Carla Renata Sipert.

Workshop para treinamento dos usuários de laboratórios de pesquisa biomédica.

As intervenções clínicas em Odontologia necessitam de planejamentominuciosa dos procedimentos a serem realizados e o diagnóstico da condiçãodo tecido pulpar é essencial em quaisquer condições clínicas. Além defundamentais, estes conceitos sofreram alterações que vem sendo consolidadasao longo das últimas décadas, mas se confrontam com o padrão adotado aolongo de muitos anos mundialmente. O curso de Odontologia da Universidadede São Paulo tem se destacado ao longo da última década no ensino em nívelde graduação, pós-graduação e extensão. Com o uso de tecnologias atualmentedisponíveis dentro da infraestrutura da Universidade, é viável a elaboração decursos de difusão à distância como forma de promover a atualização deprofissionais nos conceitos atuais do diagnóstico em Endodontia. O uso destametodologia também tornará possível a difusão de conhecimentos para ospaíses signatários da Associação Dentária Lusófona, expandindo assim aspossibilidades e o alcance da Univeridade. Este projeto tem como objetivos 1)obter material gráfico (fotografias, fluxogramas, radiografias, etc); 2) elaborarconteúdo escrito para fundamentação dos conceitos a serem ministrados; 3)construção do curso em formato remoto e 4) divulgação do curso por meio decanais oficiais e por redes de conexão. O suporte oferecido pelo bolsista seráfundamental para a construção e efetivação do curso de difusão pretendido.

Discussão da literatura atual relacionada à Endodontia.

Coordenação das atividades relacionadas à Endodontia inseridas no projeto Bandeira Científica.

A formação clínica em odontologia exige constante atualização pedagógica, demodo a alinhar o ensino às necessidades contemporâneas da prática profissional. Nosúltimos anos, a Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo (FOUSP)implementou uma nova matriz curricular, com o objetivo de aprimorar a integração entreteoria e prática, otimizar o desenvolvimento de competências clínicas e promover umaformação mais centrada no estudante. Dentro desse novo modelo, é fundamental avaliarcomo as mudanças curriculares impactaram a produção clínica dos alunos, especialmenteem áreas críticas como a Endodontia. Trata-se de uma especialidade que demandaelevado rigor técnico e científico, sendo parte essencial da formação do cirurgiãodentista. A análise da produção clínica dos alunos permite mensurar o desempenhoacadêmico-prático, identificar possíveis lacunas e aprimorar estratégias de ensinoaprendizagem. O Sistema Romeu, utilizado pela FOUSP para registro digital deatendimentos clínicos, possibilita a obtenção de dados detalhados sobre os procedimentosrealizados, incluindo tipo de tratamento, número de atendimentos, complexidade doscasos e evolução clínica. A partir dessa base de dados, torna-se viável realizar umlevantamento quantitativo e comparativo entre turmas formadas sob diferentes matrizescurriculares. Este estudo tem como objetivo levantar e comparar a produção clínica dostratamentos endodônticos realizados por alunos da FOUSP, com base nos dadosregistrados no Sistema Romeu, a fim de avaliar os impactos da nova matriz curricularsobre a formação clínica na área de endodontia.

Os conceitos relacionados ao Diagnóstico das alterações da polpa e doperiápice são fundamentais para a formação do cirurgião-dentista e costumamse apresentar como um desafio para a disciplina de Endodontia. Estratégiaspedagógicas múltiplas devem ser consideradas nestes contextos e agamificação pode ser promissora para a consolidação dos conceitos descritos.Este projeto tem como objetivo o desenvolvimento de um jogo de cartas e umjogo de tabuleiro para uso como estratégia pedagógica no ensino do conteúdode diagnóstico. Os bolsistas selecionados deverão desenhar jogos queenvolvam os conceitos relacionados ao diagnóstico das alterações pulpares eperiapicais. Em seguida, deverão coletar material como fotografias, radiografiase relatos de caso. Na sequência, os jogos serão construídos utilizando omaterial coletado. Por fim, estes jogos serão aplicados aos alunos matriculadosna disciplina de Endodontia e o feedback será registrado.

