Rodolfo Borges dos Reis.

Curso com reuniões mensais de discussão de artigos e casos clínicos, com a presença de urologistas, oncologistas e residentes que não atuam no meio universitário.

O câncer de próstata é a o câncer mais prevalente em homens, com relevantes impactos sociais e econômicos. O fenótipo e o curso da doença abrangem um amplo espectro, desde um tumor indolente até um carcinoma metastático agressivo. Os marcadores clinicopatológicos atuais são insuficientes para capturar esse espectro de pacientes, especialmente os em risco de falha do tratamento e com mau prognóstico. Mesmo com os métodos atualmente aplicados para a estratificação de risco, seleção do tratamento, predição de resposta, aproximadamente 25 dos pacientes evoluem com doença progressiva, justificando a importância do melhor conhecimento dos fatores biológicos responsáveis pela progressão, como pré-requisitos para desenvolver novas estratégias terapêuticas e melhorar os resultados clínicos. A análise de textura por ressonância magnética (RM) é uma técnica recente, promissora e objetiva que permite identificar padrões teciduais sem necessidade de métodos invasivos Contudo, diferentemente dos parâmetros quantitativos convencionais de RM, pouco se sabe sobre o exato significado das características técnicas e sua correlação com achados histológicos e genéticos na neoplasia de próstata. Estudos relatam que a mutação BRCA está associada a maior escore de Gleason, maior nível de PSA sérico, maior estadiamento e grau tumoral ao diagnóstico e menor sobrevida global, portanto o conhecimento dessa mutação pode afetar as opções de tratamento. O objetivo do estudo é avaliar a capacidade de atributos texturais derivados de sequências de Ressonância Magnética como biomarcadores do comportamento biológico do câncer de próstata, em pacientes com mutação dos genes BRCA 1 e 2. O estudo utilizará as sequências ponderadas em T2 e difusão para criar padrões texturais em 80 pacientes com câncer de próstata que terão dados clássicos de prognóstico histológicos (escala de Gleason) coletados e sequenciamento de mutação BRCA. Como grupo controle, teremos cerca de 80 pacientes sem mutação gênica, porém com risco evolutivo semelhante. A análise dos padrões texturais com características clínicas e genómicas poderá contribuir para a individualização do tratamento oncológico de próstata, sem necessidade de técnicas invasivas.

O panorama terapêutico do câncer de próstata avançado se ampliou consideravelmente nos últimos anos. Com a implementação de técnicas sensíveis de imagem funcional, o câncer de próstata avançado não está mais limitado à doença metastática resistente à castração, mas também inclui o câncer de próstata metastático sensível ao hormônio e alguns tumores localizados com doença metastática oculta não reconhecida anteriormente. Essas descrições melhoradas da amplitude da doença avançada coincidem com uma melhor compreensão da complexidade genômica subjacente dos cânceres avançados. No entanto, a resistência à quimioterapia, terapia hormonal e imunoterapia no cenário metastático continua sendo uma causa significativa de morbidade e mortalidade no câncer de próstata avançado. Os resultados iniciais com a imunoterapia indicam que menos de 10 dos pacientes respondem a esses tratamentos. Assim, é fundamental compreender os mecanismos moleculares que levam à variação nas respostas terapêuticas no câncer de próstata avançado. Testaremos as seguintes hipóteses relacionadas para explicar por que uma grande porcentagem de cânceres de próstata metastáticos falham nos tratamentos atuais: 1) postulamos que os tumores de próstata metastáticos que adquiriram mutações inativadoras do PTEN expressam novas vias relacionadas à evasão da imunoterapia; 2) que as culturas organóides de tumores metastáticos fornecerão uma plataforma funcional para avaliar o papel das mudanças na expressão gênica de tumores intrínsecos na resposta imunológica e medicamentosa tanto na doença sensível à castração como na resistente; e 3) as vias downstream ativadas em tumores resistentes a medicamentos abrirão caminhos para investigar novas abordagens combinatórias à imunoterapia. O objetivo geral desta proposta é usar genômica de célula única e perfil espacial combinado com abordagens in vitro para modelar e melhorar o sucesso da imunoterapia no câncer de próstata metastático.

