto a zona reticular somente se diferenciará na adrenarca, entre 6-9 anos de idade. Em camundongos, a ZFe somente desaparece na puberdade no macho e nas fêmeas após a primeira gestação, e durante esse período essa zona remanescente é denominada zona X (ZX). Em um trabalho recente do nosso grupo mostramos que animais SF-1/SOCS3 knockout (KO) apresentaram retenção da ZX em camundongos machos e fêmeas tornando-se um modelo para o estudo do processo de diferenciação do córtex adrenal, da importância do gene SOCS3 e consequentemente da via JAK/STAT nesse processo. Portanto, tendo como hipótese que a via JAK/STAT/SOCS3 tem um papel na diferenciação da glândula adrenal e para testar essa hipótese teremos os seguintes objetivos: 1) caracterizar morfologicamente e funcionalmente as adrenais de camundongos SF-1/SOCS3KO machos e fêmeas em diferentes idades, através de análises histoquímicas e imunohistoquímicas da glândula íntegra; 2) analisar genes marcadores das ZX e ZDe de animais em diferentes idades por microdissecção e qPCR; 3) analisar parâmetros relacionados com a diferenciação celular, como SF-1, DAX-1 e FAdE, por qPCR e immunoblotting em cultura de células primárias do córtex adrenal de animais SF-1/SOCS3KO e controle; 4) analisar a ativação da via JAK/STAT através da análise da fosforilação das STATs em cultura de células primárias do córtex de animais SF-1/SOCS3KO e controle; 5) modular a expressão de SOCS3, para sua superexpressão utilizando vetor lentiviral ou para seu silenciamento através de siRNA, nas culturas de células primárias de respectivamente, camundongos SF-1/SOCS3 KO e animais controle e 6) analisar por qPCR marcadores de diferenciação celular, como SF-1, DAX-1 e FAdE, além da expressão da proteína StAR e das enzimas esteroidogênicas CYP11B1 e CYP11B2 nas células com SOCS3 superexpresso ou silenciado. Ao final desse projeto teremos um maior entendimento da participação ainda não explorada e compreendida da via JAK/STAT/SOCS3 na diferenciação e função do córtex adrenal de camundongos, bem como da importância do papel da zona fetal humana na formação de tumores adrenais pediátricos, uma vez que a manutenção de células embrionárias da zona fetal em humanos e suas características foram encontradas em tumores adrenocorticais pediátricos.#8195;

POD-1/TCF21 pode inibir o fator de transcrição Sf-1/NR5A1 durante o desenvolvimento da adrenal. Essa inibição pode levar a alterações no desenvolvimento da adrenal, no entanto seu aumento está relacionado com o aumento da proliferação e tumorigênese adrenal. Estudo anterior do nosso grupo mostrou que a hiperexpressão de POD-1 inibe a expressão do SF-1 endógeno através da ligação no sitio E-box do promotor de Sf-1, que resultou na diminuição da proteína esteroidogênica StAR. Embora não tenha afetado a viabilidade celular, a análise de POD-1 em carcinomas adrenocorticais (ACC) de pacientes mostrou uma relação inversa entre a expressão desse gene e diferentes genes de controle do ciclo celular, entre eles BUB1B, um dos marcadores moleculares para prognóstico de ACC em adultos. Portanto, em vista da importância de SF-1 em tumores adrenocorticais (ACT), e devido às evidências de que POD-1 pode regular a expressão do gene SF-1 bem como outros genes do ciclo celular, temos como hipótese que a expressão de POD-1 pode ter valor diferencial no diagnóstico de massas adrenais e de prognóstico para ACC. Portanto temos como objetivo 1) analisar a expressão de POD-1 e SF-1 em amostras de cDNA de ACT adultos e pediátricos por reação de TaqMan e qPCR quantitativo, e correlacionar esse dados com os resultados clínicos dos pacientes. Também serão analisadas a expressão combinada de BUB1B e PINK1 e de POD-1 e BUB1B nos ACC de adultos e pediátricos, para testar seu valor de prognóstico. Outros resultados do nosso grupo mostraram que POD1 promove o aumento da expressão gênica de LRH-1 e a diminuição da expressão de SHP, um regulador negativo de LRH-1, em células de tumores adrenocorticais e de hepatocarcinomas. Em conjunto, esses e outros dados sugerem que POD1 pode ter um papel mais amplo como regulador de transcrição em células tumorais e é candidato a gene supressor de tumor. Portanto, 2) a identificação de outros alvos controlados por POD1 podem contribuir no entendimento da sua importância e do seu papel nas células tumorais. Para tal, iremos sequenciar o DNA imunoprecipitado de células de tumor adrenal e de hepatocarcinoma, respectivamente, as linhagens NCI-H295R e HepG2, permanentemente transduzidas com partículas lentivirais expressando POD-1, pelo método ChIP-Seq seguido da validação dos alvos encontrados por ChIP-PCR, como qPCR e immunoblotting. Como a viabilidade celular não foi afetada com o aumento da expressão de POD-1 em ACTs, e em melanomas a regulação negativa de POD-1 foi relacionada com invasão e metástase, 3) iremos analisar se o aumento da expressão de POD-1 em culturas de tumores adrenocorticais diminui a capacidade de migrar e invadir dessas células. Serão utilizadas células permanentemente infectadas com lentivirus expressando POD-1, seguido de ensaios de migração em uma câmara de quimiotaxia contendo micromembrana porosa, e ensaios de invasão em placas com inserto contendo Matrigel. Em resumo, ao final do projeto teremos: 1) estabelecido a importância do fator de transcrição POD-1 em tumores adrenocorticais de adultos e pediátricos, se esse fator pode ser utilizado no diagnóstico e prognóstico desses tumores e outros genes de controle do ciclo celular estão envolvidos; 2) teremos identificado novos alvos, isto é novas sequencias de DNA, que possam estar sendo controlados por POD-1, aumentando nosso conhecimento sobre sua importância em células tumorais e 3) saberemos se POD-1 tem capacidade de controlar a migração celular e portanto a progressão dos tumores adrenocorticais e de outros tumores.