A Endodontia é a especialidade da Odontologia que previne e trata asalterações do tecido periapical. A longo da disciplina/módulo oferecida pelo curso degraduação, os alunos apreendem conceitos relacionados à etiopatogenia das doenças dapolpa e do periápice juntamente com seus desdobramentos e ainda desenvolvehabilidades técnicas para atender aos objetivos práticos da especialidade. No entanto,apesar de consolidados conceitos fundamentais da área, subsequente à disciplina, oaluno é desafiado a avaliar tratamentos realizados como parte da tomada de decisõessobre procedimentos restauradores e reabilitadores. Embora este conteúdo seja abordadodurante a disciplina, a avaliação do tratamento endodôntico tomará sentido prático apósa conclusão da disciplina. Este projeto tem o objetivo de oferecer suporte ao discente deodontologia para a busca por literatura a respeito do tema e com base nas discussões degrupo direcionadas pelos desafios por eles encontrados, será elaborado um manualcomo foram de suplemento ao material didático oferecido aos alunos que cursarão adisciplina e/ou futuro módulo.

Reabsorção de tecidos mineralizados é um evento biológico presente em patologias orais desafiadoras como doença periodontal, periodontite apical e reabsorção radicular externa. O papel de células mesenquimais na modulação do metabolismo ósseo já é conhecido, mas não o papel de células da papila apical neste contexto especialmente por meio do efeito de osteprotegerina (OPG). O objetivo deste estudo é investigar o papel de OPG produzida por células-tronco da papila apical (SCAP) na apoptose, migração e diferenciação de monócitos in vitro. Cultura primária de SCAP será estabelecida e as células serão submetidas ao silenciamento de OPG por transfecção lipossomal (SCAP-OPG KD ou SCAP-scr KD como controle negativo). O sobrenadante será coletado para validação do silenciamento por meio da quantificação de OPG além da detecção de outros fatores envolvidos com apoptose como TRAIL e interleucina (IL)-33 ou com migração celular como CCL2. Além disso, também será detectado o ligante de receptor de fator nuclear kappa B (RANKL). Com base nestes achados, serão preparados meios condicionados e estocados. Monócitos de sangue periférico serão isolados a partir de indivíduos saudáveis e colocados em cultura. Estas células serão tratadas com os meios condicionados de SCAP-OPG KD ou SCAP-scr KD e serão investigados quanto à viabilidade celular e apoptose na presença ou não de anticorpos neutralizadores de TRAIL e IL-33. Para migração celular, o meio condicionado será utilizado em conjunto com anticorpo neutralizante de CCL2. Por fim, os monócitos serão induzidos à diferenciação em osteoclastos com adição de M-CSF e RANKL na presença do meio condicionado de SCAP-OPG KD ou SCAP-scr KD por 21 dias. A avaliação da diferenciação em osteoclastos será feita por meio da análise de anéis de actina, detecção de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e catepsina K, atividade de TRAP e consumo de glicose e produção de lactato. SCAP serão imunomarcadas para RANKL nas membranas celulares e em seguida serão co-cultivadas com monócitos CD14+ por 14 dias. TRAP, catepsina K e RANKL serão avaliados por imunofluorescência bem como atividade de TRAP. Os dados serão analisados estatisticamente com base no padrão de normalidade de sua distribuição. Valores de p serão considerados significativos a 5.

A reabsorção inflamatória de tecidos mineralizados, como ossos e dentes, é um evento biológico presente em patologias orais desafiadoras como periodontites e reabsorção radicular externa. Tratam-se de condições que levam a perdas dentárias resultando em impacto significativo para a qualidade de vida dos indivíduos acometidos. Considerando reabsorções radiculares externas, tratamentos convencionais conseguem atrasar sua evolução, mas não paralisá-la. Com o intuito de melhorar o prognóstico desta crítica condição, ao longo dos últimos anos as terapias endodônticas regenerativas têm sido empregadas para seu tratamento com resultados promissores. Este projeto de pesquisa foi delineado com o intuito de aprimorar protocolos clínicos de regeneração em endodontia para tratamento precoce e tardio de reabsorções dentárias externas. Considerando que células de papila apical (CPA) e osteoclastos desempenham papel central neste contexto, este estudo visa elucidar a influência de cimentos biocerâmicos utilizados na endodontia regenerativa no papel inibitório de CPA sobre osteoclastos in vitro. A hipótese nula consiste em assumir que nenhum dos cimentos biocerâmicos afetará o potencial de inibição da diferenciação e atividade osteclástica por CPA. Em paralelo aos estudos de casos que têm empregado a revascularização para o tratamento de reabsorções externas, dados do nosso grupo demonstram robusta produção de osteoprotegerina (OPG) por CPA, um potente inibidor da diferenciação e maturação do osteoclasto. Utilizando metodologia de cultivo celular de CPA, este estudo investigará a modulação da produção de OPG por estas células em contato com extratos de agregado trióxido mineral, Biodentine e CIMMO HP. Posteriormente, utilizando culturas de monócitos de sangue periférico, o efeito do meio condicionado de CPA tratadas com os biocerâmicos será investigado tanto na inibição da diferenciação como da atividade osteoclástica in vitro.