, apresenta taxas elevadas em países em desenvolvimento. No Brasil, o estado do Maranhão possui a maior incidência nacional e global já registrada da doença, seguido do estado do Pará e Amazonas. Como causas principais da baixa eficiência do tratamento do câncer de pênis temos o pouco conhecimento sobre a sua base genética e molecular e a ausência de terapias alvo que impeça a progressão para metástase linfonodal, condição que reduz consideravelmente a sobrevida dos pacientes. O presente estudo visa levantar alguns alvos terapêuticos usando abordagens de NGS (Next Generation Sequencing) para identificar e caracterizar assinaturas genômicas e metagenômicas no carcinoma espinocelular de pênis com metástase linfonodal em uma coorte do estado do Maranhão. Para isso, serão coletadas amostras do tecido tumoral primário e de linfonodos metastático de pacientes diagnosticados com câncer de pênis atendidos em três hospitais no Maranhão. Esses pacientes serão caracterizados no âmbito sócio comportamental, clínico e histopatológico. Com esse estudo colaborativo que une as expertises do grupo da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP e da Universidade Federal do Maranhão, teremos um ambiente científico profícuo para contribuir com a identificação de potenciais marcadores genéticos de valor preditivo ou terapêutico aplicado tratamento do câncer de pênis.

Estudos de associação genômica ampla (GWAS) são ferramentas importantes para a caracterização da susceptibilidade ao câncer e ao processo de seu desenvolvimento. Individualmente, as regiões genômicas de risco explicam uma pequena fração da hereditariedade envolvida nesses processos, mas modelos que unem o efeito de várias dessas regiões, por meio de escores poligênicos, explicam parte significativa do risco genético. Dessa forma, uso de escores poligênicos é fundamental para a implementação de uma oncologia de prevenção de precisão, na qual o rastreamento e a prevenção primária poderão ser individualizados pelo risco genético. Estudos prévios de GWAS em câncer renal identificaram 13 regiões de susceptibilidade para câncer renal, explicando 14 do risco para desenvolvimento desse tumor. Todavia, ainda é necessário identificar novas regiões de risco para melhor entender a hereditariedade envolvida nesse tipo de câncer. Esse projeto JP é composto de 3 eixos principais. No Eixo 1 será desenvolvido um novo estudo de GWAS, com pacientes brasileiros, para identificação de novas regiões de risco para câncer renal e o desenvolvimento de estratégias para adaptação do escore poligênico em diferentes populações. Essas regiões de risco são oportunidades agnósticas únicas para identificar novos mecanismos moleculares relacionados ao desenvolvimento de câncer renal. Nesse sentido, Eixo 2 serão desenvolvidos estudos funcionais, pós-GWAS, in vitro e in vivo para compreender o papel das variantes de risco como desreguladoras de vias tumor-específicas. Durante o postdoc, o Pesquisador Principal desenvolveu várias análises funcionais de larga escala (ATAC-seq, Chip-seq, eQTL, Capture-HiC, e MPRA) para priorização de variantes funcionais para cada região de risco para câncer renal. Nesse objetivo, usaremos esses dados para acelerar estudos funcionais de post-GWAS para identificar os mecanismos moleculares que levam o desenvolvimento de câncer renal em três regiões: 12p12, 14q24 e 2q22. Assim, serão realizados estudos genômicos funcionais e de fenótipo em três regiões de câncer renal: 12p12, 14q24 e 2q22. No Eixo 3, será utilizada a estratégia de interação somático-germinativa das regiões de risco para desenvolvimento do câncer renal e seu impacto no tratamento e prognóstico de pacientes com esse tipo câncer. Em síntese, essa proposta permite estudar um arco translacional genótipo-molecular-fenótipo que engloba a geração de evidências em epidemiologia molecular, a identificação de mecanismos moleculares e o estudo do impacto da arquitetura genética de susceptibilidade para o tratamento do câncer renal.

