Claudia Pinto Marques Souza de Oliveira.

A esteatose hepática associada a disfunção metabólica (MASLD) é uma das principais causas de morbidade e mortalidade relacionadas ao fígado em todo o mundo, Atualmente existe apenas uma medicação para o tratamento da esteato-hepatite não alcoólica (MASH), a forma mais agressiva da MASLD, aprovada pelo FDA que tem uma resposta terapêutica para fibrose por volta de 25. Ainda, as terapêuticas baseadas em microbiomas, que incluem transplantes fecais e probióticos, são ainda pouco eficazes em virtude da sua natureza não direcionada. Propomos estudar os mecanismos pelos quais o microbioma intestinal é alterado na MASLD e em sua progressão para MASH. O objetivo geral deste estudo é elucidar as mudanças na função microbiana com a progressão da doença para gerar hipóteses que possam ser traduzidas em alvos terapêuticos direcionados a doença globalmente. Para isso, estabeleceremos uma coorte multiétnica de MASLD nos EUA (VCU), Brasil (USP) e Ásia (Nat. Univ. Singapura) que será utilizada nessa proposta e em futuros estudos longitudinais. Prevemos recrutar 100 pacientes em cada local. A composição do microbioma intestinal será interrogada usando o sequenciamento de 16S rRNA e o papel funcional do microbioma será estabelecido conectando essas medidas à expressão de genes transcritos e concentração de metabólitos microbianos nas fezes e soro desses pacientes. O estabelecimento desta coorte será fundamental para esclarecer o papel do microbioma no desenvolvimento e progressão da MASLD em diferentes regiões do mundo. A justificativa para esta linha de trabalho é que ela fornecerá a base científica da estratificação de risco baseada em microbiomas e ácidos biliares, monitoramento de doenças e estratégias de tratamento para MASH e, portanto, terá um forte impacto positivo na saúde de milhões de pessoas afetadas no mundo. Portanto, este projeto está diretamente alinhado com a proposta da chamada MCTI/CNPq n 16/2024.

Doença Hepática Gordurosa não Alcoólica (DHGNA) constitui uma epidemiamundial e pode evoluir, em longo prazo, para esteato-hepatite (EHNA), fibrose, cirrose ecarcinoma hepatocelular (CHC). Existe a necessidade imediata de se conhecer melhor a suapatogênese, assim como de se desenvolver uma terapêutica eficaz para impedir a suaevolução para as formas mais graves. Com base nestas observações, objetivamos avaliar osefeitos de um inibidor multiquinase, o sorafenibe, na carcinogênese hepática experimentalsecundária a DHGNA. Para tanto, iremos avaliar a expressão proteica para glutaminasintetase, HEP-PAR-1, survivina, VEGF, VEGFR-1 e VEGFR-2, p53, EGFR e beta-catenina emmodelo experimental de DHGNA e CHC com e sem o uso de sorafenibe

Projeto de pesquisa que visa a investigação dos exossomos no CHC secundário ~NAFLD (DHGNA) com a Biodonostia Institute e Universidade de Navarra na Espanha.

Introdução: Evidências recentes sugerem que a modulação da microbiota intestinal(MI) pode melhorar desordens metabólicas, incluindo a obesidade. Objetivo: O Objetivo dopresente estudo foi avaliar o impacto da suplementação simbiótica na obesidade e na MI decamundongos deficientes em leptina (ob/ob). Métodos: Vinte animais foram divididos emquatro grupos: Obeso Tratado (OT) e Controle (OC), Magro Tratado (MT) e Controle (MC). Osgrupos OT e MT receberam água potável com uma combinação de probióticos e prebióticos[Lactobacillus acidophilus SD 5221 (10 9 UFC), Lactobacillus rhamnosus SD 5675 (10 9 UFC),Lactobacillus paracasei SD 5275 (10 9 UFC), Bifidobacterium lactis SD 5674 (10 9 UFC) efrutooligossacarídeo (5,5 g) (Simbioflora - Invictus Farmanutrição Ltda, São Paulo, Brasil)por oito semanas. Os grupos OC e MC receberam apenas água potável. Todos os animaisreceberam dieta padrão Nuvilab CR1 (Nuvital Nutrientes S/A, Colombo, Brasil) por 8semanas. O ganho de peso foi calculado como a diferença entre o peso corporal medido noinício e no final do protocolo. Após o período de tratamento, os animais foram anestesiadoscom cloridrato de cetamina (0,1 mL/ kg) por via intraperitoneal e sacrificados. Amostras doíleo intestinal foram coletadas para análise da expressão de genes relacionados à integridadeintestinal (#946;-catenina, ocludina, caderina e zonulina) por RT-qPCR. Amostras de fezes foramcoletadas e o DNA extraído e sequenciado para a análise da MI utilizando a plataforma IonPersonal Genome Machine. Resultados: A suplementação com simbiótico reduziu o ganho depeso corporal no grupo OT em comparação com OC (p=0,0398), aumentou as quantidades deEnterobacteriaceae (p=0,005) e diminuiu as de Cyanobacteria (p=0,047), Clostridiaceae(p=0,026), Turicibacterales (p=0,005) e Coprococcus (p=0,047). Por outro lado, observamosredução significativa das bactérias Sutterella (p=0,009) e Turicibacter (p=0,005) no grupoMT em relação ao MC. Alfa e beta diversidade foram diferentes entre os grupos tratados. Aexpressão da #946;-catenina foi significativamente diminuída no grupo OT (p#8804;0,0001) quandocomparada aos outros grupos. Não foram observadas alterações na expressão de ocludina,caderina e zonulina. Conclusão: A suplementação com simbióticos preveniu o ganhoexcessivo de peso, modulou a MI e reduziu a expressão de #946;-catenina em camundongosobesos.