Dentes com rizogênese incompleta acometidos por necrose pulpar apresentam importante comprometimento estrutural com raízes curtas e paredes dentinárias delgadas. Paralelamente, observa-se o desenvolvimento de áreas de reabsorção óssea no periápice destes casos. A literatura científica tem demonstrado mecanismos envolvidos com a produção de matriz mineralizada por células de papila apical, entretanto não existem ainda evidências acerca da capacidade destas células na modulação de eventos relacionados à reabsorção óssea. Sendo assim, este projeto pretende avaliar o potencial de células de papila apical na modulação da osteoclastogênese in vitro. Culturas primárias de células de papila apical (n = 3) serão estabelecidas a partir de técnica de explant. Parte das células será ativada com 1 µg/mL de ácido lipoteicóico (LTA) de Enterococcus faecalis por 7 dias. As células serão tripsinizadas e distribuídas em placas de 96 poços para avaliação da citotoxicidade de hidróxido de cálcio após contato por 5 dias pelo método MTT. Primeiramente, serão preparados meios condicionados por células de papila apical naïve e ativadas com LTA. Em um segundo bloco de experimentos, células ativadas com LTA tratadas ou não com hidróxido de cálcio por 5 dias serão empregadas para o preparo dos meios condicionados. A quantificação de RANKL e OPG nos sobrenadantes e nas células será feita por ELISA e RT-qPCR, respectivamente. Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) e células CD14+ serão isoladas e cultivadas. Culturas de monócitos serão mantidas em contato com os meios condicionados por células de papila por 21 dias. Os monócitos serão avaliados quanto à imunomarcação e atividade de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP). Os dados serão analisados por meio de análise de variância a um critério adotando-se como significativos valores de p < 0,05.

O tratamento endodôntico de dentes com rizogênese incompleta constitui um dos maiores desafios da Endodontia atual. Apesar dos recentes avanços nesta área da Odontologia, os mecanismos moleculares envolvidos com a interrupção da formação radicular resultante de cárie ou trauma dentário ainda são desconhecidos. Sendo assim, o objetivo deste estudo é elucidar o papel de mediadores inflamatórios nas alterações funcionais de células de papila apical humana (CPA). Culturas de CPA serão estabelecidas a partir de terceiros molares com rizogênese incompleta, isoladas e caracterizadas. As células serão submetidas a estímulo com concentrações crescentes de lipopolissacarídeo (LPS) para ensaio de viabilidade celular. Em seguida, CPA serão então submetidas a estímulo com LPS em meio de proliferação (MP) e de diferenciação (MD) para detecção da produção de prostaglandina E2 (PGE2), endocanabinóides e angiotensina II (AngII) e da modulação de seus respectivos receptores. Com base nestes resultados, serão determinadas as condições experimentais e os receptores a serem bloqueados para os ensaios seguintes. O papel de receptores de PGE2 (EP1-4), de endocanabinóides (CB1 ou CB2) e do receptor de angiontensina I (AT1) na função de CPA será investigado por meio de bloqueio farmacológico. Serão avaliados o contexto de diferenciação celular e o envolvimento destes mediadores inflamatórios nos mecanismos de reabsorção óssea inflamatória.

Este projeto tem o objetivo de compreender a modulação de células do tecido da papila apical e do ligamento periodontal por materiais utilizados durante o tratamento endodôntico, especialmente nas fases de medicação intracanal e obturação do sistema de canais radiculares.