The present project aims at: 1) the ARMC5 genetic and phenotype analysis of PMAH patients and to test the hypothesis of ARMC5 alteration in patients with incidentally found adrenal adenomas. 2) the investigation of the role of ARMC5 in the adrenal cortex to understand the mechanisms involved in CS and adrenal growth 3) the identification of new gene(s) responsible for PMAH.

Estudos em animais "knockout" para o gene da Pró-opiomelanocortina (Pomc-/-) demonstraram que, os animais que sobrevivem à fase adulta, apresentaram obesidade, defeitos na pigmentação e insuficiência adrenal severa. Quando neonatos, a glândula adrenal estava presente macroscopicamente, entretanto decorridas cinco semanas após o nascimento, observou-se uma atrofia severa de todo o órgão, refletindo a dependência dos peptídeos derivados da POMC para a diferenciação, maturação e manutenção da glândula adrenal. O hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) é considerado o principal fator derivado da POMC que atua na glândula adrenal, seja no desenvolvimento, na manutenção ou na esteroidogênese. Apesar de existirem evidências, inclusive do nosso grupo, que os peptídeos da porção N-terminal (N-POMC), possam atuar na manutenção da glândula adrenal, através da indução da proliferação em zonas específicas do córtex adrenal, ainda não se sabe qual a importância destes peptídeos na diferenciação, maturação, e função do córtex adrenal. Esse projeto tem como finalidade a obtenção de animais que possuam um sistema "knock-out" condicional Cre-Lox induzível por tamoxifeno com a finalidade de silenciar o gene Pomc em camundongos, em períodos específicos do desenvolvimento. Com a obtenção desses animais teremos como objetivo avaliar o papel de diferentes tipos e tamanhos de peptídeos N-POMC terminais, sintéticos e extratos, na arquitetura do córtex adrenal, na função da glândula, na ingestão alimentar e na alteração do peso corpóreo durante o período de diferenciação da glândula, que ocorre após o nascimento. A arquitetura da glândula será analisada por imunoflurescência utilizando anticorpos para detectar células em proliferação, em apoptose, positivas para enzimas esteroidogênicas, para marcador específico de zona fetal (Zona X), além da detecção de proteínas da matriz extracelular e de vasos. A capacidade funcional da glândula adrenal será analisada por quantificação da concentração da c