Estudos de associação genômica ampla (GWAS) são ferramentas importantes para a caracterização da susceptibilidade ao câncer e ao processo de seu desenvolvimento. Individualmente, as regiões genômicas de risco explicam uma pequena fração da hereditariedade envolvida nesses processos, mas modelos que unem o efeito de várias dessas regiões, por meio de escores poligênicos, explicam parte significativa do risco genético. Dessa forma, uso de escores poligênicos é fundamental para a implementação de uma oncologia de prevenção de precisão, na qual o rastreamento e a prevenção primária poderão ser individualizados pelo risco genético. Estudos prévios de GWAS em câncer renal identificaram 13 regiões de susceptibilidade para câncer renal, explicando 14 do risco para desenvolvimento desse tumor. Todavia, ainda é necessário identificar novas regiões de risco para melhor entender a hereditariedade envolvida nesse tipo de câncer. Esse projeto JP é composto de 3 eixos principais. No Eixo 1 será desenvolvido um novo estudo de GWAS, com pacientes brasileiros, para identificação de novas regiões de risco para câncer renal e o desenvolvimento de estratégias para adaptação do escore poligênico em diferentes populações. Essas regiões de risco são oportunidades agnósticas únicas para identificar novos mecanismos moleculares relacionados ao desenvolvimento de câncer renal. Nesse sentido, Eixo 2 serão desenvolvidos estudos funcionais, pós-GWAS, in vitro e in vivo para compreender o papel das variantes de risco como desreguladoras de vias tumor-específicas. Durante o postdoc, o Pesquisador Principal desenvolveu várias análises funcionais de larga escala (ATAC-seq, Chip-seq, eQTL, Capture-HiC, e MPRA) para priorização de variantes funcionais para cada região de risco para câncer renal. Nesse objetivo, usaremos esses dados para acelerar estudos funcionais de post-GWAS para identificar os mecanismos moleculares que levam o desenvolvimento de câncer renal em três regiões: 12p12, 14q24 e 2q22. Assim, serão realizados estudos genômicos funcionais e de fenótipo em três regiões de câncer renal: 12p12, 14q24 e 2q22. No Eixo 3, será utilizada a estratégia de interação somático-germinativa das regiões de risco para desenvolvimento do câncer renal e seu impacto no tratamento e prognóstico de pacientes com esse tipo câncer. Em síntese, essa proposta permite estudar um arco translacional genótipo-molecular-fenótipo que engloba a geração de evidências em epidemiologia molecular, a identificação de mecanismos moleculares e o estudo do impacto da arquitetura genética de susceptibilidade para o tratamento do câncer renal.

