Francisco Garcia Soriano.

Estudaremos as diferentes linhagens de células tronco sobre a sepse.
Retiraremos células tronco mesenquimais de tecido adiposo e células tronco hematopoiéticas e as injetaremos endovenosamente em camundongos.
Os animais serão submetidos a sepse por ligadura cecal e punção e analisaremos o perfil inflamatório e a lesão de órgãos.

O estudo visa analisar quais as alterações nas histonas são produzidas pela sepse e pela indução de tolerância. A seguir estudar como essas alterações influem no desenvolvimento da sepse

O óxido nítrico é uma substância gasosa que age como sinalização intra e extracelular. A capacidade de produzir s-nitrosilação determina parte de seu papel na sinalização.
durante a sepse e a tolerância ao LPS temos produção de óxido nítrico em quantidades diferentes e locais celulares diferentes.
Estes eventos determinam a produção de s-nitrosilação de proteínas citosólicas e também nuclerares de forma a regularem os mecnismos epigeneticos

O projeto visa desenvolver biosensor capaz de medir a glicemia dos pacientes internados em UTI,de forma continua.

A Unidade de Terapia Intensiva tem por finalidade cuidar de pacientes em estado crítico. Estes pacientes apresentam muitas alterações em diversos dos parâmetros metabólicos. Uma forma que possibilite sua medida de forma rápida e continua,trará benefício para o tratamento destes pacientes.Neste intuito estamos desenvolvendo potenciais sensores para esta finalidade

Variabilidade da freqüência cardíaca (VCF) na sepse
Recentemente tem se demonstrado uma reduzida capacidade do coração a modificar sua resposta com elevação ou redução da freqüência cardíaca em pacientes sépticos. Esta alteração de VFC tem se correlacionado com maior mortalidade. Os autores propõe que no choque séptico haja um comprometimento da modulação simpática sobre o coração e vasos sangüíneos e altos níveis de catecolaminas, este distúrbio da regulação autonômica central contribui para a falência circulatória da sepse [32, 52-54].

Sepse&#10;A sepse é causada por micro-organismos tais como: bactérias Gram-negativas, Gram-positivas, fungos e vírus. A sepse severa e o choque séptico estão associados a taxas de mortalidade de 40 a 60% [1]. Sepse e suas seqüelas representam diferentes estágios da mesma doença. Em 1992, a sepse foi definida pela Conferência de SCCM/ACCP como uma resposta sistêmica à infecção, manifestada pela presença de dois ou mais sintomas : a) temperatura >38°C ou <36°C; b) freqüência cardíaca >90 bpm; c) freqüência respiratória acima de 20 rpm ou PaCO2<32 torr e contagem de leucócitos acima 12000/ mm3 ou <4000/mm3, ou >10% de formas segmentares imaturas [2]. &#10;Coração e sepse&#10;Apesar dos efeitos da sepse sob a função cardíaca ter sido o objeto de muitas investigações, estes efeitos permanecem não esclarecidos. Estudos experimentais tem mostrado que a disfunção cardíaca se relaciona com a dose de LPS e com a bactéria. Contudo, em humanos, a disfunção cardíaca é independente do agente bacteriano [25-29].&#10;A participação do coração nas alterações hemodinâmicas apresenta inúmeras restrições a sua análise pois há alterações vasculares periféricas que influenciam o desempenho cardíaco. Adiciona-se a isto o fato que na fase inicial da sepse o sistema simpático-adrenal está ativado, estimulando o inotropismo e cronotropismo cardíaco e isto pode mascarar a depressão cardíaca presente [30-32].&#10;Variabilidade da freqüência cardíaca (VCF) na sepse&#10;Recentemente tem se demonstrado uma reduzida capacidade do coração a modificar sua resposta com elevação ou redução da freqüência cardíaca em pacientes sépticos. Esta alteração de VFC tem se correlacionado com maior mortalidade. Os autores propõe que no choque séptico haja um comprometimento da modulação simpática sobre o coração e vasos sangüíneos e altos níveis de catecolaminas, este distúrbio da regulação autonômica central contribui para a falência circulatória da sepse [32, 52-54].

