Marinella Holzhausen Caldeira.

AEX FOUSP

Atividade extensionista curricular AEX-FO-00010.01

Projeto Temático FAPESP sob a coordenação da Profa. Dra. Marcia Pinto Alves Mayer.

A periodontite é definida como uma doença crônica inflamatória que resulta na destruição dos tecidos periodontais de suporte formados pelo cemento, osso alveolar e ligamento periodontal. Tal destruição é em decorrência da presença persistente de microrganismos específicos nos tecidos periodontais. Estudos indicam que as proteases (ou proteinases) bacterianas possuem a capacidade de modular a resposta imuno-inflamatória do hospedeiro Cisteínas-proteases bacterianas, produzidas pela Porphyromonas gingivalis, podem atuar como moléculas sinalizadoras ao se ligarem com o receptor ativado por protease do tipo 2 (PAR-2). O PAR-2 tem um importante papel no processo inflamatório, e está associado com o aumento de mediadores inflamatórios associados com a destruição do periodonto, IL-6, IL8, TNF-, MMP-2, MMP-8, entre outros além disso, foi demonstrado que o PAR-2 tem um papel na reabsorção óssea por estimular a regulação de fatores de remodelação óssea como MMP-1, MMP-9, IL-6 e RANKL. Ainda, pode agir sobre a diferenciação de osteoblastos e osteoclastos durante o crescimento e a reparação óssea. Células mesenquimais indiferenciadas do ligamento periodontal coletadas de dentes com reabsorção primária, tiveram expressão aumentada de runt relacionado à transcrição do fator 2 (Runx2), o qual leva ao aumento nos níveis de ligante do receptor ativador do fator nuclear Kapa- (RANKL) e diminuição da osteoprotegerina (OPG). Esse desequilíbrio entre RANKL e OPG leva a maior diferenciação osteoclástica, contribuindo possivelmente a maiores perdas ósseas periodontais Existe, porém a necessidade de mais estudos a fim de elucidar os efeitos da ativação do PAR-2 sobre os tecidos periodontais. O objetivo do presente estudo é avaliar o efeito da ativação do PAR-2 sobre a atividade osteoclástica de células do ligamento periodontal. Serão avaliados os efeitos da ativação do PAR-2 sobre a expressão de Runx2, RANKL, OPG, ALP, OPN e OC, além da influência do PAR-2 sobre a proliferação de células do ligamento periodontal além da produção de IL-10 e TGF-1.

Os objetivos deste estudo serão delinear algumas citocinas no fluido gengival (FG) e no soro de pacientes portadores de PA (localizada e generalizada) e de indivíduos saudáveis. Além dos dados clínicos, serão obtidas amostras de sangue periférico e FG de dois sítios doentes para análise das citocinas, e amostras de biofilme subgengival para detectar e quantificar, por meio da PCR-Real Time (qPCR), quatro patógenos periodontais: Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Treponema denticola. Adicionalmente será feita a pesquisa do clone JP2 do A. actinomycetemcomitans, devido à sua grande associação com a PA.

O objetivo primário dessa investigação é verificar se existe diferença nos níveis de marcadores de função hepática entre hepatopatas com e sem doença periodontal. O estudo também tem como objetivo verificar a prevalência de doença periodontal em hepatopatas graves pré-transplantados e a presença de marcadores inflamatórios na saliva e fluido gengival, bem como presença de bactérias periodontopatógenas em amostras subgengivais.

Os receptores ativados por protease tipo 1 (PAR-1) e tipo 2 (PAR-2) estão associados com a periodontite crônica oral, como sugerido em estudos prévios. O PAR-2 parece estar associado à perda óssea e subsequente perda do elemento dental enquanto que o PAR-1 está associado a um possível envolvimento no reparo e na homeostasia dos tecidos periodontais. Sendo a doença periodontal e o diabetes mellitus doenças inflamatórias crônicas, e o diabetes considerado um fator de risco importante para o aumento da severidade de gengivite e da periodontite, neste estudo serão estudadas células do sulco gengival para avaliar a expressão gênica do PAR-1 e do PAR-2 por Real-Time PCR em pacientes diabéticos e não diabéticos, com e sem doença periodontal, antes e após a terapia periodontal básica. Pacientes diabéticos que controlam bem o diabetes tem chances menores de desenvolverem a periodontite em relação aos diabéticos com pobre controle glicêmico, enquanto que os diabéticos com periodontite apresentam risco seis vezes maior de piora do controle glicêmico quando comparado aos diabéticos sem periodontite, demonstrando uma relação bidirecional entre essas duas doenças. Vários mecanismos estão envolvidos na fisiopatologia da doença periodontal associada ao diabetes: produção de produtos de glicosilação avançada (AGEs), deficiente resposta imune, herança de determinados polimorfismos genéticos, alterações dos vasos sanguíneos, tecido conjuntivo e composição salivar. Se não detectados precocemente, esses problemas podem evoluir para doença periodontal. É importante que dentistas orientem seus pacientes com diabetes sobre a necessidade de higiene bucal adequada para minimizar os riscos de doença periodontal.

O tratamento não cirúrgico das doenças periodontais destrutivas consiste na redução dos depósitos bacterianos aderidos às superfícies dentárias, por meio de raspagem e alisamento radicular. Entretanto, em alguns casos, tratamentos convencionais podem não ser suficientes no controle dessas doenças pela interferência de periodontopatógenos resistentes e consequente ativação de mediadores químicos da resposta inflamatória. O objetivo deste estudo é verificar a eficácia da terapia fotodinâmica (PDT) como tratamento complementar em bolsas residuais de pacientes portadores de periodontite crônica por meio da avaliação de parâmetros imunológicos. Será conduzido um ensaio clínico aleatório controlado duplo-cego paralelo para avaliar 82 pacientes. Indivíduos portadores de periodontite crônica serão submetidos ao tratamento periodontal convencional. Após oito semanas, os pacientes serão reavaliados e os sítios com bolsas residuais com profundidade clínica de sondagem (PCS) e 5mm serão selecionados como sítios experimentais e alocados em grupos teste e controle aleatoriamente. O grupo teste receberá a aplicação da PDT e o grupo controle receberá um procedimento simulado. Serão avaliados os níveis de mediadores inflamatórios no fluído gengival: interleucinas (IL-1², IL-6, IL-10) e fator de necrose tumoral ± (TNF-±). Esses parâmetros serão coletados antes da aplicação da PDT, uma semana após, três e doze meses após o tratamento. Durante o período de acompanhamento os pacientes receberão manutenção periodontal a cada 3 meses, quando também será feita a aplicação da PDT. (AU)

Neste presente estudo, será avaliada em células creviculares a correlação entre a expressão gênica e proteica do PAR-2 (Real Time-PCR, Western blot) com os parâmetros periodontais clínicos na periodontite crônica em humanos, antes e após a terapia periodontal básica. Será então avaliada a expressão gênica específica da gingipaína na microbiota subgengival. Por final, a contagem diferencial de células do fluido crevicular será realizada com hematocitômetro e a imunolocalização do receptor nestas células será avaliada por citofluorometria de fluxo do fluido crevicular. Como resultado final deste estudo, espera-se observar uma diminuição da expressão do PAR-2 após terapia periodontal, confirmando o papel das proteases, principalmente gingipaínas, na regulação de sua expressão.