O tecido pulpar é persistentemente afetado por impactos ambientais durante a vida humana. A capacidade de reparo da polpa dental é limitada e os mecanismos envolvidos neste fenômeno não são completamente compreendidos. MicroRNAs são moléculas responsáveis pela regulação fina da síntese protéica e podem estar envolvidos no processo de reparo pulpar. Este estudo tem como objetivo investigar o papel de microRNAs no reparo da polpa dental. Cultura primária de fibroblastos de polpa dental humana serão estabelecidos a partir de terceiros molares hígidos (n=3). Os fibroblastos serão tratados com concentrações crescentes de TGF-&#61538;1 por 6, 24 e 72h para análise e validação da expressão dos microRNAs miR-144 e da família let-7. Com base nestes resultados, o silenciamento dos miRNAs expressos será realizado utilizando-se ácidos nucléicos estabilizados (Locked Nucleic Acid) e as células serão tratadas com TGF-&#61538;1 na concentração e tempo determinados anteriormente. A avaliação de alvos candidatos a interação com os microRNAs supracitados serão avaliados por RT-PCR (reação em cadeia da polimerase seguida de transcrição reversa) e a detecção das proteínas será realizada por Citometria de fluxo (Fibronectina, &#61538;8 integrina, &#61538;3 integrina, &#945;3 integrina e TGFBRI), Western blot (colágeno 1A1, 1A2, colágeno 3, fibrilina 1 e Smad4) e ELISA (trombospondina-1 e p-SMAD2/3). A marcação de diferenciação em miofibroblastos e odontoblastos-like será feita por imunofluorescência para actina de músculo liso e proteína de matriz dentinária 1. As células silenciadas e controle serão avaliados ainda quanto à proliferação e ciclo celular. Para avaliar a expressão de microRNAs durante o reparo da polpa dental, camundongos Balb/c serão tratados com um inibidor de TGFBRI (SB-431542) e submetidos à indução de exposição pulpar e capeamento direto com agregado trióxido mineral (MTA). Após 1, 2, 3 e 4 semanas, os animais serão eutanasiados e espécimes serão coletados para deteç

Este projeto visa avaliar a citotoxicidade de cimentos utilizados em endodontia.

A polpa dental é formada de tecido conjuntivo frouxo sendo constituída por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório e com a produção de componentes da matriz extracelular fundamentais para o reparo, como por exemplo, o colágeno. Assim sendo, este projeto tem como objetivos: 1. avaliar a expressão de pró-colágeno tipo I; 2. avaliar a expressão de quimiocinas tais como MIP-1&#61537; e SDF-1&#61537;&#61472;por fibroblastos de gengiva e polpa dental humanas estimulados por ácido lipoteicóico (LTA) de E. faecalis e lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli e P. gingivalis; 3. comparar a liberação destas quimiocinas e do pró-colágeno pelos fibroblastos quando estimulados por LTA ou por LPS e 4. comparar o comportamento das células provenientes de gengiva e polpa de um mesmo paciente frente aos mesmos estímulos . Serão coletadas polpas de terceiros molares não irrompidos e biópsias de gengiva saudável de um mesmo indivíduo (5 pacientes). Serão picotadas e armazenadas em meio para a cultura dos fibroblastos, os quais serão utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0,8 - 80 &#61549;g/mL de LTA de E. faecalis e 1 - 100 &#61549;g/mL de LPS de E. coli ou P. gingivalis será adicionado às placas e depois de 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante e as células serão coletados para algumas análises. Para o estudo da expressão de mRNA de pró-colágeno tipo I, MIP-1&#61537; e SDF-1&#61537;, será feito PCR em tempo real a partir de RNA total extraído das células em cultura. Para o estudo da expressão protéica de pró-colágeno tipo I, será feito Western blot e para MIP-1&#61537; e SDF-1&#61537;, ELISA. A análise estatística será realizada por meio do programa GraphPad Prism 3.0, aplicando-se o teste ANOVA seguido

A polpa dental é formada por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Estas células respondem a agentes externos com a liberação de substâncias, como quimiocinas, fundamentais para a inflamação. Assim sendo, a proposição deste estudo foi: 1. avaliar a capacidade de fibroblastos de polpa dental humana em cultura em produzirem MIP-1alfa&#61472;e SDF-1; 2. avaliar a produção destas quimiocinas pelos fibroblastos quando estimulados por Enterococcus faecalis morto por calor com relação à concentração e 3. avaliar a liberação destas quimiocinas com relação ao tempo de estímulo. Culturas primárias foram estabelecidas através da polpa de um terceiro molar. Os fibroblastos foram utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo E.faecalis morto por calor numa concentração correspondente a 1, 10 e 100 bactérias por fibroblasto foi adicionado aos poços. Após 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante das células foi coletado para a análise por ELISA. A análise estatística foi realizada aplicando-se o teste Kruskal-Wallis com nível de significância de 5%. Os fibroblastos pulpares se mostraram capazes de produzir SDF-1 constitutivamente sendo que o estímulo bacteriano levou a uma diminuição estatisticamente significativa desta produção. A produção de MIP-1alfa também foi detectada tanto de maneira constitutiva como em resposta ao desafio microbiano, porém de maneira variável. Essas diferenças, entretanto, não foram estatisticamente significativas. A capacidade dos fibroblastos secretarem MIP-1alfa e SDF-1 reforça a importância dessas células na imunidade e inflamação pulpar, principalmente por serem as células mais numerosas deste microambiente.