A imunoterapia melhorou a sobrevida do paciente em muitos tipos de câncer, mas no câncer de próstata (PCa) os resultados iniciais da imunoterapia foram decepcionantes. Este tumor é considerado imunologicamente "frio" e incapaz de gerar uma resposta eficaz das células T contra as células tumorais. No entanto, uma porcentagem pequena, mas significativa, de pacientes com PCa responde à imunoterapia por razões atualmente desconhecidas. Esses dados sugerem que a seleção de pacientes com base em biomarcadores que preveem uma resposta imune eficaz pode ser fundamental para o sucesso da imunoterapia no PCa. Nossos resultados anteriores e descobertas recentes da literatura sugerem que mutações somáticas que afetam PTEN, TP53, CDK12 e as fusões ETS podem alterar a expressão gênica e ajudar o PCa a evitar a vigilância imunológica. Nossa hipótese é que os PCas que não respondes aos inibidores do checkpoint adquiriram mutações somáticas específicas que levam a alterações transcricionais no tumor e influenciam as células imunes e as citocinas secretadas no microambiente tumoral, facilitando a evasão imune. Em nosso desenho experimental, determinaremos o impacto desses quatro subtipos mutantes de PCa nas alterações celulares que afetam as células imunes e os outros tipos celulares infiltrados no microambiente tumoral (TME) de 30 PCas, conforme determinado por citometria de fluxo. Nossa análise por citometria de fluxo identificará os tipos de células imunes, como células supressoras derivadas mielóides (MDSCs), células T regulatórias (Tregs), fibroblastos associados ao tumor (CAFs), macrófagos associados ao tumor (TAMs) e células dendríticas, associadas à imunossupressão tumoral. Confirmaremos a identificação dos tipos celulares e interações células imunes e tumorais por microscopia imunofluorescente. Também analisaremos os níveis de citocinas associados à resposta imune. Em seguida, realizaremos a análise transcricional de 24 tumores usando um painel de resposta imune com 395 genes, comparando os tumores representativos com características celulares e mutacionais fortemente associadas à evasão imune com o grupo de tumores representativos com menos características de evasão imune. Esta análise fornecerá novas informações de expressão sobre as vias imunológicas relacionadas à evasão imune que podem atuar downstream aos subtipos mutacionais já descritas na literatura. Nós correlacionaremos as mudanças de expressão em vias imunes específicas com a presença de fusões ETS e mutações de PTEN, TP53, CDK12 no contexto de alteração do conteúdo de células imunes, variação nos estados de ativação de células T e ativação da sinalização de citocinas no microambiente tumoral. As alterações de expressão nos genes mais informativos serão validadas por RT-PCR quantitativa, utilizando toda a coorte deste estudo. Em seguida, realizaremos a imunofluorescência das seções de cada tumor para determinar o conteúdo de células imunes. Validaremos os achados celulares no microambiente tecidual de nossa coorte de 91 PCa, desenvolvida como parte do projeto anterior financiado pela FAPESP e em colaboração com os estudos do Johns Hopkins. Nossa análise permitirá identificar um painel de 20 a 30 genes para uso como biomarcadores preditivos de ativação da evasão imune no TME do PCa. Acreditamos que entender como as mutações somáticas comuns no PCa podem levar a alterações transcricionais que afetam a resposta imune fornecerá novas abordagens para melhorar o sucesso da imunoterapia neste tumor.

Avaliação da heterogeneidade do genoma mitocondrial no carcinoma renal de células claras. Introdução: O carcinoma de células renais (CCR) é o tumor renal maligno mais frequente diagnosticado nos adultos. Uma série de defeitos genéticos tem sido observada nos tumores renais, tais achados podem estar envolvidos na gênese ou progressão destas neoplasias. Alterações genéticas da mitocôndria e defeitos metabólicos são fatores que contribuem para o desenvolvimento de muitas doenças humanas, incluindo o câncer. Estas alterações genéticas podem estar relacionadas desde a gênese desta neoplasia até a agressividade tumoral. Dentre as alterações genéticas, destacam-se as deleções e translocações do braço curto do cromossomo 3 e as alterações do genoma mitocondrial (redução no número de cópias; presença de polimorfismos e inserções, deleções e mutações). Objetivo: avaliar a heterogeneidade do genoma mitocondrial no tecido tumoral de pacientes portadores de CCR-células claras. Métodos: Serão obtidas amostras de CCR-células claras e do parênquima renal sem acometimento tumoral de quinze pacientes. De cada paciente, após a nefrectomia, serão retiradas quatro amostras de diferentes regiões da lesão tumoral. Após a microdissecção das amostras realizaremos a extração do DNA de forma a obter apenas o DNA mitocondrial (mtDNA) íntegro sem a contaminação pelo DNA nuclear, nesta técnica de extração ocorre primeiramente o isolamento da fração mitocondrial e em seguida a extração do mtDNA. O sequenciamento do mtDNA será realizado no Ion PGM (New Generation Sequencing); A avaliação da ocorrência de depleção do DNA mitocondrial será realizada através da determinação de número de cópias por Droplet Digital PCR (ddPCR). A avaliação da heterogeneidade intra-tumoral será analisada confrontando-se os achados genéticos encontrados em cada um dos fragmentos do mesmo tumor. Trata-se do primeiro que avaliará a heterogeneidade do mtDNA no CCR-células claras. Este achado contribuirá para a elucidação das alterações metabólicas que ocorrem nas diferentes áreas tumorais de um mesmo paciente.