Os receptores nucleares LRH-1 e SF-1 estão envolvidos com a regulação da esteroidogênese nas gônadas e adrenais e com a proliferação em diferentes tipos celulares. Os mecanismos de atuação desses fatores de transcrição e o papel de seus reguladores Dax-1, SHP, USF e Pod-1 no efeito proliferativo de células normais e tumorais não estão bem estabelecidos. Sendo assim, analisaremos o papel de SF-1 e LRH-1 na proliferação de células normais e no controle do processo tumoral da suprarrenal humana. Para testar a hipótese que SF-1 e LH-1 são importantes na proliferação da suprarrenal, utilizaremos culturas primárias de células da adrenal de rato e linhagens de células tumorais NCI-H295 e Y-1, além de culturas de células de tumores adrenais humanos (adenomas e carcinomas) obtidos no nosso laboratório e que são provenientes de fragmentos de tumores de pacientes. Esses diferentes tipos celulares serão transfectados com plasmídeos contendo a seqüência de Pod-1 para testarmos a importância do controle desse fator de transcrição sobre a expressão de SF-1 e LRH-1. A análise da expressão gênica e protéica dos fatores de transcrição e seus reguladores serão feitas através de PCR quantitativo e ?imunoblotting? nas linhagens e culturas de células que estarão ou não transfectadas com Pod-1. O efeito biológico da ação de Pod-1 nos diferentes tipos celulares será analisado através da análise da proliferação e apoptose bem como a expressão de alguns tipos de proteínas relacionadas com o ciclo celular. Além disso, analisaremos a interação de Pod-1 no promotor de Sf-1 e Lrh-1 nos tipos celulares já citados através de ensaios de imunoprecipitação de cromatina (ChIP assay). O melhor entendimento do mecanismo molecular e bioquímico envolvido no processo normal e na progressão da doença se faz importante considerando-se a baixa sobrevida dos pacientes com carcinoma adrenal e a alta incidência de tumores adrenais pediátricos no Brasil.

Vários sistemas têm sido desenvolvidos para o estudo da suprarrenal in vitro como culturas primárias de glândulas normais e de tumores de rato ou de boi; linhagens tumorais de camundongo ou humanas ou ainda células imortalizadas de roedores. Dentre os vários sistemas propostos, os mais utilizados são as linhagens SW-13 e NCI-H295 tumorais humanas e a linhagem Y1 de camundongo. Apesar das contribuições consideráveis para o entendimento dos mecanismos moleculares e bioquímicos que controlam a esteroidogênese, por diferentes motivos, esses sistemas apresentam limitações, principalmente para estudos da expressão gênica de tumores suprarrenais humanas. Sabe-se que a patogênese molecular dos tumores da suprarrenal dos modelos animais é bastante diferente dos tumores humanos, mas poucos são os trabalhos que utilizam culturas de tumores humanos como modelo. Por serem tumores raros e com uma ampla gama de manifestações clínicas, a obtenção e o estabelecimento de culturas celulares representativas dos diversos subtipos tumorais é uma valiosa ferramenta no estudo dos processos fisiopatológicos responsáveis pela gênese e progressão da doença. Com esse intuito nos últimos dois anos nosso laboratório tem se empenhado em estabelecer culturas de células derivadas de tumores do córtex da suprarrenal. Em colaboração com o grupo liderado pela Dra. Berenice B. Mendonça do Departamento de Clínica Médica da FMUSP, até o momento, obtivemos aproximadamente 25 culturas provenientes de tumores do córtex da suprarrenal. Para que estas possam ser utilizadas como modelos e definidas como linhagens, é necessário que sejam caracterizadas sob os pontos de vista morfológico, funcional e molecular. O objetivo deste projeto é a caracterização pormenorizada das culturas obtidas e uma contínua obtenção de novas linhagens celulares obtidas de culturas primárias de tumores do córtex da suprarrenal de humanos, em diferentes contextos clínicos. Com isso, espera-se aumentar o número de ferramentas disponíve

Trabalhos anteriores do nosso laboratório mostraram que o ACTH (hormônio adrenocorticotrópico) estimula o aumento no número de células que incorporam bromodioxiuridina (BrdU) nas zonas mais internas do córtex de adrenais de ratos hipofisectomizados ou tratados com dexametasona (DEX) (Torres & Lotfi, 2007; Baccaro et al, 2007). Resultados mais recentes também mostram que o ACTH reverte o efeito da hipofisectomia, que é de atrofia do córtex adrenal, diminuindo o número de células em apoptose (Torres & Lotfi, em preparação). Essas respostas ao ACTH sugerem o envolvimento da expressão dos genes relacionados com a progressão do ciclo celular e, portanto envolvidos com o equilíbrio entre os fenômenos de proliferação e morte celular. No entanto, as informações sobre quais são esses genes e como é sua expressão in vivo é incipiente. Nesse projeto temos como hipótese que marcadores de ciclo celular, como as ciclinas e outros ainda não conhecidos, precisam ser modulados para que as células adrenocorticais, que compõem as diferentes zonas da supra-renal, progridam de G1 para a fase S do ciclo celular quando estimuladas pelo ACTH e/ou pelo peptídeo N-terminal da POMC, esse último um provável mitogênico da supra-renal. Portanto, para testar essa hipótese e entendermos qual o mecanismo pelo qual ocorre a transição G1-S do ciclo celular nas diferentes zonas da supra-renal de rato, analisaremos a expressão diferencial dos genes relacionados com essa fase do ciclo celular através 1- de ensaios de microarray de membrana, composta por genes relacionados à proliferação e morte celular através da utilização de extratos nucléicos da glândula e de extratos de culturas primárias de células do córtex adrenal; e 2- da análise da expressão das proteínas ciclinas, de seus estimuladores e inibidores (Cdks e CKIs). A análise da expressão das proteínas será realizada através de ensaios de Western blotting ou imunoprecipitação utilizando lisados protéicos de frações das glândulas de supra-renal de