A Doença Hepática Gordurosa não Alcoólica (DHGNA) é uma das causas maiscomuns de hepatopatia na atualidade. Abrange um largo espectro de doença, podendo seapresentar como esteatose simples, esteato-hepatite não alcoólica (EHNA), cirrose ecarcinoma hepatocelular (CHC). A DHGNA tem incidência e prevalência cada vez maior emtodo o mundo e até hoje não se desenvolveu método diagnóstico que possa substituir abiópsia hepática. Além disso, não existem biomarcadores eficientes em predizer a evoluçãopara esteato-hepatite e cirrose. Existe, portanto, uma necessidade urgente em desenvolvermétodos que possam identificar precocemente, de forma não invasiva, pacientes de maiorrisco. A DHGNA tem etiologia multifatorial, sendo sua evolução claramente influenciada porfatores ambientais, genéticos e epigenéticos. Dentre os mecanismos epigenéticos, osmicroRNAs são os mais estudados em doenças hepáticas. Inúmeros microRNAs têm sidoassociados à DHGNA, entre eles o miR-122, miR-29, miR-33a, miR-21, miR-155 e miR-181. Oobjetivo deste projeto consiste em estudar a relação entre os níveis séricos dos micro-RNAsmiR-122, miR-29, miR-33a, miR-21, miR-155 e miR-181 e a expressão fenotípica da DHGNA.Será realizado estudo transversal em pacientes com DHGNA diagnosticados por biópsiahepática, onde serão analisados dados clínicos, epidemiológicos, bioquímicos eprincipalmente histológicos (grau de fibrose e escore para avaliação da atividade necroinflamatória)e sua correlação com os níveis séricos dos micro-RNAs supracitados. Esteprojeto visa à melhor compreensão do papel dos microRNAs nos diversos fenótipos dadoença, bem como, melhor reconhecimento desses ácidos nucléicos como biomarcadores,tanto diagnósticos como prognósticos, além de se constituírem em potenciais alvosterapêuticos na DHGNA.

Determinar fatores genéticos para evolução para cirrose e CHC em pacientes com NAFLD/DHGNA

Projeto internacional em colaboração com a Virgin Commowealth University (VCU, em Richmond na Virginia-EUA.
Projeto que decorreu da minha visita como Professo Visitante me 2015 naquela UNiversidade.
Existe um andamento deste projeto com Microbioma em NASH.

1)	PROJETO EPoS/LITMUS NAFLD Registry - Projeto Internacional Europeu denominado EPos (Elucidating Pathways of Steatohepatitis) coordenado pelo Professor de Newcastle, Quentin Anstee, que participam Universidades Européias e o Brasil, em que a Professora Claudia Pinto Marques Souza de Oliveira mantém intercâmbio, culminando recentemente com algumas publicações no quadriênio

Embora haja evidência que a microbiota intestinal (MI) está envolvida napatogênese da obesidade, na Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA) não temsido bem caracterizada. Compreender melhor o papel da microbiota intestinal na progressãoda DHGNA é complexo principalmente porque é uma doença multifatorial. As hipóteses,postuladas para explicar à melhora da histologia hepática, inflamação e sensibilidade ainsulina com o uso de probióticos ainda é muito escassa e continua obscura. Seguindo essalinha de pensamento faz-se necessárias mais investigações da microbiota, o que irá auxiliar adesvendar os inúmeros questionamentos na fisiopatogênese e terapêutica na DHGNA. Nesteestudo serão incluídos 30 pacientes com Doença Hepática Gordurosa não Alcoólica (DHGNA)(15 pacientes com esteatose; 15 pacientes com esteatohepatite), matriculados noAmbulatório de Doença Hepática Gordurosa não Alcoólica (A2MG700) da Disciplina deGastroenterologia Clínica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidadede São Paulo (HC-FMUSP), que tenham realizado biópsia hepática, indicada de acordo com oprotocolo de rotina assistencial de atendimento do serviço. O grupo controle será constituídopor 10 indivíduos saudáveis com o IMC normal, sem diabetes ou sintomas gastrointestinaiscrônicos. Todos os pacientes realizarão avaliações antropométricas e da composiçãocorporal, bem como análise de variáveis clínicas, coleta de fezes e exames séricos. Apósrecordatório alimentar de 7 dias, amostras de fezes serão coletadas com auxílio de coletor deFISHER, e estocadas a -20C para posterior análise por pirosequenciamento.