Aneurisma da aorta abdominal (AAA) é uma doença progressiva caracterizada pela deterioração estrutural, expansão gradual e eventual ruptura do vaso. A incidência e mortalidade do AAA são altas e o tratamento existente é abordagem cirúrgica aberta convencional ou correção endovascular. Até o momento nenhum tratamento farmacológico eficaz para o tratamento de AAA foi identificado, o qual possa, portanto, inibir seu crescimento, progressão ou o risco de ruptura em seres humanos. Isto deve-se, em parte, ao desconhecimento mais aprofundado sobre os mecanismos genéticos, celulares e humorais envolvidos na fisiopatologia dos AAAs. O sistema renina angiotensina (SRA) participa de inúmeros processos fisiológicos nos sistemas cardiovascular e renal, além de ter importante papel na fisiopatologia das doenças cardiovasculares. Dados experimentais demonstraram que a infusão continua de angiotensina (Ang) II induz AAA em camundongos. Além disso, estudos experimentais e clínicos indicam que o uso dos inibidores do SRA (inibidores da enzima conversora de angiotensina (ECA) e os antagonistas do receptor AT1 (AT1R)), podem ter um efeito na estabilização e redução do risco de ruptura de AAA. Nos últimos anos emergiu um novo paradigma onde acredita-se que dois eixos principais modulam a função do SRA: um eixo deletério composto por ECA/Ang II/AT1R, e outro eixo benéfico composto por ECA-2/Ang 1-7/MASR. Além disso, vem sendo caracterizado o papel biológico de outros componentes como Ang IV, Ang 1-9. Recentemente, o papel da Ang IV ligante do receptor AT4 foi relacionado como um fator protetor ao desenvolvimento de AAA em camundongos. Porém, grande parte desses dados que relacionam AAA e peptídeos do SRA, entre os quais a Ang II, Ang 1-7 e Ang IV, foram realizados em animais de experimentação. Pouco se sabe sobre a ação da Ang 1-9 e Ang III, bem como sobre as enzimas responsáveis pela formação destes peptídeos neste contexto. Assim, uma proposta inovadora do presente projeto de pesquisa é a investigação do papel desses importantes componentes do SRA, os quais produzem, degradam e regulam os diversos tipos de angiotensinas, no desenvolvimento de AAA. Outras enzimas além da ECA participam na geração de Ang II como, por exemplo, a quimase humana e a elastase-2 (ELA-2) de ratos e camundongos. Evidências sugerem que a e a ELA-2 contribuem na formação de Ang II em diferentes territórios vasculares e por isso pretendemos também estudá-las na fisiopatologia do AAA. Para isto, utilizaremos uma abordagem translacional através de modelos em camundongos e amostras de pacientes portadores, ou não, de AAA. A infiltração de células inflamatórias e a ruptura da matriz extracelular estão envolvidas na formação e progressão de AAA. Estudos demonstraram que um dos mecanismos pelos quais Ang II induz AAA é através da produção e aumento da atividade das metaloproteinases (MMPs; especialmente MMP-2 e MMP-9) no tecido extracelular. Além disso, a secreção de citocinas e a acumulação de células inflamatórias na parede arterial podem contribuir para o desenvolvimento de AAA. Assim, o presente projeto pretende avaliar contribuição dos componentes do SRA na fisiopatologia de AAA através de análises bioquímicas, moleculares e histológicas para investigar a participação do SRA nesta patologia. Utilizaremos amostras de pacientes atendidos e operados no HCRP-USP e modelos experimentais de camundongos (C57Bl/6 e ELA-2 knockout). A novidade de nosso estudo reside na investigação dos eixos ELA-2/quimase/ECA/AngII/AT1R, ECA-2/Ang1-7/MASR, na interação Ang4/AT4R e na contribuição da ELA-2 na fisiopatologia do AAA. A nossa abordagem translacional que liga fenótipos clínicos de pacientes com AAA com caracterização molecular, bioquímica e histológica fortalece este projeto e possibilita o desenvolvimento de novas estratégias para compreender melhor AAA tanto em suas bases moleculares quant