O foco desse projeto é o estudo da ação do ACTH na transição G0-G1-S do ciclo celular de células da supra-renal. Ao descrever os fenômenos envolvidos nessas fases do ciclo celular conseguiremos propor os mecanismos que envolvem as sinalizações intracelulares desencadeadas pela ativação de diferentes receptores e suas interações, e a conseqüente modulação da expressão gênica e protéica das células adrenais. Utilizaremos sistemas in vivo, animais hipofisectomizados ou tratados com dexametasona e em in vitro, mais especificamente culturas primárias de adrenais de ratos, que serão tratados com ACTH, N-terminal da POMC e fatores de crescimento. Com esse projeto daremos continuidade ao projeto anterior que mostrou: 1- diferenças importantes nas vias de sinalização e expressão gênica entre a linhagem tumoral de supra-renal de camundongo, linhagem Y1 e as células isoladas de supra-renal de rato, células glomerulosas e fasciculadas/reticulares tratadas com ACTH e FGF2 (Mattos & Lotfi, 2005); 2- a caracterização de um padrão de expressão das proteínas dos genes de resposta primária das famílias Fos e Jun em supra-renais de rato infundidas com ACTH ou FGF2 (Baccaro et al., 2007) e em animais hipofisectomizados tratados com ACTH ou FGF2 (Torres & Lotfi, submetido) e a provável composição do fator de transcrição AP-1. Nesse projeto teremos como objetivos: 1) Definir outras vias de sinalização iniciadas em diferentes receptores da adrenal relacionado-as com os efeitos biológicos decorrentes dessa ativação; 2) Determinar a composição do fator de transcrição AP-1 em culturas primárias de supra-renal de rato tratadas com ACTH e FGF2 por EMSA; 3) Estudar a ação do ACTH e do peptídeo N-terminal da POMC na proliferação, morte celular e na expressão das proteínas de genes de resposta secundária, ciclinas e seus inibidores, na adrenal de ratos hipofisectomizados ou tratados com dexametasona;. 4) Analisar da regulação de fatores de crescimento endógenos e seus receptores em culturas primá

O desenvolvimento de modelos in vitro tem sido uma alternativa atraente para o estudo da glândula supra-renal e vários sistemas têm sido investigados como, culturas primárias de glândulas normais e de tumores de rato ou de bovino, linhagens tumorais de camundongo ou humana ou ainda células imortalizadas de roedores. Dentre os vários sistemas propostos os que são mais utilizados como sistemas modelos para o estudo da supra-renal são as linhagens tumorais humana SW-13 e NCI-H295 e de camundongo a linhagem Y1. Essas linhagens celulares têm valor considerável no estudo do controle dos mecanismos moleculares e bioquímicos da esteroidogênese, no entanto, apresentam limitações como modelos principalmente para estudo da expressão gênica de tumores adrenais humanos.
Tumores do córtex da supra-renal são achados acidentais freqüentes em 3-7% da população em geral, mas somente uma pequena proporção desses tumores causa alterações endócrinas e menos que 5% são malignos. Em média carcinomas adrenocorticais são diagnosticados tardiamente apresentando metástases ocultas e disseminadas, cujo prognóstico é pobre e com taxa de sobrevivência de 20% em cinco anos. O alto número de alterações cromossômicas e a alteração da expressão gênica observados nesses tumores sugerem que cada tumor é, potencialmente, distinto de todos os outros tumores, tanto do ponto de vista molecular como clínico. 
Apesar dos progressos obtidos a compreensão da biologia dos tumores adrenocorticais é ainda incompleta. Comparativamente, a grande maioria dos trabalhos publicados utiliza carcinomas de modelos animais ou linhagens de células tumorais, mas poucos são os trabalhos que utilizam como modelo cultura primária e/ou estabelecida de tumores humanos. Por serem tumores raros e de difícil diagnóstico a obtenção de culturas de células de tumores da supra-renal pode ser uma valiosa ferramenta no estudo do potencial proliferativo, da cascata de sinalização intracelular e da expressão gênica dos diferentes tumores