Sepse&#10;A sepse é causada por micro-organismos tais como: bactérias Gram-negativas, Gram-positivas, fungos e vírus. A sepse severa e o choque séptico estão associados a taxas de mortalidade de 40 a 60% [1]. Sepse e suas seqüelas representam diferentes estágios da mesma doença. Em 1992, a sepse foi definida pela Conferência de SCCM/ACCP como uma resposta sistêmica à infecção, manifestada pela presença de dois ou mais sintomas : a) temperatura >38°C ou <36°C; b) freqüência cardíaca >90 bpm; c) freqüência respiratória acima de 20 rpm ou PaCO2<32 torr e contagem de leucócitos acima 12000/ mm3 ou <4000/mm3, ou >10% de formas segmentares imaturas [2]. A síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) é clinicamente irreconhecível da sepse, e pode ocorrer em associação com grande variedade de eventos não-infecciosos, como por exemplo: politraumatismo, cirurgia, pancreatite e queimaduras [3-5]&#10;Alterações metabólicas na SIRS e sepse &#10;Resistência a insulina e hiperglicemia tem sido associadas a pacientes críticos (SIRS e sepse) desde o final do século 19, com a descrição da situação de estresse por Claude Bernard. Este quadro metabólico é uma resposta fisiológica ao estresse, que representa um fenômeno de caracter adaptativo ao insulto. Esta alteração era considerada benéfica para a sobrevivência 75-81.&#10;O conhecimento dos mediadores inflamatórios (citocinas) possibilitou a demonstração de que TNF-a e IL-1b produzem alterações na expressão dos diferentes transportadores de glicose. A mudança no predomínio de GLUT-2 sobre GLUT-4 induz a um estado de resistência insulínica 76, 82-87. A resistência a insulina também interfere com o metabolismo lipídico, com aumento de lipólise e maior oferta de ácidos graxos livres. Têm sido descritas alterações em lipoproteínas de alta densidade (HDL), de baixa densidade (LDL) e colesterol total em pacientes críticos 76. Estes colesteróis tem sido encontrados reduzidos em pacientes com SIRS, e correlacionados com evolução clínica desfa

Fisiopatologia da sepse&#10;&#10;A resposta sistêmica à infecção é mediada através de citocinas produzidas por macrófagos, que estimulam receptores de órgãos alvo em resposta à infecção. As citocinas são mediadores primários ou secundários. Os mediadores primários são o fator de necrose tumoral-a (TNF-a), interleucina 1 (IL-1), IL-6, e IL-8 16-20. Estes mediadores estimulam a liberação de mediadores secundários tais como outras citocinas, derivados do ácido araquidônico (PGE2, TXA2), fator ativador de plaqueta (PAF); peptídeos vasoativos tais como bradicinina, angiotensina, peptídeo intestinal vasoativo; aminas tais como histamina e serotonina; e uma variedade de produtos derivados do complemento 1.&#10;A SIRS é um processo contínuo caracterizado por uma resposta anormal generalizada do hospedeiro atingindo órgãos remotos ao insulto. A resposta de citocinas é regulada por uma intrincada rede de mediadores, que mantêm a resposta inflamatória inicial sob controle através de redução da produção e contrabalanço dos efeitos de citocinas pró inflamatórias já produzidas. Em alguns pacientes não se restabelece a homeostasia e neste estágio o controle é perdido ocorrendo uma intensa reação inflamatória 12, 21, 22. &#10;&#10;LPS e inflamação&#10;O LPS de várias famílias microbianas gram-negativas é constituído do mesmo princípio arquitetônico; uma porção de polissacarídeo ligado covalentemente com o lipídeo A (LA) (Fig. 1). A cadeia O é característica e única para cada sorotipo bacteriano, tornando-se, então, um importante fator da virulência. O LA representa o princípio endotóxico do LPS. De acordo com o conhecimento presente, é o LA bioativo, de característica anfofílica que em meio aquoso forma micelas, e em condições fisiológicas apresenta-se exclusivamente em estrutura não laminar, mas cúbica ou hexagonal. Entretanto, a atividade endotóxica é mediada pelas moléculas singulares com conformação peculiar 23.