Mitocôndrias desempenham papeis fundamentais tanto no metabolismo energético quanto em sinalização em células eucarióticas. Essas organelas são responsáveis pela produção de ATP, e desempenham funções centrais na sinalização redox, homeostase de cálcio e sinalização apoptótica. Um aspecto particular da biologia mitocondrial é que essas organelas contêm um genoma próprio, independente do genoma nuclear. Em humanos, o genoma mitocondrial (mtDNA) contem 16.569 pares de bases e codifica 13 proteínas, 2 rRNAs e 22 tRNAs. A estabilidade do mtDNA é essencial para a integridade funcional da organela e da célula, e mutações nesse genoma estão associadas com várias doenças. No entanto, o genoma mitocondrial está exposto a vários agentes genotóxicos, incluindo espécies reativas de oxigênio geradas normalmente como subprodutos do transporte de elétrons durante a fosforilação oxidativa. De fato, o mtDNA acumula lesões de DNA em níveis maiores do que o genoma nuclear. Desta forma, o entendimento dos mecanismos envolvidos na manutenção da estabilidade genética e funcional do mtDNA é fundamental para a melhor compreensão de processos fisiológicos e/ou patológicos. Esse projeto é subdivido em 5 subprojetos que abordam desde aspectos moleculares dos mecanismos de manutenção da integridade do mtDNA até a relevância funcional desses em patologias humanas. Esses são: 1) estudo dos mecanismos moleculares de reparo de DNA em mitocôndrias de mamíferos; 2) estudo do papel de proteínas de replicação na estabilidade do mtDNA; 3) estudo do papel de Rad51 mitocondrial na linhagem germinativa feminina e na fertilidade; 4) estudo da heterogeneidade do mtDNA em carcinoma renal; e 5) investigação de defeitos na manutenção do mtDNA em pacientes com intolerância ao exercício. Os resultados obtidos aqui devem avançar significativamente o entendimento molecular dos mecanismos de manutenção da estabilidade genômica em mitocôndrias, bem como da participação de alterações nessas vias em processos patológicos, e assim podem contribuir para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas ou preventivas.

O câncer de próstata é caracterizado por alta incidência, grande variabilidade no período de latência e prognóstico incerto. Além disto, o screening sanguíneo por PSA resulta em excesso de diagnóstico, sendo que muitos pacientes não apresentam doença clinicamente significativa. Atualmente, o tratamento inicial baseia- se em nomogramas preditivos que relacionam achados histopatológicos detalhados com dados clínicos, definindo um escore de risco global. Até a presente data, não existem biomarcadores que permitam determinar com confiança, a partir de biópsias prostáticas, quais tumores de risco intermediário permanecerão indolentes e quais serão mais agressivos. Dados recentes de nosso grupo de pesquisa sugerem que tumores com pior prognóstico apresentam tanto deleção do gene PTEN quanto presença do gene de fusão TMPRSS2-ERG, além de CNVs recorrentes que afetam outras regiões do genoma. O objetivo do projeto, utilizando uma amostra de 150 casos de câncer de próstata com seguimento clínico conhecido, é identificar novos biomarcadores genéticos que permitam melhor avaliação prognóstica individual. A primeira etapa inclui seleção de casos que apresentam os biomarcadores PTEN e TMPRSS2-ERG combinando as técnicas de FISH, imunohistoquímica e análise de mutação. A seguir, a técnica de array-CGH será aplicada para comparar o perfil global de CNVs em tumores que apresentam os biomarcadores PTEN e TMPRSS2-ERG com os tumores sem qualquer dessas alterações. Análise bioinformática permitirá a seleção de genes candidatos diretamente relacionados com as regiões de CNV em comum neste subgrupo de tumores associados à câncer avançado e com progressão da doença. Esses genes formarão um painel de sondas de FISH altamente informativo para avaliação prognóstica do tumor.