O foco desse projeto é o estudo da ação trófica do ACTH, hormônio adrenocorticotrópico, e sua relação com a função parácrina e/ou autócrina dos fatores de crescimento como FGF2, PDGF, VEGF na regulação do ciclo celular de células do córtex da supra-renal. Com esse projeto daremos continuidade ao projeto Jovem Pesquisador que mostrou: 1- diferenças importantes nas vias de sinalização e expressão gênica (MAPK-ERK; PKA e cFos) entre a linhagem tumoral de supra-renal de camundongo, linhagem Y1 e as células isoladas de supra-renal de rato, células glomerulosas e fasciculadas/reticulares tratadas com ACTH e FGF2; 2- similaridades na produção de alguns fatores de crescimento endógenos como FGF2, PDGF e seus receptores entre células normais e a linhagem além de demonstrar uma regulação importante da produção de FGF2, isoforma de 18kDa, estimulado pelo ACTH em células da linhagem Y1. Nesse projeto teremos como objetivos: Investigar e definir novas vias de sinalização iniciadas em receptores de ACTH e FGF2 e a provável interação entre essas vias; determinar a modulação da expressão de genes de resposta primária e secundária, como genes da família fos, jun e myc, ciclinas e cdks e genes inibidores de ciclo celular, estimulados por ACTH e FGF2. Nesse estudo serão utilizadas três abordagens; isolamento das células do córtex da supra-renal através da obtenção de cultura primária de supra-renal de rato, infusão in situ da supra-renal de rato aonde é mantida a relação entre as diferentes células que constituem as camadas do córtex da supra-renal; em animais hipofisectomizados ou tratados com dexametasona; estender os resultados obtidos da regulação pelo ACTH de fatores peptídicos endógenos como FGF2, PDGF em células da cultura primária de supra-renal de rato, além de verificar a expressão do fator de crescimento endotelial derivado de glândula endócrina o EG-VEGF, cuja análise do seu mRNA mostrou como sendo restrito à glândulas esteroidogênicas.

Uma observação experimental de 20 anos atrás mostrou que células adrenais em cultura (culturas primárias e a linhagem Y1) apresentavam bloqueio do ciclo celular e inibição de crescimento quando tratadas com ACTH. Esta era uma resposta não esperada para um hormônio que é um promotor de crescimento da córtex adrenal in vivo e que tem capacidade de estimular genes de resposta mitogênica in vitro. Esses dados contraditórios invalidavam incursões no estudo do efeito trófico do ACTH em células adrenais em cultura. Essa questão ficou pendente por esse tempo até que resultados preliminares obtidos da ação de ACTH na linhagem Y1, permitiram levantar a hipótese de que a resposta trófica de células adrenais ao ACTH seria de estimulação de entrada em S e proliferação. Segundo resultados que nós obtivemos do estudo do ciclo celular das células Y1, confirmamos essa hipótese. Assim até o momento podemos afirmar que: ACTH tem uma ação dual no ciclo celular de células adrenais: com tratamentos curtos (pulsos de até 2h) estimula e com tratamentos longos (mais de 4h) inibe a transição G0-G1-S; pulsos de ACTH produzem uma resposta mitogênica semelhante a um mitogênico protótipo como FGFb; a indução de genes fos e jun, nas células Y1, é essencial na resposta mitogênica do ACTH e do FGFb; a ativação de receptores do ACTH inicia uma sinalizaçãoque passa por MEK1 e MEK2 (quinases de proteínas quinases ativadas por mitogênicos) e ativação de ERK-MAPK. Esses resultados permitiram uma re-interpretação das observações anteriores resolvendo assim uma questão que ficou pendente na literatura por muitos anos. Este quadro recente abre novas possibilidades para avanços no entendimento da resposta trófica de células adrenocorticais ao ACTH, fator endócrino, e sua interação com fatores parácrinos / autócrinos como FGFb e outros fatores de crescimento.