Sepse&#10;A invasão da corrente sangüínea ou tecidos por microorganismos tais como: bactérias Gram-negativas, Gram-positivas, fungos e vírus pode levar ao quadro conhecido de sepse. A sepse severa e o choque séptico estão associados a taxas de mortalidade de 40 a 60% 1. Em 1992, a sepse foi definida pela Conferência da Sociedade de Terapia Intensiva Americana como uma resposta sistêmica à infecção, manifestada pela presença de dois ou mais sintomas: a) temperatura >38°C ou <36°C; b) freqüência cardíaca >90 bpm; c) freqüência respiratória acima de 20 rpm ou PaCO2<32 torr e contagem de leucócitos acima 12000/ mm3 ou <4000/mm3 2. A sepse representa um subgrupo da síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS). A SIRS pode ocorrer também em associação com grande variedade de eventos não infecciosos, como por exemplo: politraumatismo, cirurgia, pancreatite e queimadura 3-5. &#10;A relevância da patologia sepse é evidenciada pelos seguintes dados: o aumento da incidência de sepse em pacientes internados em hospitais e UTI nas últimas décadas; alta mortalidade; necessidade de internação destes pacientes em unidade de terapia intensiva (UTI) com altos custos monetários para o tratamento; e a ocorrência de complicações e falências de órgãos 6-8.&#10;SOLUÇÃO HIPERTÔNICA (NACL 7,5%)&#10;&#10;As observações relatadas por Velasco e colaboradores em 1980 dos benefícios de solução hipertônica (SH) no tratamento do choque hemorrágico em cães atraiu grande interesse para este tema 38. A curta duração dos efeitos circulatórios tem sido atribuída ao rápido equilíbrio dos solutos entre os compartimentos intra e extracelular Mecanismos de ação da solução salina hipertônica&#10;&#10;No choque hemorrágico os principais mecanismos de ação propostos são: a mobilização de fluidos do intracelular para o extracelular decorrente do gradiente osmótico produzido pela SH; aumento da contractilidade cardíaca, redução de edema tecidual e endotelial com conseqüente melhora da microcirculação, melhora da viscos

SOLUÇÃO HIPERTÔNICA (NACL 7,5%)&#10;&#10;As observações relatadas por Velasco e colaboradores em 1980 dos benefícios de solução hipertônica (SH) no tratamento do choque hemorrágico em cães atraiu grande interesse para este tema 38. A curta duração dos efeitos circulatórios tem sido atribuída ao rápido equilíbrio dos solutos entre os compartimentos intra e extracelular 39, 40. Desde da década 1980, vários estudos tem sido realizados com ressuscitação utilizando pequenos volumes de solução hipertônica, na dose de 4 ml/Kg 39, 41-44.&#10;&#10;Mecanismos de ação da solução salina hipertônica&#10;&#10;No choque hemorrágico os principais mecanismos de ação propostos são: a mobilização de fluidos do intracelular para o extracelular decorrente do gradiente osmótico produzido pela SH; aumento da contractilidade cardíaca, redução de edema tecidual e endotelial com conseqüente melhora da microcirculação, melhora da viscosidade sangüínea devido a hemodiluição, e imunomodulação44.

PANCREATITE&#10;&#10;A pancreatite é uma doença comum apresentando grande variabilidade no quadro clínico em relação à severidade. Clinicamente um quadro de pancreatite é definido como agudo se o paciente torna-se assintomático na evolução, enquanto na pancreatite crônica há persistência da dor ou insuficiência exócrina ou endócrina. Estima-se que ocorram por volta de 100.000 casos de pancreatite por ano nos Estados Unidos. A mortalidade dos pacientes com pancreatite aguda nas formas graves, pode ser bastante elevada e alcançar taxas de 80 a 100%.1 As complicações sistêmicas são as principais causas das altas taxas de mortalidade e morbidade que acompanham a doença. Fisiopatologia da síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS)&#10;&#10;A síndrome da resposta inflamatória sistêmica é mediada através de citocinas produzidas por macrófagos, que estimulam receptores de órgãos alvo em resposta a uma agressão23-25. As citocinas são mediadores primários ou secundários. Os mediadores primários são o fator de necrose tumoral-a (TNF-a), interleucina 1 (IL-1), IL-6, e IL-8 . Estes mediadores estimulam a liberação de mediadores secundários tais como outras citocinas, derivados do ácido araquidônico (PGE2, TXA2), fator ativador de plaqueta (PAF); peptídeo vasoativo tais como bradicinina, angiotensina, peptídeo intestinal vasoativo; aminas tais como histamina e serotonina; e uma variedade de produtos derivados do complemento23-27.&#10;SOLUÇÃO HIPERTÔNICA (NACL 7,5%)&#10;&#10;As observações relatadas por Velasco e colaboradores em 1980 dos benefícios de solução hipertônica (SH) no tratamento do choque hemorrágico em cães atraiu grande interesse para este tema 38. A curta duração dos efeitos circulatórios tem sido atribuída ao rápido equilíbrio dos solutos entre os compartimentos intra e extracelular 39, 40. Desde da década 1980, vários estudos tem sido realizados com ressuscitação utilizando pequenos volumes de solução hipertônica, na dose de 4 ml/Kg 39, 41-44.