Foram objetivos deste estudo identificar os miRNAs que apresentam diminuição de sua expressão na urina dos pacientes portadores de CCR de Células Claras após terem sido submetidos a nefrectomia; verificar se alterações de expressão pré e pós nefrectomia do painel de UmiRNAs do MD Anderson Cancer Center se relacionam com a recorrência tumoral nos pacientes portadores CCR de Células Claras localmente avançado e identificar as vias gênicas relacionadas aos miRNAs urinários que possam estar contribuindo para o processo de recorrência tumoral.

Este estudo objetivou avaliar a capacidade dos cães detectarem o câncer de próstata, por meio da olfação da urina de pacientes portadores de neoplasia prostática. Foram avaliados 402 amostras de urinas de pacientes doentes ou sadios. O animal foi conduzido a identificar a amostra positiva cinco vezes. foram colocadas cinco amostras negativas (controle) e apenas uma amostra positiva à doença. em relação às amostras de urina 50% eram de pacientes com câncer de próstata em estágio avançado e 50% em estágio inicial da doença. De todas as avaliações, o animal apresentou 100% de acerto na detecção das amostras positivas (urina de pacientes com câncer de próstata).

O objetivo do estudo foi avaliar o quadro clínico e os achados anatomopatológicos de 175 pacientes com tumor peniano, verificando fatores relacionados ao prognóstico. Foi investigada a ocorrência de alterações do mtDNA dos tumores penianos, mais especificamente a presença de polimorfismos na região do D-loop, mutações somáticos e o número de cópias do mtDNA.

Introdução: A prevalência da esterilidade conjugal é estimada entre 10 e 15% dos casais da população geral, sendo que 40% das causas de origem feminina, 40% de origem masculina e 20% de ambos os parceiros. Os fatores etiológicos masculinos que se evidenciam clinicamente pelas alterações no espermograma ainda não foram completamente elucidados. Por muitas décadas a mitocôndria foi vista como uma organela que participava estritamente do metabolismo energético celular. Atualmente se reconhece o fato de que esta estrutura dinâmica participa de forma ativa nos mecanismos de transformação celular. Alterações metabólicas e genéticas da mitocôndria são fatores que contribuem de forma decisiva em muitas doenças humanas, incluindo infertilidade. A relevância da atividade mitocondrial na função espermática foi estudada no nível gênico. Existe consenso que o acúmulo de deleções múltiplas do mtDNA está associado à perda de função espermática. Objetivos - Avaliar a presença de mutação do DNA mitocondrial no sêmem de pacientes com doença mitocondrial com oftalmoplegia externa progressiva (PEO) e sua repercussão na fertilidade analisada pelo espermograma; avaliar no número de cópias totais de mtDNA e a correlação com os parâmetros do espermograma. Pacientes e Métodos - Foram avaliados dois grupos de indivíduos: pacientes adultos, do sexo masculino, seguidos no Ambulatório de Doenças Neuromusculares do HCFMRP?USP, com diagnóstico de doença mitocondrial associada à PEO; controles adultos, do sexo masculino, saudáveis. A fertilidade será analisada através da coleta do espermograma para quantificações do número, vitalidade, motilidade e morfologia. Avaliação molecular do DNA mitocondrial (mtDNA) extraído do sêmen consistirá da identificação da presença de deleções isoladas ou múltiplas do mtDNA por PCR, quantificação da porcentagem de mutantes e do número de cópias totais do mtDNA por Southern blot e por PCR em tempo real. Análise estatística será realizada par.