Projeto com a Universidade da Virginia (VCU) do estudo da Microbiota na população brasileira com NAFLD e cirrose. Foi publicado um artigo e continua em andamento para publicação de novos artigos. Esse convênio, deriva da internacionalização da Profa. Claudia PMS Oliveira que esteve como Professor Visitante nessa Universidade no período de 2015, sob coordenação do Prof. Arun Sanyal.

A Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA) é uma das formas maiscomuns de doença hepática, relacionada primordialmente ao aumento progressivo daobesidade no mundo. Devido as crescentes taxas de obesidade, a DHGNA tem se tornadocada vez mais frequente em todas as populações, principalmente no mundo ocidental e temsido definida pelos especialistas como uma doença do mundo moderno. A DHGNA abrangeum espectro de alterações hepáticas que variam desde um simples depósito de gordura nointerior do hepatócito, sem inflamação ou fibrose (esteatose simples), até casos de esteatohepatitenão alcoólica (EHNA), cirrose e, carcinoma hepatocelular em pacientes sem históriade etilismo. Várias abordagens são utilizadas no tratamento da DHGNA e estas se baseiam notratamento das condições associadas como: obesidade, Diabetes Mellitus ehipertrigliceridemia, assim como descontinuação de drogas hepatotóxicas. A recomendaçãoda perda do excesso de peso e exercícios físicos deve ser sempre preconizada, independentedo grau histopatológico da biópsia hepática do paciente. Um dos fatores preconizados notratamento da EHNA é o treinamento físico aeróbio em função do aumento da taxa de lipólisee redução do peso corporal. Estudos em animais têm ajudado no conhecimento sobre osmecanismos fisiopatogênicos e terapêuticos de DHGNA. Atualmente existem vários modelosanimais para estudar a DHGNA e EHNA. Entre os principais modelos destaca-se o modelo docamundongo obeso deficiente em leptina (LEP ob/ob) que é portador de síndromemetabólica. Esses camundongos apresentam comportamento e fisiologia de animais em umestado constante de jejum, hiperfágicos e hipometabólicos, com níveis séricos elevados decorticosterona e insulina, hipotérmicos e incapazes de se manterem aquecidos e, comalterado limiar de apetite, o que gera a obesidade característica com distúrbios metabólicossimilares aos dos diabéticos. Contudo, este animal não desenvolve EHNA espontaneamente,necessitando de um segundo estímulo para que a esteatose se transforme em esteatohepatitenecessitando de um segundo estímulo como dietas hipercalóricas ou deficiente decolina para induzir DHGNA. Implementou-se em nosso meio, em trabalhos anteriores, o11 Atividades Científicas I Linhas de Pesquisa 229Memorial - Claudia Pinto Marques Souza de Oliveiramodelo experimental de esteato-hepatite não alcoólica induzida tanto pela dieta DCM como adieta hiperlipídica (DH), ambas em camundongos obesos (Oliveira et al, 2008). Conseguiu-secom estes modelos, desenvolver esteato-hepatite não alcoólica muito semelhante à formahumana, com balonização hepatocelular, esteatose macro e microvesicular em zona III (veiacentrolobular), infiltrado de polimorfonuclear e satelitose. Considerando os efeitos benéficosdo treinamento físico para a promoção de adaptações metabólicas que possam contribuirdiretamente para o tratamento da DHGNA, e a oportunidade de estudar um modelo animalque desenvolve de forma robusta o fenótipo hepático patológico mediante o uso de dieta, opresente trabalho terá a finalidade de investigar o papel do treinamento físico aeróbio para otratamento da DHGNA e os mecanismos celulares envolvidos nessa resposta.

Projeto Jovem Pesquisador- Participação da aluna de IC- subprojeto

Doutorado

Pós-Doutorado

Projeto de Doutorado da Fabíola Rabelo

Iniciação Científica

Estudo randomizado omega3 e placebo na DHGNA

Pós-Doutorado da aluna Rosamar Eulira Resende