A atividade antimicrobiana dos cimentos MTA, Portland, Sealapex, EndoRez e Fill Canal foi avaliada através do método de difusão em ágar frente a sete amostras de referência: Enterococcus faecalis ATCC 29212, Escherichia coli ATCC 25922, Micrococcus luteus ATCC 9341, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Candida albicans ATCC 10231. Em três placas de petri de 60x100mm, contendo uma base de 10 mL de ágar Muller Hinton (MH), foram confeccionados cinco orifícios de 5 mm de diâmetro nos quais foram inseridos os cimentos e na superfície de outras 2 placas de petri foram colocadas pontas de papel absorvente impregnadas com os materiais avaliados. A partir de culturas bacterianas em caldo MH incubadas a 37°C em aerobiose por 24 horas, foi padronizado o inóculo para ser adicionado a 10mL do ágar Muller Hinton, a fim de se obter uma concentração final semelhante a 0,5 da escala de Mc Farland, sendo distribuído por pour plate. As placas foram mantidas em temperatura ambiente por 2 horas para pré-difusão do material e em seguida incubadas a 37°C em aerobiose por 24 horas. Para facilitar a leitura da área de inibição, alíquotas de 10mL de gel TTC a 1% foram adicionadas às placas e após geleificação foram incubadas a 37°C por 30 minutos. Os halos de inibição ao redor dos orifícios e ao longo das pontas de papel foram mensurados com o auxílio de um paquímetro graduado em milímetros. O cimento EndoRez não apresentou nenhuma atividade contra os microrganismos testados. Os cimentos MTA e Portland não apresentaram atividade apenas para a Escherichia coli, enquanto foram eficazes para os demais microrganismos. Os cimentos Sealapex e Fill Canal apresentaram atividade antimicrobiana para todas as cepas testadas.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de limpeza de canais radiculares por meio do sistema de instrumentação RaCe (FKG Dentaire - La-Cheaux-de Fonds - Suíça) em comparação à instrumentação manual por meio de limas tipo K-File (Maillefer Instruments - Ballaigues - Suíça). Foram selecionados 20 dentes humanos extraídos (molares superiores) que tiveram seu conteúdo radicular removido após realização da abertura coronária. Os canais foram preenchidos com corante (tinta nanquim) e após 48 horas para secagem, realizou-se a odontometria da raiz mésio-vestibular e metade dos espécimes foi instrumentada pela técnica de Oregon modificada e a outra metade pela seqüência crown-down preconizada pelo fabricante do sistema RaCe. Após o preparo, os dentes foram seccionados longitudinalmente e foram avaliados de acordo com a quantidade de corante remanescente. Os dados obtidos foram registrados por meio de escores numéricos e as médias aritméticas foram analisadas entre os grupos pelo teste de Mann-Whitney. Ambas as técnicas foram incapazes de limpar completamente o interior dos canais radiculares sendo que a técnica manual desempenhou limpeza significantemente superior apenas no terço médio. Conclui-se que o sistema RaCe foi capaz de desempenhar uma limpeza satisfatória sendo próxima àquela conseguida pela técnica de instrumentação manual.

A força de mordida isométrica máxima tem sido objeto de avaliação por vários pesquisadores que utilizam-se dessa técnica para avaliar o comportamento neuromuscular do sistema estomatognático em diferentes condições como a morfologia craniofacial, a idade, a textura de alimentos, o tratamento ortodôntico, a cirurgia ortognática, o número de dentes e o estado do periodonto. Entretanto, não há na literatura dados consistentes a respeito da avaliação do parâmentro força de mordida em pacientes portadores de fissura lábio-palatal transforame unilateral que apresentam variados tipos de má-oclusão. A presente investigação quantificou a força de mordida nesses indivíduos e correlacionou os resultados obtidos com aqueles de um grupo de normais. Os dados obtidos mostram no grupo masculino redução significante da força de mordida nos indivíduos fissurados (92,6% sob tratamento ortodôntico) quando comparados aos normais. Essa diferença não foi encontrada no grupo feminino. Essa particularidade pode estar relacionada com o fato de que nos homens submetidos a tratamento ortodôntico diferentemente das mulheres, ocorre significante redução da força de mordida, não havendo ainda na literatura justificativa para tal achado.