Sepse&#10;A sepse é causada por microorganismos tais como: bactérias Gram-negativas, Gram-positivas, fungos e vírus. A sepse severa e o choque séptico estão associados a taxas de mortalidade de 40 a 60% (31). A sepse representa um subgrupo da síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS). Em 1992, a sepse foi definida pela Conferência da Sociedade de Terapia Intensiva Americana como uma resposta sistêmica à infecção, manifestada pela presença de dois ou mais sintomas: a) temperatura >38°C ou <36°C; b) freqüência cardíaca >90 bpm; c) freqüência respiratória acima de 20 rpm ou PaCO2<32 torr e contagem de leucócitos acima 12000/ mm3 ou <4000/mm3 (1). A síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) pode ocorrer em associação com grande variedade de eventos não infecciosos, como por exemplo: politraumatismo, cirurgia, pancreatite e queimaduras (3, 19, 20)&#10;A angiotensina produz hipertrofia da musculatura vascular&#10;Também aumenta a produção de radicais livres, levando a ativação da PARP

Tolerância ao LPS&#10;A resistência ao LPS pode ser determinada geneticamente ou adquirida. Animais de experimentação submetidos a exposição prévia a doses sub-letais de LPS pode induzir um estado de resistência adquirida e tornar estes animais resistentes a doses letais, pirogênicas e metabólicas de LPS. O fenômeno da interrupção da mortalidade associada com LPS, ou então chamado como tolerância a endotoxina, não é específico à ação de LPS e apresenta reação cruzada com outros estímulos, tais como, peptidoglicano, lipoproteína das bactérias, estresse hipertérmico, lipoaribinomannan, ácido lipoteícoico, micobacterium, muramil dipeptideo, 25-hidroxi-colesterol, estresse cirúrgico, isquemia, TNF e IL-10 (7, 34). As fases inicial e tardia de tolerância com características diferentes seguem a injeção inicial do LPS. A fase inicial pode ser detectada dentro das primeiras 24 horas depois de exposição ao LPS e pode durar até 8 dias. A tolerância ao LPS relaciona-se à produção e liberação reduzida de citocinas pelos fagócitos em re-exposição ao LPS. Além disso, foi demonstrado que a exposição prévia ao LPS resulta em alteração de padrão de expressão gênica das citocinas (Fig. 2-A) (29). Parece que a tolerância a endotoxina resulta de alterações em rotas de transdução de sinal induzidas pelo LPS. Inicialmente foi proposto que a tolerância seria uma resposta imune benéfica, entretanto as evidências indiretas sugerem-na como um marcador ou participante de desregulação imune, complicando o manejo de pacientes em sepse severa.

Tolerância ao LPS&#10;A resistência ao LPS pode ser determinada geneticamente ou adquirida. Animais de experimentação submetidos a exposição prévia a doses sub-letais de LPS pode induzir um estado de resistência adquirida e tornar estes animais resistentes a doses letais, pirogênicas e metabólicas de LPS&#10;Expressão gênica e sepse&#10;Os avanços recentes em biotecnologia, os resultados de sequenciamento do genoma humano e o desenvolvimento de métodos de análise da expressão gênica em escala genômica oferecem oportunidades para melhorar nosso conhecimento de mecanismos de alta complexidade, tais como fisiopatologia de doenças. Foi proposto que todas as células envolvidas em resposta imune específica atuam de maneira coordenada e dividem elementos regulatórios comuns. Este processo coordenado cria uma área de citocinas caracterizada pela produção de um único padrão de citocinas ou quimocinas e receptores deles correspondentes (&quot;assinatura da expressão gênica&quot;)